carte microbiologie

Upload: mally-fox

Post on 03-Jun-2018

340 views

Category:

Documents


16 download

TRANSCRIPT

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    1/71

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    2/71

    LOCUL AGENILOR INFECIOI N SISTEMATICAMICROORGANISMELOR

    Microorganismele difer $n mod fundamental unele de altele, fiind $ncadrate $n % regnuri: protista,procariotae i vira.

    Regnul Protista cuprinde microorganisme a cror celule sunt evoluate, de tip eucariot, cu nucleui organite celulare nespecifice cum sunt reticolul endoplasmatic, ergastoplasma etc.

    &igura # ' elula de tip eucariot

    Algelesunt microorganisme acvatice, fotosintetizante, de la dimensiuni microscopice pna laforme gigante, pluricelulare, filamentoase. Ele nu prezint interes medical propriu*zis, cu

    e"cepia agar*agarului din care se obine agarul, poliza+arid care servete la preparareamediilor de cultur solide.

    Mcetelesau ciupercile microscopice sunt grupate $n clase. !in cele #-. de specii, doar# sunt de interes medical.

    &igura - * M/cetele

    Proto!oarele sunt microorganisme unicelulare eucariote, evoluate structural i $n generalmobile, asemnnndu*se cu celulele animale. ele de interes medical se $ncadreaz $n clase:flagelata, r+izopoda, sporozoa i ciliata.

    -

    are toate caracterele celulelorevoluate

    nucleu

    organite celulare comune

    nu are perete celular

    se divide prin direct sau prin mitoza

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    3/71

    &igura % * 0rotozoarele

    Regnul Procariotecuprinde microorganisme a cror celule sunt primitive, de tip "rocariot, lipsitede nucleu adevrat i de organite celulare nespecifice, dar cu un $nveli suplimentar numit peretecelular.

    nu au nucleu adev1rat ci un cromozom +aploid format dintr*o molecul1 circular1 de 2!3

    lipsite de organite celulare comune cu e"cepia ribozomilor

    au perete celular rigid

    4e divid direct

    &igura % ' elula de tip procariot

    Arc#ae$acteriile sunt lipsite de interes pentru medicin. Ele sunt bacterii termofile,productoare de metan.

    Eu$acteriilecuprind un numr foarte mare de bacterii, dintre care cele de interes medical sunt:

    bacteriile clasice * cu forme variate i cu perete celular,

    c+lam/diile * bacterii cu parazitism intracelular obligatoriu i care prezint un mecanismde multiplicare unic $n lumea bacteriilor,

    ric5ettsiile * bacterii cu +abitat intracelular (cu o e"cepie), dar cu diviziune direct,$ntlnit la ma6oritatea bacteriilor,

    micoplasmele * bacterii crora le lipsete $n mod natural peretele celular.7n prezent sunt incluse $n eubacterii i c/anobacteriile sau algele albastre, care sunt microorganismeacvatice.

    Regnul %iracuprinde entiti infecioase de natur subcelular care sunt virusurile i viroizii.

    %irusurilese deosebesc fundamental de formele celulare de via. Ele sunt formate dintr*unsingur acid nucleic (2!3 sau 23), $nvelit de o capsid proteic i sunt parazite obligatoriuintracelulare. 8irusurile sunt particule inerte $n stare e"tracelular dar, dup ce ptrund $ntr*ocelul vie, deviaz metabolismul acesteia $n scopul propriei replicri.

    %iroi!iiau o structur i mai simpl, fiind alctuii doar dintr*un acid nucleic cu 9M mic.nii dintre ei produc boli transmisibile la plante. 8irusurile i viroizii alctuiesc $mpreunregnul 8;2.

    %

    nu au nucleu adev1rat ci uncromozom +aploid format dintr*omolecul1 circular1 de 2!3

    lipsite de organite celulare comune cue"cepia ribozomilor

    au perete celular rigid

    4e divid direct

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    4/71

    Entit1i infecioase acelulare cu parazitism obligatoriu intracelular

    2cid nucleic (2!3 sau 23) i un $nveli proteic ' capsida. neori au un $nvelisuplimentar ' anvelop1.

    ;nerte $n afara celulei gazd1

    0araziteaz1 celula la nivel genetic, deviaz1 metabolismul acesteia $n scopul proprieireplic1ri

    &igura ' 4tructura virusurilor

    Prionii sunt entiti infecioase de dimensiuni foarte mici (

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    5/71

    Bacteriologie general

    MORFOLOGIA I STRUCTURA &ACTERIILOR

    'i(ensiunea bacteriilor se e"prim $n micrometri (#@A# *% mm), fiind cuprins $ntre #*#@.

    !imensiunea, forma i aezarea bacteriilor se apreciaz prin microscopie optic, iar detaliilemorfologice i structurale prin microscopie electronic. &orma bacteriilor constituie bazaclasificrii lor.

    For() *i a*e!are. 7n raport cu forma lor deosebim categorii de bacterii: rotunde (cocii), alungite(bacili), $ncurbate (spirili, spiroc+ete, vibrioni) i filamentoase (actinom/cetele).

    &igura < ' &orma i dimensiunile bacteriilor

    cocii sunt bacterii rotunde, aezate $n grmezi (genul Staphylococcus), ovalare, aezate $nlanuri (genul Streptococcus), lanceolate, dispuse $n diplo ca dou flcri de lumnare, (speciaStreptococcus pneumoniae) i reniforme dispuse ca dou boabe de cafea ce se privesc fa $nfa (genulNeisseria) cu de ,C * #@D

    $aciliisunt bacterii cu form alungit de bastona cu dimensiuni $ntre #,< * #@.

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    6/71

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    7/71

    STRUCTURA CELULEI &ACTERIENE

    &igura G' 4tructura celulei bacteriene

    Structuri celulare o$ligatorii

    Peretele celular

    &igura # ' 4tructura peretelui celular

    omponent celular obligatorie care $ncon6oar membrana citoplasmatic, peretele celular este o

    structur rigid, specific bacteriilor. El este format dintr*un strat bazal sau peptidoglican,asemntor la toate bacteriile i un strat al structurilor superficiale, foarte difereniat, $n funcie de

    F

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    8/71

    care bacteriile manifest caractere tinctoriale diferite: bacterii gram * pozitive, gram * negative iacido*alcoolorezistente.

    Pe"ti,oglicanulsau mureina este structura c+imic responsabil de rigiditatea peretelui celular icare asigur forma i rezistena mecanic a bacteriei. 0rezent la toate bacteriile, el const dintr*un

    sc+elet, format din molecule lungi paralele poliza+aridice de 3*acetil*glucozamin i acid 3*acetil*muramic. Moleculele de acid 3*acetil*muramic din lanurile vecine sunt legate $ntre ele prin punipolipeptidice, transversale.

    &igura ## ' 4tructura peptidoglicanului

    ?a $acteriile gra( - "o!iti+e, peptidoglicanul are o grosime de #

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    9/71

    ?0J este o to"in termolabil, care se elibereaz $n mediul $ncon6urtor de ctre bacteriile gram*negative numai dup liza lor i foarte reactiv $n organismul gazd. 2stfel, lipidul 2 produce febr,activeaz mecanismele aprrii antiinfecioase i $n e"ces produce ocul endoto"ic cu evoluiegrav, c+iar fatal.

    Spa#iul periplasmic. 4istemul structural dublu al peretelui celular la bacteriile gram*negative

    creeaz un compartiment ce se $ntinde de la membrana celular pn la membrana e"tern, numitspaiu periplasmic. El conine peptidoglicanul i un gel care favorizeaz nutriia bacteriei princoninutul $n enzime degradative ca, de pild, fosfataze, nucleaze, proteaze etc. Kot aici sunt

    prezente enzimele de inactivare ale unor antibiotice cum sunt beta*lactamazele i cefalosporinazele.

    &acteriile aci,o-alcoolore!istente de interes medical sunt bacilul tuberculos i bacilul leprei.0eretele celular se aseamn cu cel al bacteriilor gram*pozitive, dar structurile speciale conin acidmicolic i o cear, ce confer acestor bacterii caractere tinctoriale deosebite i rezisten crescut lafactorii de mediu. Ele se coloreaz la cald prin te+nica Jie+l*3eelsen.

    Funciile peretelui celular:

    asigur forma, rezistena mecanic i osmotic a bacterieiD

    regleaz traficul molecular de perete $n ambele sensuri

    este sediul antigenelor de suprafa

    este sediul unor factori de patogenitateD

    are rol $n diviziunea bacterian i $n procesul de sporulare.

    Me($rana cito"las(atic)

    &igura #- ' 4tructura membranei citoplasmatice

    Este o membran fin (,

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    10/71

    este sediul sintezei acizilor grai, a fosfolipidelor,

    este implicat $n sinteza peretelui celular, al poliza+aridelor capsulare, participnd activ lacreterea i diviziunea celulei bacteriene i la formarea sporului bacterian.

    Materialul nuclear

    Este un nucleoid sau ec+ivalent nuclear, cu o structur primitiv $n comparaie cu nucleul celuleloreucariote. 3ucleoidul este format dintr*o molecul circular de 2!3, organizat sub forma unuicromozom +aploid care este $n contact direct cu citoplasma datorit lipsei membrane nucleare.Molecula de 2!3 dublu spiralat este la rndul ei supra+elicat $n 6urul unui miez de 23,dispoziie necesar funcionalitii materialului nuclear.

    $unc#ia nucleului bacterian const $n depozitarea informaiei genetice necesar autoreplicrii,organizrii structurale i funcionale a celulei bacteriene, deci a caracterelor ce definesc specia.

    Cito"las(a

    4ituat $ntre materialul nuclear i faa intern a membranei citoplasmatice, citoplasma este unsistem coloidal alctuit din CL ap, $n care se gsete o cantitate mare de molecule organice, ionianorganici, enzime, 23, vacuole i incluzii. Este lipsit de organitele celulare prezente la celuleleeucariote cum sunt reticulul endoplasmatic, aparatul 9olgi, mitocondriile, centrul celular,ergastoplasma.

    Ri$o!o(ii. 4e apreciaz c o celul bacterian are -. de ribozomi ce conin C*GL din 23*ul citoplasmatic. ibozomii reprezint sediul sintezelor proteice din celul.

    Inclu!iile cito"las(atice, descrise la unele specii bacteriene, sunt formaiuni structurale inerte,temporare, de diferite dimensiuni, variind $n funcie de specia bacterian i condiiile de mediu. Elesunt structuri legate de activitatea metabolic a celulei bacteriene i reprezint un material derezerv care poate fi folosit ca surs de energie.

    Structuri celulare neo$ligatorii

    Ca"sula

    Ca"sulaeste un $nveli compact, intim legat de celula bacterian, vizibil pe preparatele uzualesub forma unui +alou clar ce $ncon6oar bacteria.

    !in punct de vedere c+imic, capsula tuturor bacteriilor de interes medical este de naturpoliza+aridic (Streptococcus pneuomoniae, %lebsiella etc.) cu e"cepia capsulei baciluluicrbunos care este polipeptidic.

    apsula are rol $n rezistena bacteriilor fa de fagocitoz, fiind astfel un factor de virulen.8ariantele necapsulate ale acelorai specii sunt nepatogene. !e e"emplu, Streptococcus

    pneumonie, de tip 4, capsulat,produce la oarecele alb de laborator o septicemie mortal, pe cnd

    varinata necapsulat nu este patogen.apsula este o structur cu proprieti antigenice specifice (antigenele >) care permit difereniereaunor serotipuri $n cadrul speciei.

    Microca"sula este o structur discret cu o grosime sub ,-@m care nu se evideniaz lamicroscopul optic, ci numai prin metode imunologice sau electronomicroscopice (Neisseria

    &onorrhoeae). Ea constituie un factor de virulen.

    Stratul (ucos, glicocali"ul este un strat amorf i vscos ce $nvelete bacteria. El este format dinlanuri lungi de poliza+aride, cum sunt levanii i de"tranii, cu rol ma6or $n adezivitatea bacteriilorde suprafee. 2stfel, de pild, Streptococcus mutansproduce cantiti mari de de"tran i levan prinintermediul crora se ataeaz de suprafaa diniilor contribuind la formarea cariilor i a plciidentare.

    Funciile capsulei: este un factor de aderen i colonizare a bacteriile pe suprafeeD

    #

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    11/71

    prote6eaz bacteriile de diferii ageni antibacterieni din mediu cum sunt: bacteriofagii,colicinele, complementul, lizozimul sau alte enzime bacterioliticeD

    prote6eaz bacteriile de aciunea fagocitelor, fiind deci un factor de virulenD

    reprezint sediul antigenelor capsulare, importante $n identificarea acestor bacterii.

    Cilii sau 0lagelii $acterieni4unt apendici filamentoi ai speciilor bacteriene mobile, cu originea $n citoplasma bacterian, iservesc ca organe de locomoie. Ei sunt prezeni mai ales la bacili. !ispoziia i numrul cililor suntcaracteristice speciei. 4*au descris bacterii atric+e (fr cili), monotric+e * cu un cil polar (Vibrocholerae), lofotric+e * cu un smoc de cili situat la unul din polii bacteriei * ('seudomonas

    fluorescens), amfitric+e * cu cilii situai la ambii poli ai bacteriei (la genul Spirillum) i peritric+e *cu cilii dispui pe $ntreaga suprafa a bacteriei (Salmonella,() coli,'roteusetc.).

    &igura #% ' ilii bacterieni

    Pilii $acterieni

    3umeroase specii bacteriene gram*negative au pe suprafaa lor lor nite apendici filamentoi, rigizi,mai scuri dect flagelii, $n numr mare (#*

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    12/71

    &igura # ' 0oziia sporului

    4porularea se declaneaz $n condiii nefavorabile de via, cnd bacteriile sunt lipsite de sursenutritive.

    &igura #< * 4tructura sporului

    4porii nu sunt forme de $nmulire ale bacteriilor. !intr*o bacterie vegetativ se formeaz un singurspor, care $n condiii favorabile de via germineaz i va da natere unei singure celule bacterienevegetative identice cu aceea $n care s*a format.

    &igura # * 9erminarea sporului

    4porii au un rol important $n epidemiologia unor infecii, cum sunt antra"ul, tetanosul, botulismuli gangrena gazoas.

    #-

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    13/71

    STU'IUL MORFOLOGIC AL &ACTERIILOR

    E"aminarea microscopic este frecvent primul pas $n identificarea unor bacterii. aracterelemorfologice i tinctoriale $ncadreaz bacteriile $ntr*unul din grupurile ma6ore stabilind conduitadiagnosticului bacteriologic. Elementele morfologice importante $n identificarea unei bacterii sunt:,i(ensiunea, 0or(a, a*e!area, prezena unor structuri speciale ca, de pild, endospori, flageli,

    capsul sau incluzii intracelulare. Microsco"ul cu c2(" lu(inos3 2cesta are - sisteme de lentile care mresc imaginea

    obiectului studiat: lentilele obiectivului i lentilele ocularelor. 7n mod obinuit se folosesc %obiective: un obiectiv care mrete de #" i care se folosete pentru obinerea unei imagini deansamblu a preparatului e"aminat, un obiectiv ce mrete de ", cu care se e"amineazmicroorganisme mai mari ca, de pild fungi, parazii i $n fine obiectivul cu imersie careamplific imaginea de #" i cu care se e"amineaz bacteriile. ;maginea mai este amplificat$nc de # ori de lentilele ocularelor. 0uterea de rezoluie (distana cea mai mic $ntre - punctece poate fi perceput) a unui microscop fotonic este de ,-@. ?a microscopul cu cmp luminosse e"amineaz preparatele colorate, dar uneori i preparate native.

    Microsco"ul cu 0on, 4ntunecat3 2re un condensator special, cardioid, care permite

    ptrunderea luminii numai de la periferia obiectivului. ?a acest tip de microscop se e"amineazpreparatele native, $ntre lam i lamel, efectuate direct dintr*un produs, $n care se cautbacterii a cror lime nu depete ,#*,-@ (ca, de e"emplu, evidenierea treponemelor dinancrul sifilitic), sau dintr*un mediu de cultur lic+id, $n care se urmrete dezvoltarea uneiculturi (Leptospiraetc.).

    Microsco"ul cu contrast ,e 0a!)se utilizeaz la e"aminarea preparatelor native. El are unsistem de filtre care permit sesizarea diferenelor de faz a luminii cnd aceasta trece prinobiecte de densitate diferit. Microorganismele e"aminate la acest microscop au aspecttridimensional.

    Microsco"ul cu ra!e U%30reparatele de e"aminat sunt colorate cu un compus fluorescentcum este izotiocianatul de fluorescein. 0articulele colorate vor apare luminoase, fluorescente

    pe cmpul $ntunecat al microscopului. Microsco"ul electronic. ?umina este $nlocuit cu un fascicul de electroni. 7n microscopia

    electronic cu transmisie, electronii trec direct prin preparat, iar $n microscopia prin baleia6 eitrec dintr*un anumit ung+i prin preparat, astfel $nct imaginea ce apare pe ecran estetridimensional.

    E"aminarea morfologiei bacteriene se efectueaz pe diverse preparate microscopice.

    E0ectuarea 0rotiurilorfi"ate i colorate este o metod de rutin $n laboratorul de bacteriologie.&rotiurile se pot colora simplu cu un singur colorant, elementele preparatului avnd toate aceeaiculoare, sau difereniat cu mai muli colorani, bacteriile colorndu*se diferit $n funcie de afinitatealor tinctorial.

    !up efectuarea frotiurilor, acestea se usuc la temperatura camerei i se fi"eaz cel mai des princldur, trecnd frotiul de -*% ori prin flacr. 7n timpul fi"rii, formele vegetative ale bacteriilorsunt omorte i devin permeabile pentru colorani. &i"area c+imic (cu alcool metilic, aceton,Ma/*9rNnOald, acid osmic etc.) se utilizeaz mai ales cnd preparatele sunt seciuni de esuturi saufrotiuri de snge, deoarece prote6eaz celulele din produs de degradare.

    Colora1iile si("le folosesc soluii apoase a unui colorant bazic ca, de e"emplu, albastru demetilen, violet de metil, fu"in bazic etc. !up colorare, frotiurile se spal pentru $ndeprtareae"cesului de colorant. nii microbi se coloreaz bipolar datorit dispoziiei citoplasmei la ambelecapete ale bacteriei.

    Colora1ia negati+)este o metod rapid i simpl de studiu a morfologiei bacteriene. Bacteriile seamestec cu colorantul i se $ntind ca un film pe lam. Ele apar incolore pe fondul colorat al

    preparatului.

    #%

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    14/71

    I("regnarea argentic)se utilizeaz pentru colorarea spiroc+etelor, mai ales cnd se urmreteevidenierea lor $n esuturi. 7n aceast coloraie, spiroc+etele se coloreaz $n brun*negru pe fondulgalben al preparatului.

    Colora1iile ,i0eren1iale sunt cele mai importante $n laboratorul de bacteriologie. el mai desfolosit este coloraia gram, introdus de studentul danez +ristian 9ram la sfritul secolului

    trecut. !up cum apar bacteriile $n aceast coloraie, ele se $mpart $n gram*pozitive i gram*negative.

    Princi"iul colora1iei gra(const $n colorarea iniial a bacteriilor cu cristal*violet sau violet degeniana. Mordansarea se face cu lugol. rmeaz decolorarea $n urma creia unii microbi, ceigram*pozitivi, pstreaz colorantul violet, iar alii, cei gram*negativi, vor fi decolorai cu unamestec de alcool*aceton. 2cetia din urm se vor recolora cu fu"in bazic. Bacteriile gram*

    pozitive vor aprea, deci, de culoare violet iar cele gram*negative roii.

    FI.IOLOGIE &ACTERIAN5

    &iziologia bacterian se ocup cu studiul nutriiei, metabolismului i multiplicarea bacteriilor.

    Nutri1ia $acterian)3utriia bacterian reprezint totalitatea proceselor prin care bacteriile $i procur din mediul$ncon6urtor substanele necesare supravieuirii, creterii i $nmulirii, iar respiraia bacterianmodalitatea de a*i produce energia necesar activitii metabolice.

    !up sursa de carbon i azot bacteriile se clasific $n:

    autotro0e, care sintetizeaz compui organici utiliznd ca surs de carbon P -i ca surs deazot amoniacul, nitriii sau nitraii

    #eterotro0e, care utilizeaz ca surs de carbon numai substane organice.

    Bacteriile de interes medical sunt, cu foarte puine e"cepii, heterotrofe. Ele au nevoie pentrumultiplicare de substane organice, diveri ioni, oligoelemente i factori de cretere (vitaminele B#,

    B-, acid pantotenic, biotin, lactoflavin acid folic etc.).3ecesitile nutritive difer c+iar i $ncadrul aceleiai specii. 7n cadrul bacteriilor paratrofe se gsesc cele "aratro0e, cu +abitatobligatoriu intracelular care sunt dependente de celula gazd. 2ceste microorganisme suntric5ettsiile i c+lam/diile.

    Meta$olis(ul $acterian

    Res"ira1ia $acterian)

    'in "unct ,e +e,ere "ractic, bacteriile se $mpart dup necesarul de o"igen, $n:

    $acterii strict aero$e, care se dezvolt nu(ai 4n "re!en1a o/igenului at(os0eric, folosind

    e"clusiv res"ira1ia aero$) i deci o"igenul ca acceptor final de +idrogen ca, de e"emplu,'seudomonas aeru&inosa,ycobacterium tuberculosis etc.

    $acterii strict anaero$e, care nu se ,e!+olt)dect4n a$sen1a o/igenului, prezena lui fiindfoarte to"ic culturii c+iar la o presiune de numai # *

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    15/71

    $acterii anaero$e aerotolerante folosesc numai 0er(enta1ia 4n "re!en1a aeruluiat(os0eric, 0)r) "artici"area o/igenuluila reaciile energogenetice. Ele tolereaz o"igenul $nmediu fie pentru c au $n ec+ipamentul enzimatic supero"iddismutaz i catalaz, fie cenzimele e"ist $n mediul de cultur. 2stfel, bacteriile din genul Streptococcussunt lipsite decatalaz, dar pot fi cultivate $n condiii de aerobioz pe medii cu snge, care suplinete

    catalaza. $acterii (icroaero0ilefolosesc respiraia i fermentaia, dar necesit o concentraie mai mare

    de bio"id de carbon dect cea din atmosfer pentru reacii de carbo"ilare. 2stfel, unele specii,ca cele din genurile Neisseria, Brucella, *ampylobacter,necesit concentraii de bio"id decarbon de *#L.

    Cur$a ,e cre*tere *i 4n(ul1ire a $acteriilor 4ntr-un (e,iu li(itat

    Bacteriile se $nmulesc prin diviziune direct. !ac se introduce un inocul (un numr redus) decelule bacteriene $ntr*un mediu de cultur proaspt i se incubeaz $ntr*o atmosfer prielnicspeciei respective, bacteriile vor crete i se vor $nmuli, iar timpul care trece de la o diviziunecelular la urmtoarea se numete timp de &enera#ie.

    &igura#F ' !iviziunea bacteriana a bacteriilor gram pozitiv

    &igura #C ' urba de multiplicarea a bacteriilor in mediu limitat

    #

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    16/71

    !ac se apreciaz numrul de celule bacteriene vii la intervale diferite de timp de la momentulinoculrii i reprezentm grafic raportul care se stabilete $ntre acest numr i timpul care s*a scurs,vom obine o curb caracteristic ce cuprinde urmtoarele faze:

    Fa!a ,e lag. 7n aceast perioad nu se remarc o cretere a numrului de celule, cu toate c elecresc $n volum i dovedesc o activitate metabolic intens. !urata acestei faze variaz $n

    funcie de specie, condiiile de mediu, de numrul de celule din inocul i este intervalul de timp$n care celulele se adapteaz noilor condiii de mediu. ?a ma6oritatea bacteriilor de interesmedical, durata ei este $n 6ur de #- de or, iar la formele sporulate %* ore. 4ensibilitatea

    bacteriilor fa de c+imioterapice este crescut.

    Fa!a e/"onen1ial) sau logarit(ic) este precedat de o faz de accelerare $n care celulelebacteriene $ncep s se $nmuleasc. elulele se divid constant prin fisiune binar, deci $nprogresie logaritmic, raportul dintre numrul bacteriilor i timp fiind liniar. 2ceast ratintens de multiplicare este posibil doar in vitro, in vivoea fiind mult frnat de mecanismeleaprrii antiinfecioase. !urata acestei perioade este dependent de aceleai condiii de mediuca i faza precedent dar i de specie. 2stfel()coliare un timp de generaie de apro"imativ #minute iarycobacterium tuberculosispeste -< ore. 4ensibilitatea la antibiotice a microbilorrmne crescut. ompoziia mediului de cultur se modific pn la sfritul acestei faze pede o parte datorit consumului principiilor nutritivi iar pe de alt parte, acumulrii demetabolii.

    Fa!a sta1ionar))Multiplicarea bacteriilor $n progresie logaritmic nu mai este posibil, rata de$nmulire scade treptat pn cnd bacteriile trec $n faza staionar. 7n aceast faz, celulele numai cresc, ci are loc o activitate metabolic endogen, prin care celula $i sintetizeaz rezervede energie i produi intermediari necesari meninerii $n viaa $n noile condiii. 7ncetareamultiplicrii $n faza staionar se datoreaz $n principal epuizrii unui factor nutritiv esenialdin mediu, numit factor limitant i acumulrii unor produi to"ici. 7n acest faz scadesensibilitatea tulpinilor la c+imioterapice.

    ?a $nceputul fazei staionare, unele specii bacteriene produc anumii metabolii secundari cudistribuie ta"onomic foarte riguroas. 2cet metabolii includ antibiotice, colicine i e"oto"ine.

    ;niierea sporogenezei la bacteriile sporulate se petrece la sfritul fazei e"poneniale sau la$nceputul fazei staionare. !urata fazei staionare este $n general de cteva ore.

    Fa!a ,e ,eclin care dureaz mai multe zile se caracterizeaz prin scderea numrului debacterii. Ea se datoreaz scderii substanelor nutritive i acumulrii de substane to"ice pentrubacterii. ?a aceti factori se adaug la unele specii bacteriene proprietatea de autoliz cueliberarea coninutului citoplasmatic $n mediu. Modificrile morfologice sunt pregnante att $nceea ce privete forma, dimensiunile ct i caracterele tinctoriale. 7n timp mor toate bacteriile,cu e"cepia celor sporulate, i cultura se autosterilizeaz.

    ultivarea bacteriilor $n mediu limitat este utilizat $n laboratoarele de bacteriologie medical,pentru stabilirea diagnosticului unei infecii bacteriene, caracterele culturale sunt deosebit deimportante $n identificarea bacteriilor.

    In0luen1a 0actorilor ,e (e,iu asu"ra 4n(ul1irii $acteriilor

    nii parametri fizici ai mediului $ncon6urtor influeneaz $n mod +otrtor creterea imultiplicarea microorganismelor.

    Te("eratura

    Kemperarura optim de dezvoltare a bacteriilor este cea a +abitatului lor natural. 7n funcie deaceast temperatur, bacteriile se $mpart $n psi+rofile, care se $nmulesc optim la -Q dar i subaceast temperatur, mezofile, cu temperatura optim cuprins $ntre -*Q i termofile, care se$nmulesc optim la peste

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    17/71

    ?imitele de temperatur $n care aceste bacterii pot s creasc sunt $ns mai mari i variaz de laspecie la specie. 2stfel, gonococul i meningococul nu suport variaii mai mari de #*-Q fa detemperatura optim, spre deosebire de enterobacterii, care cresc $n limite foarte largi.

    Microorganismele sunt sensibile la temperaturile ridicate, aplicaia practic a acestui aspect fiindsterilizarea.

    Kemperaturile moderat sczute, ca, de pild, cea de R o din frigidere, nu distrug bacteriile daropresc, $n general, $nmulirea lor prelungindu*le viabilitatea.

    *on&elarea. !ac o suspensie bacterian este supus $ng+eului la temperaturi nu prea mici fa deo, cristalizarea apei determin leziunea structurilor bacteriene. 0rin $ng+eare nu vor fi omortetoate celulele unei suspensii, dar $ng+eul i dezg+eul repetat scad foarte mult numrul de bacteriiviabile.

    *onservarea prin con&elare. Kemperatura optim este cea realizat de P-(*FCQ) sau de azotullic+id (*#CQ).

    p7-ul

    Bacteriile se pot dezvolta $n limite largi de pS, cele patogene pentru om dezvoltndu*se optim la unpS de F,-*F,. E"ist i e"cepii ca, de pild, bacteriile din genulBrucellacare cresc la unpS de, i vibrionul +oleric lapS de G,. ?actobacilii, prezeni $n flora vaginal normal se dezvoltc+iar i la unpS de %,G.

    Concentra1ia ,e CO8

    3ecesarul de bio"id de carbon al bacteriilor este diferit. 2stfel, unele specii (Neisseriamenin&itidis, N) &onorrhoeae) sunt dependente de prezena lui $n concentraii ridicate pn la #L$n atmosfera $n care se dezvolt, pe cnd altele ca, de e"emplu, S)aureusse dezvolt la concentraiaobinuit de P-din atmosfer (,%L), nu i $ntr*o atmosfer complet lipsit de P-.

    2stzi, incubarea produselor patologice din care se urmrete izolarea bacteriilor se efectueaz $n

    termostate cu P-(L), deoarece dezvoltarea lor este superioar celei din termostatele obinuite.U(i,itatea

    2pa liber este absolut necesar creterii i multiplicrii microbilor. 3ecesarul de ap variaz $nfuncie de specie.

    0rin liofilizare (desicare brusc la *FCo), care este o metod de conservare a microbilor, se e"tragepractic $ntreaga ap liber din celulele bacteriene, ceea ce are ca urmare creterea stabilitiibiopolimerilor i $ncetarea metabolismului. Bacteriile liofiliizate se pstreaz ani de zile.

    Presiunea os(otic)

    Bacteriile se $nmulesc optim pe medii izotonice, rezisten lor la variaiile presiunii osmotice fiind

    incomparabil mai mare dect cea a celulelor organismelor superioare. 2ceast rezisten sedatoreaz peretelui celular.

    Bacteriile osmofile, dintre care cele #alo0ile, sunt capabile s se $nmuleasc $n soluii +ipersaline(bacteriile din genul Staphylococcusi (nterococcus+. 0e baza acestei proprieti se prepar unelemedii de $mbogire i selective.

    Ra,ia1iile

    Razele neionizante

    azele ultraviolete. 0uterea bactericid a razelor luminoase devine perceptibil la o lungime deund de %%nm, crescnd pe msur scderii lungimii de und a luminii 8. Mecanismul

    bactericid al razelor 8 const $n inducerea formrii $n celula bacterian a unor dimeri de timincare interfereaz replicarea !32. 2lterrile altor elemente structurale bacteriene sunt negli6abile.

    #F

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    18/71

    7n scop practic lmpile cu vapori de mercur se folosesc pentru a reduce numrul de bacteriie"istente $n aer $n slile de operaie, $n laboratoare, $n $ncperi $n care sunt adpostite animale dee"prien etc.

    Efectul bactericid al razelor solarese datoreaz coninutului $n raze 8 (%*nm). 7n condiiinaturale efectul bactericid al luminii solare este mai mare $n rile sudice unde coninutul $n raze

    8 este mare.Radiaiile ionizante

    Mecanismul bactericid al acestor raze const $n formarea $n celul a unor radicali cu via scurt iprotoni. 2ceti produi vor altera bazele azotate i legturile dintre ele. 4porii sunt $n general mairezisteni dect formele vegetative ale bacteriilor. TTT

    Meto,e ,e culti+are a le $acteriilor

    unoaterea necesitilor nutritive ale bacteriilor este foarte important $n bacteriologia medical,deoarece st la baza preparrii mediilor de cultur destinate izolrii diverselor specii bacteriene din

    produsele biologice sau patologice.

    0rin cercetarea necesitilor nutritive ale diferitelor specii s*au realizat medii adecvate pentru

    aproape toate bacteriile de interes medical, speciile necultivabile fiind foarte puine, ca, de pild,ycobacterium lepraei unele spiroc+ete printre care Treponema pallidum.

    ultivarea bacteriilor $n scop diagnostic pune $n esen dou probleme:

    U alegerea unui mediu de cultur optim, care s permit izolarea tuturor bacteriilor care arputea fi prezente $n produsul de e"aminat i

    U obinerea bacteriilor $n culturi pure, pentru a putea fi identificate.

    Con,i1ii generale "entru culti+area $acteriilor

    n mediu de cultur trebuie s conin ap, substane organice, minerale, oligoelemente i factoride cretere. 0entru satisfacea acestor necesiti se ultilizeaz substraturi biologice comple"e care au

    $n compoziia lor aceste ingredinente. 2cestea sunt:*peptonele,care se obin prin +idroliza enzimatic sau acid a proteinelor de origine animal (dee"emplu fin de oase). 0rin coninutul $n peptide i aminoacizi constituie o surs universal deazot, fiind folosite practic $n prepararea tuturor mediilor de cultur,

    * extractul de carne,se obine prin des+idratarea decoctului de carne de vit.

    * extractul de drojdie,care conine numeroase vitamine, mai ales cele din grupul B,

    7n afar de ingredientele mai sus menionate mai amintim:

    * clorura de sodiu, care se adaug la mediile uzuale $ntr*o concentraie de ,GL

    Culti+area (icro$ilor "e (e,ii lic#i,e. Mediile lic+ide se folosesc pentru $nmulirea unormicrobi care se gsesc $n numr mic $ntr*un anumit produs. el mai simplu mediu folosit $nlaboratorul de bacteriologie este bulionul care se prepar din decoct de carne de vac, pepton iclorur de sodiu. ultivarea unui produs pe medii lic+ide are dezavanta6ul c nu permite obinereaunei culturi pure.

    Culti+area $acteriilor "e (e,ii soli,e3 ;ntroducerea mediilor de cultur solide a $nsemnat unprogres uria $n te+nicile de diagnostic, deoarece permite dezvoltarea distinct a microbilor, subform de colonii izolate. P colonie bacterian este o micropopulaie ce rezult din $nmulirea unuisingur microb pe un mediu, vizibil $n general cu oc+iul liber.

    #C

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    19/71

    &igura #G ' olonii izolate

    el mai simplu mediu solid este geloza simpl, ce se obine prin adugarea la bulion a uneisubstan gelificabile, care de regul este geloza, un poliza+arid obinut din alga marin agar*agar.?a aceast mediu simplu se pot aduga diferite ingrediente (snge de oaie, ser, ascit, e"tract dedro6die etc.) pentru a putea cultiva bacteriile pretenioase.

    aracterele culturale pe medii solide sunt foarte importante $n identificarea microbilor. Ele seapreciaz fie cu oc+iul liber, fie cu a6utorul unei lupe. Elementele ce se descriu, $n general, suntdimensiunea, forma, pigmentul, consistena, aderena la mediu, activitatea +emolitic a coloniilor iunele modificari pe care microorganismele le produc $n mediul respectiv.

    oloniile cu aspect neted, cu marginile regulate i care se suspend omogen $n ser fiziologic senumesc colonii de tip 4 (smoot+), pe cnd coloniile aceleiai specii, cu suprafaa rugoas, relief imargini neregulate i care aglutineaz sponatan $n ser fiziologic * colonii de tip (roug+). 7n

    general, cu unele e"cepii, coloniile 4 aparin tupinilor virulente, pe cnd cele sunt nevirulente.ultivarea microbilor pe medii solide permite, de asemenea, numrtoarea de germeni $ntr*unanumit produs. 2cest aspect este deosebit de important deoarece $n multe infecii criteriul deimplicare etiologic este numrul bacteriilor $n produsul de e"aminat (infecii urinare).

    Me,ii s"eciale. E"ist situaii $n care izolarea unui microb necesit medii deosebite care sfavorizeze selectarea lui din produse intens contaminate.

    Mediile de mbogire sunt medii lic+ide care permit $nmulirea preferenial a unui microb dintr*un amestec. 2stfel sunt mediile cu coninut mare de clorur de sodiu (#*#L) $n care se potdezvolta numai bacterii +alofile ca, de e"emplu, stafilococul (mediul +apmann lic+id) ienterococul.

    Medii selecti!e. !ac un mediu de $mbogire se solidific, rezult un mediu selectiv care are

    avanta6ul obinerii microbilor sub form de colonii izolate. !atorit acestor medii, izolarea iidentificarea bacteriilor este astzi mult simplificat. Mediile selective, care se bazeaz peparticularitile metabolice ale unor specii microbiene sau mai ales pe rezistena natural a acestorala antibiotice, sunt utilizate $n mod curent $n laboratoarele de bacteriologie, deoarece permit,

    practic, izolarea dintr*un amestec de microbi, a oricrui microb $n cultur pur.

    Mediile de diagnostic sunt medii de cultur care evideniaz anumite proprieti fiziologice icaractere bioc+imice ale tulpinilor bacteriene pe baza crora acestea pot fi identificate. 2stfel, dee"emplu, numeroase specii bacteriene se recunosc pe baza za+arurilor pe care le fermenteaz.Mediile de diagnostic cu za+aruri conin za+arul de cercetat i un indicator de pS. 7n cazul $n care

    bacteria $nsmnat $n acest mediu va fermenta za+arul, culoarea mediului se va sc+imba dupcteva ore datorit scderiipS*ului.

    0roducia mediilor de cultur a devenit o industrie puternic. E"ist mii de firme, care sunt $ntr*opermanent concuren, rezultatul fiind elaborarea unor medii de cultur din ce $n ce maiperformante, care uureaz i $mbuntesc asistena medical microbiologic.

    #G

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    20/71

    &igura - ' Ke+nica $nsmnrii $n vederea obinerii coloniilor izolate

    GENETICA &ACTERIAN5

    Ere,itateaeste $nsuirea tuturor vieuitoarelor de a transmite caracterele specifice speciei la urmaiiar variabilitatea apariia unor caractere diferite de cele ale genitorilor.

    %aria$ilitateala bacterii este cea care intereseaz medicina $n mod deosebit. Modificarea zestreiereditare la bacteriilor d natere unor tulpini bacteriene noi care, prin virulen i rezistena lac+imioterapice, se adapteaz mai bine condiiilor de mediu i $nlocuiesc bacteriile mai puinadaptabile.

    4uportul material al ereditii este 2!3. 4tructura i replicarea acestuia este similiar cu cea de

    la celulele eucariote.

    Organi!area (aterialului genetic la $acterii

    9enomul bacterian este alctuit din repliconi, care sunt formaiuni genetice ce se pot replicaindependent. 2cestea sunt cromozomul bacterian, elementele genetice e"tracromozomiale(plasmidele i genomul bacteriofagilor) i elementele genetice transpozabile (fragmentele deinserie i transpozonii).

    Cro(o!o(ul $acterian

    Ma6oritatea genelor bacteriene se gsesc $ntr*un cromozom +aploid, ec+ivalent nuclear carecodific informaiile absolut necesare supravieuirii speciei $n condiii normale.

    -

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    21/71

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    22/71

    Bacteriofagii

    &igura -- ' 4tructura bacteriofagului

    4unt virusuri care pazariteaz bacteriile.

    Morfologie. Bacteriofagii sunt formai dintr*un cap +e"agonal, un gt i o prelungire numit picior(coad). apul este alctuit dintr*un $nveli proteic (capsida) i adpostete 2!3. oada este uncilindru rigid $nvelit $ntr*un manon proteic asemntor miozinei i se termin cu o plac+e"agonal ce conine o enzim de tipul lizozimului. !e placa bazal se aprind fibre cu rol $nfi"area bacteriofagului pe suprafaa bacteriei.

    2taarea bacteriofagului pe suprafaa peretelui bacterian este determinat de e"istena unorreceptori de perete, specifici. !up ataare are loc contracia manonului proteic i bacteriofagul $iin6ecteaz numai 2!3 $n celula bacterian.

    !up ptrunderea genomului fagic $n celula bacterian, acesta va determina sinteza de noibacteriofagi identici cu cel de la care a provenit 2!3. !up asamblarea noilor virusuri ele vorprsi celula bacterian care se lizeaz. 2cesta este ciclul litic al $acterio0agilor, iar ei se numesc

    0agi +irulen1i.!ar nu $ntotdeauna relaiile bacteriofag*bacterie evolueaz $n acest fel. neori genomul

    bacteriofagului se va integra $n cromozomul bacterian $ncadrndu*se i funcional $n acesta. 7naceast situaie el nu se mai replic dect $n acelai timp cu cromozomul bacterian, deci $n timpuldiviziunii bacteriene i se numete "ro0ag. 2cest ciclu este ciclul li!ogen iar bacteriofagii senumescfagi temperai.

    #lemente genetice transpozabile

    Elementele genetice transpozabile sunt 0rag(entele ,e inser1ie >IS?i trans"o!onii >Tn?.

    &igura -% ' 4tructura secvenelor de inserie

    &igura - ' 4tructura tranpozonilor

    ;4 i Kn sunt fragmente mici de 2!3 cu limite structurale bine precizate care se pot integra repetat$n mai multe situsuri dintr*un genom. E"istena lor a fost presupus $nc $n anul #G%# i $n anul#G

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    23/71

    %aria$ilitatea la $acterii

    8ariabilitatea la bacterii se produce prin:muta#ii, transfer de material &enetici transpozi#ie.

    Muta1ia

    Modificrile spontane ale genomului se numesc mutaii i constau din modificarea secvenei denucleotide dintr*o gen. Ele pot fi punctiforme, inversii, inserii, deleii i mutaii secundare.

    Mutaiile duc la apariia unor indivizi cu caractere noi, din care importante din punct de vederemedical sunt rezistena la c+imioterapice, modificarea structurii antigenice, modificarea viruleneietc.

    Mutaiile naturale sunt rare.

    Trans0erul ,e (aterial genetic

    Bacteriile se $nmulesc vegetativ prin diviziune direct, deci materialul genetic provine de la osingur celul. u toate acestea e"ist i la bacterii mecanisme care permit sc+imbul de materialgenetic de la o bacterie la alta. 2cestea sunt trans0or(area6 trans,uc1ia *i con@ugarea3

    $ransformareaeprezint transferul de material genetic de la o celul donor la una receptor sub forma de 2!3

    pur, eliberat fie prin liza celulei donor, fie prin e"tracie c+imic. 2cest proces a fost observatpentru prima oar la pneumococi de 9riffit+ $n #G-C. 2!3*ul pneumococilor viruleni, capabili ssintetizeze capsula, s*a transferat la mutante , nevirulente, acestea din urm dobndind capacitateade a sintetiza capsula. Kransformarea are loc i intre specii diferite. Bacteria care primetematerialul genetic trebuie sa se afle $n stare de competen.

    $ransducia

    Kransducia reprezint un transfer de gene cromozomiale de la o celul bacterian la alta, mediat debacteriofagi. nii bacteriofagi sunt capabili s transfere orice gen bacterian (transduciegeneralizat) iar alii numai anumite gene (transducia specializat).

    %onjugarea

    on6ugarea este transferul de material genetic de la o bacterie donoare la una receptoare printr*unproces de $mperec+ere, ce se realizeaz prin contactul direct dintre cele dou celule. 0rin con6ugarese pot transmite plasmide, precum i gene cromozomiale (prin intermediul factorului &R).

    $ransferul prin conjugare a plasmideloreste condiionat de prezena $n plasmid a genelor detransfer tra, care sunt responsabile de sinteza se"*pilului i de transferul plasmidului.

    on6ugarea $ncepe prin sinteza se"*pilului care va adera de receptori specifici prezeni pe peretelecelular al bacteriei receptoare. !up formarea legturii dintre celula donor i cea receptor are locreplicarea de transfer a plasmidului. P caten parental de 2!3 va rmne $n celula donor, iar adoua va trece $n celula receptoare, pe tiparul lor sintetizndu*se catene complementare.

    !in punct de vedere medical importante sunt plasmidele con6ugative de rezisten *plasmidele R.

    $ranspoziia

    Kranspoziia presupune integrarea $ntr*un genom al unui elemente genetic transpozabil din aceeaimolecul de 2!3 sau din alta prezent $n aceeai celul.

    ;nseria oricrei gene $ntre dou elemente transpozabile face posibil transferul ei prin recombinareneomolog, $n aceeai celul pe o molecul de 2!3 ne$nrudit structural.

    2stfel, prin transpoziie se pot produce deleii, inversii, transpuneri de determinani genetici de peun plasmid pe altul sau c+iar fuzionarea stabil a unor repliconi complei, de pild a dou plasmide.

    E+olu1ia re!isten1ei la anti$iotice a $acteriilor nu "oate 0i conce"ut) ast)!i 0)r) 0eno(enul ,etrans"o!i1ie.Mecanismele transpoziiei sunt responsabile de formarea plasmidelor cu multirezisten, prin

    inserarea succesiv pe un plasmid a determinanilor genetici de rezisten situai $ntre douelemente transpozabile de pe alte plasmide.

    -%

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    24/71

    Rezistena antiinfecioasMediul $ncon6urtor conine o infinitate de ageni infecioi, omul fiind supus unei contaminri

    permanente. u toate acestea, la individul sntos, infeciile se produc rar, sunt de obicei de duratlimitat i dispar fr sec+ele, datorit mecanismelor rezistenei antiinfecioase.

    Re!isten1a antiin0ec1ioas) este su(a tuturor (ecanis(elor care "rote@ea!) organis(ul ,ein0ec1ii i cuprinde:

    re!isten1a 4nn)scut), care asigur rezistena natural, nespecific, fa de agenii infecioi,comun tuturor indivizilor unei specii, necondiionat de un contact anterior cu un agentinfecios, i

    re!isten1a ,o$2n,it) sau i(unitatea antiin0ectioas), care se dezvolt pe parcursul vieii, caurmare a contaminrii continue cu diveri ageni infecioi i care depinde, deci, de e"perienaindividual a fiecruia.

    RE.ISTENA ANTIINFECIOAS5 NATURAL5

    Re!isten1a natural) antiin0ec1ioas)reprezint totalitatea mecanismelor constituionale $nnscute

    care se opun penetrrii i dezvoltrii microbilor patogeni $n organism.

    7n esen, organismul este aprat 0a1) ,e unele in0ec1iiprin !estrea sa ere,itar), care nu permitedezvoltarea anumitor germeni. 9ermenilor la care este sensibil, organsimul se opune ptrunderii lor

    prin $ariere e/terne anato(icei c#i(icela care se adaug 0lora nor(al) a organis(ului. !actotui germenii au reuit s strbat aceste bariere i a6ung $n zonele interne sterile aleorganismului, intervin o serie de 0actori u(orali (complement etc.) care declaneaz reac1iain0la(atoriei care la rndul ei va mobiliza un alfu" mare de celule fagocitare (0M3, macrofage)$n focarul infecios. ezultatul este distrugerea germenilor prin0agocito!).

    Bine$neles c e"ist germeni care au dezvoltat strategii ce ocolesc mecanismele rezistenei naturalei care dau infecii la indivizii neimunizai.

    u toate c mecanismele rezistenei naturale sunt distincte de cele ale rezistenei dobndite, ele nupot fi separate deoarece se intric i acioneaz sinergic.

    Factorii genetici

    Re!isten1a antiin0ec1ioas) ,e s"ecie. &iecare specie este genetic rezistent la anumii agenietiologici infecioi. 2stfel, de pild, omul este rezistent fa de virusul arrV, agentul etiologic al

    6igodiei la cine, la virusul +epatitei cinilor sau la pesta aviar.

    ezistena genetic antiinfecioas de specie este absolut. Ea se e"plic prin condiiile impropri pecare un organism le ofer microorganismului fa de care este rezistent i prin lipsa receptorilorcelulari specifici pentru agentul infecios respectiv.

    Re!isten1a in,i+i,ual). 7n cadrul aceleiai specii, rezistena antiinfecioas prezint variaii de ras

    i individuale. Este cunoscut faptul c $n timpul unor epidemii, ca, de pild, $n cele de poliomielit,unii indivizi fac forme grave de boal infecioas, alii forme fruste iar unii c+iar infecii clinicinaparente. !e asemenea, $n timp ce e"ist purttori sntoi de streptococ beta*+emolitic de grup2, infeciile streptococice pot produce $n funcie de rezistena individual, infecii faringiene banalesau complicaii alergice severe.

    elaia dintre factorii genetici i sensibilitatea la diveri ageni infecioi este deosebit deimportant, infeciile constituind de*a lungul timpului factorul cel mai puternic al seleciei naturale.

    &arierele anato(ice

    ;ntegritatea anatomic a organismului este unul din factorii eseniali $n aprarea antiinfecioasnatural.

    -

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    25/71

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    26/71

    ?ic+idul seminal conine spermina, o poliamin dependent de pS i care in+ib creterea floreigram pozitive.

    Flora nor(al)

    &lora normal are o serie de funcii fiziologice, printre care prevenirea colonizrii organismului cu

    flor patogen. Mecanismele prin care flora normal se opune multipicrii florei patogene sunt:U competiia pentru acelai receptor celular,

    U competiia pentru un substrat nutritiv,

    U secreia unor produi secundari to"ici,

    U stimularea sistemului imun, care va produce anticorpi naturali, ce vor reaciona $ncruciatcu antigenele florei patogene.

    2dministrarea abuziv de antibiotice va distruge ec+ilibrul dintre speciile florei normale i unelespecii condiionat patogene sau patogene, lipsind organismul de un mecanism antiinfeciosimportant. 2stfel, tratamentul oral $ndelungat cu antibiotice va avea ca urmare apariia diareei prindezvoltarea necontrolat a unei singure specii ca, de pild, S)aureus, *andida albicans,*lostridium difficile etc.care fac parte din flora normal i care se menin la individul sntos $nanumite limite tocmai datorit antagonismului bacterian.

    Mecanis(ele u(orale

    !ac un microorganism trece de stratul protector al barierelor anatomice, el $ntlnete mecanismelede aprare nespecifice $nnscute, umorale i celulare, prezente $n lipsa unui contact anterior cuagentul infecios respectiv.

    4erul proaspt este capabil s lizeze unele microorganisme (bacterii, virusuri) datorit $n primulrnd coninutului $n complement i lizozim, la care se mai adaug i ali factori umorali.

    Siste(ul co("le(ent

    omplementul este un sistem seric de -< de proteine enzime care, ca i sistemul coagulrii ifibrinolizei, se activeaz $n cascad sub aciunea unui trigger.

    'ese(narea co("onentelor siste(ului co("le(ent. omponentele ma6ore sunt notate cu C9-C:.

    -

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    27/71

    &igura -< ' 2ctivarea complementuluiActi+area co("le(entuluise poate petrece pe dou ci cu punct de plecare diferit, dar, careconverg spre aceiai produi finali:

    - calea alternati+), mai vec+e din punct de vedere filogenetic care se activeaz $n absenaanticorpilor specifici i face parte, deci, din rezistena antiinfecioas natural, i

    - calea clasic)6 a crei activare presupune $n general prezena anticorpilor specifici, deci, uncontact prealabil cu agentul etiologic respectiv.

    Mo(entul esen1ial 4n acti+area co("le(entului este acti+area C

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    28/71

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    29/71

    !intre proteinele serice a cror concentraie crete $n timpul rspunsului de faz acut amintim"roteina C-reacti+)(0), produs de celula +epatic stimulat de ;?*#. 7n -*C ore de ladebutul inflamaiei acute concentraia seric a 0 crete de mii de ori. 0 se poate lega de

    poliza+ardele unui numr mare de bacterii i fungi. 0rin activarea consecutiv a a complementului,pe cale alternativ, se faciliteaz $ndeprtarea acestor microorgansime prin bacterioliz ifagocitoz.

    O"soninele *i o"soni!area

    Ppsoninele sunt substane care ader de suprafaa unui microorganism fcndu*l accesibilfagocitozei. E"ist opsonine nespecifice i specifice. %b, de pild, opsonin nespecific ce se

    produce $n timpul activrii complementului se leag covalent de microbi. 2cest comple", microb*%b, se leag de glicoprotein*receptorul pentru %b prezent pe membrana fagocitelor (#). &iindlegat de fagocit, microbul va fi fagocitat eficient.

    2lt e"emplu de opsonin nespecific este fibronectina, o glicoprotein cu funcii de opsonin fade bacteriile gram*pozitive. Ea se gsete la suprafaa mucoaselor, $mpiedicnd, prin proprietateade a se lega de flora gram*pozitiv, colonizarea mucoaselor cu flor gram*negativ (de e"emplumucoasa faringian).

    Ppsoninele specifice sunt unii anticorpi care, $ns, sunt implicai $n aprarea antiinfecioasdobndit.

    Inter0eronii >IFN?

    ;nterferonii sunt glicoproteine (9M - 5!) cu rol important $n rezistena fa de virusuri. 4edeosebesc % tipuri de interferoni:

    IFN- , secretat de macrofage i 0M3 ca urmare a infeciei celulelor respective cu un virus saudup stimulare cu polinucleotide, diverse componente bacteriene cum ar fi endoto"ina

    bacteriilor gram negative etc.D

    IFN-, secretat de fibroblati $n aceleai condiiiD interferonii alfa i beta sunt produi de celuledup ptrunderea unui virus sau a inductorilor de interferoni (polinucleotide, endoto"ina

    bacteriilor gam*negative, 23 dublu catenar etc.). Ei $mpiedic ptrunderea altui virus $ncelula respectiv pe de o parte, iar pe de alt parte, secretat $n e"terior se fi"eaz pe receptorii

    pentru virusuri ale celulelor invecinate prote6ndu*le i pe acestea fa de ptrunderea virusului.

    IFN-sau interferonul imun, secretat de limfocitele K dup stimularea acestora cu un antigenfa de care limfocitele au fost sensibilizate anterior.

    !intre efectele biolologice ale interferonilor amintim aici activitatea antiviral antimitotic iimunomodulatoare. 8om reveni asupra lor $n capitolul de virusologie.

    R)s"unsul in0la(ator

    n esen1)6 ")trun,erea (icro$ilor 4n 1esuturi ,uce la acti+area co("le(entului6 ceea ce areca ur(are li!a celulelor (icro$iene6 "e ,e o "arte6 *i ,eclan*area r)s"unsului in0la(atorin0ec1ios6 "e ,e alt) "arte3 Casca,a ,e acti+are a co("le(entului +a antrena eli$erarea unor(e,iatori c#i(ici (cito5ine, proteinele de faz acut, mediatori rezultai din degranulareamastocitelor etc.)care "artici") ,irect 4n "rocesul in0la(ator *i +or atrage 4n 0ocarul in0ec1ios0agocitele3 Acestea +or 4nl)tura (icroorganis(ele in+a,atoare "rin 0agocito!)3

    -G

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    30/71

    &igura - * Modificrile vasculare din inflamaie

    ;nflamaia acut este rezultatul sc+imbrilor ce se petrec $ntr*un esut ca rspuns la o agresiunemecanic, c+imic sau infecioas. Ea este un mecanism de aprare antiifecios rapid, care tinde slocalizeze infecia i s previn diseminarea ei. Manifestrile locale ale inflamaiei sunt eritemul

    (rubor), cldura (calor), durerea (dolor) i edemul (tumor).;nflamaia poate evolua spre vindecare cu restitutio ad integrum a esuturilor sau cu sec+ele.!eznodmntul unei reacii inflamatorii depinde de e"tinderea procesului inflamator, demicroorganismele implicate, precum i de reactivitatea gazdei.

    ele % evenimente ma6ore ale inflamaiei sunt:

    +aso,ilata1ia ca"ilar) local)6

    (o,i0ic)rile structurale (icro+asculare6

    acu(ularea leucocitelorla locul in6uriei.

    %aso,ilata1ia ca"ilar). Mediatorii plasmatici ai inflamaiei, ca, de pild, complementul, e"ist sub

    forma unor precursori care, aa cum am vzut, devin biologic activi numai dup activare. 2ctivarea% a complementului este o etap critic a inflamaiei.

    C

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    31/71

    &igura -F * !iapedeza

    0M3 sunt atrase de factorii c+emotactici de natur bacterian, de cei produi $n urma activriicomplementului i de cei rezultai din degranularea mastocitelor. Ele vor prsi capilarul prindiapedez i se vor $ndrepta ctre focarul inflamator unde vor distruge microbii prin fagocitoz.

    Mecanis(e celulare nes"eci0ice - 0agocito!a&agocitoza este un mecanism important de $ndeprtare a microorganismelor i a celulelor lezatefiind proprietatea unor celule de a $ngloba i digera particule strine organismului. 2ceste celulesunt 0M3 i monocitele (care dup ce migreaza $n esuturi se numesc macrofage).

    0M3 apar primele ca rspuns $ntr*o inflamaie acut, fiind urmate mai trziu de macrofage.

    &agocitoza are urmtoarele etape: c+emota"ia, opsonizarea, ataarea, internalizarea i digestia

    %#

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    32/71

    &igura -C * &agocitoza

    C#e(ota/ia. &agocitele sunt atrase $n focarul infecios de factori de origine bacterian i factoric+imiotactici ce apar $n cursul inflamaiei, cum sunt:

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    33/71

    &igura -G ' macrofag $n fagocitoz

    olul fagocitozei prin 0M3 este distrugerea bacteriilor. Macrofagele intervin mai trziu $n focarulinfecios, unde vor fagocita microbi i detritusurile celulare rezultate $n urma leucocitelor distrusela locul in6uriei. &azele fagocitozei prin macrofage sunt asemntoare cu cele descrise mai sus, dar,spre deosebire de 0M3, (acro0agele se "ot acti+a dac sunt stimulate corespunztor. Ele seactiveaz sub aciunea unor substane ce apar $n urma prezenei microorganismelor, ca, de pild,%b i g*interferon, unele componente bacteriene, cum ar fi endoto"inele, i de limfocitele Kd+ $ncadrul rspunsului imun celular. u toate acestea, unele bacterii, protozare sau fungi sunt capabiles supravieuiasc i s se multiplice $n macrofagul neactivat (micobacterii, brucelle, criptococi,listerii etc.). !up activare unele ele pot fi distruse. !eci, fagocitoza efectuat de macrofage este

    eficient asupra microorganismelor cu +abitat intracelular. neori, $ns, microorganismele nu suntdistruse i supravieuiesc pe durat lung $n macrofag, rezultatul fiind inflamaia cronic.

    Fagocito!a "rin (acro0age are6pe lng rolulde a $ndeprta bacteriile, mai ales cele cu +abitatintracelular, i cel ,e a ini1ia r)s"unsul i(un. Macrofagele sunt celule prezentatoare de antigencare dup prelucrarea acestuia $l prezint limfocitelor K+.

    Li(0ocitele N

    Celulele Nsunt limfocite citoto"ice naturale care e"ist de6a la natere. Ele nu sunt fagocite, darpot ataca i distruge $n mod nespecific celule infectate cu virusuri sau c+iar celule tumorale.

    7n contact cu celulele infectate, celulele 3> secret o perforin $nrudit cu G a complementului.2ceasta polimerizeaz pe membrana celulei int i formeaz aici canale ce distrug integritatea

    acesteia.

    %%

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    34/71

    Rezistena antiinfecioas dob&ndit2pariia unor substane strine organismului este recepionat de sistemul imun care:

    discrimineaz HselfulI de Hnon*selfID rspunde prin efectori umorali i celulari care vor elimina ceea ce este strin organismului,

    meninnd astfel individualitatea i integritatea acestuiaD

    memoreaz acest rspuns.

    Func1ionalitatea siste(ului i(un se "e $a!ea!) "e co("le(entaritatea steric) ,intre ,oi"arteneri.

    Pri(ul "artener6perceput de sistemul imun ca non-sel0, se numete antigeni are capacitatea dea induce modificri biologice ale sistemului imun, care constau, $n esen, $n apariia efectorilorimuni umorali (anticorpi) i celulari (limfocite sensibilizate).

    Partenerul reac1iei i(une care "ro+ine ,in "artea organis(ului se numete anticor"$n ser i

    secreii i rece"torpentru antigen cnd se constituie ca parte component a membranei celulare alimfocitelor (B pentru limfocitul B i K pentru limfocitul K).

    Reac1iile i(unologicecare au loc $ntre antigen i efectorii imuni a cror formare a indus*o potavea consecine diferite asupra organismului. ?a o e"trem a acestor reacii stau cele 0i!iologice,care asigur imunitatea organismului i pe care omul $ncearc s le provoace artificial prinimunizare pasiv (seroterapie) sau activ (vaccinare). ?a cellalt capt stau reaciilei(uno"atologice, care sunt defavorabile organismului, fie c sunt $ndreptate spre un agentinfecios, fie spre propriile antigene pe care organismul nu le mai recunoate ca propri (reaciiautoimune). 7n aceste cazuri omul caut s intevin prin depresia reaciilor imunologice.

    ANTIGENELE

    9393'e0ini1ie3 Antigene co("lete3 7a"tene

    2ntigenele sunt substane capabile de a interaciona specific cu receptorii pentru antigen (anticorp,B#, K-). !atorit configuraiei de suprafa, antigenele sunt recunoscute de organism castrine, ca Hnon*selfI. 7n unele situaii patologice c+iar i unele substane proprii ale organismului

    pot deveni antigenice, nemaifiind recunoscute de organism ca self.

    n agent infecios, indiferent de natura lui, este un mozaic de antigene capabile s produc unrspuns imunitar.

    Antigenele co("leteau dou proprieti de baz:U imunogenitatea, care este capacitatea unui antigen de a induce un rspuns imunitar(umoral saui celular), i

    U antigenicitatea, care este proprietatea antigenelor de a reaciona $n mod specific cuefectorii imuni (anticorpi sau limfocite sensibilizate) a cror producere au indus*o.

    7a"tenelesunt antigene inco("letelipsite de imunogenitate, deci de proprietatea de a induce ele$nile un rspuns imunitar, dar sunt capabile s reacioneze cu anticorpi specifici. ontradicia dindefiniia de mai sus se e"plic prin faptul c o +apten devine imunogen legat covalent de omolecul mai mare, numit HcarrierI. 2nticorpii care se vor forma vor reaciona la un contactulterior i cu +aptena liber fr ca aceasta s fie asociat cu carrierul.

    E"ito"ii. 9ruprile unui antigen care sunt recunoscute de organism ca Hnon*selfI se numesce"ito"i. 0artea complementar a efectorilor imuni (anticorpi sau receptori de pe suprafaalimfocitelor) se numete "arato". n antigen poart $n general mai muli epitopi diferii fa de

    %

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    35/71

    care organismul va produce tot atia anticorpi cu paratopi diferii. 4*au descris i antigene cuepitopi identici repetitivi.

    Po!i1ia e"ito"ilor$ntr*un antigen este diferit i $n funcie de aceast poziie pot fi recunoscui delimfocitele * K sau B.

    Epitopii care vor fi recunoscui de anticorpi sau li(0ocitele &sunt proeminene ale unor molecule

    g+emuite la suprafaa antigenului i se numesc epitopi structurali sau e"ito"i &. 2ceti epitopi nusunt antigenici dect $n stare nativ, denaturarea proteinei modificnd aspectul acestor epitopi.

    &igura % ' Epitopii B

    Li(0ocitele Trecunosc doar epitopi situai $n interiorul moleculei de antigen i care sunt peptidescurte (C*# aminoacizi). 2ceti epitopi liniari se numesc epitopi sec!enialisau e"ito"i T. Ei suntrecunoscui de limfocitelele K doar dup prelucrarea antigenului de ctre macrofag i dup ce a6ungla suprafaa acestuia.

    &igura %# * Epitop K

    !eci, limfocitul B recunoate epitopul ca o parte a moleculei intacte de antigen, pe cnd limfocitulK $i vede epitopul corespunztor doar dup descompunerea moleculei. u alte cuvinte, li(0ocitulT recunoa*te o "or1iune Dascuns) ,in carrier iar li(0ocitul & #a"tena.

    2ntigenele pot fi ti(o,e"en,ente stimulnd sistemul imun prin intermediul limfocitelor K dupprelucrare macrofagic i ti(oin,e"en,entecare stimuleaz direct limfocitele B, $n stare nativ,fr intervenia limfocitelor K. 2ntigenele timodependente sunt proteine, iar celeti(oin,e"en,entesunt $n general poliza+aridele i antigenele cu epitopi repetitivi.&actori care influeneaz imunogenitatea. Intensitatea r)s"unsuluiimun fa de un antigen este $n

    funcie de natura c+imic, greutatea molecular, persistena $n organism, doza, ritmul, calea,

    %

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    36/71

    intervalul i calea de administrare. unoaterea rspunsului $n funcie de aceti factori st la bazaelaborrii calendarului de vaccinri.

    Antigene (icro$iene

    Microorganis(ele sunt (o!aicuri ,e antigene. 2cestea sunt fie corpusculare legate de structura

    microorganismului (bacterii, virusuri fungi etc.), sau eliberate $n mediu dup distrugereamicroorganismului (endoto"inele), fie solubile, secretate de microorganism $n mediul $ncon6urtor(enzime, e"oto"ine).

    !intre antigenele corpusulare, cele mai importante sunt antigenele ,e su"ra0a1) (poliza+aridelecapsulare, componente ale peretelui celular, antigene flagelare).

    Co("onentele ,e su"ra0a1)a florei microbiene normale a organismului favorizeaz colonizareaacesteia $n niele naturale, cum ar fi cavitatea bucal, faringele, intestinul gros etc. 2ntigeneleacestei flore au o importana deosebit, deoarece datorit lor organismul se imunizeaz ocult,rezultatul fiind apariia anticorpilor naturali, cu rol $n aprarea antiinfecioas.

    2ntigenele care sunt implicate $n patogenitatea agenilor infecioi se numesc antigene ,e"atogenitate. !intre acestea amintim:

    antigenele ca"sulare(Streptococcus pneumoniae,%lebsiella,Bacillus anthracis,antigenulde $nveli 8i al bacilului tific, antigenul > al bacilului coli enteropatogen etc.),

    antigenele ,e "erete(antigenul P din peretele bacteriilor gram*negative, proteina M astreptococului de grup 2),

    e/oen!i(ele(coagulaza, +emolizinele secretate de Staphylococcus aureus, fibrinolizinelestreptococului beta*+emolitic de grup 2 etc.),

    e/oto/inele(difteric, tetanic, diferitele enteroto"ine etc.)

    I(unogenitatea antigenelor $acteriene ,e"in,e ,emai muli factori, cum sunt: "re,is"o!i1iagenetic) a ga!,ei, cantitatea, 0or(a ,e "re!entare a antigenului, care practic nu este niciodat

    pur, fiind combinat cu diveri ad6uvani sau carrieri ce aparin peretelui bacterian, cililor, capsuleietc. ?a aceti factori se mai adaug +aria$ilitatea antigenic) a unor microorganisme imodificrile pe care le pot suferi antigenele bacteriene $n organism.Co("onentele $acteriene intracelularepot fi i ele antigenice, dar numai $n cazul $n care seelibereaz $n mediu dup liza bacteriei.

    spunsul imunitar difer, de asemenea, $n funcie de #a$itatul $acteriilor $n organismul infectat,2stfel, agenii infecioi care se $nmulesc $n mediul e"tracelular induc un rspuns predominantumoral, pe cnd cei cu +abitat facultativ sau obligatoriu intracelular un rspuns predominantcelular.

    Structura antigenic) a agen1ilor in0ec1io*ieste important deoarece pe baza ei putem recunoatediferiii ageni prin intermediul serurilor imune care conin anticorpi specifici cunoscui.

    &igura %- * 4uperantigeneleSu"erantigenele sunt antigene caresti(ulea!) $n mod necontrolat idramatic "roli0erarea li(0ocitelor T3a urmare, limfocitele vor secretacantiti deosebit de mari de cito5ine,care determin manifestri clinice foartegrave, cum este ocul.

    Foarte (ulte e/oto/ine $acteriene0unc1ionea!) ca su"erantigene. 2stfel,de pild, e"oto"inele secretate deS)aureus sunt superantigene

    %

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    37/71

    responsabile de manifestrile clinice ale ocului to"ic stafilococic. Eritroto"inele streptococicesunt, de asemenea, superantigene.

    SISTEMUL CELULAR IMUNOCOMPETENT

    Prganele sistemului imun sau organele limfoide sunt rspndite $n tot organismul i implicate $n

    creterea, diferenierea i activitatea limfocitelor.

    Organele li(0oi,e "ri(are

    4unt (),u+a osoas)roie i ti(usul. 7n aceste organe limfocitele devin celule imunocompetente,dobndind re"ertoriul ,e recunoa*tere a antigenelor i proprietatea de a deosebi HselfulI deHnon*selfI. 2cest proces de HcolarizareI se ,es0)*oar) 4n a$sen1a antigenelor ,in (e,iule/tern3

    &igura %% . Prgane limfoide

    7n timus prolifereazlimfocitele K, din care #Ldobndesc caracterulimunocompetent iar restulde GL sunt distruse.

    ?a psri, limfocitele Bmigreaz i se difereniaz$ntr*un organ numit bursalui &abricius. ?a mamifere,deci i la om, ele rmn $nmduva roie i sedifereniaz aici, mduvaroie fiind i un organlimfoid secundar.

    &igura %%: irculaia limfocitelor

    Organele li(0oi,e secun,are

    !up diferenierea lor $n organele limfoide primare, limfocitele B i K migreaz pe calea vaselorsanguine i limfatice $n organele limfoide secundare, care sunt ganglioni limfatici, splina,

    amigdalele i esutul limfoid ataat mucoaselor (M2?K).

    %F

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    38/71

    ?imfocitele imunocompetente care populeaz organele limfoide secundare sunt celule antigen*reactive. !eci spre deosebire de organele limfoide primare, unde instruirea se face $n absenaantigenului, $n organele limfoide secundare prezena acestuia este obligatorie.

    Siste(ul i(un al (ucoaselor >MALT?#este format din esut limfoid ataat mucoaseigastrointestinale, respiratorii i a tractului uro*genital i este deosebit de important $n aprarea

    antiinfecioas dobndit ,eoarece este "rinci"ala $arier) antiin0ec1ioas) 0a1) ,e(icroorganis(ele care ")tun, 4n organis( "e cale ,igesti+)6 res"iratorie *i urogenital).

    4oarta unui agent infecios carestrbate barierele e"terne aleaprrii antiinfecioase naturaledepinde de calea de ptrundere.2stfel, dac agentul infecios

    ptrunde direct $n circulaie vaa6unge $n splin unde va iniiaun rspuns imunitar. !ac

    ptrunde prin piele, datoritunui traumatism, de pild, va fi

    transportat de la loculinflamaiei prin limf laganglionii limfatici regionali,care vor servi ca sediu alrspunsului imun.

    &igura %% ' Kesutul limfoidatrasat mucoaselor (M2?K)

    7n fine, dac strabate mucoasadigestiv sau respiratorie va

    a6unge $n esutul limfoid ataat mucoaselor (M2?K), unde se va produce i rspunsul imun. 2ici sevor produce anticorpi (;g2) care vor a6unge la suprafaa mucoaselor respective, dar o parte din

    limfocite vor migra la alte organe limfoide, astfel ca informaia antigenic s a6ung $n $ntregorganismul.

    Celulele i("licate 4n r)s"unsul i(un

    0entru a produce un rspuns imunitar, un antigen trebuie s interacioneze cu o serie de celuleprezente $n snge i diferite esuturi. 2cestea sunt celulele prezentatoare de antigen (02) ilimfocitele K i B. 7n interaciunea dintre antigen i aceste celule de o importan ma6or suntantigenele de +istocompatibilitate (MS) de pe suprafaa acestor celule.

    Celulele "re!entatoare ,e antigen >CPA?

    CPA sunt celulele care au proprietatea de a prezenta antigenele limfocitelor. Ele cuprind

    macrofagele (fagocite profesioniste), celulele ?anger+ans din piele, celulele dendritice dinganglionii limfatici i splin, i limfocitele B

    %C

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    39/71

    &igura % * elule prezentatoare de antigene

    Macro0agele. 4istemul mononclear macrofagic este alctuit din celule cu origine mieloid,precursorul lor comun fiind monoblastul. Ele prsesc mduva roie, intr $n snge unde se numesc(onocitei reprezint #L din leucocitele sanguine. !up cteva zile prsesc circulaia, ptrund$n diverse esuturi, devenind macrofage mature. !enumirea lor depinde de zona anatomic $n care

    au migrat. 2stfel, ele se numesc (acro0age al+eolare $n plmn, (icroglii $n esutul nervos,celule u"00er 4n 0icat, osteoclaste$n sc+elet, celulele (e!angialerenale etc. Macrofagele au pesuprafaa lor receptori pentru %b a complementului i pentru &c a imunoglobulinelor.

    Ele inter+in 4n a")rarea antiin0ec1ioas) "rin 0agocito!), dar rolul lor esen1ial const) 4nrela1iile "e care le sta$ilesc cu li(0ocitele T#6 c)rora le"re!int) antigenul. Macrofagele secret;?*# cu activitate de stimulare asupra limfocitului K+, care la rndul lui secret ;&3* careactiveaz macrofagele.

    CPAau la su"ra0a1a lor antigene ,e #istoco("ati$ilitate >M7C? ,e clasa II . !up $nglobareaantigenului, 02 prelucreaz antigenul degradndu*l pn la nivel de peptid format din C*#aminoacizi. 2cest peptid a6unge printr*un mecansim necunoscut la suprafaa 02 asociatantigenului MS de clasa ;; i este prezentat limfocitului K+, care nu recunoate antigenul dect $n

    aceast asociere. nd 02 prezint antigenul limfocitului K, ele secret o mono5in * ;?*# careare aciune stimulatoare asupta limfocitului K+.

    n conclu!ie6 celulele "re!entatoare ,e antigen sunt res"onsa$ile ,e legarea antigenului6"relucarea *i "re!entarea acestuia li(0ocitelor T# 4n asocia1ie cu M7C-II *i secre1ia ,e IL-93

    Celule cu origine li(0oi,) - li(0ocitele

    ?imfocitele alctuiesc # *#

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    40/71

    &igura %< * 4ubseturile de limfocite

    Li(0ocitele & reprezint -*#-L din limfocitele circulante. Ele au pe suprafaa lor mar5erul C'9:i antigeneM7C de clasa II.

    nd limfocitul B este stimulat corespunztor prin limfocitul K*+elper sau mai rar de antigenetimoindependente, el $ncepe s se divid transformndu*se $n limfoblati care dau natere la

    plasmoblati, apoi la plasmocite. Koate celulele provenite dintr*un singur limfocit B aparin uneisingure clone celulare, productoare a milioane de anticorpi identici care vor fi eliberai $n mediulintern. Pe su"ra0a1a li(0ocitelor & se g)se*te &CR care "er(ite celulelor & s) recunoasc)antigenele s"eci0ice.ele mai multe limfocite B sunt sub control direct al limfocitelor K*+elper care stimuleazactivitatea lor i K*supresoare care o deprim. E"ist $ns i limfocite timoindependente, care nunecesit cooperarea cu limfocitele K reglatoare fiind stimulate direct de antigen.

    !up stimulare antigenic, limfocitele se difereniaz, $n afar de plasmocite secretoare deanticorpi, i $n li(0ocite & cu (e(orie, care sunt celule cu via lung, fiind responsabile de unrspuns umoral rapid la o stimulare ulterioar cu acelai antigen.

    Li(0ocitele Treprezint G*CL din limfocitele circulante.

    a i limfocitele B, ele recunosc $n mod specific un numr imens de antigene ceea ce $nseamn ci ele trebuie s dispun de un mecanism care s le garanteze variabilitatea receptorilor. 0rincipiulmecanismului de sintez a receptorilor este asemntor celui prin care se sintetizeaz anticorpii. 4edeosebesc i aici fragmentele de genele 8,!,=, posibilitatea de variablitate fiind foarte mare.

    Mar'erii de surafa a limfocitelor $. ?a suprafaa limfocitelor K se gsesc mar5erii careindividualizeaz subpopulaiile de limfocite K.

    (imfocitele $ helper )$h* alctuiesc o subpopulaie de limfocite care dup interaciunea cuantigenul sti(ulea!) li(0ocitele &$n elaborarea unui rspuns imun umoral $n anticorpi, li(0ocitele Tc

    pentru obinerea unui rspuns celular i acti+ea!) (acro0agele. Mar5erul de suprafa a limfocitului K+ estemolecula C'H.

    (imfocitele $ supresoare )$s* limiteaz e"pansiunea clonal a limfocitelor B i K stimulate

    antigenic participnd la reglarea intensitii rspunsului imun.

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    41/71

    (imfocitele $ citotoxice )$c* sunt stimulate prin antigene care sunt e"primate la suprafaa celuleigazd ca, de pild, celule virus infectate, celule infectate cu microbi cu +abitat intracelular saucelule tumorale pe care sistemul imun nu le mai recunote ca self. Mar5erul de suprafaa este totC'H.

    (imfocitele $+# sunt limfocite care au pe suprafaa lor mar5er C'H fiind responsabile de

    producerea +ipersensibilitii de tip $ntrziat (vezi capitolul de +ipersensibilitate). Ele secret dupstimulare antigenic limfo5ine care activeaz macrofagele ce adpostesc bacterii cu +abitatfacultativ sau obligator intracelular.

    (imfocitele $ cu memorie se formeaz $n timpul rspunsului primar, ele avnd o viaa deapro"imativ de ani. Memoria lor imunologic $ns se intinde pe o perioad de #*#< ani.

    Celulele nulereprezint #L din totalul limfocitelor i sunt reprezentate de limfocitele > i 3>.

    %elulele -. )natural 'iller*recunosc nespecific celula int pe care o distrug printr*un mecanismde lezare a membranei celulare, asemntor complementului (vezi rezistena natural).

    %elulele . sunt responsabile de imunitatea celular anticorpodependent. Ele funcioneaz cacelule citoto"ice dependente de anticorpi ;g9. 2ceti anticorpi se fizeaz prin fragmentul &ab de

    celula int (tumoral sau virus

    infectat) iar prin &c dereceptorul pentru &c al celulei5iller.

    &igura % : ;nterrelaia dintrelimfocitle B i K

    n conclu!ieJ

    U li(0ocitele &vor duce lasinteza de anticorpi i suntresponsabile de imunitateaumoral,

    U li(0ocitele T citoto/icevor distruge celule gazd care i*au pierdut caracterul de HselfI,cum sunt celulele virus infectatesau tumorale. Ele rspund deimunitatea celular,

    U li(0ocitele T #el"er aurol reglator. 4timularealimfocitelor K citoto"ice i alimfocitelor B timodependentenu poate avea loc $n absenalimfocitelor K+,

    U li(0ocitele T'7 au rolreglator prin secreia delimfo5ine. Ele activeaz

    macrofagele, care vor distruge la rndul lor bacteriile cu +abitat intracelular,

    U li(0ocitele T su"resoareau rol reglator, limitnd intensitatea rspunsului imun.

    #

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    42/71

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    43/71

    &igura %C : 4tructura ;g9

    I(unoglo$ulina G

    IgG re"re!int) K - ,ini(unoglo$ulinele serice,concentraia ei fiind de C*#mgml.oncentraia normal este atins lavrsta de S-IgA? - 4n secre1iile e"iteliilor(lacrimi. saliv, mucus bronic etc.) *i la su"ra0a1a (ucoaselor.ea mai mare parte a 4*;g2 este produs de plasmocitele esutului limfatic asociat mucoaseiintestinale dar i ale celui asociat celorlalte mucoase (respiratorii, nazale etc.).

    4 * ;g2 este alctuit din - molecule de ;g2, legate printr*un lan = (6oin) glicolipidic i ocomponent secretorie polipeptidic (4). omponenta secretorie se adaug dimerului $n celulaepitelial i faciliteaz transportul ;g2 prin epitelii i secreia sa $n saliv, lacrimi, lapte i

    prote6eaz 4 * ;g2 de aciunea enzimelor digestive. a i ;g2 seric, 4 * ;g2 nu poate fi"a (activa)complementul pe cale clasic ci numai alternativ, deci nu poate participa la opsonizare. Fi/ea!)$ns $acterii *i +irusuri "rin Fa$formnd comple"e imune i4("ie,ic) ast0el 0i/area acestoragen1i infecioi ,e celulele e"iteliale ale (ucoaseor. 2ceast HneutralizareI este cea maiimportant funcie antiinfecioas a 4*;g2 pe mucoase. oncentraia normal de 4*;g2 este atinsla vrsta de #*## ani, ceea ce e"plic frecvena infeciilor respiratorii la copii.

    ?a una din F de persoane se constat un deficit de 4*;g2, !ac acest deficit nu este compensatde o activitate crescut de ;gM sau dac se adaug i un deficit de ;g9, persoanele afectate sunt

    susceptibile de a face frecvent infeciirespiratorii i intestinale.

    I(unoglo$ulina M

    IgM se "re!int) su$ 0or(a uneistructuri mari (;gM*macroglobulin) "enta(erice cu ogreutate molecular de G. !a

    i constant de sedimentare de #G4.ei < monomeri de ;gM sunt legai

    %

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    44/71

    $ntre ei printr*un lan =. !atorit greutii moleculare mari, ;gM nu trece prin placent. eprezint*FL din totalul imunoglobulinelor serice, concentraia fiind de ,

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    45/71

    Rolul anticor"ilor 4n a")rarea antiin0ec1ioas)2nticorpii au un rol esen1ial 4n a")rarea antiin0ec1ioas) 0a1) ,e $acteriile cu #a$itate/tracelular.

    E0ectul $locant *i neutrali!ant al anticor"ilor. neori este suficient doar prezena anticorpilorpentru a preveni apariia infeciei. !e pild, ;g2 de pe suprafaa mucoaselor se unete cu uneleantigene de suprafa a bacteriilor, blocnd astfel ataarea de receptorii specifici de pe mucoase.

    &a de bacteriile to"igene, cum sunt baciul difteric, botulinic sau tetanic, organismul produceanticorpi antito"ici care se leag de to"inele microbiene $mpiedicnd ataarea i, respectiv,

    ptrunderea lor $n celulele int.

    2nticorpii pot produce i(o$ili!area *i aglutinareamicroorgansimelor. ei mai buni anticorpiimobilizani sunt ;gM care au # situsuri de combinare la care se adaug favorizarea fagocitozei i

    activarea complementul.O"soni!area. Bacteriile sunt pregtite pentru fagocitoz prin opsonizare cu opsonine nespecifice(%b a complementului, proteina *reactiv, fibronectina) i anticorpi care sunt opsonine specifice.Bacteriile capsulate, ca de pild pneumococii, nu sunt accesibili fagocitozei. !ac $ns ele suntopsonizate de anticorpi ;g9 anticapsulari, acetia se vor fi"a cu fragmentul &c de fagocit i cu &abde bacterie. 7n acest fel, fagocitoza va fi posibil i eficient.

    Li!a $acteriilor. 0rin unirea ;g9 sau ;gM cu antigenele de suprafa a bacteriilor are loc activareacomplementului pe cale clasic, ceea ce ve determina fenomenul de bacterioliz.

    n orice ca!6 $acteriile cu #a$itat e/tracelular sunt eli(inate 4n 0inal "rin 0agocito!)3

    Anticor"ii sunt i("lica1i *i 4n re!isten1a 0a1) ,e (icroorganis(e cu #a$itat intracelular6 *ianu(e 4n citoto/icitatea (e,iat) celular anticor"o,e"en,ent). 2stfel, ;g9 se vor fi"a prinfragmentul lor &ab de antigenele virale sau provenite de la ali ageni cu +abitat intracelular (fungi,

    bacterii) i e"primate la suprafaa celulelor infectate, iar cu fragmentul &c de receptorii pentru &cde pe suprafaa limfocitelor > (5iller). 2cestea vor distruge celula infectat prin perforareamembranei celulare, printr*un mecanism asemntor complementului.

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    46/71

    &igura % : olul anticorpilor

    R)s"unsul i(un celular *i rolul s)u 4n a")rarea antiin0ec1ioas)

    P serie de microorganisme au +abitat obligatoriu sau facultativ intracelular. 2stfel, virusurile,unele bacterii (c+lam/dii i ric5ettsii), precum i unele protozoare au un parazitism intracelularobligatoriu, replicarea lor fiind dependent $n totalitate de celula gazd. 2lte bacterii, ca de pild

    bacilul tuberculos, bacilul leprei, au un +abitat facultativ intracelular.

    2ceste microorganisme sunt prote6ate de aciunea anticorpilor i organismul este nevoit s*idezvolte alte mecansime de aprare care se bazeaz mai ales pe imunitatea mediat celular.

    &igura : spunsul celular la substanele microbiene

    ;munitatea mediat celular cuprinde $n esen dou procese:

    U ,istrugerea ,e c)tre li(0ocitele T citoto/ice C'H(a6utate de limfocitele K+) a celulelorcare con1in un (icroorganis( 4n 0a!) re"licati+) >,e o$icei un +irus?i

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    47/71

    U acti+area "rin IFN *i alte citoBine a (acro0agelor "entru a le 0ace ca"a$ile s),istrug) (icroorganis(ul care se ,e!+olt) c#iar 4n interiorul lor (bacilul tuberculos, bacilulleprei, to"oplasma, legionella etc.)

    a) 7n prima situaie rspunsul celular este declanat de limfocitul K+ activat de macrofag. 2stfel, unvirus este fagocitat de macrofag, care prezint limfocitului K+ epitopul secvenial $n asociaie cu

    MS de clasa ;;. 0e de alt parte, virusul ptrunde i $n alte celule dect macrofage.2ntigenele virale modific imunogenicitatea acestor celule, care devin astfel Hnon*selfI. elulelenucleate ale organismului ($n afar de celulele prezentatoare de antigen) au la suprafaa lor MSde clasa ; $n asociaie cu care antigenul de suprafa aprut datorit infeciei virale va fi HvzutI delimfocitele Kc. 2cestea se vor $nmuli sub actiunea ;?*- secretate de ctre limfocitul K+ stimulat demacrofage. ezultatul va fi c limfocitele Kc activate vor secreta citoto"ine letale pentru celulavirus infectat.

    a i $n cazul limfocitelor K+ i B, o parte din Kc se vor diferenia $n limfocite Kc de memorie,capabile s iniieze un rspuns celular mai prompt la un al doilea contact cu acelai antigen.

    &igura < : spunsul imun la ageni infecioi e"tracelulari

    b) 7n infeciile cu germeni cu +abitat facultativ sau obligatoriu intracelulari (KB, lepr etc.), un rol

    important $l au macrofagele i limfocitele K+. 2cestea secret limfo5ine care activeaz macrofagelei recruteaz i alte celule participante. 7mpreun vor inia un rspuns inflamator, denumit Hde tip$ntrziatI 2cest rspuns inflamator poart denumirea de H$ntrziatI deoarece, spre deosebire derspunsul inflamator iniiat de anticorpi, care apare $n timpul cel mai scurt (minute sau ore), elapare dup cel puin -*C de ore, sau c+iar mai trziu.

    P parte din micoorganismele care $i desfoar ciclul de via i supravieuiesc $n macrofage mor,iar produsele lor de degradare prelucrate vor a6unge la suprafaa acestor celule. Macrofagul va

    prezenta limfocitului K+ aceste antigene $n asociaie cu antigenul MS de clasa ;;. ?imfocitul K+va declana secreia de ;&3 care va transforma macrofagul $ntr*un macrofag activat sau HfuriosI.

    &actorii de activare al macrogelor (mai ales ;&3) vor activa mecanisme microbicide puternice carevor reui de regul distrugerea microorganismului aflat $n celul, dar nu $ntotdeauna.

    2glomerarea i proliferarea macrofagelor i a limfocitelor vor determina formarea unui focarinflamator.

    2ctivarea macrofagelor are dou faete: este benefic dac se petrece $n limite fiziologice, dar estenociv atunci cnd depete $n intensitate anumite limite deoarece procesul inflamator produceleziuni ale esuturilor $n care se petrece. Ea st la originea unor inflamaii cronice (tuberculoz,lepr * vezi +ipersensibilitatea de tip ;8 mediat celular).

    R)s"unsul "ri(ar *i secun,ar

    0rocesele imunogenetice descrise mai sus se petrec atunci cnd organismul vine $n contact pentruprima oar cu un antigen timodependent i ele sunt desemnate ca rspuns imunologic primar. 2acum s*a vzut, pe lng celulele i moleculele efectoare iau natere limfocitele cu memorie care

    sunt limfocite cu via lung. ?a o nou $nt$lnire cu antigenul, receptorii pentru antigen se gsesc $n

    F

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    48/71

    concentraie mai mare dect la prima $ntlnire. a urmare probabilitatea $ntlnirii partenerilor dereacie potrivii crete, reacia imunogenetic decurgnd mai rapid.

    R)s"unsul "ri(ar. 7n urma stimulrii antigenice, rspunsul $n anticorpi parcurge faze:U o perioad de laten, a crei durat depinde de natura antigenului i care dureaz $ngeneral - sptmni,

    U o 0a!) ,e cre*tere6 $n cursul creia apar anticorpii, titrul lor crescnd $n progresiegeometric,

    U o 0a!a 4n "latou6$n care anticorpii se menin la un nivel costant pentru cteva sptmni i,

    U o 0a!) ,e ,escre*tere6$n care anticorpii sunt metabolizai i dispar.

    R)s"unsul secun,arse deosebete de cel primar prin:

    93 cinetica r)s"unsului. &aza de laten $n rspunsul secundar este mai scurt (%*< zile), fazade platou prelungit (luni) i descreterea mai lent (luni, ani, uneori pe toat viaa).

    83 ni+elul ,e anticor"i. Kitrul ma"im de anticorpi este $n general de # ori mai mari dect $nrspunsul primar.

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    49/71

    prezint alergenul limfocitelor K+. ?imfocitele K+ activate induc apoi transformarea limfocitelor B$n plasmocite productoare de ;gE.

    La "acien1ii ato"ici6 cu (ecanis(ul ,econtrol al "ro,uc1iei ,e IgE "ertur$at6este ,eseori ,e")*it) "ro,uc1ia ,e

    anticor"i c#iar ,u") un contact scurt6cu o ,o!) sc)!ut) ,e alergen. 0roduciade ;gE la locul de ptrundere alalergenului sensibilizeaz mai $nti celulamastocitar. E"cesul de ;gE ptrunde apoi$n secreiile mucoase i $n circulaie i seleag prin fragmentul &c de bazofilelecirculante i mastocitele din esuturi.

    A ,oua eta") a reac1iei ,e ti" I esteacti+area celulelor (astocitare *i este,eclan*at) ,e o nou) 4nt2lnire cualergenul3

    2lergenul se va uni cu ;gE fi"ate pemastocite i va determina degranularea cao consecin a influ"ului de aRR.9ranulele, coninnd mediatori de6asintetizai, migreaz spre suprafaacelulelor mastocitare, fuzioneaz cumembrana e"tern i $i elibereaz

    constituienii (+istamina, serotonina, leucotriene i prostaglandine, factori c+emotactici).

    n a treia 0a!) a rec1iei ,e ti" I, mediatorii produc variate efecte care dau nateresimptomatologiei clinice

    ?a nivelul tractului respirator, +istamina eliberat determin contracia musculaturii netede abron+iilor (bron+oconstricia) $n decurs de cteva minute.

    nd antigenul sensibilizant (alergenul) este inoculat parenteral $n doz suficient de mare(penicilin, procain, seruri +eteroloage etc.) apare o reacie sistemic manifestat prin urticarie,fenomene asfi"ice, oc i colaps circulator cu deznodmnt adesea fatal.

    nd alergenul este inoculat $n doz foarte mic ($nepturi de albin) sau depus pe o mucoas(polenuri, praf de cas, mucegaiuri, alimente ca: ou, pete, fragi), e"presia clinic a fenomenuluieste mai mult sau mai puin circumscris la tegument (urticaria), la mucoasa nazal i con6unctiv(febra de fn), la cile respiratorii inferioare (astmul bronic). Evoluia unor infecii se poate $nsoide fenomene anafilactice: viroze ale copilului (de e"emplu, cu virusul sinciial respirator), astmulintrinsec (sensibilizare la antigene ale bacteriilor care infecteaz tractul respirator inferior),

    lambliaza, +elmintiaze (ascaridioz, ec+inococoz etc.).'e"istarea sensi$ili!)rilor ana0ilactice este obligatorie, mai ales atunci cnd se administreaz un

    produs cunoscut pentru reaciile anafilactice pe care le produce.

    Testul intra,er(ic este indicat $nainte de administrarea penicilinelor, a procainei, a serurilorimune +eteroloage. ?a cteva minute de la inocularea intradermic a unei mici doze de alergen, la

    persoanele sensibilizate, apare o papul urticarian $ncon6urat de o aureol congestiv i $nsoitde prurit. &enomenele dispar dup apro"imativ o or. iscul ocului anafilactic impune mediculuicare face testarea s lucreze cu diluii mari de antigen i s aib la dispoziie o medicaiecorespunztoare i antioc.

    Reac1iile ,e ti" II citoto/ic-citolitic

    Reac1iile ,e ti" II se ,atorea!) anticor"ilor Ig G6 (ai rar IgM6 care se 0or(ea!) 4n organis(0a1) ,e antigene situate la su"ra0a1a unor celule sau 1esuturi3 2ntigenele pot aparine unor

    G

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    50/71

    celule strine sau propri dac acestea nu mai sunt recunoscute ca HselfI sau i*au modificatanigenitatea. ?eziunile se produc prin - mecanisme:

    U legarea anticorpilor de celula int cu acti+area "e cale clasic) a co("le(entului icitoliz consecutiv,

    U citoto"icitatea mediat de anticorpi ;g9 i limfocitele >.

    7n reaciile posttransfuzionale, anticorpi de tip ;gM reacioneaz cu antigene de grup 2BP aleeritrocitelor, fiind responsabile de aglutinare, activarea complementului seric i +emolizaintravascular.

    2nemia +emolitic a nou*nscutului, datorit incompatibilitii +, este produs de anticorpimaterni de tip ;g9 care recunosc antigene specifice + (factorul !) de pe suprafaa eritrocitelornou*nscutului.

    eacia de tip ;; poate fi indus i de medicamente, rezultatul fiind o anemie +emolitic.Medicamentul sau produii de metabolism ai acestuia se fi"eaz pe membrana eritrocitar deveninddin +apten, antigen complet. Eritrocitul nu mai este recunoscut ca HselfI i se vor forma anticorpiantieritrocitari. 2cetia se vor uni cu medicamentul de pe suprafaa eritrocitelor, vor activacomplementul rezultatul fiind liza acestor eritrocite.

    eacia de tip ;; apare i $n unele infecii, ca, de pild, $n infeciile streptococice (carditareumatismal), $n care se sintetizeaz anticorpi fa de unele antigene streptococice ce auasemnre cu un antigen al fibrei miocardice. Sipersensibilitatea citoto"ic*citolitic se mai$ntlnete $n infecii cu m/coplasme, virusuri (+epatit B), protozoare (malarie) etc.

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    51/71

    Reac1iile ,e ti" III "rin co("e/e i(une

    Le!iunile "ro,use ,e reac1iile ,e ti" III sunt ini1iate ,e co("le/e i(une antigen-anticor"care6 0or(ate 4n cantitate (are6 sau "ersistente 4n circula1ie6 acti+ea!) co("le(entul *i,eter(in) le!iuni la locul ,e"unerii lor. ?a persoanele sntoase, comple"ele antigen*anticorpsunt rapid fagocitate de macrofage dar, $n anumite circumstane (de obicei cnd e"ist un e"ces de

    antigen), ele persist i stau la baza a numeroase afeciuni.2ntigenele care induc aceast reacie sunt foart variate. !intre speciile microbiene care potdetermina acest tip de +ipersensibilitate menionm : Streptococcus pyo&enes, ycobacteriumleprae, Treponema pallidum, 'lasmodium,virusul +epatitei B, virusul Epstein Barr etc.

    2nticorpii implicai sunt ;g9 i ;gM, deci activatori de complement.

    omple"ele antigen*anticorp ptrund prin epiteliul vascular, se depun pe membrana bazal avaselor i activeaz complementul. %a i

  • 8/13/2019 Carte Microbiologie

    52/71

    Boala serului este o reacie de tip /// generalizati apare la pacieni crora li s*au administrat, $nscop terapeutic, doze mari de ser imun +eterolog (ser antidifteric sau antitetanic preparat pe cai).

    !up F*# zile de la admnistrarea serului apar $n circulaie anticorpi fa de proteinele de cal. !acproteinele nu au fost $nlturate din circulaie pn la apariia anticorpilor, acetia se vor uni cu ele icomple"ele imune formate se vor depune pe pereii vaselor. 0rin activarea complementului se vor

    leza p