Diagnostic de laborator in neuroviroze

2 aspecte clinice

Meningite virale

Encefalite virale

Definitie de caz meningita virala Febra 38.5 C asociata cu minim un simptom dintre: Cefalee severa i persistenta; Redoare de ceafa Durere de ceafa asociata cu minim 2 din urmatoarele: Fotofobie Greata Varsaturi Faringita exudativa Dureri abdominale

La sugari si copiii mici semnele principale sunt febra 38.5 C asociata cu iritabilitate si pulsarea fontanelei

1. SUSPICIUNEA CLINICA

ETIOLOGIE POSIBILA

SINDROM ETIOLOGIE POSIBILA

MENINGITA ASEPTICA

80%-90% Enterovirusuri Polio Cocsackie A si B E.C.H.O.

10 - 20%

alte virusuri: VZV V. URLIAN HSV CMV V. PARAGRIPALE

V. Poliomielitice

Paralizie flasca Distala Asimetrica Sensibilitate pastrata

Subgenul Serotip Boala asociata Polio 1-3 Paralizii Coxsackie A 1-24 Meningite, faringite,

exantem, herpangina

Coxsackie B 1-6 Miocardita, pancreatite, pericardite,boala Bornholm

ECHO 1-33 Exanteme, IACRS, conjuctivite

Heparnavirus 72 Hepatita virala VHA

Boala mana picior gura Coxsackie A

Algoritm de diagnostic virusologic meningite virale

ETIOLOGIE POSIBILA

Produs Patolog

IZOLARE Dg. DIRECT =detectie directa

Dg. INDIRECT =serologie

80%-90% Enterovirusuri Polio Cocsackie A si B E.C.H.O.

MF SNF LCR

De electie Culturi celulare Animal de laborator

NU DA

Produse patologice Materiile fecale(MF) Recoltare. Materiile fecale pot fi recoltate ca atare in

cantitate de 4-8 grame sau corespunzator volumului extremitatii falangei distale a indexului de adult. De asemenea, se pot recolta intr-o solutie 1 M de Mg SO4 (stabilizeaza infectivitatea enterovirusurilor) Precizari. Este important de notat ca enterovirusurile se excreta saptamani la rand, dar sansele de izolare scad. Se recomanda recoltarea a 2 - 3 probe de la pacient la interval de 24-48 ore. Stocare si transport. Produsele patologice sunt transportate si stocate la 2-4 C. Prelucrare. In vederea izolarii de virus suspensia de materii fecale se prepara amestecand proba recoltata cu 15 ml de solutie Hanks si bile de sticla sterile intr-un tub de centrifuga inchis. Se agita puternic, se centrifugheaza , si se recolteaza supernatantul.

Produse patologice Lichid cefalorahidian (LCR) Recoltare. Se realizeaza prin punctie la nivelul L4-L5,

cat mai rapid posibil de la debutul simptomatologiei, inainte de inceperea tratamentului antibiotic, respectand strict masurile de asepsie. 1 ml de LCR este suficient pentru investigatii virusologice. Cantitatea recoltata nu trebuie sa depaseasca 5-6 ml in 3 tuburi sterile. Se determina numarul de celule, proteine totale, glicorahia si presiunea LCR. Sansa de izolare din acest produs creste cnd participarea meningiana este evidenta. Acest lucru se traduce prin pleiocitoza (cresterea numarului de celule limfo-monocitare in LCR). Stocarea. Se pastreaza la 2-4 C, fara adaos de mediu de transport viral. Transportul. Se realizeaza cat mai rapid posibil. Daca se depaseste 1 ora de la recoltare transportul se face obligatoriu pe gheata sau la -70 C.

Exsudat faringian/SNF

IZOLAREA ENTEROVIRUSURILOR IN CULTURI

DE CELULE

ECP PICNOTIC LITIC

ECP picnotic litic

Identificarea enterovirusurilor: REACTIA DE SERONEUTRALIZARE IDENTIFICAREA VIRUSURILOR = VIRUS NEUTRALIZARE TITRAREA ANTICORPILOR = REACTIA DE SERONEUTRALIZARE

VIRUSNEUTRALIZARE VIRUS NECUNOSCUT ANTICORPI CUNOSCUTI=SER IMUN

DE REFERINTA SERONEUTRALIZARE TITRU DE ANTICORPI NECUNOSCUT VIRUS CUNOSCUT = TULPINA DE

REFERINTA

ETAPE RSN

1. TITRAREA INFECTIVITATII VIRALE

2. BLOCAREA INFECTIVITATII VIRALE

3. DEMONSTRAREA NEUTRALIZARII INFECTIVITATII VIRALE

1. TITRAREA INFECTIVITATII VIRALE metoda plajelor

Dilutii seriale ale virusului

Insamantare pe celule susceptibile dupa adsorbtie, 1h la 37, se acopera cu agar

Restrictia raspandirii virusului determina liza focalizata a monostratului celular vizibila sub forma plajelor, PFU

Metoda plajelor

PR8-salbatic

MDCK

PR8-delNS1

Vero

Dilutie: 104 105 106

Caractere ale plajelor la titrarea virusurilor PR8 (H1N1) cu gena NS1 integra sau defectiva pe substraturi celulare cu sistem interferon tip I activ (MDCK) sau ineficient (Vero)

2. BLOCAREA INFECTIVITATII VIRALE

3. DEMONSTRAREA NEUTRALIZARII INFECTIVITATII VIRALE

= Repetarea etapei 1 cu amestecurile antigen-anticorp

Identificarea enterovirusurilor dupa metoda Tabla de sah

Lim - Benyesh Melnick

ENCEFALITE Algoritm de diagnostic virusologic SINDROM ETIOLOGIE

POSIBILA Prod. Patologic

IZOLARE Dg. DIRECT =detect. directa

Dg. INDIRECT =serologie

ENCEFALITA ACUTA

MENINGO-ENCEFALITA ENCEFALO-

MIELITA

HERPES VIRUSURI: HSV1 HSV2 VZV,EBV,CMV

Lichid vezicular LCR Biopsie cerebrala

Culturi celulare Animal de laborator

PCR IF

NU

V. RABIC

ARBOVIRUSURI TOGAVIRUSURI FLAVIVIRUSURI BUNYAVIRUSURI

Saliva, Amprente dermice, corneene,

Biopsie cerebrala

LCR SANGE

Culturi celulare Animal de laborator

PCR IF

De electie pt. ARBO VIRUSURI

POSTINFECTIOASE V. RUJEOLOS V. URLIAN V. GRIPALE VZV

SALIVA, BIOPSIE CEREBRALA LCR

Culturi celulare

PCR IF

NU