118411662-propolis.docx

Titlu: Propolisul

Specializare: Asistent farmacist AMF

Indrumator:

Data:

Moto: "Aceasta tainica primavara izvoraste din mierea miraculoasa care nu este altceva decat o raza de caldura transformata odinioara si care acum, isi recapata forma cea dintai . Ea tine loc de soare si flori pana cand fratele ei mai varstnic, soarele . strecurandu-si prin portile intredeschise primele mangaieri caldute, va trezi la viata violetele si anemonele si va scoate din toropeala si lucratoarele (albinele) spunandu-le ca ozonul a pus din nou stapanire pe lume si ca cercul neintrerupt ce leaga moartea de viata a mai facut un ocol in jurul sau si iar a inviat."

Cuprins:I Introducere:a)Definitie.b) Istoric.c)Poduse apicole.II Propolisul.III Preparate din propolis:a)Tincturab)Propolis brunc) Propolis unguentd) Apa de propolise)Aerosoli cu propolisf)Sirop de propolisg) Sprei de propolish)Pulberi de propolisi) Extract alcoolic de propolisj) Ceai de propolisk)Granule de propolisIV Bolii tratate cu propolis:

a)Definitie apiterapieApiterapia este terapia traditionala care foloseste mierea, polenul, ceara, laptisorul de matca, propolisul, veninul albinelor si alte produse ce tin de complexa alchimie a stupului, in vederea mentinerii sanatatii corpului omenesc.b) Istoric: Produsele albinei s-au inscris de la inceputul preistoriei in randul elementelor naturale folosite pentru completarea si ameliorarea hranei si apoi pentru combaterea si prevenirea durerii si a suferintelor omului. Practica traditionala a apiterapiei dateaza din vremurile imemoriale ale istoriei umane. Primele comunitati mai dense de oameni au aparut pe valea Indului, cam prin jurul anului 3000 I.H.c)Poduse apicole:-Mierea,-Ceara,-Propolis,-Polenul,-Laptisor de matcha,-Veninul de albine,-Pastura,-Apilarnilul,-Capaceala.II Propolisul:Propolisul este un cocteil de substane vindectoare, adunat din mugurii i de pe scoara plopilor, a mestecenilor, a castanilor, a slciilor, a frasinilor, a aninilor i ale unor specii de pomi fructiferi. Cum tiu albinele s dozeze acest elixir, s-l combine i s-i dea n final o compoziie unitar, aa nct diferitele tipuri de propolis culese din diverse regiuni ale lumii s aib proprieti practic similare, este o enigm.O enigm este i cum au putut medicii antici, cum ar fi Galen sau Pliniu, s identifice, fr a beneficia de mijloacele moderne, proprietile sale terapeutice. Un lucru este cert: primvara, albinele culeg un medicament excepional, adunat cu un efort uria, din mugurii abia ieii la lumin.Exist dou metode prin care apicultorii recolteaz acest medicament: rzuindu-l direct de pe pereii stupului de albine sau pentru o mai mare eficien, construind un colector special, ce preia Pcantiti tot mai mari de propolis.Remediu de tradiie n medicina naturist din Romnia, propolisul se gsete uor la apicultori, fie brut, sub forma unor bulgrai maronii, fie lichid, ca tinctur alcoolizat. Propolisul brut de bun calitate se recunoate printr-un miros specific (dulceag-amrui) foarte puternic, precum i prin lipsa de luciu (propolisul lucios are foarte mult cear n el i ca atare, proprietile sale sunt mult diminuate).Propolisul este un excelent antibiotic ,care actioneaza progresiv inhiband dezvoltarea bacteriilor refacand tesuturiule lezate de catre catre acestea favorizand eliminarea secretilor in exces de pe caile respiratorii.Propolis provine din limba Greaca si inseamna "partea din naintea cetati"deoarece Greci antici au observat ca albinele folosesc aceasta substanta .Propolisul este un adevarat miracol al naturi ,pentru asi proteja stupul de agresori externi avand o puternica actiune bacteriana,bacteriostatica,antifungica.In cazul oamenilor rolul propolisului este acelas izvor de sanatate.Propolisul este un produs al stupului de albine,este un amestec rasinos pe care albinele il colecteaza .O data culeasa rasina este amestecata de catre albine cu secretile salivare si ceara.Propolisul este folosit ca biostimulator care mareste rezistenta fizica si inlatura oboseala.Datorita proprietatilor sale anti virale,antioxidantesi antiinflamatori propolisul isi gaseste tot mai multe utilizari.Propolisul mai este numit si "clei de albine"sau "penicilina reumatica"este un produs reumatic estrem de pretios.Preoti il folosesc la inbalsamarea mortilor asigurand ne-alterarea mumiilor.Datorita proprietatile lui curative propolisul este inclus in creme,cosmetice,unguente sau poate fi administrat ca atare sub forma de capsulesau granule.Propolisul mai contine si vitamine: A,B1,B2,B SI E.Propolisul este compus:-Rasini vegetale,-Balsam de diferite compoziti,-Ceara,-Uleiuri eterice,-Fier,-Micro elemente: - Cupru, - Zinc, -Mangan, -Cobalt la care se adauga si apa de propolis.-Flavonoide,-Secreti ale glandelor salivare ale albinelor.

III Preparate din propolis:a)Tincturab)Propolis brunc) Propolis unguentd) Apa de propolise)Aerosoli cu propolisf)Sirop de propolisg) Sprei de propolish)Pulberi de propolisi) Extract alcoolic de propolisj) Ceai de propolisk)Granule de propolis

a)TincturaDac nu vrem s lum acest remediu gata preparat din comer, putem s-l obinem acas: se pun ntr-un borcan cu filet cincisprezece linguri rase de propolis, peste care se adaug dou pahare (400 ml) de alcool alimentar de 90 de grade. Se nchide borcanul ermetic i se las la macerat vreme de dou sptmni, timp n care se agit zilnic, dup care se filtreaz. Tinctura rezultat va fi pus n sticlue mici, nchise la culoare. Se administreaz din acest remediu cte 50 de picturi, puse pe puin pine uscat sau n miere, de patru ori pe zi. Tinctura de propolis nu se ia diluat n ap, deoarece anumite substane din compoziia sa precipit (se ntresc) n contact cu apa, devenind insolubile i ca atare trec prin organism fr efect. De asemenea, nu se ia tinctura de propolis simpl, deoarece n contact cu saliva se va produce acelai efect ca n cazul dilurii n ap.

b)Propolis brun

O bucic de propolis de mrimea unei alune se suge asemenea unei bomboane, ct putem de mult, aa nct principiile sale active s i fac efectul local. Este un tratament recomandat n infecii la nivelul gurii, n faringite i n amigdalite. Dezavantajul acestei metode const n faptul c propolisul nu are o aciune ampl, asupra ntregului organism, ci doar local. Un alt inconvenient este c propolisul ader foarte puternic pe dantur, necesitnd apoi o splare ndelungat i repetat.

C)Unguentul de propolisntr-o cecu (50 ml) de untur ncins pe foc foarte mic se pun trei linguri de tinctur de propolis i o bucic de cear de mrimea unei alune, dup care se amestec continuu vreme de 10 minute. Se ia de pe foc untura, dup care se amestec n continuare pn cnd se ntrete. Preparatul se pstreaz la frigider, folosindu-se extern contra arsurilor, pentru vindecarea contuziilor i a rnilor uoare, contra eczemelor (mai ales a celor uscate).

d) Apa de propolisAa cum afirmam anterior, n contact cu apa, propolisul precipit i devine insolubil, pierznd astfel cea mai mare parte din calitile sale. Totui, cercetrile arat c o soluie obinut din cinci lingurie (aprox. 25 ml) de tinctur de propolis la un pahar de ap (200 ml) are efecte terapeutice n anumite cazuri, cnd tinctura simpl nu poate fi folosit, deoarece are o aciune prea dur asupra esuturilor. Apa de propolis, obinut n proporiile pe care le-am prezentat, are efecte excelente n combaterea stomatitelor i a cariei dentare (se fac cltiri atente ale gurii dup fiecare splare pe dini), precum i n tratarea unor afeciuni genitale la femei (leuco0ree, cervicit).

e)Aerosoli cu propolis

f)Sirop de propolis:Se prepara dintr-o lingurita de propolis brun maruntit in 250 ml de apa care se pune la fac pana scade la jumatate apoi se strecoara se indulceste cu 2 linguri de miere si se consuma cu mare eficacitate in combaterea tusei ( 3/zi).

g)Sprei de propolis:Se pulverizeaza da la distanta da 10-15 cm in tratarea unor afectiuni externe.

h)Pulbere de propolis:Se obtine prin razuirea propolisul brut si se pastreaza intr-o cutie inchisa ermetic pentru a fi utilizata in tratarea ranilor si arsurilor mari.

i)Extract alcoolic de propolis:Se ia 150 g propolis brun pulverizat fin care se pune la macerat,in intuneric cu un litru alcool agitand zilnic.Dupa 7 zile se strecoara prin tifon si se trece in sticlute brune pentru pastrare timp indelungat.Se consuma cate 20/40 de picaturi in 100ml lapte sau apa calda,cu o ora inainte de mase.Are efecte in reglarea tensiunii arteriale.Pusa pe gingia dureroasa sau pe maseaua cariata,alina durerea si impiedica infectia.j)Ceai de propolis:k)Granule de propolis :Propolisul de la albine are proprietati anti-bacteriene si anti-virale care au capacitatea de a intari si de a imbunatati sistemul imunitar.Intr0un studiu publicat in nr din august 2010 al ''Phytotherapy Research'' oameni de stiinta arata ca propolisul poate modifica sau reglementa in bine sistemul imunitar.In timpul acestiu studiu subiectii care au primit propolis de la albine au avut un nivel mai ridicat de proteine si compusi care joaca un rol central in reglarea sistemului imunitar.

Propolisul i extractele de propolis

Introducere

Dezvoltarea societii umane a permis cunoaterea unor resurse naturale deosebit de valoroase produsele albinelor. Muli vindectori din antichitate au folosit mierea, polenul cules de albine, propolisul i lptiorul de matc, ceara de albine i veninul pentru tratarea unor boli.

n epoca modern, studiile i cercetrile efectuate asupra resurselor naturale capabile s asigure organismului uman echilibrul nutriional i buna funcionare, au evideniat valoarea biostimulent, nutritiv i terapeutic a acestor valoroase produse. ntre acestea, propolisul reprezint la ora actual una din cele mai puternice provocri pentru lumea nutriionitilor i cea medical.

Calitile curative ale propolisului au fost cunoscute nc din vremea antichitii. Produsul era foarte bine cunoscut n Egiptul antic. Cu cteva milenii nainte de Cristos, propolisul era cunoscut de marii preoi, singurii ce posedau cunotine de medicin i de chimie i chiar arta de mblsmare a cadavrelor.

Faptul c propolisul era cunoscut i de grecii antici este dovedit de nsi denumirea greac a produsului : pro naintea , polis cetate. Exist o dovad foarte veche ce face aluzie direct la propolis. Faimosul filosof grec Aristotel care dorea s cunoasc ndeaproape activitatea albinelor a construit un stup transparent. Albinele nu au vrut ns s-i dezv luiasc secretul i au acoperit partea interioar a peretelui transparent cu o substan de culoare nchis probabil propolis.

Originea propolisului a fost obiectul unei polemici ntre doi scriitori romani Plinius i Dioscoride. Primul credea c albinele recolteaz propolisul din rinile secretate de mugurii de salcie, de plop, de castan i de la alte plante, n timp ce cel de-al doilea afirma c acesta este recoltat din styrax. Mult mai trziu date despre propolis se regsesc n lucrrile lui Galenus i ale lui Varron.

n bine cunoscuta lucrare Canonul tiinei medicale Abu Ali Ibn Sina (Avicenna) vorbete de dou tipuri de cear: ceara pur i ceara neagr. n opinia sa, ceara pur este cea folosit la construcia pereilor fagurilor n care albinele cresc puietul i depoziteaz mierea; ceara neagr este partea de debriuri din stup. Este foarte clar c ceara neagr nu este altceva dect propolisul.

67

Cristina Mateescu, I.F. Dumitru

Aadar, propolisul sau cleiul de albine, n stare natural sau sub form de extracte obinute prin aplicarea unor procedee blnde, reprezint o surs natural deosebit de interesant de produi cu aciune biologic complex i care, aa cum s-a demonstrat, prezint o palet deosebit de larg de aciuni terapeutice, chiar n afeciuni cu care se confrunt civilizaia secolului nostru.

Pe plan internaional, studiile efectuate la nivelul unor cunoscute laboratoare de farmacologie i medicin au confirmat rolul deosebit pe care acest produs al stupului l poate juca pentru organismul uman n profilaxia i tratamentul unor afeciuni.n acest sens, cunoa terea i folosirea empiric i conform tradiiei medicinei populare a cleiului de albine a fost treptat nlocuit de studii tiinifice aprofundate care au confirmat nu numai complexitatea compoziiei sale biochimice ci i efectele deosebite pe care le ofer acest produs natural n prevenirea i tratamentul unor afeciuni degenerative, boli infecioase, virale etc.Descoperirea rolului esenial pe care l deine echilibrul dintre factorii pro-oxidani i sistemele antioxidante n viaa organismelor aerobe n general i a omului n mod special care triete ntr-un mediu deosebit de complex i expus unei palete largi de factori de agresiune a condus la c utarea acelor resurse naturale capabile s asigure un aport cantitativ, dar mai ales calitativ, de compui cu aciune antioxidant care s permit protejarea structurii vitale celulare acidul deoxiribonucleic i ntregul sistem de transmitere a informaiei genetice i membranele celulare. Prin marea afinitate a antioxidanilor fa de radicalii liberi, aceti compui constituie inta preferat a aciunii oxidative, protejnd astfel microstructurile celulare sau ali compui eseniali.

n acest sens, propolisul, care s-a dovedit a fi o surs extrem de interesant din punct de vedere al compoziiei sale n compui cu aciune antioxidant - cu deosebirecompui flavonoizi poate contribui sub form de supliment n alimentaie, la prevenirea la om a mortalitii premature, prin corectarea deficitului din interaciunile dintre antioxidanii endogeni.

n stare natural sau sub form de extracte, tincturi i diferite forme farmaceutice, propolisul reprezint la ora actual pe plan mondial unul dintre cele mai importante mijloace de studiu i de lucru pentru apiterapie.

Aplicarea apiterapiei este cunoscut, aa cum s-a amintit, din vremuri strvechi i astzi, interesul pentru aceast variant a medicinei naturale este din ce n ce mai larg n ntreaga lume.

Prezenta lucrare se constituie ntr-o prezentare general a compoziiei biochimice complexe a propolisului i a extractelor sale precum i a ctorva dintre mecanismele de aciune ale principalelor componente ale acestui produs natural la nivelul organismului uman.

68


I. Noiuni generale despre propolis

1.1. Propolisul i rolul su n cadrul coloniei de albine

Cei ce nu cunosc prea multe despre albine, le asociaz pe acestea adeseori numai produciei de miere. Dar apicultorii tiu foarte bine c albinele, pe lng miere recolteaz i polen, ap i propolis.

Este foarte probabil ca acesta s fie ultimul dintre aceste patru produse ale stupului cu care apicultorii au fcut cunotin. Destul de des apicultorii i dau seama de existena propolisului cnd lucreaz la stupi i observ c pe minile lor sau pe dalt se acumuleaz o substan foarte lipicioas. Aceast substan este n general de culoare brun-rocat i ader puternic la piele. Pentru a ndeprta aceast substan se folosete un solvent de obicei alcool dar benzina sau terebentina sunt la fel de eficiente.

Propolisul se gsete lipit (depus) n fisurile stupului, la capetele ramelor, n gurile din stup i chiar pe prile cu suprafaa neted. n general, albinele nu folosesc propolisul pentru a umple spaiile superioare dar l folosesc ntotdeauna pentru a micora dimensiunile urdiniului.

1.2. De ce recolteaz albinele propolis ?

Propolisul poate fi folosit n stup n 5 scopuri. n primul rnd el este utilizat la astuparea fantelor sau fisurilor din adpostul ocupat de colonia de albine. n al doilea rnd, n regiunile cu climat rece, propolisul este utilizat de ctre albine pentru reducerea urdiniului. Al treilea scop este acela de a face provizii pentru situaiile critice cum ar fi nevoia de a-l combina cu cear pentru a mblsma un oaspete nedorit care a murit n interiorul stupului i care a fost izolat ca ntr-un sarcofag pentru c acesta a fost prea mare sau prea greu pentru a fi evacuat. De multe ori apicultorii gsesc astfel de mumii care pot fi oareci sau oprle ucise i tratate astfel.

n al patrulea rnd propolisul este utilizat de ctre albine pentru fixarea ramelor verticale la baza podiorului. n fine, n al cincilea rnd i poate cel mai important din punct de vedere al proprietilor sale este acela de a acoperi fagurii noi i mai ales interiorul celulelor acestora cu o pelicul fin din aceast substan. Cercetrile au artat c propolisul utilizat pentru aplicarea acestei pelicule poate fi constituit din substane asemntoare diferitelor materii rinoase obinuite recoltate de pe mugurii plantelor i numai puin modificate prin adugarea de enzime secretate de glandele faringiene i mandibulare ale albinelor lucrtoare.

69


Pelicula de substan aplicat de albine pe fagurii noi, pe pereii interiori ai celulelor precum i pe o mare parte din suprafaa interioar a stupului, care adpostete cuibul de puiet a fost denumit de P.W.PHILLIP (1928)[1] balsam. Unii cercettori consider c pentru fabricarea balsamului albinele folosesc polenul ca surs principal de materie prim.

1.3. Recoltarea propolisului de ctre albine

Recoltarea propolisului pare a fi rezervat unui numr restrns de albine lucrtoare care prezint o predispoziie genetic exclusiv. Din numrul total de albine al unei colonii numai cteva sunt angajate n aceast activitate iar acestea nu efectueaz dect foarte rar alte activiti cum ar fi colectarea de nectar i acest lucru nu se ntmpl de obicei chiar dac el este foarte necesar coloniei.Culegtoarele de propolis pot fi deturnate de la eforturile lor i angajate n recoltarea de nectar dac n apropierea sursei de propolis exist o surs de nectar atractiv care conine o cantitate ridicat de zaharuri; n general ns, ele i reiau rapid activitatea de colectare de propolis. Culegtoarele de propolis sunt foarte rar mai n vrst de 15 zile. Din acest punct de vedere ele se aseamn celorlalte lucrtoare din stup.

1.4. Tendina de propolizare la cteva rase de albine

Cercettorii care au studiat albina Apis indica, Apis florea i Apis dorsata, afirm c acestea nu propolizeaz. Acelai lucru se afirm i despre albina african. n lucrarea sa intitulat n cutarea celor mai bune sue de albine: cltorii concludente,[2] clugrul ADAM de la Mnstirea St. Mary, Buckfast, South Devon, Anglia, arat c anumite rase de albine i n particular cele din zona Asiei Mici manifest o tendin foarte puternic de propolizare.

De fapt, acesta vorbete de o albin galben frecvent ntlnit n regiunea munilor Atlas i Sahara, cunoscut sub denumirea de Apis sahariensis. El presupune c aceast albin a fost adus n Orientul Mijlociu de ctre evreii emigrani. Vorbind despre albina autohton din Anatolia Central n Asia Mic, unde iernile sunt foarte aspre, clugrul Adam spune c aceast albin, cunoscut sub denumirea de Apis mellifera var. anatolica utilizeaz propolisul pentru protecie la fel ca toate celelalte specii care fac acest lucru n zonele cu climat foarte aspru. Tot el este cel care spune c :nu se poate spune c n Egipt albinele nu propolizeaz. La Fayum unde se cresc albine italiene, am vzut interiorul

70


stupilor cptuii cu propolis din cel mai rinos. Se cunoate de asemenea c albina gri caucazian de munte are o tendin de propolizare mult mai pronunat dect cea italian.

1.5. Teorii asupra formrii propolisului

La nceputurile activitii de cretere a albinelor, propolisul a fost n general identificat cu ceara. Mai trziu, cercetrile asupra vieii albinelor au artat c propolisul este un material de construcie i de protecie cu care albinele astup orificiile din stup dar care are i alte caliti. Aceasta este perioada n care au aprut ntrebri asupra formrii propolisului.

Primele teorii asupra formrii i originii propolisului au fost foarte simple dar pe msura obinerii de noi cunotine asupra vieii albinelor, acestea au fost respinse astzi ele fiind doar etape parcurse pn la stabilirea teoriilor actuale.n prezent, exist dou teorii privitoare la originea propolisului.

O teorie afirm c albinele recolteaz propolisul din rinile i secreiile de pe mugurii i scoara anumitor arbori din familia rinoaselor i foioaselor din zona de amplasare a stupilor. Adepii acestei teorii afirm c albinele colecteaz propolisul astfel: ntr-o prim etap albinele desprind cu mandibulele o mic bucat de rin sau de secreie pe care o trateaz ulterior prin masticare la nivelul mandibulelor. Materialul astfel recoltat i prelucrat este transportat de picioarele anterioare i medii n corbiculele de polen aflate pe picioarele posterioare. Albinele formeaz deci nite pelote, n acelai mod ca i la polen. Apoi zboar spre stup unde alte albine le ajut s se debaraseze de aceste ncrcturi pe care le transport n locurile n care ele sunt necesare. Principalii adepi ai acestei teorii sunt ROSCH, EVENIUS, BERLEPSCH, CIESELSKI i alii. i ntruct ROSCH a fost cel ce a pus bazele acestei teorii, teoria este cunoscut sub denumirea de teoria lui Rosch. [3]

n 1907, o nou teorie [4] a fost avansat de Dr.KUSTENMACHER care explic formarea i originea propolisului ntr-o alt manier. Conform acestei teorii, propolisul provine din polen; albinele lucrtoare nghit polen i l acumuleaz ntr-o poriune din intestin denumit chylus magen, adic stomac de polen. Procesul propriu-zis de formare a propolisului ncepe prin absorbia unei mari cantiti de ap. Gruncioarele de polen sufer un proces de umflare datorit cantitii de 5 ori mai mare de ap dect propria lor greutate i de dezintegreaz. Din peretele gruncioarelor de polen rezult un balsam pe care albinele l elimin

71


sub form de picturi cu diametrul de 2 pn la 3 mm. Conform prerii Dr. Kustenmacher acest balsam constituie materia prim i esena propolisului.

Trebuie totui remarcat faptul c nu toate gruncioarele de polen sunt de aceeai calitate i o parte dintre acestea nu se dezintegreaz ca urmare a umflrii i din acest motiv ele reprezint un balast n hrana albinelor, de care acestea ncearc s se debaraseze. Din cauza densitii specifice mai reduse, acest balast de polen ajunge n partea posterioar a intestinului unde se combin cu balsamul. Prin micri de unduire ale stomacului de polen, albinele lucrtoare elimin aceast mas de balsam i gruncioare de polen nedigerate pe care o depun pe pereii sau n crpturile stupului. Acolo, materialul capt consisten formnd o mas de culoare galben sau galben-roiatic. Acestui material albinele i adaug nainte de a se modifica praf i impuriti mecanice dnd propolisului o consisten care permite transportul lui dintr-un loc n altul.

Deci, conform dr. KUSTENMACHER propolisul este format din balsamul provenit din prile exterioare ale gruncioarelor de polen pe care albinele l amestec cu cear i alte materiale, impuriti n cantiti variabile.

Cunotinele obinute n domeniul apiculturii de la apariia acestor teorii i pn n prezent susin dar i neag anumite pri sau detalii ale acestora; de aceea este necesar s se fac o analiz critic asupra lor.

Dac polenul este conform teoriei dr. Kustenmacher la baza formrii propolisului ar trebui ca n acesta s se regseasc mai multe substane sub form de compui azotai, zaharuri i lipide pe care polenul le conine n cantiti relativ mari. Rezultatele analizelor chimice nu confirm ctui de puin aceasta tez. n plus, nici una din aceste substane coninute n polen nu a fost identificat n propolis. Multe aspecte fiziologice, morfologice, biologice i anatomice legate de propolis expuse de HAYDAK, EVENIUS i ROSCH contrazic teoria lui KUSTENMACHER. [5]; [6]

n ultima vreme, cercetrile efectuate asupra propolisului au furnizat numeroase date obiective n favoarea teoriei dr. ROSCH. Studiul compoziiei chimice a propolisului au demonstrat clar c baza acestei teorii este mai realist i mai bine fondat.

Conform acestei teorii se susine c mai ales substanele identificate de o manier indiscutabil n propolis se regsesc ntr-una sau mai multe specii de plante vizitate de albine i c secreiile acestor plante pot fi sursa de producere a propolisului.

Un lucru deosebit de important pus n eviden este participarea activ a albinei la formarea propolisului. Prin secreiile sale glandulare pe care le adaug materiilor vegetale se obine propolisul recoltat de apicultor din stup.

72


Se demonstreaz c majoritatea substanelor de natur flavonoid identificate i separate din propolis (GHISALBERTI, 1979) [7] se gsesc n stare liber ca agliconi i nu ca glicoside, form sub care acestea se gsesc n sursele vegetale. Se pare deci c albina dispune n secreiile sale salivare de o substan ce are capacitatea de a descompune glicosidele sau componentele lor principale pe care le transform apoi n propolis i n hran.

1.6. Surse naturale de propolis

Aa cum s-a menionat, componentele propolisului pot fi identificate n sursele vegetale vizitate de albine. Adeseori albinele viziteaz plante din familia coniferelor, plopi (Populus sp.) precum i alte specii: fagul (Fagus sylvatica), castan (Aesculus hippocastanum) pentru a colecta rini de pe scoara i mugurii acestor arbori.

n Europa, principalele surse de propolis cuprind: alunul (Alnus spp.), mesteacnul (Betula spp.), alunul de pdure (Corylus spp.), stejarul (Quercus spp.), plopul (Populus spp.) i salcia (Salix spp.).

n Statele Unite ale Americii, principalele specii sunt plopul i pinul (conifere).

Conform lucrrilor lui KONIG (1985) [8], mugurii de plop reprezint principala surs de propolis n Europa, America de Sud, Asia de Vest i Africa de Nord.

ntre sursele secundare, acelai autor menioneaz: mesteacnul, stejarul, salcia i alunul, iar pentru alte zone geobotanice situaia este urmtoarea: arborele Acacia Karroo n Africa de Sud

Xanthorrhoea pressii i Xanthorrhoea australis n Australia i zonele de climat tropical

Mugurii i scoara arbutilor Plumeria accuminata, Plumeria acutifolia, Schinus terebinthifolius i Psidium guajava n insulele Pacificului, ndeosebi n

Hawaii

Studiile recente asupra originii botanice a propolisului din continentul sud american, mai ales din Brazilia au demonstrat prezena de compui specifici unor plante ca: Araucaria angustifolia, Eucalyptus globulus i Rosmarinus officinalis.

1.7. Proprieti fizice ale propolisului

73


Din punct de vedere al aspectului, propolisul se prezint ca o mas heterogen rinoas de consisten solid, uneori compact ceroas provenind din particule maleabile i aderente, alteori granuloas ori friabil, lund aspectul unor sfrmturi pulverulente. Aceast mas ce prezint o oarecare duritate la temperatura ambiant devine friabil la temperaturi sczute, sub 15C, chiar i pentru sorturile ceroase. La temperaturi ridicate se nmoaie i devine rinos i lipicios, iar n intervalul de temperatur cuprins ntre 60 69C sau dup VELESCU i MARIN (1975), [9] 81 83C. Aa cum s-a mai menionat, propolisul mai este cunoscut i sub denumirea de clei de albine.

Culoarea propolisului este ns deosebit de variabil n funcie de surs vegetal vizitat de albine. Conform studiilor efectuate de RICCIARDELLI DALBORE (1979)[10] pe eantioane de propolis provenind din 5 continente, din diferite regiuni ale acestora a demonstrat c:

propolisul din zonele cu clim temperat prezint o gam de culoare ce variaz de la brun deschis la brun nchis, uneori cu reflexe galben verzui; n Australia i n zonele cu climat tropical culoarea propolisului poate ajunge pn la negru;

propolisul din zonele apropiate de cercul polar (Finlanda) are o culoare portocalie

propolisul cubanez prezint mai multe varieti: rou, brun, verde i violet nchis.

propolisul brazilian are o culoare predominant verzuie cu nuane galben-

brune.

Mirosul propolisului este foarte specific n general, complex, balsamic amintind ceara, mierea i vanilia. i acest parametru este ns variabil n funcie de sursa de cules. Fumul pe care l scoate la ardere poart o arom de balsamuri i rini de cea mai fin calitate (HEGAZI, 1998) [11].Greutatea specific a propolisului variaz mult: se citeaz valori cuprinse ntre 1,033 i 1,145.

Gustul este deasemenea un parametru specific dependent tot de sursa vegetal dar este n general iute, arztor.

Solubilitate - Propolisul este insolubil n ap i parial solubil n alcool, aceton, eter, cloroform, propilenglicol, benzen, dimetilsulfoxid, etilendiamin. n funcie de temperatur, variaz nu numai viteza de dizolvare ci i trecerea n soluie sau nu a unor fraciuni cum ar fi de exemplu ceara care se dizolv n alcool fierbinte, dar este greu solubil n alcool la rece.

74


Reziduurile de la dizolvare cuprind n majoritate impuriti i corpuri strine, alturi de una sau sau mai multe dintre fraciunile care rmn parial solubile sau insolubile, n funcie de selectivitatea dizolvantului.

Trecerea parial ntr-un anumit solvent este luat n considerare att la obinerea extractelor de propolis, ct i la stabilirea calitii propolisului prin aprecierea substanelor solubile, proporia acestora putnd fi dat ca indice de control calitativ n farmaceutic. Conform prerii lui POPRAVKO (1975)[12], caracteristic este solubilitatea ntr-un amestec de cloroform + aceton (2+1).

75


2. Compoziia chimic a propolisului

2.1. Compoziia general a propolisului

n compoziia chimic a propolisului brut au fost semnalate n principal rini, ceruri, uleiuri volatile, polen, glucide, aminoacizi, vitamine, enzime, sruri minerale i impuriti.[7, 11]

Un tablou general de compoziie cantitativ prezint urmtoarele concentraii ale grupelor majore de substane:

55% rini i balsamuri (balsamurile sunt definite ca substane naturale lichide sau semi-lichide obinute de obicei prin metode speciale din scoara unor arbori

OPRIS, 1990) [13] 7,5 35% ceruri de natur vegetal cu solubiliti diferite i cear de albine (cerurile sunt ntotdeauna prezente n compoziia propolisului)

10% uleiuri volatile (eseniale) sunt compui caracterizai de obicei prin prezena unor arome specifice

5% polen 5% acizi grai 4,40 19% impuriti terpene vitamine: A, B, E, PP

oligoelemente: aluminiu, argint, crom, cobalt, fier, magneziu, etc. aminoacizi liberi: prolin i arginin substane taninice, secreii ale glandelor salivare de la albine i componente prezente n mod accidental n propolis (achii de lemn, fragmente de corp de albin etc.

n propolis se poate gsi un numr foarte mare de compui. n 1990 GREENAWAY et al., [14] a constatat c n timp ce exudatele de pe mugurii diferitelor specii de plop sunt frecvent asemntoare din punct de vedere al compozi iei calitative, acestea pot fi foarte diferite din punct de vedere cantitativ, diferene ce se regsesc la nivelul compoziiei propolisului n care este incorporat exudatul respectiv. Aceste variaii cantitative pot fi uneori considerabile.

2.2. Compoziia calitativ a propolisului

Se poate afirma c n general, orice compus identificat n exudatele vegetale pe care le colecteaz albinele, poate fi regsit n propolis.

Cea mai mare parte a componentelor prezente n exudatele vegetale sunt incorporate n propolis fr a fi alterate, dei este posibil ca unele glicozide s fie supuse unei hidrolize enzimatice efectuat de albine prin secreiile lor salivare n timpul colectrii exudatelor sau n cursul adugrii de cear pentru obinerea propolisului.

76


Conform autoarelor WALKER i CRANE ( 1987) [15], compuii individuali sunt prezeni n unul sau mai multe eantioane de propolis care provin de la una sau mai multe specii vegetale; unii compui sunt probabil prezeni n toate eantioanele de propolis i contribuie la proprietile sale caracteristice; unii compui pot fi prezeni n multe eantioane de propolis de origini diferite, dar alii aproape sigur sunt prezeni numai n propolisul recoltat dintr-o anumit specie vegetal.

Studiile de spectroscopie n infra-ro u au relevat prezena n diferitele sorturi de propolis a urmtoarelor grupuri de radicali organici (MAKASHVILI, 1978) [16]: legturi duble C-C gruparea CH a nucleului furanic gruparea carbonil

gruparea CH2-O-CH2 grupul furan gruparea ariloxi n compui ce conin gruparea metoxi grupurile (CH3)2C i (CH3)3C gruparea =C-OH

sisteme ciclice aromatice sisteme aromatice gruparea delta-lacton a butandienolilor grupri CH3 i CH2 gruparea CH aromatic grupri OH asociate hidrogenului molecular monooxiflavone care nu conin grupri OH n poziiile C3 i C5 inele piranice cu C, H beta (antrachinone cu 3 grupri alfa)

2.3. Principalele grupe de substane izolate din propolis

Constituenii farmacologic activi din propolis se g sesc n fraciunile solubile n diferi i solveni organici, cum este cazul alcoolului etilic principalul solvent utilizat la obinerea de extracte de uz farmaceutic.

Cei mai importani sunt flavonoizii n grupa c rora intra flavonele, flavonolii i flavanonele precum i diferii compui fenolici i aromatici.

Din punct de vedere biochimic flavonoizii sunt derivai ai benzo-gamma-piranului prezeni n toate celulele vegetale apte de fotosintez. Localizai n membrana tilacoid a cloroplastelor, aceast grup de compui particip n calitate de catalizatori n lanul transportor de electroni n faza luminoas a fotosintezei i/sau ca reglatori ai canalelor ionice implicate n procesele de fosforilare. Acest lucru are o semnificaie deosebit din punct de vedere al activitii lor chimice. Larg reprezentai n regnul vegetal, pn n prezent au fost recenzai peste 100 de reprezentani.

77


Cnd celulele vegetale mor, flavonoizii sunt deversai n sucurile, sevele, rinile i chiar n nectarul recoltat de insecte (un astfel de exemplu este pinocembrina incorporat n miere care contribuie la activitatea antibacterian a acesteia).

Produsele lor de degradare sunt n mare msur responsabile de colorarea frunzelor copacilor toamna.

Tabel nr.1

Flavonoizi din propolis

Denumirea comunDenumirea biochimic

Flavone

Crizin5,7-dihidroxiflavon

Tectocrizin5-hidroxi-7-metoxiflavon

Galangin3,5,7-trihidroxiflavon

Galangin-3-metil eter5,7-dihidroxi-3-metoxiflavon

Acacetin5,7-dihidroxi-4-metoxiflavon

Isalpinin3,5-dihidroxi-7-metoxiflavon

Kaempferol3,5,7,4-tetrahidroxiflavon

Luteolin5,7,3,4-tetrahidroxiflavon

Kaempferid (kaempferol-kaempferol-7,4-dimetil eter)

Rhamnocitrin3,4,5-trihidroxi-7-metoxiflavon

Ermanin5,7-dihidroxi-3,4-dimetoxiflavon

Pectolinarigenin5,7-dihidroxi-4,6-dimetoxiflavon

Quercetin3,5,7,3,4-pentahidroxiflavon

Quercetin-3,3-dimetil eter

Quercetin-3,7-dimetil eter

Betuletol

Apigenin5,7,4-trihidroxiflavon

Apigenin-7-metil eter

Rhamnazin

Rhamnetin

Isorhamnetin

Alnusin

Fisetin

Flavanone

Alpinetin

Alnustinol

Pinocembrin

Pinostrobin

Pinobanksin

3-acetil-pinobanksin

pinobanksin-3-butirat

pinobanksin-3-hexanoate

pinobanksin-3-metil eter

sakuranetin

isosakuranetin5,7-dihidroxi-4-metoxiflavanon

naringenin5,7,4-trihidroxiflavanon

78


Conform studiilor lui PAPAY i col., (1985)[17] i DONADIEU (1994) [18] flavonoizii din propolis pot fi clasai n:Flavone: acacetin crizin tectocrizin apigenin pectolinarigenin etc. Flavonoli:

galangin galangin-3-metil eter isalpinin kaempferid kaempferol

quercetin quercetin-3,3-dimetileter

rhamnocitrin rhamnetin isorhamnetin Flavonone:

pinostrobin sakuranetin Flavononoli:

pinobanksin etc.

Datele din care rezult c flavonoidele din propolis sunt bine reprezentate cantitativ, iar sub acest aspect ele capt importana unor componente principale, cu proporii de 15-20%, au fost publicate abia recent (POLINICENCU i col., 1981)[19]. Astfel de concentraii flavonoidice au fost determinate de autori i n mostre reprezentative de propolis din Ungaria i Uruguay.

Crizina sau 5,7-dihidroxiflavona sau 5,7-dihidroxi-2-fenilcromona a fost fost descoperit n 1927 de G.T.JAUBERT[20] att n propolis ct i n mugurii de plop, ea fiind prezent, de asemenea, n miere i n cear. Cu toate c nu este singurul flavonoid de culoare galben din amestecul prezent n propolis, cear, miere fiind din punct de vedere cantitativ componenta majoritar a fost la nceputuri singura semnalat i astfel culoarea galben a cerii de albine i a mierii se atribuia numai crizinei.

Tectocrizina sau tectogenina, a crei prezen n propolis a fost semnalat de G.T.JAUBERT [20] este 7-metil-eterul crizinei. n studiile ulterioare efectuate

79


asupra acestui compus au demonstrat proprietile sale diuretice, pentru care s-a eliberat un brevet de invenie SUA din 1964, al firmei Laroche Navarron, autor PERRAULT (1976) [21].

Galangina este flavonolul crizinei, adic 3-hidroxicrizina. Concentraia sa n propolis o plaseaz alturi de crizin, ntre bioflavonoizii bine reprezentai cantitativ. Ea a fost evideniat de VILLANUEVA i col., (1964) [22] iar n mugurii de plop diferite specii de EGGER i col., (1969) [23].

Izalpinina a fost prima dat evideniat n propolis de VILLANUEVA i col., n 1964 [22].Pinocembrina i datoreaz numele descoperirii sale n mugurii speciei Pinus cembra (Pinaceae) de ctre ERDTMAN (1946)[24]. Ca i crizina, pinocembrina este prezent ntre componentele rinii de pe mugurii de plop. Ca structur este flavanona corespunztoare crizinei.

Pinostrobina, descoperit n 1946 n mugurii speciei Pinus strobus apoi separat i din specia Prunus avium (Rosaceae).

Pinobanksina este 3-hidroxi-pinocembrina, adic un flavanonol din seria flavonoidelor specifice din propolis, caracterizate prin lipsa oricrei funciuni fenolice pe inelul B. A fost descoperit n compoziia unor specii de Pinus ntre care Pinus banksiana. Abia n 1979, SCHNEIDEWIND i col.,[25] o citeaz n propolis.

3-acetatul de pinobanksin este la rndul su identificat n totalul flavonoidic al propolisului i pare s nu fi fost identificat n vreo plant.

Exist opinia conform creia principiile active cel mai bine reprezentate cantitativ i ntotdeauna prezente n propolis, implicit susceptibile de a da cele mai constante i mai caracteristice efecte farmacologice ale acestui produs, sunt bioflavonoidele care au ca particulariti de structur starea liber, de compui de neglicozidai, precum i lipsa vreunei funcii fenolice n inelul B.

Este poate important de menionat faptul c toate aceste componente menionate, fr excepie, se regsesc n compoziia chimic a multor specii de Pinus, rspndite n cele mai ndeprtate i variate regiuni de pe glob i mai ales n mugurii de pin, la rndul lor utilizai pretutindeni pentru proprieti terapeutice bine cunoscute. Pe de alt parte, este cunoscut i utilizarea rinii unor muguri, ca cei ai speciilor Populus, Prunus, ca materie prim pe care albinele o asociaz unor ceruri i altor componente, la elaborarea propolisului. Este de asemenea e adugat c i mugurii de plop sunt medicinali i mpreun cu mugurii de prun i de Zingiberaceae sunt depozite de astfel de bioflavonoizi.Ali compui flavonoidici prezeni n propolis n cantiti mai mici sunt: acacetina sau linarigenina izolat de POPRAVKO (1975) [12]; 7-metil-eterul-acacetinei, separat din mugurii de Betula verrucosa;

80


campferida izomer de poziie al rhamnocitrinei identificat de POPRAVKO (1969) [26];

pectolinarigenina sau 6-metoxi-acacetina sau 6-metoxi-linarigenina,

4-metil-eterul-sakuranetinei o flavanon a crei origine i structur se afl n pinostrobin de la care deriv prin metoxilare a fost semnalat n propolis de ctre METZNER i col., (1975) [27].

Toate aceste flavonoide semnalate frecvent n propolis sunt prezente sub form de agliconi i care au ca specificitate prezena de funciuni fenolice libere, reactive, grefate pe inelul B.Cvercetina (quercetina) agliconul rutozidei i al mai multor alte glicozide flavonoidice este foarte rspndit n regnul vegetal. A fost descoperit n stare pur de PERKIN i HUMMEL n 1896 [28] n hamei Humulus lupulus i n cojile de ceap (Allium cepa). Este utilizat n terapie, alturi de alte bioflavonoide, ca substan activ pentru meninerea strii normale a vaselor sanguine prin descreterea permeabilitii i fragilitii capilarelor BUDAVARI (1989) [29]

Alte grupe de compui prezente n propolis sunt chalconele i dehidrochalconele, acizi alifatici i esterii lor, uleiuri volatile cu caten scurt i esteri ai acestora, acizi aromatici i esteri ai acestora, acid benzoic i derivai ai acestuia, aldehide, alcooli, acid cinnamic i derivaii acestora, ali acizi i derivai, cetone, fenoli i ompui heteroaromatici, terpene, alcooli sesquiterpenici i derivai ai acestora, terpenoizi i ali compui, hidrocarburi sesquiterpenice i triterpenice, compui volatili, hidrocarburi (C21-C33), hidrocarburi alifatice, steroli i hidrocarburi steroidice, zaharuri, lactone, aminoacizi, derivai de acizi nucleici, vitamine, minerale, transhidrogenaze anaerobe, substane donoare de H.

ntre chalcone i dehidrochalcone GREENAWAY i col.,(1990) [14] se pot meniona:

chalcona alpinetinei

chalcona pinostrobinei

chalcona pinocembrinei

chalcona pinobanksin-3-acetatului

chalcona sakuranetinei

2,6 dihidroxi-4-metoxi dihidrochalcona

Acizi alifatici i esteri ai acestora (GREENAWAY i col., 1990) [14]: acid butiric, 2-metoxi-butiric, succinic, crotonic, angelic,, fumaric, behenic, acetic, benzil-acetat, izobutil-acetat, izopentil-acetat, izopentenil-acetat,

acid palmitic, cerotic, montanic, stearic, oleic, linoleic, miristic, lignoceric,

81


Uleiuri volatile cu caten scurt:

acid butiric, acid 2-metil-butiric

acid crotonic

acid angelic

acid acetic

acid izobutiric

Esteri ai uleiurilor volatile cu caten scurt:

izobutil-acetat

izopentil- acetat

izopentenil-acetat

Acizi aromatici i esteri ai acestora:

acid benzoic

benzil-benzoat

acid protocatechic

acid veratric

etil-benzoat

metil-salicilat

benzil-salicilat

acid hidroxibenzoic

acid vanilic

acid p-anisic

metil-benzoat

cinnamil-benzoat

acid hidroxicinnamic

acid cinnamic

acid metoxicinnamic

acid p-metoxicinnamic

acid 3,4-dimetoxicinnamic

benzil-3,4-dimetoxi-cinnamat

acid caffeic i esteri acid cumaric, acid p-cumaric i esteri ai acestora acid ferulic, acid izoferulic i esteri ai acestora derivai ai acidului benzoic: acid salicilic, acid gentisic, protocatechic, acid galic

82


Aldehide: benzaldehid aldehid protocatechic p-hidroxibenzaldehid vanilin izovanilin aldehid caproic

Alcooli:

alcool cinnamic

alcool benzilic

hidroquinon alcool prenilic

izobutenol

alcool fenetilic

alfa-glicerofosfat

beta-glicerofosfat

glicerol

Ali acizi i derivai ai acestora:

esterul metilic al acidului 2,8-dimetilundecanoic

esterul fenilmetilic al acidului 14-metilpentadecanoic esterul etilic al acidului palmitic

acid sorbic

esterul butil-2-metilpropilic al acidului ftalic

metil esterul acidului alnustic

Cetone, fenoli i compui heteroaromatici: acetofenon i derivai

p-acetofenol i derivai eugenol

pterostilben

xanthorrhoeol

cumarin esculetol

scopoletol

pinosilvin trigliceride fenolice

83


Alcooli terpenici, sesquiterpenici i derivai:

geraniol

nerolidol

guaiol

farnesol

dihidroeudesmol

beta-bisabolol

alfa-acetoxibetulenol

Terpenoide i ali compui:

cimen

limonen

alfa-copaen

stiren

1,8-cineol

Hidrocarburi sesquiterpenice i triterpenice:

beta-burbonen

cariofilen

patchoulen

selen etc.

Hidrocarburi alifatice: eicosan, eicosin, heneicosan 1-octadecen tricosan

pentacosan

Steroli i hidrocarburi steroidice:

cholestrilen

cholinasterol

stigmasterol

beta-dihidrofucosterol

lanosterol

colesterol

Zaharuri: d-ribofuranoz

d-fructoz d-glucitol

84


d-guloz taloz zaharoz d-glucoz polizaharide

Aminoacizii determinai cantitativ 16 (KARDAKOV, 1980) [30] sau 24 (GABRYS, 1986) [31] au ca reprezentani semnificativi acidul piroglutamic, arginina i prolina. Proveniena acestora n propolis este pus att pe seama polenului dar i a secreiilor salivare ale albinelor.

Acelai lucru se poate afirma i despre prezena vitaminelor cu reprezentani: B1, B2, B6, C, E, acid nicotinic, acid pantotenic, vitamina A.

Elementele minerale sunt determinate din reziduul obinut dup calcinarea propolisului. n diferite eantioane de propolis provenind din diferite regiuni ale globului, VANHAELEN i VANHAELEN-FRASTRE (1979) [32] au determinat urmtoarele proporii: 0,51-0,86% n mostre din Frana, 0,55% - China, 0,67% - SUA, 0,68%- Australia.

Principalii reprezentani ai acestora sunt: sodiul (Na), potasiul (K), magneziu (Mg), calciul (Ca), bariu (Ba), bor (B) urme, stroniu (Sr), zinc (Zn), cadmiu (Cd), aluminiu (Al), siliciu (Si), plumb (Pb), - urme (datorate mai ales polurii din traficul rutier sau prin amplasarea stupinelor n aceste zone sau zone industriale), seleniu (Se) urme, fer (Fe), nichel (Ni), crom (Cr), mangan (Mn), titan (Ti), argint (Ag), cupru (Cu), cobalt (Co), molibden (Mo), vanadiu (V).

Substanele rinoase. Dei n datele curente de specialitate nu sunt informaii foarte clare despre izolarea fraciunii rinoase din propolis i caracterizarea ei, prezena rinilor nu este pus la ndoial de nimeni. Multe dintre proprietile propolisului se pot raporta la coninutul mare de rini. Se citeaz i prezena unor acizi rezinici, ca acidul abietic i acidul pimaric care fac parte din constituenii cei mai caracteristici ai rinilor naturale.

Alte componente amintite deja, frecvent ntlnite n rini, ca acidul benzoic, acidul cinamic, acidul ferulic, acidul cafeic, cumarine i triterpenoide pentaciclice au fost identificate n propolis. Acidul benzoic atinge 1,33-20% (BRILEANU i col., 1978)[33] i alturi de acidul cinamic este una dintre substanele cele mai caracteristice din rina de Styrax benzoin de la care i trage numele, fiind totodat o component comun a mai tuturor rinilor de pe muguri, ca i acizii ferulic i cafeic.

Cercetarea esterilor aromatici din propolis de tipul celor citai anterior i chiar mai complicai ca structur (prin identificarea unor acizi polifenolici esterificai) a condus la descoperirea deosebit de valoroaselor proprieti

85


antimicrobiene ale propolisului, prin prezena sau absena lor, putnd fi explicat inconsecvena de activitate antimicrobian a diferitelor sorturi de propolis (METZNER i col., 1975, 1977, 1978) [27, 34, 35].

Din punct de vedere cantitativ, fraciunea rinoas se consider c reprezint cca. 55% din propolis, cu men iunea cuprinderii n aceast frac iune i a unor balsamuri. Se tie c balsamurile se definesc ca amestecuri de r ini i uleiuri volatile (eseniale) n care ultimele, ca regul general, trebuie s fie n proporie de cel puin 40%. Este posibil ca numai mirosul balsamic al propolisului s fi generat aceast exprimare deoarece studiile efectuate nu au relevat prezena de uleiuri volatile n astfel de proporii.

3. Extracte de propolis tehnologii de obinere a extractelor standardizate

3.1. Tehnologia prelucrrii propolisului

Aa cum se poate observa din prezentarea compoziiei chimice a propolisului, principalele grupe de componente ale propolisului brut, n ordinea descrescnd a concentraiilor, sunt: substanele rinoase, ceara, bioflavonoizii, impuritile i corpurile strine, srurile minerale, vitaminele, enzimele etc.

Fiind un amestec att de complex, primele ncercri de caracterizare a acestuia au avut ca scop fracionarea sa.

Urmare a extraciei alcoolice se obine aa numita fraciune rezinic. Dup extracie rmne fraciunea insolubil n alcool sau fraciunea de ceruri.

Fraciunea cunoscut sub denumirea de balsam se refer la componentele ce pot fi extrase cu alcool de concentraie 70%.

Propolisul brut este supus mrunirii la dimensiuni a particulelor ct mai mici pentru a se putea mri suprafaa de contact a solventului cu materialul extractibil. Pentru a facilita mrunirea, dar i pentru a pstra ct mai bine fraciunea volatil de compui, propolisul este pstrat la temperaturi foarte sczute

chiar congelat dup care este mcinat (devenind friabil). n instalaii speciale specifice industriei farmaceutice instalaii de extracie percolatoare, produsul este supus extraciei cu alcool etilic absolut la temperatura ambiental. Alcoolul etilic absolut prezint avantajul unei foarte bune selectiviti . extrgnd cel mai bine flavonoidele i substanele rinoase, eliminnd din extract ceara. Prin acest procedeu se obine totui o mic fraciune de cear, solubil n alcool, respectiv ceroleina, care ns n propolis nu este prezent dect n cantiti de 0,78 1,63% (POLINICENCU i col., 1981, 1984) [19, 36].

86


Capacitatea extractiv a etanolului absolut este secondat de alcoolul etilic de 70, aceton, metanol, alcool etilic de 50, cloroform i clorura de metilen.

Tehnologia de preparare prin aplicarea acestei metode urmrete realizarea a dou variante : un extract fluid cu coninut de 10% bioflavonoide exprimate n crizin i un extract uscat cu coninut de 5% bioflavonoide exprimate n crizin (POPESCU i col., 1985) [37].

Prepararea extractului de propolis fluid standardizat cu 10% bioflavonoide exprimate n crizin tehnologie I.C.C.F-Cluj-Napoca

n principiu procedeul de preparare a EPS fluid se bazeaz pe obinerea unei soluii extractive din propolisul brut, concentrarea acestei soluii sub presiune sczut, la temperaturi mai mici de 50C i standardizarea extractului obinut la concentraia de 10% bioflavonoide exprimate n crizin.

Un detaliu important n obinerea EPS fluid este calitatea propolisului brut luat n lucru: propolisul trebuie s fie de uz medicinal caracterizat deci prin lipsa corpurilor strine (impuriti) vizibile cu ochiul liber i printr-un coninut minim de 15% bioflavonoide specifice.

Cercetrile efectuate au demonstrat necesitatea combinrii a dou procedee exxtractive: macerarea repetat i percolarea. Utiliznd numai macerarea repetat, extracia principiilor active din propolis nu este cantitativ. La aplicarea combinat a percolrii se obine extragerea cantitativ a principiilor active, operaia ns decurgnd foarte ncet datorit coninutului ridicat de substane rinoase din propolis i a colmatrii filtrelor. Deaceea aplicarea preliminar de macerri repetate i apoi a percolrii conduc la cele mai bune rezultate.

n vederea extraciei, propolisul brut trebuie mrunit la fineea sitei cu latura ochiurilor de 6,3 mm (sita I, FR.IX.). Mrunirea se realizeaz cu ajutorul unor dispozitive mecanice de tiere i rzuire. Deoarece n timpul acestei operaiuni propolisul se nclzete i devine plastic, se recomand nghe area (rcirea) propolisului brut prin meninerea 6 12 ore la temperaturi cuprinse ntre 10 20C, cnd acesta devine casant, iar operaiunea se desfoar cu mai mult uurin.

Propolisul mrunit se supune la trei macerri repetate, fiecare a cte 24 ore, ntr-o prim etap utilizndu-se o cantitate dubl de alcool concentrat fa de cantitatea de propolis luat n lucru, apoi nc de dou ori cu o cantitate egal de alcool fa de cantitatea iniial de propolis. n timpul macerrii, soluia se agit ocazional. Soluiile extractive obinute se decanteaz, se filtreaz i se reunesc.

Materia prim extras par ial prin macerare repetat, este supus, n continuare, extraciei prin percolare. Reziduul de la macerarea repetat se introduce n percolator, se acoper cu alcool, se elimin aerul i se regleaz astfel viteza de curgere a percolatului, nct n 24 de ore s se percoleze 1,5 pri fa de cantitatea

87


de propolis introdus n percolator. Se continu percolarea pn la epuizarea propolisului, respectiv pn la obinerea unui lichid de culoare slab glbuie, cu indicele de refracie cuprins ntre 1,3720 1,3655. Soluia extractiv obinut prin percolare se colecteaz separat de soluia extractiv obinut prin macerare repetat.

Faza urm toare cuprinde determinarea concentraiilor de bioflavonoide ale celor dou soluii extractive obinute prin macerare repetat i respectiv prin percolare, stabilindu-se volumul aproximativ la care trebuiesc concentrate pentru a realiza extractul fluid cu coninutul standard de 10% bioflavonoide specifice.

Concentrarea soluiilor se face la presiuni reduse i temperaturi care s nu depeasc 50C. Cele dou concentrate obinute se omogenizeaz , se determin coninutul de bioflavonoide i se aduce extractul fluid la concentraia final de 10% bioflavonoide exprimate n crizin. (Figura 1)

Alcoolul etilic concentrat, recuperat prin distilare, se poate utiliza la o nou extracie.

Prepararea EPS uscat cu 5% bioflavonoide exprimate n crizin (tehnologie ICCF- Cluj Napoca)

Obinerea EPS uscat se face pornind de la EPS fluid; acesta se adsoarbe pe o pulbere inert, se usuc, se pulverizeaz i se aduce la concentraia de 5% bioflavonoide specifice. Dintr-o parte EPS fluid se obine 2 pri EPS uscat.Procedeul de preparare este urmtorul: se amestec 1 parte EPS fluid cu 1,5 pri pulbere adsorbant (amidon). Amestecul obinut se ntinde pe tvi i se usuc la temperaturi sub 50C, iar dac este posibil i la presiune redus. Extractul uscat obinut se pulverizeaz, se omogenizeaz, se face determinarea cantitativ a flavonoidelor i se aduce la concentraia de 5% principii active exprimate n crizin, adugndu-se pulbere adsorbant. Extractul uscat se reomogenizeaz i se aduce n final la fineea sitei cu laturile ochiurilor de 250 (sita VI, FR.IX).

Tehnologia de obinere a extractului moale (spiss) de propolis pentru uz farmaceutic (tehnologie original ICDA-Bucureti) (PALO i col., 1975) [38]

Toate produsele cu destinaie terapeutic pe baz de propolis realizate pentru prima oar n lume n Romnia, folosesc ca materie prim activ extractul de propolis spiss (moale). Prin extract moale (spiss) de propolis se nelege preparatul obinut prin extracia selectiv a principiilor active din propolis cu ajutorul alcoolului etilic utilizat ca solvent i concentrarea soluiei extractive obinute pn la realizarea unei mase vscoase care prezint cel mult 20% solveni.

88


Procesul tehnologic de fabricaie a extractului de propolis spiss cuprinde urmtoarele etape:

selectarea propolisului ( acesta nu trebuie s conin un procent ridicat de cear, impuriti sau semne de degradare); mrunirea blocurilor de propolis pn la o granulare de 2-4 mm care permite creterea suprafeei de contact cu solventul facilitnd extracia. Mrunirea propolisului este o operaie foarte dificil avnd n vedere consistena sa dur, lipicioas, care face ca echipamentele folosite n mod obinuit n acest scop s nu dea rezultate pozitive. Procesul se mrunire se face n dou etape: mrunirea blocurilor de propolis pn la dimensiuni de 20-30 mm, dup care granulele mari sunt aduse la dimensiunea de 3-4 mm. Pentru prima operaiune se folosete o pres mecanic de 150 kg/cm la care se adapteaaz tane cu cuite din oel foarte dur. Pentru faza a doua se folosete o moar cu cuite prevzut cu un tambur robust, mobil, pe care sunt fixate cuitele i care n timpul rotirii tamburului trec printre cuitele unei plci fixe.

Macerarea: extracia principiilor active din propolis se realizeaz cu alcool etilic de 90 n arje formate din 70 litri alcool i 30 kg propolis n granule. Materiile prime se introduc ntr-un extractor din inox cu perei dubli prin care circul ap cald la temperatura de 40C. masa este agitat mecanic cu un agitator de turaie mic (1 rpm); folosirea agitrii i a temperaturii moderate accelereaz i mbuntete procesul de extracie; dup 48 ore se obine o cantitate de 75-80 kg extract fluid de propolis care este supus filtrrii;

Filtrarea se execut n scopul separrii reziduurilor nedizolvate. ntr-o prim faz se aplic o decantare, apoi filtrare grosier printr-un filtru de vid tip nuce i n final o filtrare fin prin hrtie de filtru la aparat prevzut cu pomp de vid.

Concentrarea extractului const n reducerea cantitii de solvent pn la limita de 20% i recuperarea acestuia cu ajutorul unui aparat de concentrare la vid. Aparatul este format dintr-un blaz de distilare, din tabl de inox, cu perei dubli prin care circul ap nclzit la temperatura de 70-80C. evaporarea la vid i nclzirea moderat asigur conservarea principiilor active ale propolisului n condiiile unei concentrri rapide. Vaporii de solvent trec din blazul de distilare ntr-un condensor format dintr-o serpentin cufundat n ap rece cu circulaie continu; condensatul recuperat se colecteaz ntr-un vas special la care este conectat pompa de vid.

Verificarea calitii produsului se face prin determinarea densitii care este cuprins ntre 1,096 - 1,159, identificarea flavonelor conform specificaiilor din farmacopee i identificarea acizilor aromai. Extractul de propolis spiss este caracterizat din punct de vedere calitativ i cantitativ prin determinarea concentraiei n flavonoizi totali exprimai n quercetin, procedeu aprobat de Agenia Naional a Medicamentului.

89


Tehnologia de obinere a extractului de propolis hidrosolubil liofilizat procedeu original brevetat la ICD Apicultur Bucureti

Extractul de propolis moale (spiss) este folosit ca materie prim pentru obinerea extractului hidrosolubil liofilizat produs obinut printr-un procedeu original i care permite solubilizarea propolisului n solveni apoi cu destinaie terapeutic ap distilat, ser fiziologic, solveni specifici cu destinaie n oftalmologie, etc.(OITA i col., 1981) [39]

Principiul metodei de preparare se bazeaz pe solventarea compuilor activi din propolis ntr-un solvent organic (etilendiamin sau dietilaminoetanol), solubilizarea extractului obinut n soluie fiziologic, filtrarea reziduurilor de cear, i apoi liofilizarea extractului n flacoane de tip antibiotic. Extractul hidrosolubil obinut se prezint sub forma unei mase de consisten spumoas care se solubilizeaz n orice proporie cu apa distilat, serul fiziologic i solveni apoi specifici destinaiei terapeutice pentru care este folosit.

Cu acest extract hidrosolubil se prepar soluii pentru aerosoli n tratamente ORL i bronhopulmonare precum i soluii i aerosoli de uz oftalmic.

3.2. Solventarea principiilor active din propolis

Prin aplicarea metodelor de nalt performan cromatografie lichid (HPLC) (BANKOVA i col., 1982) [40] gaz-cromatografie cuplat cu spectrometrie de mas (ABD EL-HADY i col., 1994 (a,b) [41,42] au izolat dinpropolis urmtoarele grupe de compui:

- esteri ai acizilor fenolici-72,7%

- acizi fenolici-1,1%

- acizi alifatici-2,4%

- dihidrochalcone-6,5%

- chalcone-1,7%

- flavanone-1,9%

- flavone-4,6%

- derivai de tetrahidrofuran-0,7%

Pentru detectarea acestor compui,propolisul a fost supus extraciei n

urmtorul amestec de solveni: metanol-eter etilic-aceton-cloroform n raport 1:1:1:1. Alte extracii aplicate propolisului brut au utilizat ca solveni alcoolul etilic15% (v/v), alcool etilic 70% i alcool etilic absolut rece sau fierbinte.

Aa cum arat rezultatele obinute, n extractele alcoolice de propolis se regsesc compui flavonoizi, terpene, derivai ai acidului cinamic, acizi alifatici i acizi fenolici.

90


Fraciunea volatil de distilat prin antrenare cu vapori de ap a prezentat urmtorii compui: acid benzoic, alcool benzilic, acid sorbic, vanilin i eugenol. Distilatul prin antrenare cu vapori conine: eter fenil vinilic, anisil-vinil-eter i ciclohexil benzoat compui presupui a fi artefacte experimentale.Studiile efectuate pe propolisul recoltat de pe mugurii i scoara de eucalipt

specific Braziliei i zonelor cu climat mediteraneean s-au identificat un mare numr de hidroxi i metoxi stilbeni, explicaia unei astfel de prezene putnd fi faptul c albinele la recoltarea materialului rinos transform stilbenii naturali prin metilare sau demetilare n pterostilbeni.

Alte tipuri de extracii aplicate propolisului brut au fost cele care utilizeaz ca solveni apa i diferite concentraii de etanol. Capacitatea de extracie a acestor solveni se poate estima prin msurarea spectrului de absorbie n UV.

Prepararea extractelor apoase i etanolice de propolis

PARK i col., (1998) [43] au ncercat obinerea unui extract etanolic de propolis pentru care s-a aplicat urmtorul procedeu: propolisul brut, uscat, a fost mcinat pentru obinerea unei pudre fine din care s-au prelevat mostre a cte 2 g tratate cu cte 25 ml soluie apoas de etanol 80%. Amestecul obinut este meninut timp de 30 de minute sub agitare continu la temperatura de 70C. Dup extracie, amestecul este centrifugat, iar supernatantul obinut este denumit extract etanolic de propolis.

Pentru obinerea extractului apos MATSUSHIGE i col., (1996) [44] au folosit eantioane de 2 g de propolis care au fost tratate cu 25 ml ap deionizat, agitate timp de 2 ore la temperatura de 95C, dup marcarea prealabil a nivelului din tuburile de testare; dup agitare, extractele se rcesc la temperatura camerei i se revine la nivelul iniial al soluiei prin adugarea de ap deionizat. Coninutul tuburilor este centrifugat pentru obinerea supernatantului desemnat ca fiind extractul apos de propolis. Este important de menionat c s-a lucrat pe eantioane de propolis recoltat din diferite regiuni ale Braziliei.

Pentru determinarea coninutului n principii active din extractele obinute s-a aplicat metoda de msurare a spectrelor de absorbiei n UV . Extractele au fost scanate la lungimile de und cuprinse ntre 200 500 nm, la un spectrofotometru UV. Pentru determinarea spectrelor de absorbie analiza s-a efectuat pe complexul metal (aluminiu)-flavonoid (chelatizare) . Reactivul folosit a fost azotatul (nitratul) de aluminiu 10% - 0,1 ml, 0,1 ml acetat de potasiu 1M i 4,3 ml etanol 80%. Cte 0,1 ml din fiecare extract de propolis au fost tratai cu cte 0,5 ml de amestec de reactivi.

Nivelul de absorbie (absorbana) al extractelor etanolice i a extractului apos de propolis sunt prezentate n tabelul 2. Toate probele analizate au prezentat un maxim de absorbie la lungimea de und de 290 nm. Totui gradul de absorbie

91


la 290 nm a fost variabil n funcie de concentraia solu iilor de etanol. Extractul apos a prezentat cea mai sczut valoare a absorbiei, care totui a crescut progresiv cu concentraia de etanol pn la 80%. Extractele cu concentraii de etanol de 90% i 95% au prezentat o scdere a absorbiei la 290 nm. A a cum s-a menionat n lucrri anterioare (MARKHAM, 1982; KUNO, 1987), [45, 46] apariia benzilor de absorbie la lungimile de und de 270 330 nm este atribuit flavonoizilor i fenolilor. Cu alte cuvinte cea mai mare concentraie de flavonoizi a fost eliberat la utilizarea etanolului de 80%. Pe de alt parte, amestecurile de extracte etanolice de propolis cu nitrat de aluminiu i acetat de potasiu modific complet spectrele de absorbie, cu formarea unui nou peak de absorbie maxim la lungimea de und de 310 nm. Modificarea maximului de absorbie se datoreaz formrii complexului (chelat) metalic cu flavonoizii. Cea mai mare parte a flavonoizilor naturali sunt polifenoli care conin una sau mai multe grupri O-dihidroxil i hidroxiceto care sunt implicate n formarea complecilor metalici. Formarea complexului metal.flavonoizi induce o schimbare a spectrului de absorbie maxim (JURD i GEISSMAN, 1956; PORTER i MARKHAM, 1970) [47, 48].

Tabelul nr.2Absorbana extractelor etanolice i apos de propolis

Extracte de propolisAbsorbana extractelorAbsorbana complex

La 290 nmla 310 nm

Extract apos0,44340,4341

10% etanol0,51150,4782

20% etanol0,59650,5471

30% etanol0,74010,7002

40% etanol1,05750,9290

50% etanol1,78021,5637

60% etanol2,46682,1455

70% etanol2,69312,2860

80% etanol2,98442,7154

90% etanol2,63342,2692

95% etanol2,52982,1980

92


Aa cum se poate observa din acest tabel, s-a concluzionat cu extractele de propolis n soluie etanolic 80% conin cea mai mare concentraie de flavonoizi.

Pentru determinarea activitilor biologice ale propolisului, n Japonia (MIYATAKA i col., 1997)[49] propun prepararea unor extracte etanolice i apoase de propolis, aplicnd tehnici de laborator specifice.

Conform acestor autori propolisul este supus extraciei n etanol de concentraie de 99,5%. 5 pri (volume) de etanol 99,5% sunt introduse ntr-un recipient etan ce conine 1 parte (greutate) propolis brut. Amestecul obinut este lsat n repaus timp de 10 zile, cu agitri ocazionale. Soluia obinut dup perioada de extracie este supus filtrrii printr-un filtru No.2 (dimensiunea porilor 5). Reziduul de pe hrtia de filtru este splat cu solventul de extracie. Soluia de splare este combinat cu filtratul obinut i volumul total al soluiei obinute este adus la 200 ml cu etanol 99,5%. Reziduurile au fost n prealabil uscate pe sulfat de sodiu anhidru. Dup msurarea greutii reziduului obinut cantitatea extras n fiecare extract i concentrare n etanol de 99,5%, se determin prin scderea valorii obinute din masa iniial a propolisului luat n lucru. Concentraia extractului de propolis accesibil pe piaa internaional este cuprins ntre 2,7 12,5%.In cazul extractului apos, 5 pri (volumetric) de ap distilat degazat prin nclzire i apoi rcit la temperatura camerei sunt introduse ntr-un vas etan cu 1 parte (n greutate) de propolis. Amestecul obinut este lsat n repaus timp de 10 zile cu agitri ocazionale. Toate operaiile ulterioare sunt identice celor pentru prepararea extractelor etanolice.

Teste asupra aciunii biologice a propolisului au fost efectuate i cu alt tip de extract de propolis respectiv cu un extract apos de concentraie 13% w/v produs n Danemarca de firma Propharma A/S.

In Cuba se prepar un extract de propolis rou prin suspendarea a 1 g produs brut n etanol 95% (v/v). suspensia este decantat dup 48 ore de pstrare la temperatura camerei. Extractul obinut are o concentraie de 70% (w/v) i se recomand pstrarea sa la temperatura de 4C (NELSON MERINO i col., 1996) [50].

Tot pe propolisul brazilian s-au efectuat teste pe extracte obinute cu ap fierbinte. Alte extracte obinute n metanol i cloroform au fost preparate prin reluarea reziduului de la filtrare cu aceti solveni. (BASNET i col., 1996) [51].

4. Activitatea biologic a extractelor de propolis i a diferitelor fraciuni ale acestora

Propolisul este cunoscut astzi ca unul dintre cele mai surprinztoare produse naturale datorit studiilor i cercetrilor efectuate care atribuie acestuia i diferitelor sale fraciuni nenumrate aciuni biologice i efecte terapeutice. ntre

93


aciunile terapeutice se pot enumra: antimicrobian, antibiotic, antifungic, antiinflamatorie, analgezic, antioxidant i anti-tumoral.

La ora actual, pe plan mondial, propolisul este utilizat pe scar larg n diferite formule de medicamente (ndeosebi n Europa rsritean), suplimente sau aditivi alimentari i buturi pentru a mbunti starea de sntate i pentru prevenirea unor afeciuni: inflamatorii, boli cardiace, hepatice, diabetul i chiar unele forme de cancer.

Cu toate aceste dovezi asupra virtuilor sale terapeutice, ansa de a se transforma dintr-un remediu empiric ntr-un medicament, depinde foarte mult de purificare, standardizare i supunerea sa la toate celelalte etape de cercetare i control: chimic, tehnologic, toxicologic, preclinic i clinic.

Progresul realizat n domeniul chimiei, farmacodinamiei i a tehnologiilor farmaceutice au condus la stabilirea anumitor reguli pentru medicamente, ntre care cea mai sever este cea privitoare la o anumit relaie ce trebuie s existe ntre produsul respectiv i efectele sale asupra organismelor. Din aceast relaie se nate noiunea de doz terapeutic, mai ales pentru substanele active pure, indiferent de forma farmaceutic n care acestea sunt prezentate.

Prin standardizarea extractelor, tincturilor, etc., noiunea de doz poate fi extins i la medicamentele sau produsele care sunt amestecuri naturale de substane active. Standardizarea nseamn deci uniformizarea concentraiei n principii active din produsele finite dimensiune ce poate fi exprimat prin componentul cel mai caracteristic.

Atunci cnd metodele fizico-chimice nu pot fi aplicate, standardizarea se poate face utiliznd o metod de control biologic. Oricum, standardizarea extractelor naturale este de mult vreme o condiie de la sine neleas.

Propolisul este cunoscut ca fiind activ la nivelul organismelor, dar n cursul ultimelor decenii, s-a raportat o larg varietate a compuilor si. De aceea extractele de propolis de uz medicinal trebuie s rspund cerinei privitoare la raportul dintre cantitatea administrat i efectul obinut; aceasta nseamn c att experimentele de laborator ct i cele clinice trebuiesc efectuate numai cu extracte standardizate.

Orice extract, presupune nainte de orice altceva, s se obin un produs mai pur; un extract standardizat ofer posibilitatea de a fi administrat n anumite cantiti ce conin concentraii controlate de substane active, astfel nct cu siguran el s fie lipsit de toxicitate, s ofere o eficiena terapeutic maxim i s permit individualizarea tratementelor.

Extractul de propolis standardizat, departe de a fi un produs toxic, este totui capabil s prezinte o serie de efecte secundare atunci cnd anumite doze sunt depite. Modificarea dozelor poate induce efecte diferite sau chiar eecuri terapeutice.

94


n acest sens, experiena Romniei prin Centrul Medical de Apiterapie al Institutului de Cercetare i Dezvoltare pentru Apicultur, a dovedit c rezultatele experimentelor biochimice i farmacologice efectuate pe organisme sntoase precum i efectele sale pe organisme animale cu stri patologice induse sunt elemente fundamentale n planificarea i efectuarea unui experiment clinic.

Extractul de propolis standardizat (extractul moale sau spiss) a fost supus unor experimente biochimice pentru a i se demonstra eficacitatea asupra ficatului, sngelui, sistemului muscular, organelor limfatice, glandelor suprarenale, metabolismul general al glucidelor precum i n anumite aspecte imunobiologice.

Datele privitoare la efectele propolisului asupra organismului animal cu condiii patologice induse privesc aciunile hepatoprotectoare i antiinflamatoare precum i investigaii asupra aciunii epitelizante, asupra permeabilitii vasculare i aciunea antiviral (testat pe anumite virusuri multiplicate n culturi de esuturi).

4.1. Aciuni fundamentale ale flavonoizilor i consecinele lor fiziologice

Efectele observate ca urmare a consumului de flavonoizi i pot avea originea din cele trei principii fundamentale ale aciunii lor: modificarea activitilor enzimatice prin fosforilare antioxidare

represie genic Consecinele fiziologice ale acestor 3 aciuni principale sunt: aciunea antialergic

aciunea antiviral aciunea anestezic aciunea anti-tumoral aciunea antiinflamatoare (aspirin-like)

Aciunea antialergic

Simptomele reaciilor alergice ca dispneea obstrucia cilor aeriene prin contracia musculaturii bronice nroirea pielii, secreia excesiv a nasului (rinit) i de suc gastric precum i creterea temperaturii, apar ca rezultat al eliberrii de histamin din mastocite. Histamina este eliberat atunci cnd agentul patogen (alergenul) este legat de imunoglobulina E din membrana extern a mastocitelor. Ca rezultat, pe fondul consumului de ATP, canalele specifice pentru ionii de calciu din membrana extern a mastocitelor se deschid, permind penetrarea acestora n celule. Datorit sarcinii lor pozitive duble, ionii de calciu permit eliberarea a dou molecule de histamin, care la rndul lor poart fiecare cte o singur sarcin pozitiv.

95


Datorit marii capacit i de reacie, adenozintrifosfatul (ATP) care deschide canalele de calciu, va aciona preferenial pentru fosfat. Ca urmare, n prezena flavonoizilor, canalele de calciu rmn nchise i mastocitele nu mai pot elibera histamina astfel nct simptomele reaciei alergice nu se mai produc. Este cunoscut faptul c chromoglycan-ul i medicamentul Intal constau dintr-un inel cromanic i un flavonoid. Aceste substane sunt folosite de mult vreme ca medicamente n combaterea alergiilor ( KLIMMEK, 1988) [52].

Dup cum se tie, propolisul conine o anumit cantitate de polen i atunci cnd acesta nu este eliminat prin procedee corespunztoare, unii pacieni mai sensibili pot dezvolta alergii la propolis. Este unul din motivele pentru care propolisul este suspectat a fi un potenial alergen. Propolisul poate fi ns incriminat de apariia alergiilor i datorit coninutului (n unele sorturi) n esteri ai acidului cinamic i ai acidului cafeic (HAUSEN i col., 1987; SCHULER i col., 1988; ITOH i col., 1994) [53, 54, 55].

O alt potenial surs de alergenicitate este veninul de albine prezent deasemenea n propolis n cantiti foarte mici. De obicei, veninul de albine este extras cu solveni apoi, motiv pentru care i acesta poate fi incriminat pentru aciunea alergic a propolisului.

Aciunea antiviral

Se tie c virusurile constau dintr-un nucleu infecios ce conine un acid nucleic (DNA sau RNA) i o manta proteic. Adeseori, acestea pot penetra uor n celulele umane. Pentru a deveni active, mantaua lor proteic trebuie s fie digerat de enzimele prezente n lizosomi. Lizosomii sunt vezicule acoperite de o membran lipidic care n prezena flavonoizilor nu poate fi penetrat de virusuri. Fondul acestui fenomen nu este nc deplin neles, dar se poate emite o ipotez. Un exemplu ar putea fi neutralizarea gruprilor amino din mantaua proteic prin fosforilare o prezumie pentru penetrarea membranelor lipidice lizosomale.

DEBIAGGI i col., (1990)[56] au testat efectele antivirale a 5 specii de flavonoizi specifici prezeni n propolis: crizina, kaempferol, acacetina, galangina i quercetina. Utiliznd culturi de celule in vitro, s-a determinat replicarea i infectivitatea unor tulpini de virus herpetic, adenovirus, coronavirus i rotavirus. Crizina i kaempferolul au prezentat o aciune inhibitorie dependent de doz asupra replicrii virale intracelulare a tuturor tulpinilor virale testate dar nu afecteaz infectivitatea acestora. Ambii flavonoizi se dovedesc foarte activi n inhibarea replicrii diferitelor tipuri de virusuri herpetice (HSV herpes simplex): HSV-2 (0,2 g/ml si 0,1 g/ml), HSV-1 (0,5 g/ml i 2 g/ml). La 10 g/ml crizina i kaempferolul reduce replicarea virusurilor n proporii de 45% i respectiv 65% la coronavirusul bovin, 30% i 50% la coronavirusul uman,

96


rotavirusul SA-II 25% i respectiv 35%. Quercetina la doza de 60g /ml i crizina la 10 g/ml au redus infectivitatea virusurilor herpetice (HSV-2, HSV-1 i TK-HSV-1) cu aproximativ 65% i respectiv 50%. (CHENG i WONG, 1996) [57].AMOROS i col., (1992a) [58] au observat c propolisul este foarte activ in vitro mpotriva virusului polio i herpetic. La o concentraie de 30 g/ml propolisul reduce titrul virusurilor herpetice de 1000 de ori, inhib replicarea HSV cu 99,5% i inhib total formarea plgii de poliovirus. S-a observat de asemenea i o aciune virulicid asupra virusurilor ncapsulate, herpes simplex i virusul stomatitei veziculare (VSV). n acest caz se sugereaz c flavonoizii galangin i crizin majoritari n eantioanele de propolis recoltat din Frana (i n general din zona european) acioneaz sinergic n aciunea antiviral a propolisului.

ntr-un studiu mai aprofundat asupra aciunii inhibitoare a flavonoizilor asupra virusurilor, AMOROS i col., (1992b) [59] au observat efecte sinergice individuale i binare ale flavonolilor (galangin, kaempferol i quercetin), flavonelor (crizin, apigenin, luteolin i tectocrizin) i a flavanonelor (pinocembrin i izosakuranetin) asupra infeciei cu virus herpetic de tip I i replicarea acestuia n celule renale de maimu in vitro. Tot aceast echip a constatat c flavonolii sunt mai eficieni n reducerea titrului virusurilor; totui s-a constatat c galangina este activ n timp ce crizina nu prezint activitate, contrazicnd astfel rezultatele obinute de DEBIAGGI i col., (1990)[56]. Autorii au atribuit contradicia: diferenei ntre tulpinile de HSV-1 diferenei dintre timpii de incubaie (48 de ore mai puin dect Debiaggi i col., 1990) [56] diferiilor parametri de lucru Activitatea flavonolilor descrete n ordine invers cu numrul de grupri

hidroxil substituite: galangin > kampferol > quercetina. Afinitatea compusului la lipide (lipofilie) pare s aib o importan deosebit pentru activitatea biologic. Numai galangina, kaempferolul i balsamul de propolis pare s fie activi cu adevrat mpotriva HSV-I. Ali constitueni de tipul metoxiflavonelor minore sau conjugai de tip cafeoil pot contribui la rndul lor la aciunea antiviral. n plus, atunci cnd doi flavonoizi diferii au fost administrai mpreun, s-a observat un sinergism semnificativ mpotriva HSV-I, cu combinaii de flavonoli i flavone care produc o reducere semnificativ a virusului. Cele mai importante combinaii binare au fost: kaempferol + luteolin; quercetin + crizin; galangin + apigenin; kaempferol + apigenin; quercetin + apigenin. Adeseori sinergismele indic diferite moduri de aciune dar ntruct mecanismul (ele) inhibiiei virale mai trebuie nc elucidate, se fac nc speculaii.

97

Propolisul i extractele sale precum i o serie de soluii de flavonoizi s-au dovedit mijloace eficiente n sistarea replicrii agentului patogen al hepatitei virale HbsAg (MORFEI i col., 1980) [60].

Aciunea analgezic

Unele procese dureroase apar ca rezultat al producerii de prostaglandine la locul leziunii (rnii). Formarea acestor prostaglandine poate fi stopat de flavonoizi prin aciunea lor de inhibare a aciunii enzimei prostaglandin-ciclooxigenaza (PG-ciclooxigenaz).

Aciunea anti-tumoral (anti-cancer)

Una dintre explicaiile acestei aciuni a flavonoizilor este urmtoarea: celulele tumorale sunt caracterizate printr-o activitate insuficient a pompelor ionice ale ATP-azei. Ca urmare, n timp, enzima ATP-az devine inactiv, deoarece centrul su activ este blocat prin fosforilare. Flavonoizii modific acest proces de fosforilare probabil prin captarea gruprilor fosfat. Prin acest proces, activitatea celulelor poate reveni la normal (KLIMMEK, 1988) [52]

n 1991 (MATSUNO i col.,) [61] a raportat prezena n propolisul brazilian a trei compui cu aciune anti-tumoral. Aceti compui sunt quercetina, esterul fenetilic al acidului cafeic i un nou compus clerodan-diterpenoid ultimul fiind centrul ateniei. Clerodan-diterpenoidul a demonstrat stoparea dezvoltrii celulelor tumorale n faza S i a prezentat o degradare masiv asupra celulelor tumorale HuH13 n nu mai puin de 3 zile n medii de cultur. Pe de alt parte, un slab efect citotoxic a fost observat asupra celulelor renale de iepure aflate n stadiu primar fr transformri, i asupra celulelor diploide umane. Urmrind aceast substan s-a demonstrat c ea prezint i aciune antibacterian, poate ucide celulele tumorale hepatice fr a le leza pe cele normale. Un an mai trziu, 1992 [62], acelai autor a artat c prin administrarea de propolis brazilian la un pacient afectat de cancer, s-a produs o activare a limfocitelor T-killer i a macrofagelor din esutul afectat fapt ce a produs inhibarea creterii tumorii.

n 1993, ARAI i col., [63] de la laboratoarele biochimice Hayashibara au ajuns la concluzia c propolisul activeaz macrofagele, induce producia de citokine i restrnge dezvoltarea de metastaze n cancerul de colon. n rapoartele lor ei au artat clar c propolisul acioneaz direct asupra macrofagelor pentru a le amplifica funciile i lucrnd mpreun cu antigenul induce producia de factor de necroz tumoral, interleukin-1 i interferon, innd metastazele la nivelul plmnilor la valori sub 60%.

98


KIMOTO i col., (1994, 1995) [64, 65] au reuit s identifice i s izoleze din propolisul brazilian artepillina C un compus cu o puternic aciune anti-tumoral prezent n produs n concentraii de aprox. 5%. Artepillina C s-a dovedit extrem de eficient ndeosebi asupra celulelor leucemice i se ateapt ca n viitor ea s fie administrat prin injecii intravenoase ca adjuvant n chemoterapia acestei afeciuni.Studiile efectuate au demonstrat c constituenii propolisului care prezint puternic aciune anti-tumoral sunt: derivai ai acidului cafeic flavonoizi

acidul 2,2-dimetil-8-prenil-cromen-6-propendioic

artepillina

acidul 17-hidroxicleroda-3m(13Z)-dien-15-oic (MARCUCCI, 1995; MATSUNO i col., 1995, 1996, 1997) [66, 67, 68, 69]

Aciunea de tip aspirin (aspirin-like)

Aspirina acidul acetilsalicilic inhib, n acelai mod ca i flavonoizii, aciunea enzimelor reponsabile pentru sinteza prostaglandinelor PG-ciclooxigenaz i lipooxigenaz. Acesta este principalul motiv pentru care flavonoizi sunt recunoscui ca aspirin natural.

4.2. Mecanisme de aciune ale flavonoizilor

Inhibarea sau activarea unor enzime

Asemnarea dintre aminoacidul tirozin (Tyr) i structura de baz a flavonoizilor poate conduce la un proces competitiv de fosforilare. Fiind mai nucleofili dect tirozina, flavonoizii sunt fosforilai naintea aminoacidului. Acesta este un posibil mecanism prin care se poate produce inhibarea sau activarea unor enzime. Tot acest proces poate fi o posibil explicaie pentru oprirea evoluiei tumorilor.

Aciunea antioxidant

Structura de baz a flavonoizilor conine un inel cromanic care n condiii de oxidare poate fi deschis cu uurin pentru a forma un radical liber (RL). Radicalul liber format poate distruge cu uurin ali radicali liberi pe care i gsete n organism i care produc distrugerea tisular. Radicalii liberi pot fi

99


produi ca rezultat al iraadierii cu raze X (raze Roentgen) sau iradiere cu substane radioactive.

Aciunea reductoare a flavonoizilor stopeaz distrugerea acidului ascorbic (vitamina C) prin oxidare i tansform ionul de fier trivalent (Fe3+) n forma sa fiziologic bivalent. n plus, flavonoizii se pot lega puternic de ioni de metale grele (cupru bivalent, mercur bivalent i plumb bivalent). Altfel, unele metale grele vor avea tendina de a cere autooxidarea anumitor elemente eseniale : substane nutritive, acizi grai polinesaturai i de asemenea de a inhiba activitatea anumitor enzime.

Represia genic

Represia genic este o aciune important a anumitor hormoni cum sunt estrogenii i glucocorticoizii.Hormonii glucocorticoizi controleaz metabolismul carbohidrailor. Unii flavonoizi prezint astfel de aciuni de tip hormon-like. Flavonoidul sylibina i cortizonul au o foarte apropiat asemnare structural, fapt ce ar putea explica aciunea lor comun.

Aciunea flavonoizilor n diabetul zaharat

n aceast boal zaharoza este transformat n grsimi i astfel circulaia sanguin la nivelul organelor ochi i intestin, de exemplu este oprit. Cu ct glucoza este meninut mai mult timp la nivelul unui organ, ea este redus de enzima aldosereductaz la hexitol un compus stabil ce nu mai sufer transformri. Prin osmoz hexitolul atrage mult ap din snge i o reine n celule, care la nivel funcional sunt marcate. La nivelul ochilor se produce o suprapresiune n timp ce la nivelul intestinului absorbia compuilor nutritivi este diminuat.

Flavonoizii inhib activitatea aldosereductazei, diminund astfel tulburrile la nivelul ochilor i normaliznd funcia intestinal.

Aciunea antimicrobian a flavonoizilor din propolis

Extractul etanolic de propolis (EEP, 70% extract etanolic) cunoscut dup s-a menionat i sub denumirea de balsam de propolis a fost utilizat de GRANGE i DAVEY (1990) [70] n culturi bacteriene n plac, demonstrndu-se eficacitatea sa n inhibarea dezvoltrii unor tulpini de Staphylococcus aureus mai ales cea care a devenit rezistent la antibioticul methicillin. Mai mult, balsamul de propolis acioneaz preferenial n inhibarea cocilor i bacililor Gram-pozitivi la o concentraie de 3 mg/ml. Se speculeaz c compuii activi din balsamul de propolis

100


cuprind flavonoidul galangin (3,5,7-trihidroxiflavon) i CAPE (esterul fenetilic al acidului cafeic caffeic acid phenethyl ester) i c aceste sinergisme, n care efectele mai multor componente se combin pentru a obine un efect mai puternic, sunt posibile ntruct componentele singulare au efecte inhibitorii mult mai reduse.

Mecanismul de aciune este considerat a fi o inhibare a RNA-polimerazelor bacteriene dependente de DNA prin aciunea unui component hidrosolubil din propolis cu absorbie n UV (GRANGE i DAVEY, 1990; SIMUTH i col., 1986) [70, 71].

BRUMFIT i col., (1990) [72] au observat c extractele de propolis obinute n ap i soluii tampon la pH 5 i 6, sau extractele n petrol nu prezint nici un fel de activitate asupra tulpinilor bacteriene testate. Totui extractele n soluii tampon la pH 7 sau 8, extractele etanolice, cele n DMSO (dimetil-sulfoxid), cloroform sau aceton au inhibat tulpini de Staphylococcus aureus, Bacteroides subtilis i Candida albicans. Zonele de inhibiie variaz ntre 7 14 mm n diametru. Staphylococcus saprophyticus, Streptococcus faecalis i grupul B de coci nu au fost inhibai de nici unul dintre extractele menionate. Extractele obinute cu solveni organici au fost slab active asupra unor tulpini de Staphylococcus aureus (3 sensibile la methicillin i 2 rezistente la acest antibiotic), Streptococcus epidermis, Clostridium spp. i Candida albicans, dar inactive asupra streptococilor,

Corynebacterium xerosis i speciile Gram-negative. ntr-un alt studiu, efectuat in vivo nu s-a constatat nici un fel de activitate n urina prelevat de la 3 voluntari care au consumat 500 mg de pudr de propolis, de 3 ori pe zi, timp de 3 zile.

O bun aciune antibacterian (mai ales asupra bacteriilor Gram-pozitive), antifungic (n special asupra fungilor responsabili de apariia infeciilor superficiale ale pielii) i antiinflamatoare (fa de modele de inflamaii acute i cronice) au fost observate de DOBROWOLSKI i col., (1991) [73].

4.3. Aciunea esterilor acizilor fenolici

CAPE (esterul fenetilic al acidului cafeic) este un alt constituent al propolisului cu aciune biologic important. GRUNBERGER i col., (1988) [74] au observat efectul CAPE asupra celulelor canceroase umane in vitro prin msurarea gradului de incorporare a timidinei tritiate n structura DNA a caarcinoamelor umane de sn (MCF-7) i linii de celule de melonoame (SK-MEL-28, SK-MEL-170). Concentraiile de CAPE de 5 g/ml i 10 g/ml inhib i blocheaz complet incorporarea de timidin tritiat. Acelai tip de inhibiie a fost

101

Tabel nr.3Aciunea antibacterian i antifungic a propolisului

Organisme Gram-pozitiveStaphylococcus aureus- comun n infeciile localizate productoare depuroiStreptococcus pyogenes- infecii ale gtuluiStreptococcus viridans- flora normal a tractului respirator superior cepoate produce infecii la bolnavi cu imunodeficienStreptococcus pneumoniae- cauza comun a pneumoniilor bacteriene

Corynebacterium diphteriae - produce difteria

Aciunea antifungicMicrosporum canis- viermi inelari la pisici i cini ce se transmit la omMicrosporum gzpseum- infecii al pielii capului i corpului n America de

SudPhialophora jeanselmei- urmare injectrii acest fung poate provoca moarteaesuturilor profunde din corpPiedraia hartae- fung parazit la nivelul pruluiTrichophyton mentagrophytes - atac prul, unghiile i pieleaTrichophyton rubrum- atac prul unghiile i pieleaTrichosporon cutaneum- se gsete n intestin, tractul respirator i pe pielei poate afecta pacienii cu debiliti, rar fatal.Propolisul n doze de 2 g/kg corp a fost bine tolerat de oareci.Conform DOBROWOLSKI i col., 1991

observat i pentru carcinoamele de colon HT29 i renale dei autorii nu prezint aceste date. Invers, liniile de celule normale, necanceroase (1434 fibroblaste i melanocite) necesit o cantitate de 50 g/ml CAPE pentru incorporarea de timidin tritiat. Cu totul interesant, liniile de celule tumorale sunt mai sensibile dect liniile de celule normale la aciunea CAPE. Toate proprietile CAPE natural i sintetic au fost identice.

n 1991, SU i col.,[75] au studiat toxicitatea CAPE fa de celulele normale transformate n celule canceroase cu adenovirusul tip 5 ce conine o fraciune de DNA genomic necaracterizat cu proprieti iniiatoare de cancer.

102


Aceast fraciune provoac activarea transcripiei genelor celulare i virale, induce sinteza DNA i mitoza celulelor difereniate. n mod clar, caracteristicile celulelor transformate par a produce cancer. Rezultatele arat c compusul CAPE inhib preferenial sinteza DNA i cre terea n celulele transformate AD5EIA, iar la concentraii ridicate de CAPE, celulele transfo

118411662-propolis.docx

Documents