Referat - Analiză instrumentală

LABORATOR 1

Spectrofotometria= măsurătoare cantitativă a spectrelor de absorbție/emisie ale unei substanțe

Aplicațiile spectrofotometriei:

➔Analiza calitativă

Din spectrul de absorbție pot fi deduse informații structurale, pe baza vârfurilor de absorbție întâlnite.

➔Analiza cantitativă

Amplitudinea absorbției depinde de concentrația substanței Determinări de concentrații ADN/ARN Determinarea densității bacteriilor într-o cultură Screening toxicologic etc.

Albastru de bromfenol (C19H10Br4O5S) este un indicator de culoare ce prezintă proprietatea de a-și modifica culoarea atunci când în sistemul chimic se schimbă un anumit parametru. Acesta are grupări cromatofore care își schimbă structura odată cu schimbarea pH-ului sistemului.

La pH acid, albastru de bromfenol are culoarea galbenă, în timp ce la pH bazic are culoarea violet.

Soluția la pH acid se citește la spectrofotometru în domeniu 400-700 nm din 25 în 25 nm față de apă distilată, în cuve de 1 cm. Procesul se repetă similar și pentru soluția la pH bazic.

Pentru a verifica dacă valorile obținute se încadrează în domeniul de pH al indicatorului, se citește la spectrofotometru în UV în domeniu 400-700 nm, pentru a evidenția virajul indicatorului, respectiv curba gaussiană a indicatorului la pH bazic și acid.

Se imprimă un grafic cu cele două viraje în funcție de lungimea de undă exprimată în nm și densitatea optică. Apoi se reprezintă pe grafic punctele obținute anterior prin citirea absorbanței la spectrofotometru din 25 în 25 nm.

Se observă dacă valorile absorbanței la pH acid, respectiv la pH bazic se încadrează în curba indicatorului.

Enescu Diana Gabriela- Biochimie, An I, Grupa I