hb a1c --- i-chroma

Hb A1c --- i-CHROMA™ Boditech Med Inc

HEMOGLOBINA A1c (HBA1c)

UTILIZAREAcesta este un sistem de analiza imunologica pentru masurarea cantitativa a Hemoglobinei A1c

(HbA1c), în sangele uman, cu i-CHROMA™ Reader.Testul este folosit pentru monitorizarea de rutina, pe termen lung, a statusului glicemic la pacientii

cu diabet zaharat.

REZUMAT SI PRINCIPIUL TESTULUIProteinele glicate se formeaza post-translational, în urma unei reactii lente, non-enzimatice dintre

glucoza si grupele amino din proteine1. Hemoglobina Alc este un indicator clinic util al glicemiei medii in timpul a 120 de zile anterioare, media duratei de viata a eritrocitelor. Studii atent controlate au documentat stransa corelatie intre HbAlc si glicemia medie. HbAlc este considerat un parametru mai de incredere pentru monitorizarea glicemiei fata de citirea glicemiei cu glucometrul conventional.

Testul i-CHROMA TM HbA1c este bazat pe tehnologie imunologica cu fluorescența, în special metoda de detectie imuno-competitiva .

Se adauga sange integral la amestecul de tampon hemoliza și tampon detectare, ceea ce duce la hemoliza celulelor rosii din sange.

Amestecul conținand HbA1c din eritrocite hemolizate și peptide HbA1c marcate fluorescent din tamponul de detecție este încarcat pe godeul de proba al Dispozitivului de Testare. Amestecul migreaza, prin capilaritate, prin matricea nitrocelulozica a benzii de testare

HbAlc din sange integral concureaza cu peptidele HbAlc marcate fluorescent pentru locusurile de legare antigenelor de pe anticorpii anti HbAlc, prezenti in matricea nitrocelulozica. Ca urmare, o concentratie mare de HbA1c in sange produce o scadere a semnalului fluorescent corespuzator peptidelor HbA1c. Semnalul este interpetat si rezultatul afisat de i-CHROMATM Reader in unitati procentuale

Componenta KituluiKitul i-CHROMA™ HbAlc contine

Dispozitivul de Testare o este un cartus etansat intr-o punga de aluminiu, individual, cu sicativ o contine anticorpi monoclonali anti-HbAlc de soarece (imobilizati pe suportul de

testare) si imunoglobulina IgG ( iepure), fixata pe liniile de control ale benzii. Tamponul de Detectare

o se afla într-o fiola si este livrat separat de Dispozitivul de Testare o contine peptide HbA1c marcate fluorescent, imunoglobulina IgG anti soarece

marcata fluorescent, BSA ca stabilizator si azida de sodiu în PBS cu rol conservant Tamponul de Hemoliza

o vine separat într-un tub, fiind ambalat într-o punga o este distribuit individual în tuburi mici si este constituit dintr-un detergent

cationic.

Materiale furnizateREF: CFPC-38- Cartus (dispozitiv) de testare - 25 pungi - ID chip 1 buc.- Prospect 1 buc- Tampon detectare* 1 fiola- Tampon hemoliza* 25 tuburi/punga

* Ambalate separat în cutii Styrofoam

1


Materiale necesare, dar care nu sunt furnizate i-CHROMA TM Reader REF FR-203 i-Chamber REF FPRR-009 Imprimanta termica (optional) Pipete de transfer (75 si 100µL) Tub capilar (5 µL) Control HbA1c tip i-CHROMATM

Stabilitate si conditii de stocare Cartusul HbA1c i-CHROMA TM este stabil timp de 20 de luni, daca este depozitat la 4 -

30° C în punga sa, sigilat. Tamponul de detectare este stabil pana la 20 de luni, daca este pastrat la 2 - 8° C. Tamponul de hemoliza este stabil pana la 20 de luni, daca depozitat la 4 - 30° C, în punga

sa, sigilat. A nu se congela și a se evita lumina directa a soarelui

Recoltarea probei si pregatirea ei Se poate utiliza sange capilar sau sange venos, cu sau fara anticoagulanti (EDTA, heparina sau

NaF). Întreaga proba de sange trebuie sa fie la temperatura camerei și sa fie omogenizata înainte de

testare. Se recomanda folosirea probei de sange proaspat pentru rezultate mai bune iar probele mai vechi

de 24 de ore trebuie sa fie evitate, daca este posibil. Daca probele sunt hemolizate, un alt specimen ar trebui sa fie prelevat pentru testare.

Avertismente și masuri de precauție Uilizare doar pentru diagnostic in vitro Nu utilizați i- CHROMATM HbA1c dupa data de expirare. Nu schimbați componente din diferite loturi. Tamponul de detectare conține azida de sodiu ( 0,05% ), care este un agent toxic. Asteptati ca tamponul de detectarea sa ajunga la temperatura camerei ( 20-30oC ) înainte de a

începe un test. Folosiți varfuri de pipeta curate separat pentru fiecare specimen . Aruncați-le dupa o unica

folosința. Probele de sange, partile folosite din acest produs, varfurile de pipeta și flacoanele de proba sunt

potențial infecțioase. Aplicati masurile de siguranta in laboratoare, metodelele de manevrare si evacuare, conform procedurilor standard si reglementarilor relevante aferente materialelor ce prezinta risc microbiologic.

i-CHROMA™ HbAlc nu trebuie utilizat ca metoda absoluta de depistare a diabetului zaharat. Rezultatele trebuie interpretate de medic in baza rezultatelor clinice si a altor rezultate de testare in laborator.

i-CHROMA™ HbAlc este functional doar utilizand i-CHROMA™ Reader. Testele trebuie aplicate de personalul pregatit ce lucreaza in laboratoarele in care probele sunt recoltate de personal medical calificat.

Dispozitivul de Testare si Citire i-CHROMA™ HbAlc nu trebuie utilizat in in mediu cu vibratii si campuri magnetice.. In timpul utilizarli normale, i-CHROMA™ HbAlc poate induce vibratii, lucru ce trebuie considerat drept normal

2


Pregatirea testului Inainte de inceperea testului pregatiti urmatoarele componente alComponentele testului

1. Dispozitivului de testare i-CHROMA™ HbAlc

1. Fereastra 1 pentru masurarea concentratiei hemoglobinei (metoda colorimetrica)2. Godeu pentru hemoglobina (se incarca 150L amestec hemoglobina)3. Godeu pentru A1c (se incarca 75 L)4. Fereastra 2 pentru masurarea concentratiei de A1c (metoda cu imunofluorescenta) (fereastra 2 este acoperita cu un capac glisant

2. ID Chip 3. Tub tampon hemoliza 4. Flacon tampon detectie 5. Tub capilar6. Dispozitiv (cartus) de testare 7. i-camera (camera de incubare) 8. i-ChromaTM Reader

Important Pastrati recipentul cu tampon detectie la temperatura camerei cel putin 30 de minute

inainte de inceperea testului. Temperatura tinta a i-Chamber este 30o C Asigurativa ca numarul de lot al ID chip-ului este exact acelasi cu numarul dispoziticului

de detectie si cu numarul tubului tampon detectie

PROCEDURA DE LUCRU3


Setari test

1. Porniti aparatul (butonul ON/OFF in pozitia ON) 2. Introduceti ID Chip3. Apasati butonul Select4. Introduceti cartusul in slotul i-chamber.5. Tineti cartusul in slot 5-30 minute

Testare propriu-zisa

1. Extrageti cu o micropipeta 100 L tampon detectie din flaconul cu tampon detectie si

2. Introduceti cei 100 L Tampon Detectie in tubul cu Tampon Hemoliza

3 Extrageti cu tubul capilar 5 L sange integral

Daca s-a aspirat prea mult se indeparteaza excesul, iar daca s-a aspirat prea putin se mai aspira sange. Stergerea de sangele in exces se face prin lateral.

4


4 Introduceti dispozitivul capilar in tubul Tamponului de Hemoliza si scuturati tubul de 15 ori prin inversare pentru a scoate sangele din tubul capitar.

5 Agitati tubul de 15 ori prin inversare pentru ascoate sangele din tubul capitar.

6 Scoateti din aparat dipozitivul de testare, doar pe jumatate, dupa perioada de 5-30 minute

7 Extrageti cu o micropipeta amestec Proba- Tampon Hemoliza

5


8 Incarcati proba in godeurile Hb, respectiv HbA1c

9 Introduceti dispozitivul de testare in i-chamber

10 Lasati cartusul in i-chamber 12 minute

11 Introduceti cartusul in cititorul i-chroma Reader

6


12 Apasati butonul "Select"

13 Cititi rezultatul testului pe display sau de pe foaia imprimata.

REZULTATEi-CHROMA™ Reader calculeaza automat rezultatele testului HbAlc si afiseaza pe LCD procentul

(%) de hemoglobina Alc din sange. Pentru mai multe informatii, consultati Manualul de Utilizare pentru i-CHROMA™ Reader

CONTROLUL CALITATII Trebuie efectuat un test de control al calitatii, ca parte a bunei practici in laborator, în vederea

confirmarii rezultatelor asteptate în ceea ce priveste controlul calitatii, în vederea confirmarii validitatii testului si în vederea asigurarii exactitatii rezultatelor pacientilor. In cazul în care doriti efectuarea controlului calitatilitatii kit-ului de testare, va recomandam sa utilizati dispozitivul de control i-CHROMA™ HbAlc al Boditech Med Inc.

Trebuie efectuat un test de control al calitatii la intervale regulate de timp, iar înainte de a utiliza un nou kit cu probe ale pacientilor, trebuie testate controale pentru confirmarea procedurii de testare si verificarea faptului ca testele conduc la rezultatele asteptate în ceea ce priveste controlul calitatii. Trebuie prelevate probe în vederea controlului calitatii de fiecare data cand se pune sub semnul întrebarii validitatea rezultatelor obtinute. La confirmarea rezultatelor asteptate, dispozitivul de testare este gata de a fi utilizat cu probele pacientilor. Standardele de control nu sunt livrate împreuna cu acest kit de testare. Pentru mai multe informatii privitoare la obtinerea elementelor de control, contactati Serviciul Tehnic de Asistenta Boditech Med Inc.

Fiecare dispozitiv de testare i-CHROMA™ HbAlc contine controlul procedurii interne care satisface cerintele aferente controlului calitatii. Acest control intern se realizeaza de fiecare data cand se testeaza o proba a unui pacient. Acest control indica faptul ca dispozitivul de testare a fost introdus corect si citit de i-CHROMA™ Reader. Un rezultat nevalid din partea controlului intern cauzeaza un mesaj de eroare pentru i'-CHROMA™ Reader ce indica faptul ca testul trebuie repetat

LIMITE Rezultatele i-CHROMA™ HbAlc trebuie evaluate împreuna cu toate datele clinice si de laborator

disponibile. In cazul în care rezultatele testului HbAlc nu corespund evaluarii clinice, trebuie realizate teste suplimentare.

7


Rezultatele fals pozitive includ reactii incrucisate cu cateva componente ale serului, cu anticorpii; de asemenea, si adeziunea specifica a unor componente din sangele uman ce prezinta epitopi similari pentru captarea si detectarea anticorpilor. In cazul rezultatelor false negative, cei mai comuni factori sunt: lipsa raspunsului antigenului la anticorpi, în care componentele necunoscute mascheaza epitopii sai, cum ar fi faptul ca antigenul nu poate fi vazut de antigeni; instabilitatea antigenului A avand drept rezultat degradarea în timp si temperatura, în asa fel încat ei nu mai pot fi recunoscufi de anticorpi; si alte componente degradate. Eficienta testului depinde în foarte mare masura de depozitarea kit-urilor sale si a probelor în condifii optime.

Alti factori pot interfera cu i-CHROMA™ HbAlc si pot conduce la rezultate eronate. Acestea includ erori tehnice sau procedurale precum si substante suplimentare în probele de sange.

CARACTERISTICI, PERFORMANTA1. Interferenta/Specificitate: La proba de testare s-au adaugat alte biomolecule, cum ar fi bilirubina

(20mg/mL), trigliceride(3000mg/dL, acid ascorbic(5mg/dL) si glucoza (300mg/dL), la un nivel mult mai mare decat nivelul lor fiziologic din sangele normal. Nu a existat o interferenta semnificativa cu masurarea HbAlc si nici nu s-a observat o reactie semnificativa încrucisata cu alti biomarkeri din sange aferenti bolilor.

2. Comparabilitate/Acuratete: Concentratine HbAlc aferente unui numar de 132 probe clinice au fost cuantificate independent cu ajutorul metodelor i-CHROMA™ HbAlc si Tosoch G7 (HPLC). Rezultatele testelor au fost analizate, iar compatibilitatea lor a fost investigata utilizand regresia liniara si corelatia coeficientului (R2). i-CHROMA™ HbAlc a fost bine comparabil fata de cealalta metoda (R2 =0.9835).

3. Precizie: Pentru imprecizia intra-test, fiecare proba de control a fost testata cu 10 elemente ale aceluiasi lot, din aceeasi zi pentru 3 loturi diferite de kit-uri. Inter-testele au fost efectuate in 5 zile consecutive, de doua ori pe zi, cu 10 elemente la fiecare proba de control pentru 3 loturi diferite de kit.

Precizia i-CHROMA™ HbAlc

HbAlc Intra-test Inter-test(%)

Medie SD CV% Medie SD CV%

5,4 5,44 0,12

2,2 5,63 0,24 4,30

9,7 9,89 0,23

2,3 9,88 0,38 3,82

1. Sensibilitatea/Limite de detectie: i-CHROMA™ HbAlc a fost evaluat în ceea ce priveste limita de detectare. S-au evaluat trei loturi diferite cu 10 teste in fiecare lot. Limita minima de detectare a

8


fost definita ca fiind +3SD peste rezultatul obtinut din probele nule. Sensibilitatea analitica a sistemului i-CHROMA™ HbAlc a fost 2,10%.

Depanare i-chroma™ HbA1c Simptome Cauze Solutii

Concentra ț ia Hb este mai mica de 5,0g / d LMesaj "Hb

Low"Volumul de sange este mai micade 5 l Folosiți 5 l proba de sânge și retestati Sange nu este complet amestecat Se agita flaconul cu proba de sange de 15 ori viguros și

retestati

Bule de aer în fereastra HbUrmați instrucțiunile pentru a preveni formarea de bule și retestati. Daca eroarea reapare, repetați testul cu o proba de sânge de 10 l

Message: "Hb High"

Concentrația Hb depaseste 25,0g/dLVolumul de sange este mai mare de 5 l Folosiți 5 l proba de sânge și retestatiParticule straine, cum ar fi praful de pe fereastra Hb

Pastrați fereastra Hb fara particule straine și retestati Daca eroarea reapare, eșantionul nu este compatibil cu ichroma ™ HbA1c. Se recomanda un test cu un sistem bazat pe HPLC

Bulele de aer în fereastra Hb Urmați instrucțiunile pentru a preveni formarea de bule și retestati.

High Result Rezultatele sunt mai mari în comparație cu alte instrumente

- ichroma ™ HbAlc calibrat Tosoh G7 Instrumente care utilizeaza HPLC referire la este recomandat pentru comparație

Rezultatul a fost citit dupa cele 12 minute recomandate

Citiți rezultatul la 12 minute dupa aplicarea amestecului

Amestecul de proba a fost încarcat dupa mai mult de 1 minut dupa amestecare

Încarcați amestecul imediat dupa amestecare

Testul a fost realizat la un nivelul de umiditate peste 70%

Repetați testul de la nivelul de umiditate sub 70%

Particulele straine sunt pe fereastra Hb Retestare dupa curațarea ferestrei HbCartușul este expus la fluxul de aer rece de la instalația de aer condiționat.

Blocați circulația aerului sau mutati aparatul si retestare

Low Result Rezultatele sunt mai mici în comparație cu alte instrumente

- calibrati ichroma ™ HbAlc contra Tosoh G7- Instrumentele de referinta care utilizeaza HPLC sunt recomandate pentru comparare

Sânge ramas în capilar Retestare dupa agitare suficient de bine pentru a extrage tot sângele din capilar

Rezultatul a fost citit mai devreme de 12 minute dupa aplicarea amestecului

Citiți rezultatul la 12 minute dupa aplicarea amestecului

Value error 3

Testare fara proba Testati cu proba

1.

Specificatii pentru i-chroma™ HbA1cTip de proba Sange capilar integral Sange venos cu antigoagulant Volum de proba 5uLUnitati de masura %(HbAlc) g/dL(Hemoglobina)Timp de incubare Timp de pre-incubare: 5 ~30minute Timp de incubare : 12 minute

Interval de masurare

4,0~15% (HbAlc) / 5,0~25,0g/dL(Hemoglobina) 0,1%(HbAlc) / 0,1g/dL(Hemoglobina)

Interval de operare Temperatura : 20~30°C Umiditate : 10~70%Interval de referinta 4,5 ~ 6,5%

9


REFERINTE

2. Goldstein DE, Little RR, Lorenz RA, Malone JI, NathanD, Peterson CM. Tests of glycemia in diabetes. Diabetes

3. Care 1995; 18:896-909.

4. Bunn HF. Nonenzymatic glycosylation of protein: relevance to diabetes. Am J Med 1981; 70:325-30.

5. Jovanovic L, Peterson CM. The clinical utility of glycosylated hemoglobin. Am J Med 1981; 70:331-8.

6. Nathan DM, Singer DE, Hurxthal K, Goodson JD. The clinical information value of the glycosylated hemoglobin assay. N Engl J Med 1984; 310:341-6.

7. Goldstein DE, Little RR, Wiedmeyer HM, England JD, McKenzie EM. Glycated hemoglobin: methodologies and clinical applications. Clin Chem 1986; 32:B64-70.

8. Goldstein DE, Little RR, England JD, Wiedemeyer H-M, McKenzie E. Methods of glycosylated hemoglobins: high Methods in diabetes research, Vol. 2. New York: John Wiley, 1986:475-504.

9. Tahara Y, Shima K. The response of GHb to stepwise plasma glucose change over time in diabetic patients.Diabetes Care 1993; 16:1313-4.

10. Svendsen PA, Lauritzen T, Soegaard U, Nerup J. Glycosylated haemoglobin and steady-state mean blood glucose concentration in type 1 (insulin-dependent) diabetes. Diabetologia 1982; 23:403-5.

11. Cefalu WT, Wang ZQ, Bell-Farrow A, Kiger FD, Izlar C. Glycohemoglobin measured by automated affinity HPLC correlates with both short-term and long-term antecedent glycemia. Clin Chem 1994; 40:1317-21.

12. Singer DE, Coley CM, Samet JH, Nathan DM. Tests of glycemia in diabetes mellitus. Their use in establishing a Ann Intern Med 1989 110:125-37. Molnar GD. Clinical evaluation of metabolic control in diabetes. Diabetes 1978; 27:216-25.

13. UK Prospective Diabetes Study. Reduction in HbAlc with basal insulin supplement, sulfonylurea or biguanide therapy in maturity-onset diabetes. Diabetes 1985; 34:793-8.

14. Baker JR, Johnson RN, Scott DJ. Serum fructosamine concentrations in patients with type II (non-insulin-dependent) diabetes mellitus during changes in management. BMJ (Clin Res Ed) 1984; 288:1484-6.

15. Tahara Y, Shima K. Kinetics of HbAlc, glycated albumin, and fructosamine and analysis of their weight functions against preceding plasma glucose level. Diabetes Care 1995; 18:440-7.

16. Brooks DE, Devine DV, Harris PC, et al. RAMP(TM): A rapid, quantitative whole blood immunochromatographic platform for point of care testing. Clin Chem 1999; 45:1676-1678

Garantia expresa si implicita a Boditech Med Ine (incluzand garantia implicita pentru defecte si caracter adecvat) depind de respectarea directivelor publicate ale Boditech Med Inc.

in ceea ce priveste utilizarea produselor Boditech Med Inc.

Pentru asistenta tehnicä sunati laBoditech Med Inc.'s Technical Services at

Tel: +82 (33) 243-1400E-mail: [email protected]

Boditech Med Incorporated

10

mailto:[email protected]


Rev. 17_ 120410_M

11

hb a1c --- i-chroma

Documents