IMUNOHEMATOLOGIE

SEROLOGIA GRUPELOR SANGUINE

DR.BRSAN TAMARA Centrul Regional de Transfuzie Galai

GRUPE SANGUINE ABO Rhesus standard (RH1)

NOIUNI GENERALE

Sngele este unic i salvator de viei Transfuzia de snge reprezint o component esenial a serviciilor de sntate moderne Securitatea transfuzional implic un ansamblu de msuri necesare att pentru protejarea integritii donatorului de snge , ct i pentru prevenirea complicaiilor imunologice i infecioase la primitor Asigurarea securitii , calitii i eficienei sngelui total i componentelor sanguine reprezint o prioritate major la nivel internaional Politica naional n domeniul calitii i contextul legislativ existent constituie un cadru adecvat pentru aplicarea n practica transfuzional a Directivelor europene care reglementeaz normele de calitate i securitate privind colecta , controlul , procesarea , stocarea i distribuia sngelui total i componentelor sanguine

SNGE TOTAL:COMPOZIIE i FUNCII

Sngele este un fluid complex format din celule sanguine aflate n suspensie n plasm: Globule roii ( eritrocite , hematii ) Globule albe (leucocite) Plachete ( trombocite)Globule albe i plachete Plasm G Globule roii

PLASMA SANGUIN

Reprezint 5% din greutatea corporal Conine proteine , substane chimice, factori de coagulare , substane metabolice Volumul sanguin total = volumul ocupat de celule i plasm n sistemul vascular i reprezint 7% din greutatea total(70ml/greutate corporal) la adult i 8% din greutatea corporal la copil

GLOBULE ROII. CARACTERISTICI

Sunt produse n mduva osoas sub controlul hormonului renal numit eritropoietin Au o durat de via de aproximativ 120 zile n torentul sanguin nainte de a fi distruse n sistemul reticuloendotelial Numr : aprox. 5 milioane /mm cub snge Conin hemoglobin , a crei funcie principal este de a fixa i transporta oxigenul n esuturi Reprezint 45% din volumul total al sngelui Hemoglobina=molecul constituit din fier(hem) i lanuri polipeptidice ( globin)

GLOBULE ALBE. CARACTERISTICI

Reprezint o familie de celule nucleate formate din: granulocite limfocite monocite Sunt produse n mduva osoas i esutul limfatic Ocup sub 1% din volumul sanguin total Au rol n aprarea organismului mpotriva infeciilor i de a produce anticorpi dirijai mpotriva antigenelor strine

PLACHETELE

Sunt mici fragmente de megacariocite produse de mduva osoas Conin enzime i alte substane biologic active(mediatori) Au rol major n iniierea mecanismelor de coagulare

GRUPELE SANGUINE

Au fost descoperite la nceputul secolului xx i reprezint cea mai mare descoperire pentru transfuzia sanguin n anii 1901-1902 Karl Landsteiner a descris 3 grupe sanguine : O, A i B n anul 1902 , elevii lui Landsteiner, Decastello i Sturli au descris i grupa AB n anul 1911 au fost descoperite supgrupele A1 i A2

IMUNOLOGIA GRUPELOR SANGUINE

Clasificarea grupelor sanguine din sistemul OAB se bazeaz pe prezena sau absena n eritrocite a unuia sau ambelor antigene (aglutinogene) A i B Antigen= orice substan recunoscut ca strin de ctre organism , care determin un rspuns imun Anticorp= produsul unui rspuns imun la un stimul antigenic Anticorpi naturali= anticorpii prezeni n snge n absena unui stimul antigenic cunoscut Printr-o excepie biologic , antigenele A i B nu sunt imonogene ,iar sngele uman nu conine anticorpi mpotriva antigenelor proprii Anticorpii anti-A i anti-B pot fi : naturali= Ac de tip IgM prezeni la toi indivizii la care aglutinogenul omolog este absent imuni = Ac de tip IgG prezeni n urma unui stimul antigenic Aglutinogenul i aglutinina omolog nu pot coexista n sngele unui individ Absena unuia din cele 2 aglutinogene implic prezena aglutininei corespunztoare

SISTEMUL ABO Antigene(Ag) de natur glucidic localizate pe faa extern a membranei citoplasmaticeAnticorpi (Ac) de natur IgM prezeni n snge Caracteristici ale celor 4 grupe sanguine :

Grupa Aglutinogene

AAg A (hematii) Ac anti B

BAg B

ABAg A i Ag B

OFr Ag

Aglutinine(ser , plasm)

Ac anti A

Fr Ac

Ac anti B i Ac anti A

NOIUNI DE GENETIC A GRUPELOR SANGUINE

Grupele sanguine se transmit ereditar Genele responsabile de specificitatea de grup sanguin sunt situate pe cromozomii materni i paterni autozomali Genotip=ansamblu de gene prezente pe cromozomi deinute de fiecare printe Fenotip= efectul observabil al genelor motenite, de exemplu grupa sanguin

SISTEMUL ABO _ Relaia genotip fenotipGenotip AA AO BB BO AB OO Fenotip Grupa sanguin A B AB O

REGULILE CARE GUVERNEAZ TRANSMITEREA EREDITAR A GRUPELOR SANGUINE

Aglutinogenele A sau B nu pot fi prezente n sngele unui copil dac nu exist n sngele unuia sau ambilor prini Un persoan cu grupa AB nu poate fi printele unui copil cu grupa O O persoan cu grupa O nu poate fi printele unui copil cu grupa AB Aglutinogenele A1 sau A2 pot fi prezente la un copil , numai dac exist n sngele unuia dintre prini

TRANSMITEREA EREDITAR N SISTEMUL ABO Fenotipul prinilor O+O O+A O+B A+A A+B B+B O + AB A + AB B + AB AB + AB Fenotipul posibil al copiilor O A,O B,O A,O AB , O , A ,B B,O A,B A , B , AB A , B , AB A , B , AB Fenotipul imposibil al copiilor A , B , AB B , AB A , AB B , AB Nici unul A , AB O , AB O O AB

SISTEMUL RHESUS (RH)

n perioada 1937- 1940 , Landsteiner i Wiener au efectuat cercetri i au descoperit factorul Rh al crui importan clinic a fost demonstrat de Levine i Stetson n anul 1939 Din punct de vedere genetic , sistemul Rh prezint: - 6 gene: Cc , Dd , Ee - 5 antigene : Cc , D , Ee Gena d nu produce antigen Genele Rh se transmit n grupe de 3 gene , fiecare grup provenind de la un printe ,diverse combinaii:CDe Cde , cde ,cDe , etc.

SISTEMUL RHESUS (RH)

0 persoan cu RhD pozitiv motenete o genD, dar nu se poate preciza dac persoana respectiv este heterozigot pentru aceast gen(D/d) sau homozigot(D/D) O persoan cu Rh negativ are fenotipul d/d Arbore genealogic: Genotip: D/d D/d Genotip: Fenotip: D/D Dpoz D/d d/d Dpoz Dneg

SISTEMUL Rhesus(RH) standard

Antigene (Ag) de natur proteic localizate pe faa extern a membranei citoplasmatice

Nu exist anticorpi (Ac) naturali prezeni n snge Anticorpii imuni (IgG) apar la persoane Rh negativ ca urmare a imunizrii anti- D (transfuzii de snge Rh + , incompatibilitate feto-matern) Caracteristici ale sistemului Rhsus (Rh) standard :

Grupa

Rhsus + (RH : 1)Ag D

Rhsus (RH : -1)Fr Ag D

Aglutinogene(hematii)

PrincipiuAg : naturali Ac : aglutinani

Aglutinare activ direct

IMPORTANA CLINIC A SISTEMULUI ABO I RH

Efectuarea testrilor imunohematologice are rolul de a asigura o securitate transfuzional optim prin prevenirea complicaiilor imunologice la pacienii care beneficiaz de o transfuzie sanguin Nu poate fi tolerat nici o eroare n determinarea grupelor sanguine. Efectuarea grupei sanguine trebuie realizat pentru fiecare unitate de snge de ctre 2 tehnicieni diferii , cu 2 seruri diferite , prin 2 tehnici: proba globular(metoda Beth-Vincent):detecteaz Ag AB prezeni pe eritrocite proba seric (metoda Simonin):detecteaz Ac specifici prezeni n ser

CONDIII ESENIALE PENTRU DETERMINAREA CORECT A TESTELOR IMUNOHEMATOLOGICE

Personal calificat Materiale i echipamente adaptate la condiiile operatorii Reactivi validai(control de calitate, instruciuni productor) Manipularea eantioanelor de snge respectnd msurile de igien i securitate Respectarea bunelor practici de laborator Proceduri operatorii scrise (SOP)

ERORI N DETERMINAREA GRUPELOR SANGUINE-REACII FALS POZITIVE SAU NEGATIVE

Reactivi nestandardizai i incorect depozitai Formarea de rulouri(pseudo-aglutinare) Probe contaminate Prezena gelatinei Warton Autoanticorpi i anticorpi la rece Tehnic de lucru incorect

PREPARAREA COMPONENTELOR SANGUINE PENTRU A FI TESTATE Snge total recoltat cu anticoagulantSepararea supernatantului(plasm coninnd anticorpi)

Centrifugare10 minute 500g

Diluie 3 % n ap distilat a hematiilor purttoare de antigen

PREPARAREA MATERIALELOR I REACTIVILOR Reactivi

Martor

Anti A

Anti B

Anti A + Anti B

Anti D

GRA

GRB

GRO+

GRO-

Diluant Plac

Seruri testMartor auto Martor reactivi Anti A Anti B

Eritrocite test et controlAnti A + Anti B

R E F

GR A

GR B

Martor Allo

Anti D

CQ + CC

CC -

REACTIVI i ERITROCITE TESTMartor auto Martor reactivi Anti A Anti B Anti A + Anti B

R E F

GR A

GR B

Martor Allo

Anti D

CC+

CC-

Martor

Anti A

Anti B

Anti A + Anti B

Anti D

GRA

GRB

GRO+

GRO-

ADUGAREA COMPONENTELOR SANGUINE DE TESTAT

Plasm sau serMartor auto Tmoinauto Martor ractif Tmoinractivi Anti A Anti B

Hematii test 3%

Anti A + Anti B

R E F

GR A

GR B

Martor Allo TmoinAllo

Anti D

CC CQ +

CC CQ -

AGITAREA BLND A PLCII PENTRU FAVORIZAREA AGLUTINRII SPONTANE

Martor auto

Martor reactivi

Anti A

Anti B

Anti A + Anti B

R E F

GR A

GR B

GRO/Martor Allo

Anti D

CC+

CC -

CITIREA AGLUTINRII

Absena aglutinrii Nu se constat formarea de reele aglutinante

Prezena aglutinrii Formarea de reele aglutinante de complexe imune Cuantificarea aglutinrii poate fi efectuat n funcie de numrul i mrimea conglomeratelor de hematii + ++ +++

R E F

28

INTERPRETAREA MARTORILORMartor Auto Compoziieserul subiectului + hematiile subiectului

Martor Reactivihematiilesubiectului + seruri test

Martor Alloserul subiectului + hematii fr Ag ABO/Rh

Aspect ateptat

Aspect non conformPrezena Ac reci n serul subiectului Aglutineaz propriile sale hematii Imagine de aglutinare dat de hematiile subiectului diluate n reactiv n condiii normale

Prezena de anticorpi n serul subiectului, indic existena altor structuri pe hematii dect Ag ABO/ Rh

EXEMPLEMartori non aglutinaiMartor auto Martor reactiv

Hematiile subiectului sunt aglutinate de toate serurile = Prezena Ag eritrocitare A i BAnti A Anti B Anti A + Anti B

GR A

GR B

Martor Allo

Anti D

CQ +

CQ -

Serul subiectului nu aglutineaz hematiile test = Fr anticorpi n ser

Controale de calitate : aglutinare CC+ i non aglutinare CCHematiile subiectului sunt aglutinate de serul antiD = Prezena Ag eritrocitare D

Martorii i controalele de calitate sunt conforme : validarea reactivilor i a tehnicilor Proba globular (Beth Vincent) i seric (Simonin) sunt concordante : nu exist anticorpi dirijaicontra propriilor antigene i prezena anticorpilor contra altor antigene

prezena aglutinogenelor A i B et absena aglutininelor : Grupa AB Punerea n eviden a antigenului D : Rh pozitiv

EXEMPLEMartori non aglutinaiMartor auto Martor reactiv

Hematiile subiectului sunt aglutinate de serul anti A (i antiA+B) = Prezena Ag eritrocitare AAnti A Anti B Anti A + Anti B

GR A

GR B

Martor Allo

Anti D

CQ +

CQ -

Serul subiectului aglutineaz hematiile test B = Prezena anticorpilor anti B

Controale de calitate : aglutinare CC+ et non aglutinare CCHematiile subiectului sunt aglutinate de serul antiD = Prezena Ag eritrocitare D

Martorii i controalele de calitate sunt conforme : validarea reactivilor i tehnicii Proba globular (Beth Vincent) i seric (Simonin) sunt concordante : nu exist anticorpi dirijaicontra propriilor antigene i prezena anticorpilor contra altor antigene

prezena aglutinogenelor A i prezena aglutininelor anti B : Grupe A Punerea n eviden a antigenului D : Rh pozitiv

EXEMPLEMartori non aglutinaiMartor auto Martor reactiv

Hematiile subiectului nu sunt aglutinate de nici un ser = Absena Ag eritrocitare A sau BAnti A Anti B Anti A + Anti B

6 9 8 5

GR A

GR B

Martor Allo

Anti D

CQ +

CQ -

Serul subiectului aglutineaz Controale de calitate : aglutinare hematiile test A et B CC+ i non aglutinare CC= Prezena anticorps anti A et anti Hematiile subiectului nu sunt aglutinate de serul B antiD = Absena Ag eritrocitare D Martorii i controalele de calitate sunt conforme : validarea reactivilor i tehnicii Proba globular (Beth Vincent) et seric (Simonin) sunt concordante : prezena anticorpilor anti A etanti B la un subiect care nu posed antigenele A sau B

Absena aglutinogenelor A i B et prezena aglutininelor anti A et anti B : Grupa O Absena antigenului D : Rh negativ Concluzie : Subiectul are grupa O-