ROTAVIRUSURI

Rotavirusurile sunt cauza cea mai frecventa a gastroenteritelor virale, mai ales la copiii prescolari.n 1959, Brenner i Horne au descris tehnica de microscopie electronic i astfel au inaugurat o nou er n virusologia experimental i de diagnostic.Rotavirusul a fost descris pentru prima dat ca agent de diaree murin infantil n 1963. Importana acestui patogen n gastroenterita uman a fost dat 9 ani mai trziu de ctre Bishop i colaboratorii (n 1972), cnd au observat particule n form de roat la specimenele de intestin de la sugarii cu gastroenterit sever n Australia, utiliznd microscopia electronic. n 1974, Flewett i colaboratorii au propus numele rotavirus, bazat pe aspectul asemntor cu o roat.

STRUCTURA SI CLASIFICARERotavirusul, numit astfel pentru aspectul su asemntor cu o roat (de la cuvntul latin rota), este un virus fr anvelop aparinnd genului Rotavirus, familia Reoviridae.Genomul rotavirusului este compus din 11 segmente de ARN dublucatenar, fiecare segment codnd o protein nonstructural sau structural viral (VP). Genomul este protejat de 3 straturi concentrice de proteine: miezul interior, o capsid intern i un strat extern.Miezul interior este compus din VP1, VP2 i VP3, acoper genomul i este nconjurat de o capsid intern compus n principal din VP6. Stratul exterior este format din VP7 i VP4 i formeaz componenta proteic. Proteinele virale VP7 i VP4 induc anticorpi neutralizani specifici implicai n imunitatea protectoare i sunt folosite pentru a defini serotipul rotavirusului.Rotavirusurile sunt clasificate cel mai frecvent n funcie de grup i serotip.Au fost descrise apte grupuri de rotavirus (A-G), iar aceast mprire se bazeaz pe proprietile antigenice ale proteinei VP6. Numai despre virusurile din grupele A, B i C se tie c pot provoca boala la om. Rotavirusurile de grup A sunt cauza principal a bolilor umane . Grupa A de rotavirusuri cu serotipuri G1-G4 iG9 cuprinde cele mai comune tipuri de rotavirus cu importan clinic. Clasificarea subgrupurilor i serotipurilor este efectuat numai pentru scopuri de cercetare. Serotipurile tind s varieze geografic, precum i ntre oameni i alte specii. Prezena rotavirusului de grup B, ce produce diareea adultului, a fost raportat n principal n China i Asia de Est, prin utilizarea eantionrilor globale serologice. Rotavirusul grup C a fost izolat la nivel global, dar tinde s fie gsit doar n mici focare sporadice . Rotavirusurile sunt clasificate n serotipuri pe baza antigenelor de exterior ale capsidei virale, VP7 i VP4. VP7, o glicoprotein, este menionat ca antigenul tip G, n timp ce VP4, o protein proteaz-sensibil, este menionat ca antigenul tip P. Zece serotipuri G i 11 genotipuri P sunt im portante pentru om, iar serotipul G1 i genotipul P8 sunt cele mai comune n ntreaga lume. Genomul Rotavirusului este segmentat i astfel permite resortarea genelor, rezultnd astfel mai multe combinaii de proteine G i P .

PATOGENIERotavirusul,ca si alte virusuri care determina enterita, infecteaza mai intai celulele vililor intestinali, mai ales acelea de la marginea vililor. Deoarece aceste celule au un rol in digestia carbohidratilor si in absorbtia intestinala a fluidelor si electrolitilor , infectia cu rotavirus conduce la malabsorbtie prin blocarea hidrolizei carbohidratilor si pierderea excesiva de fluide prin intestin. Cresterea motilitatii pare a fi secundara modificarilor functionale induse de virus la epiteliul vilos.Virusul este eliminat in cantitati mari in scaun chiar inaintea debutului simptomatic si persista pana la 10 zile dupa aparitia simptomelor.Echilibrul fluidic adecvat la oameni depinde de secretie si reabsorbtia fluidelor si electrolitilor din tractul intestinal.Diareea apare cand secretia de lichid in intestin depaseste capacitatea de reabsorbtie.Mecanismele primare responsabile pentru gastroenterita acuta sunt: alterarea marginii in perie a vililor intestinali cu malabsorbtie a continutului intestinal si diaree osmotica eliberarea de toxine care leaga receptori enterocitari specifici si determina eliberarea de ioni de clor in lumen cu diaree secretorie.

SEMNE SI SIMPTOMEInfectia cu rotavirus afecteaza adulti si copii,insa adultii pot fi asimptomatici sau pot prezenta cateva zile greata,anorexie si crampe. Diareea este mai putin semnificativa. Copiii de la 4 la 24 luni, mai ales cei din grupurile de ingrijire(gradinite) sunt la risc crescut de a contacta infectia. Copii cu greutate mica la nastere si prematuritatea , precum si lipsa alimentarii la san sunt asociati cu spitalizarea pentru infectie cu rotavirus.Simptomele incep de obicei la 2 zile de la expunere si cuprind : Anorexie Febra moderata Diaree apoasa ,dar fara sange Varsaturi si crampe abdominaleEliminarea de scaun poate fi masiva in zilele de diaree ale bolii , iar deshidratarea este frecventa.Examenul fizic in infectia cu rotavirus poate fi nesemnificativ cu exceptia semnelor de deshidratare. Acestea cuprind : scaderea pulsului ,tahipnee, incercanarea si infundarea in orbite a ochilor alterarea statusului mental depresarea fontanelelor, lipsa lacrimilor, uscarea mucoaselor si a pielii diminuarea turgorului pielii,extremitati reciDiureza scazuta semnificativ este un semn important. Scaderea in greutate poate interveni deasemenea.Complicatia cea mai grava a infectiei cu rotavirus este deshidratarea. Insuficienta multiorgan este posibila cand deshidratarea duce la soc si chiar deces.

DIAGNOSTICUL DE LABORATORImunoelectronomicroscopia sau simpla examinare la microscopul electronic a preparatelor obtinute prin centrifugari repetate ale fecalelor permite vizualizarea virionilor caracteristici, in forma de roata cu spite si uniformi in dimensiuni (70nm). Un alt examen important este electroforeza ARN viral, care separa cele 11 segmente genomice in profiluri distinct in raport cu arealul de raspandire al tulpinilor virale. Heterogenitatea in mobilitatea electroforetica a segmentelor este atribuita reasortarii genomice si constituie un indicator pentru rezolvarea filiatiei cazurilor in ceea ce numim azi epidemiologie moleculara. Studiile electroforetipurilor (serotipuri electroforetice) au indicat predominant unei singure tulpini in arealuri limitate. Inrudirea intre rotavirusuri a fost investigata si prin studii de hibridare moleculara , utilizand drept sonde secvente polinucleotidice corespunzatoare polipeptidelor capsidei externe. Trei polipeptide au functii importante si servesc pentru caracterizarea tulpinilor: VP4 si VP7,cu epitopi implicate in seroneutralizare si VP6- un antigen comun de grup. VP4 este diferit la tulpinile virulente de cele avirulente ,asimptomatice.Ultimele par sa constituie tulpini candidate pentru includerea intr-un eventual vaccin adimistrabil per os.In privinta diversitatii tulpinilor circulante, trebuie spus ca pe capsida externa sunt prezente doua proteine antigenice care induc anticorpi neutralizanti cu rol in protectie. Aceste proteine sunt: protein G (de la glicoproteina) sau VP7 si protein P(de la proteazo-sensibila)sau VP4. Grupul A de rotavirusuri cuprinde 14 serotipuri ,grupul G si mai multe,dar mai raspandite la om sunt G1-4. Serotipurile sunt diagnosticate prin seroneutralizare, iar genotipurile prin metode moleculare. Diagnosticul de rotavirus se pune prin testarea probelor proaspete de materii fecale folosind o varietate de kituri comerciale care detecteaz antigenul de rotavirus. Aceste kituri folosesc testul enzime-like imunosorbent sau latex-aglutinarea, ce sunt uor de efectuat, ofer rezultatele rapid i prezint 90% senzitivitate i 90% specificitate. Prezena rotavirusului poate fi confirmat prin aceste teste n perioada simptomatic, imediat nainte de debutul bolii i cteva zile dup dispariia simptomelor. Aceste teste detecteaz proteina VP6 prezent n stratul de mijloc al capsidei triplu stratificate.Materiile fecale (1-2g sau ml pentru probele lichide) trebuie recoltate in coprorecultoare curate si uscate, fara conservanti sau medii de transport. Probele pot fi pastrate in frigider (2-4C) 1-2 zile pana la testare. Pentru o pastrare mai indelungata trebuiesc congelate la -20C.In acest caz probele trebuie dezghetate in totalitate si aduse la temperature camerei inainte de testare.

PRINCIPIUTestul Caseta Rotavirus este un test imunoenzimatic pentru detactia antigenilor Rotavirus in probele fecale umane. Membrana este pre-acoperita cu anticorpi monoclonali la antigenii rotavirus pe linia de testare. In timpul testarii,proba reactioneaza cu particulele acoperite cu anticorpii anti-Rotavirus care sunt depusi si pre-uscati pe fascia de testare.Amestecul se deplaseaza in sus pe membrane, prin actiune capilara. In cazul unui rezultat pozitiv anticorpii specifici prezenti pe membrana vor reactiona cu amestecul conjurat si vor genera liniile colorate. O linie colorata in verde apare intotdeauna in zona de control si serveste ca verificare a volumului de proba adaugat. Aceasta ne confirma ca a fost obtinut un flux corect si ca un control intern al reactivilor.

PROCEDURASe foloseste cate un flacon de colectare nou pentru fiecare proba cu 1 ml solutie tampon. Se desurubeaza capacul flaconului si se introduce betigasul de 2 ori in proba de fecale,recoltand aproximativ 100mg.Se inchide flaconul si se agita pentru o buna distributie a probei.Pentru probele de fecale lichide ,se aspira cu o pipeta 100 uL de proba. Se pipeteaza in flaconul cu solutie tampon. Se scoate testul Rotavirus din plicul etans si se foloseste cat mai repede. Se agita tubul de recoltare,se rupe varful tubului, si se pipeteaza 4 picaturi sau 100uL in fereastra de aplicare a probei. Rezulatele se citesc la 10 minute dupa pipetarea probei.Interpretare rezultatePozitiv : apar doua linii in fereastra centrala,in zona rezultatelor (linia rosie marcata cu T) si in zona de control (linia verde marcat cu C)Negativ: apare doar 1 linie, verde in zona de control, marcata cu C.Invalid: absenta totala a liniei de control verzi indiferent de aspectul liniilor test.Cele mai frecvente cause de erori sunt: volumul insuficient de proba, procedura tehnica incorecta si deteriorarea reactivilor.Prin metoda de aglutinare(latex), se poate determina rotavirus in fecale folosindu-se trusa ROTA-VIRUS LATEX. . Reactivul Plasmatec consta in particule de latex sensibilizate impotriva unui amestec de diferite tulpini de Rotavirus atat uman cat si animal, care permit detectia antigenului prin aglutinare pe lama.

METODA CALITATIVA:1. Se lasa fiecare component sa ajunga la temperatura camerei.2. La 10 ml de tampon de extractie, se dilueaza cu 40 ml de apa deionizata. Va rezulta suficient tampon de extractie pentru prepararea a 25 probe.3. La 2 ml tampon de extractie,se adauga 0.2 g proba din fecale.4. Se amesteca bine cu un vortex, pana cand elementele solide sunt uniform dispersate.5. Se lasa la temperatura camerei pentru 10 min.6. Se centrifugheaza proba pentru 10 min la 800g.7. Se pune o picatura de supernatant din proba de fecale pe un cerc de pe lama.8. Se repeta pasul 7, folosind cercul 2 de pe lama.9. Se adauga o picatura de reactiv latex de control langa proba de fecale din cercul 1.10. Se adauga o picatura de reactiv latex de testare langa picatura de fecale din cercul 2.11. Cu ajutorul unei pipete,se distribuie reactivul de control peste zona de testare.12. Se repeta pasul 11, folosind latexul test pe cercul 2.13. Se agita lama la fiecare 2 secunde timp de 2 minute. Controlul pozitiv este gata de utilizare si nu trebuie diluat.

REZULTATE:Un rezultat pozitiv este indicat de aglutinarea vizibila a particulelor de latex. Aceasta apare in mod normal in cateva secunde de la inceperea agitarii. Un rezultat negativ este indicat de absenta aglutinarii de latex.

TRATAMENTNu se administreaza antibiotice.Cazurile mai putin severe se pot trata la domiciliu,tratamentul consta in regim alimentar( supa de morcov,mucilagiu de orez,banana,branza de vaci,grisine,sticksuri,paine prajita ),apoi cand stare generala se amelioreaza,se face trecerea treptata la alimentatia obisnuita.Se vor administra: saruri de rehidratare ( Humana electroliti,solutia Ors ),antidiareice, antisecretorii (Hidrasec 1plic de 3 ori pe zi, Smecta 1 plic de 3 ori pe zi ),probiotice ( Biotics, Linex, ecoflora, Enterolactis ). Copiilor cu deshidratare sever, celor cu deshidratare moderat care nu pot primi solutii de rehidratare orala datorit vrsturilor, meteorismului abdominal, ileusului sau letargiei, li se vor administra lichide pe cale intravenoas, n cantitate de 10-20 ml/kg ser fiziologic sau soluie Ringer lactat pn la restabilirea hemodinamic i, de asemenea, pn la reluarea rehidratrii orale.

PROFILAXIEO mare importanta in prevenirea infectiei cu rotavirus o are respectarea regulilor de igiena, in special in colectivitatile de copii.Aproape singura si cea mai eficienta metoda de impiedicare a imbolnavirii si decrestere a imunitatii la copiio reprezinta vaccinarea.In februarie 2006 s-a aprobat eliberarea uni vaccin oral cunoscut ca RotaTeq, cu administrare in 3 doze separate, la 2,4 si 6 luni. In aprilie 2008 s-a aprobat vaccinul Rotarix oral pentru preventia gastroenteritei cu rotavirus. Administrarea Rotarix se recomanda in doua doze separate pentru pacienti la 2 si la 4 luni varsta.

PROGNOSTICPrognosticul infectiei cu rotavirus este excelent cat timp se mentine o hidratare excelenta. Cei mai multi copii se recupereaza la o saptamana de la debutul simptomelor. Enterita cu rotavirus nu are sechele importante pe termen lung. Reinfectia este frecventa.

BIBLIOGRAFIE

1.http://www.romedic.ro/gastroenterita-cu-rotavirus2.http://www.medica.ro/reviste_med/download/rmr/2014.2/RMR_Nr-2_2014_Art-3.pdf3.Virusologie medicala-Costin Cernescu4. http://www.balmed.ro/pdf/linear/rota.pdf5. www.tody.ro/document/rotavirus-plasmatec6