asigurarea calitatii in microbiologie - referinte

ASIGURAREA CALITATII IN MICROBIOLOGIE

Conf. Dr. CARMEN PANZARU

REFERENTIAL:

• Ghid pentru acreditarea laboratoarelor de microbiologie: EA -04/10 – Accreditation for microbiological laboratories (European Co-operation for Accreditation)

• Standard român SR EN ISO 15189ISO – Organizaţia Internaţională de

Standardizare (organisme internaţionale de standardizare din peste 140 ţări).

ASRO (Asociaţia de standardizare din România)– organism naţional de standardizare recunoscut de Guvernul României (persoana juridică de drept privat, apolitică, neguvernamentală)

RENAR (Asociaţia de Acreditare din România)- organism de drept privat, neguvernamental, având ca obiectiv acreditarea organismelor din infrastructura de evaluare a conformităţii

Standardizarea – ansamblu de convenţii care facilitează schimbul de produse, servicii şi informaţii utile, garantate calitativ

• Tratat de microbiologie clinică, 2008, D. Buiuc

• NCCLS 2009

Personal

• “persoană cu experienţă si calificată”

• Opinii si interpretari ale rezultatelor: MEDIC!!!!

• Competenţa: monitorizată continuu

Mediu

• Acces restrictionat

• Construit pe principiul “fără cale de intoarcere”

• Separarea activităţilor in timp si spatiu

Mediu• Spaţii separate/zone de activitate clar

desemnate pentru:• Zone de receptie si depozitare probe

• Prelucrarea probelor

• Intretinerea tulpinilor de referinţă

• Pregătirea mediilor, inclusiv sterilizarea

• Marimea spatiului: in conformitate cu reglementările nationale in vigoare

Mediu

• Echipamentul laboratorului nu ar trebui in mod obişnuit mutat intre spatii pentru a evita contaminarea incrucişată (ex pipetele)

• Aerul conditionat: filtrele trebuie inspectate şi intreţinute corespunzator

Mediu• Reducerea contaminării:

• Suprafeţe netede ale pereţilor, podelelor, tavanelor şi meselor. Faianţa nu este recomandată

• Imbinări concave intre podele, pereti, tavan

• Jaluzele plasate la exterior

• Dulapuri suspendate

• In laborator nu se afla altceva decat strictul necesar pentru activitate

Mediu

• Tavane: • Suprafata neteda, cu spoturi

• Daca nu este posibil: –dovezi documentate că se controlează

riscurile potenţiale–Program de curatenie

Mediu

• Monitorizarea condiţiilor de mediu:– Progam documentat de curăţenie (care ar

trebui sa tina cont de rezultatele monitorizării condiţiilor de mediu):

• Mobila• Suprafete• Echipamente• Procedura pentru rezolvarea contaminării

accidentale

Mediu

• Monitorizarea aeromicroflorei: – săptămânal in laboratorul de microbiologie

• Teste de sanitaţie– săptămânal in laboratorul de microbiologie

ESTIMAREA INCERTITUDINII

• REPETABILITATEA

• REPRODUCTIBILITATEA

• Componenete individuale ale incertitudinii:• Pipetarea, cântarirea, efectele de diluare: să se

demonstreze că sunt ţinute sub control• Laboratoarele ar trebui să fie conştiente de

incidenţa rezultatelor fals negative sau pozitive

Repetabilitate – apropierea acordului dintre rezultatele unor masuratori succesive ale aceleasi marimi masurate in aceleasi conditii de masurare

Reproductibilitate – apropierea acordului dintre rezultatele masuratorilor succesive ale aceleasi marimi masurate in aceleasi conditii de masurare

Echipament – intreţinere, etalonare si verificarea performanţei

• Program documentat pentru:– Intreţinerea– Calibrarea– Verificarea funcţionarii echipamentelor

Ghid pentru Intretinerea laboratorului

Tipul echipamentului

Cerinţe Frecvenţa sugerată

a) Termostate

b) Figidere

c) Congelatoare

Curătaţi şi dezinfectaţi suprafeţele interne

a) Lunar

b) Când este necesar (ex la 3 luni)

c) Atunci când este necesar (ex anual)

Centrifugi a) Service

b) Curăţire si dezinfectare

a) Anual

b) La fiecare utilizare

Autoclave a) Sevice complet

b) Verificarea sigurantei vasului sub presiune

a) Anual sau conform recomandarii producatorului

b) Anual

Tipul echipamentului Cerinţe Frecvenţa sugerată

Hota de siguranţă Service complet si verificări mecanice

Anual sau conform recomandării producatorului

Microscoape a) Service

b) Curăţire şi dezinfectare

a) Anual

b) La fiecare utilizare

pH-metre Curăţare electrod La fiecare utilizare

Balanţe a) Curăţire

b) Service

a) Fiecare utilizare

b) Anual

Jar pentru anaerobioză Curăţire/dezinfectare După fiecare utilizare

Echipament volumetric Decontaminare, curăţare şi sterilizare

La fiecare utilizare

Laborator a)Curăţati şi dezinfectaţi suprafeţele de lucru,

b) Podelele

c) Celelalte suprafete

a) Zilnic

b) Saptamanal

c) La fiecare 3 luni

Ghid pentru Intreţinerea laboratorului

• Evitarea contaminării incrucişate datorită echipamentului– Ideal: 2 autoclave

– 1 singur: program de sterilizare şi curăţenie documentat

Indrumări privind etalonarea

Tipul echipamentului Cerinte Frecventa sugerata

Termometre de referinţă (lichid)

Re-etalonare trasabilă completă

Punct unic

La fiecare 5 ani

Anual

Termometre de lucru Verificate pe baza termometrelor de referinţă

Anual

Balanţe Etalonare trasabilă completă

Anual

Greutăţi de calibrare Etalonare trasabilă completă

5 ani

Greutăţi de verificare Verificare pe baza greutatii de calibrate sau verificate, imediat dupa etalonarea trasabila

Anual

Sticla volumetrică Etalonare gravimetrică Anual

Tipul echipamentului Cerinte Frecventa sugerata

Microscoape Etalonare trasabilă la micrometru (unde este cazul)

Initial

Centrifugi Etalonare trasabilă

Etalonare – set de operatii care stabileste, in anumite conditii, relatiile dintre valorile cantitatilor indicate de instrumentul de masurare sau sistemul de masurare sau valorile reprezentate printr-o masurare amaterialului sau un material de referinta si valorile corespondente obtinute din standarde

Indrumari privind validarea echipamentului si verificarea performantei

Tipul echipamentului Cerinte Frecventa sugerata

Echipamente cu temperatura controlată (termostat, frigider, congelator)

a. Obtineţi stabilitatea si uniformitatea temperaturii

b. Monitorizaţi temperatura

a. initial, la fiecare 2 ani şi după reparaţie

a. Zilnic

Etuva a. Obtineti stabilitatea si uniformitatea temperaturii

b. Monitorizati temperatura

a. initial, la fiecare 2 ani si după reparaţie

a. Zilnic/la fiecare utilizare

Autoclav a. Stabiliţi caracterisiticile pentru incarcari/cicluri

b. Monitorizati temperatura/timpul

a. initial, la fiecare 2 ani şi după reparaţie

b. Zilnic/la fiecare utilizare

Tipul echipamentului Cerinte Frecventa sugerata

Hota de siguranţă microbiologică

a. Stabiliţi performanţa

b. Monitorizare microbiologică

c. Monitorizarea fluxului de aer

a. Iniţial, şi după reparaţie

b. Săptămânal

c. La fiecare utilizare

Cronometre Verificaţi in baza in baza semnalului de timp national

Anual

Microscoape Verificaţi alinierea Anual

pH-metre Ajustati utilizand cel putin 2 soluţii tampon de calitate adecvată

Zilnic/la fiecare utilizare

Balante verificaţi la zero şi citind in baza greutatilor de verificare

Zilnic/la fiecare utilizare

Tipul echipamentului Cerinte Frecventa sugerata

Pipete Verificati acurateţea şi precizia volumului eliminat

In mod regulat (să fie luat in calcul frecvenţa si natura utilizării)Numărător de colonii Verificaţi in baza

numarului obtinut manualAnual

Centrifugi Verificati viteza in baza unui tahometru independent calibrat

Anual

Jar anaerob Verificati cu indicator anaerobic

Fiecare utilizare

Mediul laboratorului Teste de aeromicrofloră şi sanitaţie

Săptămânal

Reactivi şi medii de cultură

• Trebuie verificată conformitatea fiecărui lot de reactivi critici, iniţial şi pe parcursul perioadei de valabilitate, cu tulpini de referinta (ex coloraţia Gram)

• Medii de cultură (preparate in laborator/gata preparate) – pH, sterilitate, volum– Proprietăţi nutritive, selective şi diferenţiale– Inregistrări cu privire la specificatiile fabricantului: numele

mediului, suplimente, termen de valabilitate, conditii de depozitare, certificat de calitate

– Loturile de medii ar trebui să fie identificabile– Etichetare adecvată

Materiale de referinta si culturi de referinta

• Certificat de calitate: furnizează trasabilitatea masuratorilor

Utilizarea tulpinilor de referinta

Tuplini de referinta recunoacute de catre organismul de acreditare

Sub-cultivate o data

Stocuri de referinta (congelator: 6 luni)

Repicaje

Culturi de lucru: pe panta de geloza simpla, la 4 grd C (1 – 2 luni)

Utilizarea de rutina

verificarea puritatii culturii si testari biochimice

!!! Subcultivarea o data !!!

Prelevarea

• Conform manualului de recoltă a probelor• Transportul şi depozitarea: in condiţii care

să menţină integritatea eşantionului• Durata eşantionării ar trebui inregistrată• Procedura cu privire la calitatea si

cantitatea podusului patologic şi criterii de respingere a probei

• Procedura pentru păstrarea şi eliminarea probelor

Eliminarea deşeurilor contaminate

• Conform cu reglementările naţionale– Autoclavarea materialului contaminat: zilnic– Predarea deşeurilor firmelor specializate: max

la 48 ore

Asigurarea calităţii rezultatelor/controlul calităţii performantei

• Controlul intern al calităţii– Procedurile desfăşurate in laborator in scop

diagnostic– Utilizarea de eşantioane martor– Utilizarea de materiale de referinţă (tulpinile

de referinta)– Contraprobe

Asigurarea calităţii rezultatelor/controlul calităţii performanţei

• Controlul extern al calităţii– Programe de control extern

• Exprimarea rezultatelor– Rezultat calitativ

• “absent pentru o unitate definită”

– Rezultat cantitativ• “mai putin decat limita de detecţie pentru unitatea

definit㔕 “prezent/absent in cantitatea sau volumul definit”