LP 11

Determinarea activitii peptidice. Reacia Timol

(metoda Mac Langan) i reacia cu sulfat de zinc

(testul Kunkel / 3 ore

Teste de disproteinemie

Introducere

Dintre principalele fractiuni proteice ale sangelui, albumina reprezinta 2/3

iar globulinele 1/3. Cand acest raport se mentine incluzand si concentratia

de proteina totala, vorbim despre euproteinemie.

Disproteinemie modificarea cantitativa si calitativa a proteinelor

plasmatice cauzata de diferite afectiuni ca urmare a unui mecanism

fiziopatologic.

Paraproteinemia reprezinta aparitia de proteine atipice - paraproteine,

anormale, absente in plasma normala. Disproteinemia este totdeauna

insotita de aparitia acestor tipuri de proteine.

Albuminele reprezinta proteinele majoritare in plasma - circa doua treimi

din totalul proteinelor plasmatice. Albuminele au un rol de a stabiliza din

punct de vedere coloidal in timp ce globulinele au un efect contrar. In

starile patologice asociate inflamatiilor cronice tendinta este de scadere a

albuminelor si de crestere a globulinelor.

Cand echilibrul proteic, cantitativ si calitativ, se modifica in sensul scaderii

A (factor stabilizant) si cresterii G (factor precipitant) se produce un

dezechilibru in sistemul coloidal al serului instabilitate sau labilitate

coloidala.

Testele de disproteinemie se mai numesc teste de labilitate serica sau

de labilitate coloidala. Exista un numar mare de astfel de teste, cele mai

folosite sunt testele cu timol si sulfat de zinc. Principiul acestora se

bazeaza pe faptul ca starea de echilibru a coloizilor proteici din plasma

este dependenta si influentata de modificarea raportului dintre albumine si

globuline. In mod normal acest raport este supra unitar de aproximativ

1,2 - 1,5.

Testele de disproteinemie sunt folosite de catre laboratoarele mai putin

dotate pentru a evalua functia ficatului in principal, dar si disproteinemiile

care apar in diferite infectii, cancere, boli autoimune, boli renale,

dislipidemii sau alte situatii cu inflamatie persistenta.

Testele de disproteinemie au avantajul ca prezinta un cost redus si nu

necesita echipamente sofisticate. Ele pot fi folosite ca teste de rutina

rapide, accesibile oricarui tip de laborator. Cu toate acestea, sunt lipsitede

specificitate si nu sunt utile diagnosticului unei anumite afectiuni. In

schimb pot fi utile pentru monitorizarea evolutiei bolii respective, daca

aceasta este cunoscuta.

Testele de disproteinemie au fost initial denumite teste hepatice. Aceasta

denumire este improprie, deoarece, acestea nu sunt specifice bolilor

hepatice, ele fiind teste orientative ale functiei hepatice. In hepatitele

cronice si cirozele hepatice valorile testelor de disproteinemie sunt mult

crescute. In hepatita acuta cu virus A testele cu timol si sulfat de zinc

cresc rapid dar se normalizeaza la fel de rapid. In hepatitele acute cu virus

B si C valorile cresc mai tardiv si se normalizeaza lent.

TESTUL TIMOL (metoda Mac Lagan)

Pp metodei

O solutie de timol la pH 7,4, pp. precipit proteinele serice, dac exist o

labilitate a echilibrului coloidal datorit creterii gamma-globulinelor, a

beta-lipoproteinelor sau a scderii albuminelor. Precipitarea insotita de

turbiditate apare datorita formarii unui complex timol-globuline-

fosfolipide.

Gradul de turbiditate se determina fotometric la 660 nm.

Reactivi

Reactiv timol

Proba

Se utilizeaz seruri proaspete, limpezi, fr hemoliz.

Mod de lucru

Intr-o eprubeta se adauga:

0,05 ml ser

3 ml reactiv timol in tampon veronal 7,4

Se agita si se lasa 30 min. la temp camerei.

Se apreciaza turbiditatea utilizand o scala de etalonare sau prin citire la

Spekol la 660nm, factor de panta 35, fata de apa distilata sau reactivul

timol.

Rezultatul se exprima in unitati Mac Lagan (UML).

Valori normale 0 4 UML

Variatii patologice

Valori crescute:

- Hepatopatii difuze (infectioase, toxice)

- Ciroza hepatica

- Inflamatii cronice poliartrita reumatoida, reumatism articular

- Colagenoze

- TBC pulmonar

- Neoplasm

- Mielom multiplu

- Infectii virale

TESTUL CU SULFAT DE ZINC (TESTUL KUNKEL)

Pp.

O solutie de ZnSO4 la pH 7,4, adaugata la o proba de ser determina

cresterea turbiditatii serului in cazul prezentei gama-G in cantitate

crescuta. Turbiditatea aparuta se datoreaza formarii unui complex metal

gama-G urme de beta-G (complex insolubil)

Reactivi

Reactiv Kunkel (sulfat de zinc tamponat)

Proba

Ser

Mod de lucru

Intr-o eprubeta se adauga

0,05 ml ser proaspat

3 ml rectiv Kunkel

Se amesteca prin rasturnare de cateva ori.

Se lasa 30 min la temp camerei.

Se evalueaza turbiditatea prin comparare cu scala turbidimetrica de

etalonare de la timol sau citire la spekol la 650 nm, fata de apa distilata.

Rezultatul se exprima in unitati turbidimetrice.

Valori normale

2 9 unitati turbidimetrice

Variatii fiziologice

Valori crescute la persoane in varsta (pana la 12 unit) sau valori scazute

la fat in primele 6 luni de viata extrauterina.

Variatii patologice

Testul este mai specific ca testul timol pt gama-G si este important pt

diagnosticul de hepatita infectioasa.