ANTIBIOGRAMA

Antibiograma: testarea sensibilitii microorganismelor fa de antibiotice 1. Metode calitative Metoda difuzimetric Kirby-Bauer Se testeaz sensibilitatea unei tulpini bacteriene izolate. a. Prepararea inoculului:

- se suspensioneaz 2-3 colonii izolate n ser fiziologic; - turbiditatea suspensiei se controleaz nefelometric sau comparnd cu tuburi etalon

(conin suspensii de particule latex/sulfat de Ba avnd turbiditate determinat); - se ajusteaz la 0,5 McFarland (1,5x108 CFU/ml).

b. nsmnare: - se alege un mediu corespunztor speciei bacteriene testate

Mueller-Hinton pentru majoritatea bacteriilor Mueller-Hinton cu snge pentru pretenioi (de ex. streptococi) medii speciale (pentru Haemophilus spp., neisserii)

- se introduce un tampon n suspensia bacterian, se stoarce pentru ndeprtarea excesului de lichid

- se terge uniform toat suprafaa mediului de 3x c. Depunerea microcomprimatelor de antibiotice

- se aleg antibioticele care trebuie testate n funcie de specia bacterian testat i n funcie de localizarea infeciei conform recomandrilor standardelor n vigoare

- se depun discurile de antibiotic la 1,5 cm distan de marginea cutiei Petri i la 3 cm distan unul fa de cellalt (pot fi depuse max. 7 discuri)

- 15 min. temperatura camerei d. Incubare

- n funcie de specia bacterian: n atmosfer obinuit sau n atmosfer de CO2 (de ex. streptococi, neisserii,)

- 35C - 16-18 ore (n cazul germenilor pretenioi pn la 20-24 de ore)

e. Citirea antibiogramelor - apare o cultur bacterian confluent, n jurul microcomprimatelor apar zone de

inhibiie (lipsa creterii bacteriene), - se citesc diametrele zonelor de inhibiie - se compar diametrele citite cu diametre standard n funcie de antibiotic, cantitatea

de antibiotic din comprimat, specia bacterian testat Tabel: Exemple de diametre standard, conform standardelor CLSI (Clinical Laboratory Standards Institute, USA)

Specii bacteriene

Antibiotic Rezistent Intermediar sensibil

Sensibil

S. aureus Penicilin 10 U 28 mm - 29 mm

Enterococcus spp.

Penicilin 10 U 14 mm - 15 mm

- pot aprea fenomene de sinergism/antagonism care reflect diferite mecanisme de rezisten

- colonii izolate n interiorul zonei de inhibiie: subpopulaii rezistente f. Interpretarea antibiogramelor:

- Rezultatul se raporteaz: sensibil (S), intermediar sensibil (IS) sau rezistent (R) la antibioticul testat

- nu se comunic diametrele citite (metod calitativ) - Se identific fenotipuri de rezisten (presupune cunoaterea rezistenei intrinsece a

bacteriilor + a mecanismelor de rezisten prin care bacteriile pot dobndi rezisten la diferite antibiotice)

Variabilele care influeneaz rezultatele:

- compoziia mediului (coninut de cationi, timidin) - pH (optim: 7,2-7,4) - grosimea gelozei (standard: 4 mm) - inoculul - 0,5 McFarland - microcomprimate (valabilitate, coninut, condiii de pstrare) - timpul, temperatura de incubare - citirea diametrelor (lumin refractat/reflectat, colonii izolate, prezena unui vl,

margini crenelate) Control de calitate

- microcomprimatele, - loturile noi de medii de cultur se testeaz cu tulpini de referin

2. Metode cantitative Permit stabilirea concentraiei minime inhibitorii (CMI) a unui antibiotic CMI: cantitatea cea mai mic de antibiotic care inhib complet multiplicarea unei bacterii Este recomandat testarea cantitativ n urmtoarele situaii:

- cazuri clinice grave (septicemii, endocardite, meningite) - rezultate incerte cu metoda difuzimetric / sensibilitate nedeterminat - situaii speciale (de ex. testarea sensibilitii pneumococului la penicilin printr-o

metod cantitativ cnd diametrul zonei de inhibiie la oxacilin este sub 20 mm) CMI obinut se raporteaz la punctele de ruptur superioare i inferioare date de CLSI Exemplu: Puncte de ruptur CMI n mg/ml pentru ampicilin Specii bacteriene Sensibil Intermediar

sensibil Rezistent

Stafilococi 0,25 - 0,5 Enterococi 8 16 Enterobacterii 8 16 32

Metoda diluiilor (macro/microdiluie) - se realizeaz diluii succesive din antibioticul de testat n mediu de cultur lichid - se adaug cantiti fixe din cultura bacterian cercetat - incubare 18 ore 35C - se urmrete apariia culturii n mediul lichid - CMI: cea mai mic concentraie de antibiotic care nu permite creterea germenilor

(cultur limpede) Metoda diluiilor n agar

- se realizeaz diluii succesive din antibioticul testat n geloz Mueller Hinton - se nsmneaz cultur bacterian n spoturi - citire: CMI concentraia cea mai mic care inhib complet creterea

E-teste

- pe suprafaa mediului de cultur solid i nsmnat se aplic fii din plastic impregnate cu antibiotic n concentraie crescnd la un capt concentraia este minim, la cellalt este maxim; gradaiile sunt notate pe fie;

- incubare - apar zone de inhibiie de form elipsoidal, n dreptul intersectrii cu fia de plastic

se citete CMI