1BIOANALIZA

Tehnici si metode analitice pentru determinarea si analiza lipidelor

Lipide

Dpdv structural: grup heterogen de compui hidrofobi, insolubili n ap, solubili n solveni

organici (cloroform, eter, etc)

Dpdv al rolului biologic: compui care pot ndeplini variate roluri biologice

surse de energie izolatori termici substane tensioactive implicate n digestie hormoni provitamine, vitamine (A, D, E K) constitueni ai membranelor

2Lipide

HIDROLIZABILE (SAPONIFICABILE)

- esteri care n prezena apei i a catalizatorilor (NaOH, lipaze) elibereazacizi grai sau srurile lor (spunuri)

R-COOR + H2O = R-COOH + R-OH

R-COOR + NaOH = R-COO-Na++ ROH

NEHIDROLIZABILE

- compui care au rezultat prin hidroliza lipidelor saponificabile sau se gsesc ca atare n organismele vii

Clasificare :

y lipide simple gliceride sau grasimi, ceride (din cerurivegetale), etolide (din conifere), steride (din organismevegetale cu rol biochimic si fiziologic)

y lipide complexe lipoproteide ( din tesuturi si organe animale), glicerofosfolipide, serinfostatide (lecitina, cefaline)

3Colesteroly Colesterolul - identificat n membrana celular i n

esuturile organismului i transportat n snge. Termenul provine din grecescul chole (bil) i stereos (solis) plus sufixul ol, fiind identificat n calculii colesterolici n anul 1784.

y nu se absoarbe prin alimentaie, ci se sintetizeaz n oragnismul animal.

y Se concentreaz la nivelul ficatului, mduvei spinrii, a creierului dar i la nivelul plcii de aterom, conducnd la ateroscleroz.

y Colesterolul are un rol important n organism, numeroase procese biochimice avndu-l drept precursor.

y Hiperproducerea de colesterol (cel din lipoproteine de mic densitate) este asociat cu afeciuni vasculare: accidente vasculare cerebrale, cardiace, oculare .a., periclitante pentru via.

6:36 PM 5

y Termenul de colesterol sanguin se refer de fapt la 2 tipuri de lipide:x LDL (low density lipoprotein) lipoproteine cu densitate mic

aa numitul colesterol rux HDL (high density lipoprotein) lipoproteine cu densitate mare

6:36 PM 6

Colesterol

4Metode cantitative

Metoda enzimatic

colesterol ester+ O2 colesterol esteraza colesterol + acizi grasicolesterol colesterol oxidaza 4 cholestene-3-one + H202H202 + 4-aminoantipirina + fenol peroxidaza Chinon-imina + H2O

(550 nm)

Chinon-imine:

Metoda Liebermann-BurchardColesterol + acid sulfuric + anhidrida acetica compus colorat verde-

albastru

Metode cantitative

Proba(ml)

Standard(ml)

Martor(ml)

Ser 0,1 - -Reactiv standard - 0,1 -Ap bidistilat - - 0,1Soluie acid sulfosalicilic 0,6 0,6 0,6

se omogenizeaz, se las s se rceasc 10 min. si se adaug: Acid sulfuric conc. 0,2 0,2 0,2

Se citesc A proba (Ap) i A standard (As) fa de martor la 610 nm

Calcul: Colesterol total (mg / 100ml ser) =(Ap/As) x 250

51. Metoda enzimaticay Aceasta metoda se bazeaza pe hidroliza enzimatica (lipaza - (LPL) a

trigliceridelor plasmatice in glicerol si acizi grasi liberi (FFA). Gliceroluleste fosforilat de catre trifosfat adenosin (ATP) in prezenta glicerolchinaza (GK) pentru a forma glicerol-3-fosfataza (G-3-P) si difosfatadenozina (ADP). G-3-P este oxidata de glicerofosfat oxidaza (GPO)pentru a forma fosfat dihidroxiacetona (DHAP) si apa oxigenata.

y Se obtine un compus colorat in rosu din reactia 4-aminoantipirina (4-AA) si fenol in prezenta de H2O2, reactia fiind catalizata de peroxidaza(POD).

Determinarea trigliceridelor

6:36 PM 10

6Determinarea trigliceridelor