PRELUCRAREA PRELEVATELOR PATOLOGICETEHNICI DE INSAMANTARE PENTRU IZOLAREA SI IDENTIFICAREA BACTERIILORCATEDRA DE MICROBIOLOGIELP5

Insamantarea prelevatelor patologice, in functie de natura lor, se realizeaza:directsaudupa o prealabila prelucrare (concentrare, decontaminare, omogenizare, inactivarea unor substante antimicrobiene)

Prelevatele omogene, fluide sange, exsudate seroase prelevate pe anticoagulant, puroiPrelevatele emulsionabile - materii fecale

- se pot insamanta direct

CONCENTRAREA PROBELORCentrifugare probele fluide

Omogenizare - sputa

DECONTAMINAREA PROBELORSpalare in solutie salina izotona utila pentru: sputa muco purulenta, portiunile muco sangvinolente din scaunTratarea cu NaOH: decontamineaza probele pentru izolarea micobacteriilor fluidifica si omogenizeaza sputa

OMOGENIZAREA PROBELOROmogenizarea sputei pentru izolarea bacteriilor neacido alcoolo rezistente: se realizeaza cu N acetil cisteina.

Omogenizarea tesuturilor:se realizeaza prin mojarare in tub Griffith

TEHNICI DE INSAMANTAREEpuizarea inoculului cu ansa pe placi cu mediu agarizat si obtinerea culturilor pure necesare identificariiinitial, este necesara uscarea placilor, prin mentinerea placilor ~ 30 min. la 37C, cu capacul Intredeschis pentru evaporarea condensului de pe suprafata mediului

TEHNICI DE INSAMANTARE Epuizarea inoculului pe placile cu medii agarizate neselective, uzuala este izolarea prin epuizare semicantitativa a inoculului in 4 cadrane, cu arderea ansei cand schimbam directia striurilor de insamantare. - metoda permite aproximarea relativa a cresterii.

TEHNICI DE INSAMANTARE Epuizarea inocululuipentru izolari pe medii selective, cantitatea de inocul trebuie sa fie mai mare, iar epuizareamai putin drastica.initial, se etaleaza in aria A una sau mai multeanse cu inocul ori inocul prelevat pe tampon.epuizam apoi inoculul, fara sterilizari intermediare ale ansei, prin 3 serii de striuri: B, C, D.

TEHNICI DE INSAMANTARE Epuizarea inocululuicantitatea de fluid prelevata in ansa difera cupozitia de scufundare si retragere a ansei: cantitate minima si constanta - la scufundarea si retragerea verticala

cantitate maxima la scufundare cat mai oblica si retragerea ansei prin smulgere din fluid

TEHNICI DE INSAMANTARE Epuizarea inocululuiCultura pura acea cultura formata din descendentii unei singure colonii rezultate dupa o epuizare a materialului microbian, care duce la cresterea sub forma de colonii bine izolate pe un mediu neselectiv.

TEHNICI DE INSAMANTARE Epuizarea inocululuiIdeal, ar fi ca asemenea crestere sa porneasca de la indivizi izolati.Practic ea porneste de la unitati formatoare de colonii (UFC) poate indivizi, poate o mica grupare de organisme asemanatoare.

TEHNICI DE INSAMANTARE2. Insamantarea in medii lichide se face: - direct cu seringa de prelevare (hemoculturi) - cu pipeta (sedimentul LCR) - cu ansa incarcata cu prelevat patologic monomicrobian ori cultura pura

TEHNICI DE INSAMANTARE Insamantarea in medii lichide inclina tubul si descarca ansa pe peretele tubului

cand readucem tubul la pozitia verticala, inoculul ajunge submers si difuzeaza in mediu.

TEHNICI DE INSAMANTARE3. Izolarea bacteriilor sporulate de cele nesporulate pe baza termorezistentei sporilor.

TEHNICI DE INSAMANTARE Izolarea bacteriilor sporulate Mentine in baia de apa la 80 C, timp de 10 min., produsul microbian suspensionat in solutie salina izotona, apoi epuizeaza suspensia pe o placa cu mediu agarizat.

TEHNICI DE INSAMANTARE4. Insamantarea cu ansa a mediilor solidificate in panta.Indicatii: - mentinerea pe durata limitata (cateva zile / 1 - 2 saptamani) a culturilor pure (ex.: tulpini de identificat, tulpini de referinta)

TEHNICI DE INSAMANTAREInsamantarea cu ansa a mediilor solidificate in panta

preleva cu ansa inocul din mai multe colonii ale culturii purificate pe placa cu mediu agarizat.depune inoculul in partea inferioara a pantei, imediat deasupra apei de condens si retrage ansa spre partea superioara a pantei descriind miscari in S pe suprafata mediului.

TEHNICI DE INSAMANTAREInsamantarea cu ansa a mediilor solidificate in panta

izolarea in cultura pura a tulpinilor de Proteus din prelevate contaminate.descarca o ansa din prelevatul patologic strict in apa de condens a tubului.incubeaza tubul in pozitie verticala.singura, cultura de Proteus va invada prin catarare suprafata pantei de mediu.

TEHNICI DE INSAMANTARE5. Insamantarea cu firul drept a coloanei de agar nutritiv moale.Indicatii:testarea mobilitatii bacteriilorconservarea pe durate mai lungi (1 6 luni) a tulpinilor bacteriene

TEHNICI DE INSAMANTARE Insamantarea cu firul drept a coloanei de agar nutritiv moaleincarca firul cu inocul din cultura pura si inteapa central coloana de agar nutritiv pana aproape de fundul tubului.la testarea mobilitatii retrage acul cat mai exact pe acelasi traiect pentru a evita dilacerari suplimentare ale mediului in care cresterea poate da impresia falsa de mobilitate a bacteriei.

TEHNICI DE INSAMANTAREInsamantarea cu firul drept a mediilor solidificate in coloana si panta.

6. Insamantarea cu firul drept a mediilor solidificate in coloana si panta.

Indicatii:- testarea unor activitati biochimice

TEHNICI DE INSAMANTAREInsamantarea cu firul drept a mediilor solidificate in coloana si panta.

Incarca firul cu inocul din cultura pura si procedeaza mai intai la insamantarea prin intepare a coloanei, apoi retrage acul, insamanteaza prin miscari in S pana in partea sa superioara.

TEHNICI DE INSAMANTARE7. Insamantarea uroculturilor se realizeaza cu ansa calibrata de 10 l. pentru a estima semicantitativ concentratia bacteriana / ml. urina