PREPARATE MICROSCOPICECATEDRA DE MICROBIOLOGIELP 2

In microbiologia clinica, microscopul este indispensabil.Microscopia uzuala o facem cu fond luminos.Numai in circumstante speciale recurgem la:microscopia cu fond negru, cu contrast de faza sau cu luminiscenta.

Microscopia optica pe fond luminosBacteriile, fungii, protozoarele le urmarim:in produse patologice sau in culturi fie in stare nativa, vie (preparate umede), fie dupa fixare si colorare (preparate colorate).

Microscopia optica pe fond luminosPreparate microscopice umedeIndicatii:- depistarea rapida si - identificarea spirochetelor, fungilor sau protozoarelor- observarea rapida a mobilitatii microorganismelor- depistarea si identificarea unor elemente celulare si necelulare in expectoratie, lavaj bronsiolo alveolar, urina, materii fecale, secretie vaginala, lichid duodenal etc.

Microscopia optica pe fond luminosPreparate microscopice umedeMateriale necesare: - lame de sticla: 76/25 mm., grosime 1 1,1mm. - lamle de sticla: 18/18, 20/20, 22/22, 24/24 mm., grosime 0,1 - 0,17 mm. - microscop optic: obiective uscate de 4x, 10x, 20x si 40x.

Microscopia optica pe fond luminosPreparate microscopice umedeInterpretare: - Miscarea browniana determina oscilatia pe loc a particulelor. Curentii de fluid antreneaza o multime de particule care traverseaza campul microscopic in aceeasi directie.

Microscopia optica pe fond luminosPreparate microscopice umede - Un microorganism este mobil cand isi modifica pozitia fata de un reper din vecinatate. - Bacteriile monotriche sau lofotriche au miscari rapide de rostogolire, - Bacteriile peritriche au miscari oscilatorii.

Microscopia optica pe fond luminosPreparate microscopice coloratePrincipiu: Fixarea colorantilor (ex. coloranti bazici de anilina etc.) pe structurile protoplastului mareste refringenta microorganismelor si permite observarea detaliilor morfologice.

Microscopia optica pe fond luminosPreparate microscopice colorateStructuri speciale asociate peptidoglicanului bacterian determina anumite afinitati tinctoriale care apar dupa coloratii diferentiale: Gram, Ziehl Neelsen etc.

Microscopia optica pe fond luminosPreparate microscopice colorateIn coloratiile negative particulele insolubile ale colorantului (carbonul din tusul de India, nigrozina) formeaza fondul negru al campului microscopic pe care se observa usor, ca un halou incolor, capsula unor microorganisme ca: pneumococii, Cryptococcus neoformans etc.

Microscopia optica pe fond luminosPreparate microscopice colorateIndicatii: identificarea microscopica a microorganismelor.

Microscopia optica pe fond luminosPreparate microscopice colorateProcedura:Efectuarea frotiului: Frotiul este materialul microbian etalat in strat subtire pe suprafata unei lame de microscop marcata cu indicativul produsului examinat.

Microscopia optica pe fond luminosPreparate microscopice colorateFrotiul se efectueaza in 3 timpi:

Etalarea

Uscarea rapida a frotiului in aer cald

Fixarea frotiului pentru bacterioscopie

Microscopia optica pe fond luminosPreparate microscopice colorate2. Colorarea frotiului

3. Protejarea frotiului prin montarea in balsam de Canada

Microscopia optica pe fond luminosPreparate microscopice colorateColoratia Gram1. Colorare cu sol. Violet de gentiana (cristal violet) 1% - 1.Spalare cu apa de robinet.2.. Mordantare cu sol. Lugol (sol. de I2 in KI) 1.Spalare cu apa de robinet.3. Decolorare cu sol. alcool acetona 30 1Spalare cu apa de robinet.4. Colorare cu sol. Safranina (fucsina bazica diluata) 1.Spalare cu apa de robinet.

Coloratia Gram

Coloratia Gram

Link-uri http://www.microbiologybytes.com/LabWork/LabWork.htmhttp://www.ncl.ac.uk/dental/oralbiol/oralenv/tutorials/christian_gram.htmhttp://www.uphs.upenn.edu/bugdrug/antibiotic_manual/gram.htmhttp://serc.carleton.edu/microbelife/research_methods/microscopy/gramstain.htmlhttp://homepage.ntlworld.com/diamonddove/01_Contents/Contents.htmhttp://micro.digitalproteus.com/morphology.php

TEMA PENTRU STUDENTICautati si alte link-uri despre coloratia Gram (staining Gram) si imagini cu bacterii Gram (+) si Gram (-).Desenati in caietul de lucrari bacteriile pe care le-ati gasit.