Lp. 16: Identificarea bacililor gram-negativi non-fermentativi: Pseudomonas aeruginosa. Examenul citobacteriologic al urinii

OBIECTIVE:- Cunoaşterea etapelor identificării unui bacil gram-negativ non-fermentativ ;- Însuşirea etapelor examenului citobacteriologic al urinii în infecţii produse de agenţi oportunişti.

Identificarea bacililor gram-negativi non-fermentativi: Pseudomonas aeruginosa

1. Caractere microscopice: bacili gram-negativi, drepţi sau uşor încurbaţi, fini, dispuşi izolat, în perechi sau scurte lanţuri, nesporulaţi.2. Caractere de cultivare: nepretenţioşi nutritiv, strict aerobi, cresc la temperaturi între 5-42ºC, cu miros caracteristic (flori de tei sau iasomie), produc pigmenţi difuzibili în mediu (piocianină, pioverdină, piorubrină, piomelanină). Culturile au luciu metalic. Pe geloză-sânge, coloniile sunt hemolitice.3. Caractere biochimice: catalazo-pozitivi, oxidazo-pozitivi, metabolism oxidativ al glucozei, reduc nitraţii, alcalinizează coloana şi panta de agar TSI, lactozo-negativi, indol-negativi.

Examenul citobacteriologic al uriniiIndicatie: - suspiciunea de infecţie de tractus urinarCondiţia microbiologicǎ a tractului urinar:- rinichii + ureterele + vezica urinară= normal sterile;- uretra distală = normal colonizată (stafilococi coagulazo-negativi, enterococi, difterimorfi, enterobacteriacee).

Etiologia bacteriană a infecţiilor tractusului urinar (ITU):1) bacterii condiţionat patogene Bacili gram negativi:o Escherichia coli;o Proteus mirabilis;o Enterobacter cloacaeo Klebsiella pneumoniaeo Pseudomonas aeruginosa.Coci gram pozitivi:o Enterococcus faecalis;o Staphylococcus saprophyticus o Staphylococcus aureus;o Streptococcus agalactiae;Bacili gram pozitivi:o Corynebacterium urealyticum2) bacterii patogene primare:o Mycobacterium tuberculosis.

Etapele examenului citobacteriologic al urinii în ITU determinate de bacterii condiţionat patogene:1) Prelevarea urinii pentru examen cito-bacteriologic: Prelevǎri uzuale: proba curatǎ, prinsǎ în zbor din jetul mijlociu; Prelevǎri speciale: aspiraţia suprapubianǎ, prelevǎri prin cateter. Proba curatǎ prinsǎ în zbor din jetul mijlociu:o Toaleta localǎ cu apǎ şi sǎpun, urmatǎ de uscarea zonei decontaminate;o Momentul prelevǎrii : prima urinǎ de dimineaţǎ sau dupǎ cel puţin 3 ore de la micţiunea anterioarǎ;o Volumul prelevat : 20 ml pentru izolarea cantitativǎ a microorganismelor condiţionat patogene.Transportul probelor la laborator pentru examinare în maxim o orǎ de la prelevare. Refrigerarea urinii dacă se temporizează examinarea.Alte prelevate utile diagnosticului de ITU- urină (sumar de urinǎ);- sânge (hemoculturǎ) la pacienţii cu suspiciune de pielonefritǎ.2) Examen microscopic

1

– aprecierea calităţii probei - celule epiteliale scuamoase sunt markerii contaminǎrii vaginale- aprecierea piuriei - camera Fuchs Rosenthal > 10 leucocite / mm3 = PIURIE < 3 leucocite / mm3 = piurie absentă 3 - 10 leucocite / mm3 – este necesară proba Addis care stabileşte prezenţa sau absenţa piuriei -frotiu de urină colorat Gram > 1 leucocit / câmp microscopic = PIURIE- aprecierea bacteriuriei (frotiu din urină colorat Gram) – prezenţa a > 1 – 2 bacterii cu aceleaşi caractere microscopice/câmp = BACTERIURIE SEMNIFICATIVǍ (se corelează cu > 105 UFC/ml urină în urocultura cantitativă)3) Urocultura cantitativă = însǎmânţarea pe gelozǎ sânge şi pe agar MacConkey a câte 0,1 ml din diluţia 10-2 a urinii omogenizate urmată de incubare la 37ºC şi numărarea coloniilor dezvoltate. Calculăm bacteriuria după formula :Nr. UFC/mL = N×D×1/volumul însămânţatN = nr. colonii dezvoltate pe mediuD = inversul diluţiei Interpretarea rezultatelor :a) O singură specie de bacili gram-negativi izolată în concentraţie de 104-5 UFC/ml, de stafilococi ≥ 5x104 UFC/ml sau levuri ≥ 104 UFC/mL: - în prezenţa piuriei = ITU; -în absenţa piuriei = colonizare abortivă / probă examinată tardiv fără refrigerare imediată.b) Două tipuri de izolate care depăşesc fiecare 105 UFC/mL: - pe o singură probă = cel mai frecvent contaminare -în 2 probe succesive = infecţie mixtăc) Mai multe tipuri de bacterii care depăşesc fiecare 105 UFC/mL = contaminare/ probă examinată tardiv fără refrigerare imediată.4) Identificarea bacteriei cu semnificaţie clinică5) Antibiograma Pentru Pseudomonas aeruginosa- Metoda difuzimetrică- Agar Mueller-Hinton- Antibiotice: peniciline anti-Pseudomonas (ticarcilina, piperacilina), aminoglicozide (gentamicina, tobramicina, amikacina), fluorochinolone (ciprofloxacina, moxifloxacina), cefalosporine (cefoperazona, ceftazidima, cefepim), carbapeneme (meropenem, imipenem)

În sală se găsesc:- frotiuri de urină colorate Gram- frotiuri de cultură colorate Gram- urocultura cantitativă (geloză sânge, agar MacConkey)- testul catalazei- testul oxidazei- antibiograma difuzimetrică pentru Pseudomonas aeruginosa

2