LP 5. Dozarea hemoglobinei / 2 ore

HemoglobinaDerivatii hemoglobinei

Hemoglobina reprezinta componentul principal al eritrocitelor (95 % din proteinele citoplasmatice eritrocitare) si serveste ca vehicul pentru transportul oxigenului si dioxidului de carbon.

Hemoglobina este o proteina conjugata constand dintr-un tetramer format din 2 perechi de lanturi polipeptidice (globine 96%), fiecare dintre acestea fiind conjugat cu un grup hem (4%), un complex al unui ion de fier cu pigmentul rosu, porfirina, care confera sangelui culoarea rosie. Fiecare gram de hemoglobina poate transporta 1.34 mL oxigen per 100 mL de sange.

Rol

Hemoglobina fixeaza reversibil oxigenul molecular la nivelul plamanilor, cu formarea oxihemoglobina HbO2 si dioxidul de carbon cu formarea carbhemoglobinei HbCO2, forma de transport a CO2 de la țesuturi la plămâni.

Dozarea Hb ca cianmethemoglobina prin metoda Drabkin

Este metoda standard de hemoglobinometrie.

Principiul metodei

Fericianura de K oxideaza Fe feros (2+) din Hb la Fe 3+ si toate tipurile de Hb se transforma în metHb. Aceasta se combină cu cianura de K transformându-se în cianmetHb- compus stabil.

ReactiviReactiv Drabkin

- 0,14 g fosfat monopotasic- 0,2 g cianura de potasiu- ad pana la 1000 ml (pH 6,4)

Se filtreaza prin hartia de filtru, se pastreaza la frigider in flacoane de sticla bruna, bine inchise, aprox 2 luni.

Parametri obligatorii pt rv Drabkin:- pH 7,3 – 7,5- claritate

- stabilitate

Standard de cianmetHb

ProbaSange capilar sau venos tecoltat pe anticoagulant EDTA

Tehnica de lucru

- In 2 eprubete de hemoliza se adauga 5 ml rv Drabkin.- Intro eprubeta se pune cu o micropipeta de hemoglobina, 0,02 ml sange, al

carei exterior se sterge cu o hartie de filtru.- In cealalta eprubeta se adauga 0,02 ml standard.- Se lasa 30 min in repaus.- Se citesc Ep si Es fata de apă distilată la λ= 540 nm in cuve de 1 cm.

Calcul

Cp = Ep / Es x Cs (g Hb /100 ml ser)

Condiții de analiza

Spekol- se verifică lungimea de unda- cuve de 1 cm

Standard- se utilizeaza o singura data (fiola de standard are valabilitate 1 ora de la

deschidere)- se pastreaza la rece

Reactiv Drabkin- cianura de potasiu ,f toxica, daca este umeda se pastreaza in exicator 24 – 48

ore- pH 7,3 – 7,5- pH apă distilată 6 – 6,5- pastrare la frigider in sticle brune cu dop de plastic sau sticla

Pipete- curate, uscate, intacte

Proba, esantion de sange- se recolteaza fara bule de aer pana la semn

Tehnica de lucru- micropipeta se introduce la fundul eprubetei cu rv- nu se introduc bule de aer- se spală micropipeta in rv de 2-3 ori- omogenizarea rv se face printr-o singura scuturare- se respecta cu strictete timpul de reactie 30 min.

Valori normale nou nascut: 17 – 20 g/100 mlcopii 0 - 1 an: 12 - 19 g/100 mlcopii 1 - 15 ani: 11,2 - 13,4 g/100 mlbărbați: 14 – 18 g/100 mlfemei: 12 – 16 g/100 ml

Variaţii patologice

Scăderi – anemii, hemoragiiCreșteri – poliglobulii, deshidratare, insuficiență pulmonară şi cardiacă, tumori