IndicatoriiSunt substante chimice care se folosesc pentru a evidentia punctul de echivalenta ale reactiilor,punct in care isi modifica o proprietate usor peceptibila.Indicatorii se clasifica in functie de echilibrele de reactie care se produc intre titrant si substanta din Solutia de analizat.Indicatorii sunt: Acido-bazici De precipitare De complexareIndicatorii sunt caracterizati de 2 parametri pe baza carora sunt alesi in momentul utilizarii lor. Intervalul de viraj(reprezinta intervalul de valori ala ph in care se inregistreaza modificarea culorii) Exponentul indicatorului(reprezinta ph la care jumatate din indicatori se va transforma)

Indicatorii acido-bazici

Trebuie sa indeplineasca urmatoarele conditii: Schimbarea de culoare sa fie reversibila Schimbarea de culoare sa se produca brusc(ph cat mai mic) Puterea de culoare sa fie mare chiar pentru concentratii mici de indicatori Solubilitatea in apa astfel incat solutia sa fie sufficient de colorata Schimbarea de culoare sa se produca la adaugarea unor cantitati mici de acizi sau baze Sa fie stabili in concentratiile obisnuite de lucru Indicatorii de ph: simpli ,micsti ,universaliIndicatorii micsti-reprezinta un amestec de mai multi indicatori care au in schimb un singur punct de viraj.Indicatorii universali-reprezinta un amestec de mai multi indicatori cu intervale de viraj diferite,dar care acopera toata plaja de ph-uri.

Rezerva alcalinaReprezinta totalitatea alcalilor pe care sangele ii pune la dispozitia acizilor care atunci cand ajung in torentul circulator trebuie sa fie neutralizati pentru a nu modifica ph sangvin.Principiul metodeiPrin adaugarea unei cantitati de acid azotic in ser sau plasma se elibereaza o cantitate de dioxid de carbon legat de alcali iar excesul de acid se trateaza cu o solutie de hidroxid de sodium de aceeasi normalitate. Valori normale: 22-29 mili echivalenti gram /litruVariatii patologice valori scazute ale R.A se gasesc in acidoze metabolice si acidoze respiratrii ,astm

Determinarea proteinelor totale prin metoda biuret

Principiul metodeiReactia biuretului se bazeaza pe formarea unor compusi intre legatura peptidica a proteinelor si ionul de Cu din reactivul biuret in mediul alcalin cu formarea unui complex colorat albastru-violet.Intensitatea culorii obtinute este direct proportional cu concentratia proteinelor in proba de analizat.Valoare normale: 6-8 g%Variatii patologice (valorori scazute) malnutritie,malabsorbtie,maldigestie,ciroza hepatica,peritonita (valori crescute) diaree,deshidratare,stari febrile,diabet insipid,tuberculoza.

Dozarea colesterolului total prin metoda enzimatica

Principiul metodeiMetoda permite dozarea colesterolului total fplosind un system enzimatic format din colesterol-esteraza,colesterol-oxidaza si peroxidaza.Prin metoda enzimatica,colesterolul este determinat calorimetric,concentratia colesterolului fiind direct proportional cu extinctia citita la 505 nm.Valori normale:160-200 mg%Variatii patologice: Valori crescute:hipotiroidie,sindrom nefrotic,guta,dibet zaharat,alcoholism,anorexie nervoasa. Valori scazute:malabsorbtie,maldigestie,carente alimentare,afectiuni hepatice(ciroze).

Metoda de dozare enzimatica a ureei cu ureazaPrincipiul metodeiUreea este hidrolizata sub actiunea ureazei si este transformata in amoniac si dioxid de carbon.In mediul alcalin ioniide amoniu impreuna cu salicilatul si hipocloritul de sodium formeaza un compus de culoare verde,fotometrabil.Intensitatea culorii este direct proportionala cu concentratia ureei. Valori normale: sange 20-40 mg% urina 24-30 mg%Variatii patologice: Valori crescute:tumori renale,hidronefroza,insuficienta renala acuta sau cronica Valori scazute:insuficienta hepatica grava

Determinarea creatininei serice(metoda Jaffe)

Principiul metodeiCreatinin in mediul puternic alcalin reduce acidul picric la acid picramic de culoare galben-portocalie fotometrabil.Intensitatea culorii este direct proportionala cu concentratia creatininei.

Valori normale: in sange: 0,6-1,1 mg %(barbati) 0,5-0,9 mg %(femei) in urina: 1-1,5 g/24 h

Variatii patologice: Valori crescute: insuficienta cardiaca congestive,diabet zaharat,diabet insipid,guta,miopatii,afectiuni hepatice. Valori scazute:insuficienta renala cronica.

Metoda de dozare a acidului uric cu uricazaPricipiul metodei Acidul uric este transformat de uricaza in alantoina si apa oxigenata care sub actiunea peroxidazei oxidaza 2,4-diclor-fenol-sulfonatul si 4-amino-antipirina formand un derivat de chinona de culoare rosu-violet.Intensitatea culorii derivatului obtinut este direct proportionala cu concentratia acidului uric.Uricaza este o enzima cu specificitate absoluta de substrat,actionand numai asupra acidului uric.

Valori normale: in sange 3,5-7,5 mg % (barbati) 2,5-6,5 mg % (femei) in urina: 0,25-0,8 g/24 h (adulti)Variatii patologice: enzimopatii,guta,leziuni tubular renale,afectiuni hepatice severe,mielom multiplu.

Determinarea lipidelor totale prin metoda cu vanilina-acid fosforicPrincipiul metodeiSub actiunea acidului sulfuric concentrate,in prezenta acidului fosforic si a vanilinei,lipidele serice formeaza la cald un complex colorat in roz,fotometrabil.Intensitatea coloratiei obtinute este direct proportionala cu concentratia lipidelor totale din ser.Valori normale :500-700 mg %Variatii patologice: Valori crescute: insuficienta hepatica,diabet,pancreatita acuta Valori scazute: infectii acute,anemie,malabsorbtie

Testul timol (metoda Mac Lagan)Principiul metodeiPrin adaugarea solutiei tampon saturate de timol,la o proba de ser apare o turbiditate in cazul in care globulinele sunt crescute sau albuminele sunt scazute.Turbiditatea se datoreaza aparitiei unui complex timol-globulinic-fosfolipidic.Valori normale: 0-4 unitatiVariatii patologice: ciroza hepatica,endocardita acuta,TBC pulmonar,mielom multiplu,infectii virale.

Testul cu sulfat de zincPrincipiul metodeiO solutie tamponata de sulfat de zinc adaugata la o proba de ser determina cresterea turbiditatii serului in cazul prezentei gama-globulinelor in cantitate crescuta.Turbiditatea aparuta se datoreaza formarii unui complex metal gama-globuline si urme de beta-globuline.Valori normale: 2-9 unitati turbidimetriceVariatii fiziologice: valorile apar crescute la persoanele varstnice (pana la 12 unitati) si scazute in primele 6 luni de viata extrauterina.

Influenta temperaturii asupra activitatii enzimaticePrincipiul metodeiAmilaza salivara este activa la 37 grade dar prin fierbere se inactiveaza si nu mai are actiune hidrolitica asupra amidonului.Interpretarea rezultatelorIn eprubeta cu saliva nefiarta,enzima activa descompune amidonul la maltoza,care reduce reactivul Fehling la oxid cupros de culoare rosu caramiziu.In eprubeta cu saliva fiarta in care amilaza din saliva a fost distrusa prin fierbere,amidonul nefiind hidrolizat la maltoza,aceasta nu reduce reactivul Fehling iar continutul din eprubeta ramane albastru.

Influenta Ph asupra activitatii enzimaticePrincipiul metodeiAmilaza salivara are activitatea maxima la un Ph specific care se poate pune in evidenta prin hidroliza amidonului intr-o gama de ph-uri realizate de sistemul tampon.Interpretarea rezultatelorPh-ul optim al activitatii amilazei salivare se gaseste in eprubeta colorata galben-roscat deoarece in aceasta hidroliza amidonul a avut loc pana la maltoza si maltodextrine.Eprubetele colorate in albastru indica prezenta amidonului nehidrolizat iar cele colorate in violet si brun dovedesc o hidroliza partial pana la stadiul de dextrine.

Determinarea activitatii (TGP)prin metoda enzimaticaPrincipiul metodeiSubstraturile participante in reactia catalizata de TGP sunt:L-alanina si alfa-cetoglutaratul.Piruvatul rezultat din reactie in prezenta lactat dehidrogenazei va reactiona cu NADH ducand la formarea NAD si L-lactat.Valori normale: 2-16,5 unitatiVariatii patologice: Hepatita virala acuta,hepatite cornice,ciroze,icter mechanic Cresterea ALAT este mult mai importanta decat cresterea ASAT in hepatitele infectioase datorita lezarii membranelor celulare Cresterea ASAT este mai importanta decat cresterea ALAT in hepatopatiile infiltrative datorita lezarii membranelor celulare si mitocondriale.

Determinare activitatii (TGO) prin metoda enzimaticaPrincipiul metodeiSubstraturile participante in reactia catalizata de ASAT sunt L-aspartatul si alfa-cetoglutaratul.Oxalacetatul rezultat din reactive in prezenta malat-dehidrogenazei va reactiona cu NADH ducand la formarea NAD si L-malat. Variatii normale: 2-20 unitati

Variatii patologice ASAT: Cresteri de 10-100 ori ale ASAT fata de valorile normale se intalnesc in:infarct miocardic,hepatita virala acuta Cresteri moderate:hepatite cronice,dupa traumatisme,interventii chirurgicale,anemii hemolitice severe

Masurarea diurezeiDiureza este volumul de urina emis in 24 h si reprezinta echilibrul intre pierderea de lichide si aportul exogen si endogen de lichide.Principiul metodeiMasurarea cntitatii de urina emisa spontan in 24 h cu cilindru gradatValori normale: 1200-1500 ml (barbati) 1000-1200 ml (femei)Variatii fiziologice: diureza variaza cu varsta,cantitatea de lichide ingerate si starea de hidratare a organismuluiVariatii patologice: diabet insipid,diabet zaharat cauze renale: TBC renal,pielonefrita cronica oligurie: regim alimentar sec,transpiratie abundenta,effort fizic crescut anurie: hemoragii masive,avorturi septice

14