Lucrarea de laborator nr. 20

TEMA: MICROBIOLOGIA I DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECTIILOR CAUZATE DE BACILI GRAM-NEGATIVI (ENTEROBACTERII I NONENTEROBACTERII)

1. Caracteristica general a becteriilor din familia ENTEROBACTERIACEAE. Clasificarea. Caracterele morfobiologice.

FAMILIA ENTEROBACTERIACEAEPeste 30 genuri cu peste 150 speciiHabitat: intestinul omului, animalelor. Pot fi intalnite pe sol, plante, in apa, etc Martori de contaminare fecal a mediuluiMajoritatea fac parte din microflora normal (comensal) intestinal

CLASIFICAREAN FUNCIE DE PATOGENITATE:Enterobacterii patogene: genurile Shigella, Salmonella, Yersinia, unele variante ale speciei Escherichia coli;Enterobacterii condiionat patogene: genurile Citrobacter, Enterobacter, Hafnia, Klebsiella, Morganella, Proteus, Providencia, Serratia, Edwardsiella, etc.

CARACTERE MORFOBIOLOGICECaractere morfologice: bastonae G-, 1 - 6 m x 0,3 - 1 m, mobile peritriche (Shigella, Klebsiella, Yersinia pestis imobile), nesporogene, formeaz microcapsule (Klebsiella capsulat), posed fimbrii.

Caractere de cultur: Anaerobe facultativTemperatura optim 37 grade C (limite 18 45 grade) Nepretenioase nutritivColonii S, apar dup 18-24 h de incubare, 2 - 3 mm (dup repicri pot apare colonii R), Klebsiella colonii M (mucoide), Proteus invadeaz suprafaa mediului

MEDII DE CULTURDe transport: glicerin 30%, soluie salin 3%, soluie tampon-fosfatDe mbogire a bacteriilor patogene: Kauffmann, Muller, bulion selenit, etcDiferenial-diagnostice:De izolare a culturii pure- ENDO, LEVIN, PLOSKIREVComponena: baz nutritiv, lactoz, indicatorColoniile L+ : colorate Coloniile L- : incolore (frecvent flora patogen)- Mediul Wilson-Blair cu sulfit de Bi (Salmonella reduce sulfitul n sulfur de Bi colonii negre pe mediul verde)

II. De acumulare i identificare preliminar (medii multitest)Russel, Kligler (glucoz, lactoz, sruri de Fe, indicator)Olkeniki (glucoz, lactoz, zaharoz, uree, sruri de Fe, indicator)III. De identificare final (medii cu citrat, malonat, irul Hiss, medii cu aminoacizi, gelatina, etc)

CARACTERE ANTIGENICEAg O, de perete, LPZ, termostabil i rezistent la alcool, sensibil la formol, specificitate de gen, specie, grup. Stimuleaza producerea Ig M.Ag H, flagelar, proteic, termolabil i inactivat de alcool, rezistent la formol, specificitate de tip (variant). Stimuleaza producerea Ig G. Ag K, superficial, capsular, termovariabil, specificitate de specie, tip. Mascheaz Ag O, inaglutinabilitate cu seruri anti-O. Variante L, A, B la E.coli, Vi la Salmonella i CitrobacterAg F, fimbrial, termolabil, nespecific ECA (Enterobacterial Common Antigen) antigen comun fam. Enterobacteriaceae (interes taxonomic) Ag Kunin

Genul Escherichia. Diagnosticul de laborator al escherichiozelorGenul Escherichia Spp.: E.coli, E.blattae, E.fergusonii, E.vulneris, E.hermaniiHabitat: intestinul omului i animalelor (80% din flora aerob intestinal), 107-109 bacterii/gram fecale. Contamineaz solul i apele de suprafa. Prezena E.coli - indicator de contaminare fecal

Rolul E.coli n fiziologia uman1. Manifest activitate antagonist fa de alte bacterii, inclusiv cele patogene2. Stimuleaz dezvoltarea esutului limfoid prin intermediul Ag sale3. Particip la procesele de digestie, inclusiv n metabolismul colesterolului i acizilor biliari4. Asigur organismul cu vitamine, sintetiznd vitamine B, K, acid nicotinic, acid folic, etc.CARACTERE MORFOBIOLOGICEE.coli enterobacterie tipic, mobil, lactoza+ (colonii colorate pe medii DD), fermenteaz glucoza cu formare de AG (teste primare: MR +, mobilitate +, LDC+, celelalte teste sunt negative)Structura antigenicAg O 180 tipuri (O1, O2, O3,......O180)Ag H 60 tipuri (H1, H2, etc)Ag K 100 tipuriDin combinaii rezult serovariante: ex.: O55:H2:K1

FACTORI DE PATOGENITATECapsula (antifagocitar, Ag K1 camuflaj imunologic datorit epitopilor comuni cu polisialozil-glicopeptide cerebrale la nou-nscui)Proteine din ME i LPZ (anti-complement, protecie de factorii bactericizi ai sngelui, adeziune, invazie)Fimbrii: pili manozo-sensibili/rezistenti, pili CFA, pili P (adeziune la mucoasa intestinala si alte substrate)Toxine (endotoxina, enterotoxine termostabile - ST i termolabile LT (codificate plasmidic), citotoxine Shiga-like toxine (SLT-1, SLT-2), codificate bacteriofagic Hemolizina Siderofori (sisteme de captare a Fe)

GENUL SHIGELLA. Shigelele strict umane. Cauzeaz infecii intestinale - igeloze, cea mai grav formdizenteria bacterian.Clasificarea genului Shigella (biochimic i antigenic):A Shigella dysenteriae (12 s/v, 12 b/v) Manitol -B Shigella flexneri (6 s/v, 14 ss/v, 23 b/v)C Shigella boydii (18 s/v)D Shigella sonnei (7 b/v)Subgrupele B, C, D manitol +CARACTERE MORFOBIOLOGICE Enterobacteriaceea tipice, imobile, lactoza-negative (colonii incolore pe medii DD), scindeaz glucoza pana la acizi (testul MR+), celelalte teste primare sunt negative.Factori de patogenitate:Factori de adeziune la mucoasa colonului (fimbrii, LPZ)Microcapsula (antifagocitar)Factori de penetrare i multiplicare intracelularToxine:Toxina Shiga, de origine cromosomial. Inhiba sinteza proteinelor in celula gazda. Manifesta activitate neurotoxic, enterotoxic, citotoxic elaborat de S.dysenteriae 1. 2. Citotoxine (Shiga-like toxine (SLT), verotoxine), codificate de bacteriofagi. Efect similar cu cel al toxinei Shiga.Endotoxina

Structura antigenic: Ag O i K cu specificitate de gen, specie, subspecie, variant

Rezistena n mediul extern:S.dysenteriae - foarte sensibil (1-2 ore)S.flexneri persist 1-3 sptmni n ap, 2 luni n lactateS.sonnei persist i se multiplic n lactate

CLASIFICARE

Genul: Salmonella (Daniel Elmer Salmon, veterinar american, care a descoperit bacteria n 1885)Specii: Salmonella enterica, Salmonella bongori (Salmonella subterranea (din 2004))Subspecii ale speciei S.enterica: enterica, salamae, arizonae, diarizonae, houtenae, indicaMajoritatea tulpinilor izolate din patologii umane (99,5%) aparin ss S.enterica enterica cu peste 2500 de serovariante: S. London, S. Enteritidis, S. Typhi, S. Paratyphi A, S. Paratyphi B, S.Choleraesuis, etc

Salmonellaenterica subspecia enterica serovar Typhi sauSalmonella Typhi

CLASIFICAREA KAUFFMANN-WHITE (conform structurii antigenice)Ag O 67 varieti antigenice (O1, O2, O3, ... O65, etc), permite repartizarea salmonelelor n serogrupe (A, B, C, D, E,...Z, O51,...)Fracii antigenice majore desemneaz grupa:O2 grupa A; O4 B, O6 C, O9 D, etcFracii antigenice minore O1, O12 - sunt comuneAg H definete serovariante n cadrul grupei. Structura flagelinei este determinat de 2 gene cromozomiale diferite, care se exprim simultan sau alternativ (variaie de faz, frecvena 10-4) Ag H faza 1 (specific) Ha; Hb; Hc; Hd; Hg,m Ag H faza 2 (nespecific) H1,2; H1,5; H1,7;

Serovar monofazic: O1,2,12:Ha (S.Paratyphi A)Serovar difazic: O1,4,12:HbH1,2 (S.Paratyphi B)Ag Vi (K), poliozidic, termolabil, prezent la S.Typhi, S.Paratyphi C, S.Dublin. Este concentrat la polii bacteriei. Mascheaza Ag O.S. Typhi O9,12:Hd:Vi+ / O9,12:Hd:Vi- Conform patogenitii pentru gazd se disting:Salmonele monopatogene (umane) (S.Typhi, S.Paratyphi A, S.Paratyphi B)Salmonele bipatogene (patogene pentru om i animale, ubicvitare) - majoritatea

Caractere de cultur Medii de mbogire : Muller, Kauffmann (medii cu bil, tetrationat), bulion cu selenit de NaMedii DD de izolare a culturii pure: Endo, Levin , Ploskirev (colonii S, lactozo-); mediul cu sulfit de bismut Wilson-Blair (colonii negre) Medii DD de acumulare i difereniere: Olkeniki, Kligler (glucoza AG, lactoza-, H2S+, ureaza-)Teste primare: utilizeaz citratul de Na, produc H2S, MR+, LDC+, mobilitate+, celelalte teste negative. Teste secundare: scindeaz glucidele AG, indol-, ornitindecarboxilaza+, etcEXCEPIE: S.Typhi citrat-, H2S-, scindeaz glucoza pn la acid;S.Paratyphi A H2S+/-, LDC-

FACTORI DE PATOGENITATEFimbrii (adeziune)Capacitatea de a penetra n celule i de multiplicare intracelular (Macrofage, celule epitel)Endotoxina Citotoxine (SLT) inhib sinteza proteic (necroz)Enterotoxine (LT, ST) activeaz adenilat/guanilatciclazele membranare (diaree)Siderofori (captarea Fe)Ag Vi (antifagocitar, inhib activarea C, rezisten la activitatea bactericid a serului)

Majoritatea salmonelelor (98%) sunt sensibile la bacteriofagul O1. Exist bacteriofagi cu specificitate de specie i variant.Habitat: intestinul omului, animalelor, psrilor, reptilelor. Rezistena n mediul extern: salmonelele rezist la 70C 30 min., rezistente la frig i concentraii mari de sare. Se nmulesc n produse alimentare la temperatura camerei.

2. Testele-cheie ale familiei. Testele primare i secundare de identificare a genurilor si speciilor.

TESTE-CHEIE ALE FAMILIEI Bacterii (bastonae) gramnegativeNesporogeneMobile-peritriche sau imobileFacultativ-anaerobeFermenteaz glucoza pn la acid (A) sau acid i gaz (AG)Catalaza-pozitiveOxidaza-negativeReduc nitraii n nitriiTESTE PRIMARE (identificarea genurilor)Utilizarea citratului de Na (mediul Simmons)Utilizarea malonatului de NaHidroliza ureei (testul Preus)Decarboxilarea lizinei (LDC)Dezaminarea fenilalaninei (FAD)Producere de H2S n mediul multitest (ex.: Kligler)Fermentarea glucozei pn la acizi (testul MR)Fermentarea glucozei pn la acetoin (testul VP)Mobilitatea (n geloz semilichid)TESTE SECUNDARE (identificarea speciilor/variantelor)Teste biochimice (fermentarea glucidelor, decarboxilarea aminoacizilor (arginin, ornitin), producerea indolului, etc)Fagoidentificarea i lizotipiaColicinogenotipiaSeroidentificarea Antibiograma

3. Habitatul natural al enterobacteriilor i rolul lor n patologia uman.

ROLUL E. COLI N PATOLOGIA UMANFENOTIPURI DIAREIGENETulpini enteropatogene: EPEC (O26, O55, O111, O125, O142, etc). Responsabile de gastro-enterite infantile (infecii salmoneliforme). Ader la mucoasa intestinului subire printr-o protein din membrana extern fr a penetra intracelular, distrug microvilozitatile, perturba procesele de secretie si absorbtie intestinala. Tulpini enteroinvazive: EIEC (O28, O124, O143, etc). Responsabile de sindrom dizenteric (infectie dizenteriforma) cu invazia mucoasei colonului, penetrare intracelular, ulceraii. Factori de patogenitate: adezine, citotoxine (SLT).

Tulpini enterotoxigene: ETEC (O6, O8, O20, O25, O115, etc). Responsabile de diareea cltorului, sindrom holeriform. Adeziunea la enterocitele intestinului subire este asigurat de pili (CFA colonization factor antigen sau CSF coli surface factors). Elaboreaz toxine enterotoxine ST i/sau LT. Activeaz adenilat- respectiv guanilat ciclaza enterocitelor cu acumulare de AMPc intracelular sau GMPc, provocnd o secreie sporit a ionilor de Cl- i inhibiia absorbiei ionilor de Na+, antrennd o pierdere hidric important.

Tulpini enterohemoragice: EHEC (O157:H7; O26, O111). Responsabile de colite hemoragice cu sindrom uremic-hemolitic (anemie hemolitic + trombocitopenie+insuficien renal). Posed factori de adeziune i produc citotoxine capabile de difuzie n organism (Shiga-like toxine SLT 1 i SLT 2). Produc frecvent hemolizin. Tulpini enteroagregative: EAggEC (O111:H12). Posed adezine, hemolizine i SLT. Provoac diaree persistent (peste 14 zile) la copii si adulti cu imunosupresie (HIV). Ader agregativ la suprafaa culturilor de celule.Tulpini enteroadezive: EAEC. Ader difuz la celulele intestinale i culturile de celule. Provoac sindroame diareice.

FENOTIPURI UROPATOGENE (O1, O2, O4, O6) Posed afinitate pentru mucoasa uro-genital (fimbrii tipul P sau 1, Ag O i K specifice, hemolizine, etc )

FENOTIPURI BACTERIEMICE

Alte forme clinice provocate de E.coli:oc endotoxinicMeningite la nou-nscui (preponderent tulpini cu Ag K1)Infecii ale plgilor (frecvent de origine nosocomial)Colecistite, peritonite, salpingite, etc.Toxiinfecii alimentare

PATOGENEZA DIZENTERIEI BACTERIENE(SIGELLA)Sursa de infecie: bolnav, reconvalescent, purttorTransmiterea fecal-oral: Contact direct (mini murdare)Alimentar (alimente, ap)Doza infectant: 10-102 bacteriiBacteriile patrund n intestin, colonizeaz epiteliul colonului i macrofagele din foliculii limfoizi, penetreaz intracelular (prin macropinocitoz dirijat). Bacteriile se propag intra- i intercelular graie polimerizrii actinei la un pol al celulei (caracter determinat plasmidic). Urmeaz multiplicarea local intracelular cu invazia celulelor vecine provocnd moartea lor. Aceasta duce la inflamaie fibrinoas intens a colonului, micro-abcese i ulceraii, cu apariia mucusului, puroiului i sngelui n materiile fecale.Perioada de incubaie 2 - 4 zileSemne clinice febr, dureri abdominale, tenesme (spasme rectale), scaune lichide muco-sanguinolente frecvente. Vindecarea n 2-5 zile (clinic, apoi microbiologic)Forme cronice sau portaj sunt posibile

ROLUL SALMONELELOR N PATOLOGIA UMANSALMONELOZE:Febre tifo-paratifoide (S.Typhi, S.Paratyphi A, B, (C)Salmoneloze digestive (toxi-infecii alimentare, gastro-enterite)Manifestri extra-digestive: - bacteriemii nontifoidice - infecii pleuro-pulmonare - afeciuni osteo-articulare (osteite, osteomielite, artrite septice, etc) - infecii nozocomiale - infecii cardio-vasculare (pericardite, arterite) - infecii urinare - infecii abdominale (colecistite, abces al ficatului, splinei) - infecii ale SNC (meningite, abces al creierului, abces epidural, etc)

FEBRELE TIFO-PARATIFOIDEAgenii cauzali S.Typhi, S.Paratyphi A, B, (C)Sursa de infecie omul bolnav, purttorul Contaminarea fecal-oral (ap, alimente), contact directDoza infectant 105 bacteriiPATOGENEZA Traversarea epiteliului intestinal intact Invazia i multiplicarea intracelular la nivelul plcilor Peyer i esutului limfoid al tubului digestiv (perioada de incubaie)Ptrunderea n ganglionii limfatici mezenterici cu multiplicarea salmonelelor (perioada prodromal)

I sptmn de boal (bacteriemie). Invadarea fluxului sangvin, via sistemul limfatic (diseminarea germenilor cu eliberarea endotoxinei). Endotoxina pe cale sangvin parvine la centrii neurovegetativi ai ventriculului 3, determinnd febr, stare de tifos, colaps cardio-vascular, leziuni intestinaleII sptmn de boal (difuzie parenchimatoas) Bacteriile sunt fixate n organele SRE i se multiplic n ficat, splin, mduv osoas, esut limfoid, etc Din aceast perioad ncepe eliminarea salmonelelor cu saliva, materiile fecale, urina, bila, etc.III-IV sptmn de boal (faza alergic). Din ficat salmonelele ptrund n cile biliare, apoi iari n intestin. La nivelul plcilor Peyer se dezvolt o reacie de hipersensibilitate tip 4 - necroz, ulceraii

Manifestri clinicePerioada de incubaie - 1-3 sptmniPerioada prodromal (de invazie) 1-3 zilePerioada de stare. Debut brutal, cu frison, febr 39-41 grade, cefalee, stupoare, somnolen, delir, com. Erupii cutanate (rozeole) apar pe abdomen, torace, spate n ziua a 8-9 de boal (embolii limfatice cu bacterii). Diaree, constipaie, tulburri cardiovasculare. Durata 7-10 zile Complicaii: hemoragii intestinale, perforarea intestinului, peritonit, miocardit, meningit, psihoz etc. Perioada de reconvalescen (1-3-6 luni)

Imunitatea celular, umoral5-10% convalesceni purttori pn la 3 luni (cu depistarea salmonelelor n bil sau/i urin)3-5% convalesceni (cu litiaz biliar) purttori cronici (1-10 ani toat viaa)Recidive sunt posibile (descrcri bacteriemice din focare profunde, forme L), se caracterizeaz prin simptome atenuate i evoluie de scurt durat

SALMONELOZE DIGESTIVE (gastro-enterite, toxi-infecii alimentare)Consecutive consumului de alimente contaminate cu salmonele (ou, maionez, patiserie cu crem, carne, lactate, etc).Agenii cauzali: salmonele bipatogene Gr. B (S. Typhimurium, S. Paratyphi B, S. Heidelberg, S. Derbi)Gr. C (S. Choleraesuis, S. Newport, S. Paratyphi C)Gr. D (S. Enteritidis, S. Dublin)Gr. E (S. Anatum)

PATOGENEZA GASTROENTERITELOR Sursa de infecie: animalele domestice i psrile (bolnave sau purttori cronici)Transmiterea pe cale alimentar (alimente contaminate direct de la surs sau pe parcursul procesului tehnologic), prin ap sau contact direct.Doza infectant 105-1010 microorganisme (n funcie de receptivitatea gazdei, vrst, utilizarea AB, inocul, etc) Salmonelele colonizeaz mucoasa intestinului subire, penetrnd si multiplicandu-se n enterocite, celulele M i macrofage. Urmeaz o reacie inflamatoare intens (gastroenterit, gastroenterocolit acut). Enterotoxina provoac diaree (activeaz adenilatciclaza sau guanilatciclaza enterocitelor), endotoxina absorbit acioneaz asupra SNC semne de intoxicaie. Gastroenteritele pot fi urmate de bacteriemii.

Manifestri clinice: Perioada de incubaie 8 - 48 oreDebut brusc i evoluie acut (1-3 zile) cu diaree, vom, febr, cefalee, stare de ru.Evoluie sever la sugari, btrni, imunodeprimai (n special bolnavi cu SIDA).

TOXIINFECII ALIMENTARESurvin ca urmare a ingestiei unui aliment n care s-au acumulat cantiti mari de mi/o (105 107). Nimerind n intestin, bacteriile se distrug, iar endotoxina eliberat provoac semnele clinice de intoxicare.Alte forme de salmoneloze (septicemii, meningite, infecii urinare, etc) se dezvolt la persoane cu rezistena sczut

4. Diagnosticul difereial al infeciilor provocate de m/o din familia Enterobacteriaceae.

DIAGNOSTIC DE LABORATOR AL ECHIRECHIOZELORPrelevate n funcie de forma clinic: materii fecale, urin, snge, LCR, puroi, etcMetode de diagnosticExamenul microscopic de orientare (frotiu Gram n infecii extra-intestinale, RIF)Examenul bacteriologic (de baz, cantitativ) detalii in Ghid !!!!!Examenul serologic (retrospectiv, de confirmare) - RA cu autotulpini (titru diagnostic 1:200)

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL DIZENTERIEI (SIGELLA)Prelevate: probe de scaun (elementele muco-sanguinolente), apa, alimente, lavaje de pe suprafeeMetode de diagnosticExamenul microscopic RIFExamenul bacteriologicI. Izolarea culturii pure pe medii DD (Endo, Levin, Ploskirev) sau mbogirea ighelelor n bulion selenit

II. Coloniile L- sunt repicate pe mediile Olkeniki, Kligler pentru acumularea culturii pure i identificare preliminar(lactoza/zaharoza -, glucoza A, ureea -, H2S -)III. Identificarea definitiv a culturii pure - Caractere morfotinctorialeCaractere de cultur Caractere biochimice (teste primare, secundare)Caractere antigenice (seroidentificarea prin RA pe lam cu seruri imune anti-Shigella poli- i monovalente)FagoidentificareaVirulena (testul Sereny la cobai)AntibiogramaIV. Analiza rezultatelor i formularea rspunsului

3. Diagnosticul serologic (din a 5-7 zi de boal)- RA, RHAI (aduli 1:400 (S.flexneri) 1:200 (S.sonnei) copii 1:100 coproanticorpi (Ig A 1:80) ELISARIFI

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL FEBRELOR TIFO-PARATIFOIDEPRELEVATE: snge (perioada febril, n special I sptmn de boal), urin (ncepnd cu a II sptmn), materii fecale (II-III sptmn de boal), exsudat din rozeole, ser sangvin (din ziua a 7-ea), bil, mduv osoas

METODE DE DIAGNOSTICExamenul microscopic RIF, Gram

Identificarea final - n baza studiului caracterelor morfotinctoriale, de cultur, biochimice, antigenice (RA pe lam cu seruri imune polivalente ABCDE, seruri monovalente anti-O de grup (O2, O4, O6, O9, etc) , seruri monospecifice anti-H (de variant), seruri anti-Vi, sensibilitatea la bacteriofagi). Rezultatul definitiv negativ n ziua a 11.

Rozeolocultura (exsudatul din rozeole se ntroduce n 3-5 ml bulion biliat)Mielocultura (0,5 ml mduva osoas din stern n 3-5 ml bulion biliat)Bilicultura (dup 3-6 luni de la vindecare, 5-10 ml bil se ntroduc n BP)Se examineaz ca i hemoculturaCoprocultura (din spt. 2) 3-5 g materii fecale se nsmneaz direct pe medii DD i pe medii de mbogire. Urocultura (10 ml urin se centrifugheaz, sedimentul se examineaz ulterior ca i coprocultura)

Serodiagnostic (din II sptmn)1. RA Widal (la diluii ale serului bolnavului se adaug diagnosticuri OH din S.Typhi, Paratyphi A i B). Titrul diagnostic 1/200 sau creterea n dinamic a titrului 2. RA modificarea Felix (utilizarea separat a diagnosticurilor O i H). Anticorpii anti-O (Ig M) apar primii (ncepnd cu ziua 7-8) i dispar dup 2-3 luni (maximum spt. II-III).Anticorpii anti-H (Ig M, apoi Ig G) apar mai trziu (10-12 zi) i persist o durat mai lung. n debut de reconvalescen (sptmna a IV) titrul Ac anti-O i anti-H se egaleaz.3. RHAI (cu diagnosticuri eritrocitare O)

INVESTIGAREA PURTTORILORCoproculturi repetateUroculturaBilicultura Serodiagnostic Reacia de Vi-aglutinare (eritrocite sensibilizate cu Ag Vi). Titrul diagnostic - 1/40Reacia de latex-aglutinareDeterminarea claselor de imunoglobuline Ig M sau Ig G

Diagnosticul de laborator al salmonelozelor digestivePrelevate: mase fecale, mase vomitive, snge, splturi gastrice, urin, puroi, resturi de alimente suspecte.Metode de diagnostic:Examenul bacteriologic de baz (coprocultur, hemocultur, urocultur...)RIF pentru diagnostic rapidSerodiagnostic - RHAI

5. Imunitatea. Profilaxia i tratamentul specific al infeciilor cauzate de m/o din familia Enterobacteriaceae.

TRATAMENTUL I PROFILAXIA FEBREI TIFOIDETratament: FluorochinoloneCefalosporine de generaia IIICloramfenicolAmpicilin CotrimoxazolProfilaxia specific: vaccinarea selectiv (zone endemice, militari, personal medical, etc)Vaccinul chimic TABTe Vaccinul atenuat Ty2 (administrare oral, imunitate local sIg A), contraindicat gravidelor, copiilor, imunodeprimailor - Vaccinul subunitar din Ag Vi (areactogen, imunitate 3-5 ani)

TRATAMENTUL I PROFILAXIA SALMONELOZELOR DIGESTIVE

Profilaxia salmonelozelor nespecificTratamentul simptomatic, antibioterapie la necesitate, n forme grave de infecie

TRATAMENTUL I PROFILAXIA DEZINTERIEI

Imunitate: specific de tip, 1-2 ani, umoral (IgA)Profilaxie: vaccinuri ribosomale, inactivate, atenuate (imunitate de scurt durat) Tratament: antibiotice (trimetoprim, sulfamide, tetraciclin, ampicilina, etc), eubiotice, bacteriofagi, vaccin inactivat (dizenteria cronic)

TRATAMENTUL I PROFILAXIA ECHERICHIOZELOR

Tratamentul escherichiozelorAntibiotice (conform antibiogramei)Eubiotice (colibacterin, lactobacterin, bifidumbacterin, bificol, etc)

Profilaxia escherichiozelor - nespecific

6. Familia VIBRIONACEAE. Clasificarea. Habitatul i rolul n patologia uman.

FAMILIA VIBRIONACEAEFamilia: VibrionaceaeGenuri: Vibrio Photobacterium Salinivibrio Aliivibrio (Allomonas) Enterovibrio GrimontiaCaractere generale (cheie) ale familiei: bastonae G-, drepte sau ncurbate, mobile, reduc nitraii n nitrii, fermenteaz glucoza, oxidaza+, catalaza+

7. Genul Vibrio. Clasificarea. Caracterele morfobiologice ale vibrionilor. Grupele de vibrioni Heiberg. Biovariantele speciei V.cholerae.

GENUL VIBRIOBastonae G-, ncurbate, polimorfe, 2-3 m / 0,5-0,8 m, nesporogene, necapsulate, mobile monotriche (flagel polar unic)

Clasificarea:Vibrioni halotolerani - Vibrio cholerae (agenii holerei i diareilor holeriforme)Vibrioni halofili V.parahaemolyticus, V.alginolyticus, V.anguillarum, V.vulnificus, V.metschnikovii (oportuniti, pot cauza toxiinfecii alimentare, septicemii, meningite, supuraii)Vibrioni free life (saprofii)

VIBRIO CHOLERAEClasificare :Serogrupuri: Vibrio cholerae O1, O2, ... O155V.cholerae O1, agent cauzal al holerei- V.cholerae O139 Bengal (descris in 1992, mutant al Ag O, biovarul El Tor) agent cauzal al holerei- V.cholerae non O1/non O139 (O2, O3,... etc, vibrioni NAG) responsabili de sindrom holeriform, diaree, toxiinfecii alimentare, gastro-enterite

Serovariante ale V.cholerae O1 - Ogawa, Inaba, HikojimaBiovariante ale V.cholerae O1 : V.cholerae cholerae (clasic) n 1883 izolat n cultur pur de ctre R. Koch, a cauzat 6 pandemiiV.cholerae El Tor izolat n 1905 ntr-o staie de carantin din El Tor (peninsula Sinai), n 1961 determin pandemia a VII

Caractere morfotinctoriale (vezi caracteristica genului)Caractere de culturAnaerob facultativ, temperatura optim de cultivare -- 37 grade. Crete pe medii simple, dar prefer pH alcalin (7,6 - 9,6). Halotolerant (0,5 - 7% NaCl, optimal 3%). Sensibil la pH acid Mediu de mbogire Apa peptonat alcalin 1% (AP)Medii de izolare a culturii pure: Geloza alcalin (GA) - mediu electiv-selectiv - Mediul TCBS (tiosulfat-citrat-bil-zaharoz) DD i selectiv

Manifestarea creteriiAP peste 3-6 ore de incubare vl fin la suprafaa mediului GA peste 12 ore colonii S (R atipice), plate, transparente, cu nuan albstruieTCBS peste 12 ore colonii S, opace, galbene (fermentarea zaharozei)Caractere biochimice: V.cholerae este catalaza+ i oxidaza+, reduce nitraii n nitrii, produce indol, posed gelatinaz, LCD i ODC, fermenteaz i oxideaz glucoza pn la acid (testul Hugh-Leifson), lactoza -.

Conform activitii glicolitice V.cholerae aparine grupului I Heiberg (fermenteaz zaharoza i manoza, nu fermenteaz arabinoza)- testul ZAMSe disting 2 biotipuri (variante) de V.cholerae: clasic (V.cholerae cholerae) i El Tor (V.cholerae El Tor), identice morfologic i antigenic.

8. Structura antigenic a vibrionilo, Serogrupurile i serovariantele implicate n patologia umana.

STRUCTURA ANTIGENIC A VIBRIO CHOLERAEAntigenul O somatic, LPZ, termostabil (peste 155 serogrupe - O1, O2....O155) Ag O1 este constituit din 3 fracii - A,B,CRespectiv se disting 3 serovariante ale V.cholerae O1: Ogawa (A,B), Inaba (A, C) i Hikojima (A; B; C)Ag H, proteic, termolabil, comun pentru V.cholerae

FACTORI DE PATOGENITATEFactori de adeziune (pili - Toxin Coregulated Pilus (TCP), LPZ, glicocalixul)Enzime de patogenitate (mucinaza, neuraminidaza, LDC, lecitinaza)Enterotoxina (toxina holeric, holeragen), constituit dintr-o subunitate A (A1, A2) i 5 subuniti B. Codat de genele ctxAB ale unui bacteriofag filamentos. Endotoxina

9. Holera. Sursa de infectie, caile de transmitere i patogeneza.

PATOGENEZA HOLEREI I MANIFESTRILE CLINICEHOLERA gastroenterit acut, strict uman.Agentul cauzal V.cholerae O1/O139Sursa de infecie bolnav, convalescent, purttor sntos Mecanismul de transmitere fecal-oralAlimentar (ap, alimente, fructe de mare)Contact direct (manual)Doza infectant 109 - 1011 UFC (104 pentru persoane cu hipoaciditate gastric)

Vibrionii care au supravieuit ajung n intestinul subire. Local mucinaza descompune mucusul, asigurnd adeziunea vibrionilor la enterocite, colonizarea i producerea toxinei. Neuraminidaza transform di i trisialogangliozidele membranare n GM1, ce permite fixarea toxinei i penetrarea ei.

Evoluia clinic a holerei:I - Perioada de incubaie (2-5 zile)II Enterita holeric (scaune frecvente, afecale, apoase, constituite din lichid clar cu flocoane albe - aspect zeam de orez)III Gastro-enterita (scaune frecvente 10 - 50 ori pe zi i vome abundente). Consecine deshidratare (3-20 litri eliminai n 24 ore), carene de sruri, acidoz, hipoxie tisular, hipotensiune, contracii (crampe) musculare.

IV - Algida holeric (stare extrem de grav, hipotermie, asfixie, anurie, colaps, com, deces)

Imunitatea umoral (sIgA, IgG), antibacterian i antitoxic, de scurt durat (2 ani), reinfecii sunt posibile

10. Diagnosticul de laborator al holerei:a) prelevatele, regulile de recoltare i transportare n laborator. b) metodele de diagnostic: microscopic - determinarea speciei, a serovarului i a biovarului; Serologic: RA, RHAI, determinarea anticorpilor vibriocizi; metodele rapide: RIF, reactia de imobilizare a vibrionilor cu bacteriofagi, reactia de imobilizare i microaglutinare cu serul O1.

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL HOLEREIPrelevate: mase vomitive, materii fecale, bil (purttori), de la cadavru 3 fragmente din intestinul subire i vezica biliar, prelevate din mediul extern (apa, alimente)Metode de diagnostic1. Diagnosticul rapidFrotiu Gram (bacterii G-, ncurbate)Studierea mobilitii (preparate native bacterii mobile, grupate n bancuri de peti Imobilizarea i aglutinarea vibrionilor cu serul anti-O1Imobilizarea vibrionilor cu bacteriofagi C i ETRIF

2. Examenul bacteriologic (de baz)Prelevatele se nsmneaz n AP I (mbogire) i GA I / TCBS (izolarea culturii pure) termostat, 37 grade CPeste 6 ore se examineaz cultura din AP (vl la suprafa?), utilizat pentru diagnosticul rapid, apoi se rensmneaz pe AP II i GA II.

Peste 12 ore se examineaz coloniile de pe GA I sau TCBS. Coloniile suspecte (plate i transparente cu nuan albstruie pe GA, galbene pe TCBS) sunt expuse diagnosticului rapid (5 teste), apoi repicate pe mediul cu lactoz i zaharoz pentru acumularea culturii pure i difereniere primar. AP II poate fi utilizat pentru efectuarea testelor rapide i nsmnare pe GA IIICulturile lactoza-/zaharoza+ sunt identificate morfologic, cultural, biochimic, serologic (cu ser O1 sau RO (colonii atipice), apoi cu seruri monospecifice Ogawa i Inaba). Se efectueaz fagoidentificarea i diferenierea biovariantelor

3. Depistarea toxinei In vivo (ansa ligaturat la iepure, culturi de celule)In vitro (ELISA, cu utilizarea gangliozidului GM1; latexaglutinarea) Tehnici de biologie moleculara (PCR, etc)4. Serodiagnostic (retrospectiv)Anticorpii (aglutinine, vibriocine, antitoxine) apar dup 10-15 zile de boalRA (serul bolnavului + diagnostic din V.cholerae O1 (titrul diagnostic 1/80) RHAI (serul bolnavului + diagnostic eritrocitar)Reacia de vibrioliz (serul bolnavului + cultur de vibrioni + complement). Titrul diagnostic 10-4Dozarea antitoxinelor (ELISA, RHAI)

11. Imunitatea. Profilaxia specific i tratamentul holerei.

TRATAMENTUL I PROFILAXIA HOLEREITratament RehidratareAntibiotice (tetraciclin, sulfanilamide, doxiciclin)Tratament simptomatic Profilaxie Igiena individual i colectivVaccinarea (vaccin inactivat, vaccin subunitar, holeragen-anatoxin) Imunitatea pn la 6 luniVaccinul viu este n proces de studiu

SENSIBILITATE LA ABEritromicina este antibioticul de elecie n tratamentul campilobacteriozelor digestive.Alte antibiotice: tetraciclina, aminoside, cloramfenicol, ampicilina