1.Notiuni generale despre microbiologie:

Microbiologie (mikros bios logos – mic, viu, studiu). Microbiologia studiază microorganismele şi activităţile lor.

Microorganisme / microbi – organisme microscopice, cu dimensiuni de ordinul µm

(10-6 m) sau nm (10-9 m).

Mi/o reunesc bacteriile şi alte tipuri de organisme: alge, ciuperci microscopice (fungi, micete), protozoare, virusuri şi agenti subvirali, de ex. prioni.

Studiaza

forma mi/o

structura

nutriţia

metabolismul

creşterea şi multiplicarea mi/o (pentru a le

identifica)

urmăreşte

a) relatia mi/o-gazda umanab) capacitatile patogene mi/oc) capacitatile antiinfectioase organism umand) metode de diagnostic etiologic al bolilor infectioasee) metode de terapie/profilaxie antimicrobiana

Mi/o = organisme microscopice (micro-nano- metri) + alge, protozoare, virusuri, agenti subvirali (prioni), cipuerci microscopice (fungi, micete)Clasificari mi/o:

fenotipica (prima tentativa – Carl von Linne) genotipica filogenetica (bazata pe studiul fosilelor sau al HLA)

Grupe taxonomice: domeniu regn increngatura clasa ordin familie gen specieTaxoni infraspecifici din cadrul speciei, care prezinta anumite diferente:

biovar (activitate biochimica/fiziologica) serovar (structura Ag) patovar (grad de patogenitate) lizovar (sensibilitate la bacteriofagi) antibiovar (sensibilitate la AB)

Rolul taxonilor infraspecifici: markeri epidemiologici!Clasificare mi/o:

forme acelulare (virusuri, viroizi, prioni) forme celulare:

bacteria = procariote, eubct1) G-2) G+3) micoplasme (lipsite de PC)

archaea = procariote, PC fara peptidoglican, habitat in conditii extremale eucarya = eucariote (fungi, protozoare)

2 Tipurile de laboratoare microbiologice si sarcinile lor. Regimul si regulile de lucru in laboratorul microbiologic. Clasificarea laboratoarelor in functie de exigenta sigurantei antiinfectioase.

3 Reguli de protective a muncii in laboratorul de microbiologie

Este strict interzis accesul persoanelor străine în laborator Intrarea în laborator și participarea la lucrările practice se va face numai după audierea și

însușirea regulilor de protecție a muncii (dovedită prin semnătură pe un proces verbal) Intrarea în laboratorul de microbiologie necesită purtarea obligatorie a echipamentului de

protecție (halat cu mâneci lungi). Se recomandă ca echipamentul de protecție să fie păstrat separat de hainele utilizate în exterior.

Toate produsele biologice vor fi considerate ca potențial infectante Consumarea de alimente și băuturi, ducerea mâinilor la față în timpul lucrului, fumatul în

laborator sunt strict interzise. Este interzisă introducerea în gură a oricărui obiect din laborator Este interzisă aducerea în laborator a obiectelor de uz personal

o hainele, servietele, gențile, vor fi lăsate în vestiarul special amenajato este permisă aducerea în laborator a materialelor de scris și a lucrurilor de valoare,

acestea din urmă fiind așezate în laborator în locuri special amenajate. Este interzisă intrarea în laborator în lipsa unui cadru didactic Nu este permisă fuga sau mersul rapid prin laborator Lucrul în laboratorul de microbiologie implică contact cu material infecțios! Pentru a preveni

accidentele de lucru, este necesară urmarea strictă a metodelor de lucru și a regulilor de dezinfecție și antisepsie:

o însămânțările se fac la flacără, flambându-se gâtul recipientelor la deschidere și la închidere

o ansa și acul de platină se sterilizează înainte și după folosire prin încălzire la roșu, iar portansa se va flamba

o pipetele și lamele de sticlă contaminate nu se vor decontamina la flacără, ci se scufundă după folosire în recipiente cu soluție dezinfectantă existente la mijlocul fiecărei mese. Tot în aceste recipiente se vor introduce lamele și lamelele de sticlă folosite

o pipetarea cu gura este interzisă. În vederea pipetării se vor folosi dispozitive de pipetare adecvate

o cutiile Petri, eprubetele, sau alte recipiente și materialele contaminate se introduc după lucru în găleata de infecte care va fi autoclavată

o manipularea aparatelor se va face respectând instrucțiunile de folosire specificeo atenție la manipularea substanțelor caustice și inflamabileo în cazul răspândirii accidentale a materialului infecțios, va fi anunțat cadrul didactic

care conduce lucrările și care va indica măsurile de dezinfecție După terminarea lucrului mâinile se antiseptizează prin introducerea lor într-o substanță

antiseptică (cloramină, bromocet) pentru câteva minute, apoi se spală cu apă caldă și săpun. Fiecare student are obligația de a-și supraveghea spațiul de lucru, păstrând ordinea și

curățenia:o fiecare student își va alege locul de lucru la începutul primei lucrări practice, loc pe

care și-l va păstra până la încheierea semestrului/anului universitaro orice alterare a suprafeței de lucru sau a diferitelor obiecte adiacente spațiului de lucru

propriu produsă exclusiv din vina studentului, va fi penalizată prin amendă și/sau absență nemotivată în ziua respectivă

o orice alterare existentă a zonei de lucru va fi consemnată cadrului didactic la începutul lucrării practice

5. Amenajarea si utilarea laboratorului de microbiologie

Laboratorul de microbiologie trebuie sa cuprinda doua compartimente: - o sala de pregatire a mediilor si obiectelor de lucru si de decontaminare, continând mese, un autoclav, o etuva, un congelator si un frigider (care va fi utilizat si pentru pastrarea tulpinilor microbiene). Tot aici se poate stoca sticlaria, mediile de cultura precum si reactivii. - o sala de lucrari propriu-zise, de manipulare a culturilor microbiene, la adapost de curentii de aer, dotata cu mese cu suprafata neteda, rezistenta, impermeabila, cu conducte de gaz si prize electrice, un sistem de vid si de aer comprimat si o hota sterilizabila, cu radiatii ultraviolete (eventual o hota cu flux laminar). În masura în care este posibil, în legatura cu aceasta sala, ar trebui sa existe anexe prevazute cu termostate la diferite temperaturi ( 250C, 300C, 370C, 440C, 550C).Manipularile de culturi microbiene sau de produse susceptibile sa contina microorganisme se efectueaza

tinând cont de unele tehnici particulare prin care sa se evite cele doua tipuri de contaminare:1. contaminarea culturii sau a produsului ce trebuie analizat datorita personalului sau mediului inconjurator;2. contaminarea personalului sau a mediului înconjurator de catre microorganismele studiate.In laboratorul de microbiologie, operatia de baza este transferul de microorganisme dintr-un recipient în altul, lucrare ce se executa în zona sterila de protectie din jurul flacarii becului de gaz.Sticlaria cel mai des utilizata în laboratorul de microbiologie consta în eprubete de diferite dimensiuni, flacoane Erlenmeyer, placi Petri, pipete Pasteur si pipete gradate. În ultima perioada sunt din ce în ce mai mult utilizate recipientele si pipetele din plastic, de unica folosinta. Pentru prelevarea si inocularea culturilor se utilizeaza ansa sau firul metalic, fabricate din nicrom. Ustensilele de etalare permit repartizarea uniforma a inoculului pe suprafata mediilor solidificate si pot fi fabricate prin îndoirea unui tub sau a unei baghete din sticla. În afara acestor ustensile curente de lucru, mai pot fi întrebuintate o serie de alte instrumente, în functie de operatia efectuata.Laboratorul de microbiologie trebuie sa aiba în dotare urmatoarele aparate si echipamente:- robinet cu apa calda si rece, de preferinta actionat cu piciorul;- hota cu flux laminar sau nisa sterilizabila, indispensabila lucrarilor de microbiologie- bec de gaz tip Bunsen pentru lucrul în zona sterila din jurul flacarii cu con albastru si pentru sterilizarea ansei- etuva pentru sterilizarea sticlariei- termostat bacteriologic pentru incubarea culturilor- autoclav pentru sterilizarea mediilor de cultura si pentru decontaminarea obiectelor - baie de apa termostatata- frigidere pentru conservarea mediilor si a culturilor- balante- pH-metru- microscoape