Metoda radioimuna RIAIntroducereMetoda radioimuna (RIA-radioimmunoassay) este o tehnica de mare sensibilitate folosita pentru a masura concentratia antigenelor utilizand anticorpii. Tehnica presupune separarea unei proteine dintrun amestec folosindu-se de specificitatea legaturii antigen-anticorp si masurarea cantitatii complexelor prin radioactivitate. Tehnica a revolutionat cercetarea si practicile medicale in domenii diverse: diagnosticul alergiilor (prin metoda RAST-radioalergosorbent), endocrinologie, virusologie.

IstorieRIA a fost introdusa in 1960 de Berson si Yalow ca un test pentru determinarea insulinei din sange. Era prima data cand se doza nivelul unui hormon din sange printr-un test in vitro. In 1977, Rosalyn Yalow a primit premiul Nobel in medicina pentru dezvoltarea tehnicii radioimune pentru insulina.

TehnicaSe prepara un amestec format din antigene radioactive si anticorpii corespunzatori lor. Izotopii de 125I si 131I sunt des utilizati datorita usurintei cu care se leaga de tirozina din proteine. In urmatoarea etapa se adauga in amestec cantitati cunoscute de antigene nemarcate. Acestea intra in competitie cu situsurile de legare ale anticorpilor. La cresterea cantitatii de antigene nemarcate, un numar mai mare de antigene radioactive este deplasat din legaturile cu anticorpii, iar apoi se masoara radioactivitatea din sange. Din datele obtinute rezulta un grafic cu o curba standard de legare. Esantioanele care trebuie testate (antigenele nemarcate), sunt desenate in paralel. Dupa stabilirea raportului de legare a fiecarui antigen necunoscut, concentratia acestora poate fi citita direct pe curba standard.

1

Prin adaugarea unei a doua cantitati de anticorpi indreptate impotriva primelor antigene, rezulta precipitarea complexelor antigen-anticorp. De exemplu, se poate precipita prin adaugarea unor antigene anti-IgG. Metoda este vast folosita datorita marii specificitati pe care o are. Daca afinitatea anticorpilor este foarte mare, este posibil sa fie detectate cantitati de antigene de ordinul picogramelor (10-12). Cu cat este mai mare specificitatea, cu atat testul este mai exact.

DezavantajeCele mai mari dezavantaje ale folosirii acestei metode sunt costul ridicat si riscul important care presupune prepararea si folosirea antigenelor radioactive. Ambii izotopi emit radiatii gamma care necesita un echipament special de manipulare. Organismul uman concentreza iodul radioactiv sau nu in glanda tiroida unde sunt incorporati in tiroxina (T4).

AvantajeIn ciuda neajunsurilor, RIA a devenit un test foarte des folosit in laboratoare. Este utilizat pentru a detecta nivelul majoritatii hormonilor din sange, digitoxina la pacientii care o au in medicatie, droguri. De asemenea, poate fi detectat antigenul de suprafata al virusului hepatitic B (HBsAg) in sangele donat, anticorpii anti-ADN in Lupus erythematosus.

2

Bibliografie:http://users.rcn.com/jkimball.ma.ultranet/BiologyPages/R/Radioimmunoassay.html http://en.wikipedia.org/wiki/Radioimmunoassay

Dabija Raluca-Ioana, Grupa 6, Facultatea de Farmacie, Universitate Ovidius

3