Toxiinfecii alimentare produse de enterobacterii

57

CUPRINS

PARTEA I - STUDIU BIBLIOGRAFIC

Introducere..................................................................................................................pag. 4

Capitolul 1 - Toxiinfecii alimentare colective

1.1 Generaliti..........................................................................................pag. 6

1.2 Cauze....................................................................................................................pag. 9

1.3 Simptome...............................................................................................................pag. 9

1.4 Diagnostic..............................................................................................................pag. 10

1.5 Tratament..............................................................................................................pag. 11

1.6 Regim alimentar.....................................................................................................pag. 12

1.7 Prevenire................................................................................................................pag. 13

1.8 Enterocolita la copii..............................................................................................pag. 13

Capitolul II - Bacili Gram negativi de interes medical

2.1 Familia enterobacteriaceae-taxonomie...................................................................pag. 16

2.2 Habitat..................................................................................................................pag. 17

2.3 Rezistena la aciunea factorilor fizici i chimici.....................................................pag. 18

2.4 Morfologie, caractere culturale............................................................................pag. 18

2.5 Structura antigenic...................................................................................pag. 24

2.6 Patogenitate............................................................................................................pag. 24

2.7 Semnificaie clinic...........................................................................pag. 25

2.6 Rspunsul imun, profilaxie i tratament................................................pag. 26

PARTEA a II-a CERCETRI PROPRII

Capitolul III - Scopul lucrrii..................................................................pag. 29

Capitolul IV - Material i metode............................................................pag. 31

4.1 Izolarea, identificarea i caracterizarea biochimic a unor tulpini de Bacillus cereus izolate din lapte i produse lactate..............................................................pag 31

4.2 Izolarea i identificarea caracterizrii unor tulpini de Escherichia coli izolate din carne vit, carne tocat de vit i telemea vac......pag. 37

4.2.1 Metoda simplificat de izolare i identificare a bacteriei Escherichia coli n produsele de origine animal.......................................................................pag. 37

4.2.2 Metoda orizontal pentru detectarea bacteriei Escherichia coli n produsele de origine animal......................................................................................pag. 50

4.2.3 Identificarea bacteriei Escherichia coli prin tehnica VIDAS.......................pag. 71

CONCLUZII ............................................................................................pag. 81

BIBLIOGRAFIE.......................................................................................................pag. 82

PARTEA I : STUDIU BIBLIOGRAFIC

INTRODUCEREBolile de origine alimentar reprezint o problem major de sntatepublic. Ele sunt provocate de ingerarea alimentelor i apei contaminate cumicroorganisme sau toxinele lor. Majoritatea bolilor de origine alimentar sauhidric sunt considerate toxiinfecii alimentare, o grup de boli a creidefiniie este nc discutabil. n general, toxiinfeciile alimentare sunt definiteca boli acute de origine alimentar care apar de obicei n mod brusc i ntr-operioad scurt de timp, la dou sau mai multe persoane care au ingeratacelai aliment i care, din punct de vedere clinic se manifest preponderentprin simptome digestive, n special grea, vom i sau diaree i numairare ori prin simptome neurologice i musculare.

Toxiinfeciile alimentare nu apar prin simplul contact al omului cualimentul contaminat , ci numai dup ingerarea acestuia . Agenii vii sau toxinele lor prezente n aliment vor mbolnvi oamenii numai dac sunt n cantiti mari i numai dac sunt introdui n organism pe cale oral. Pentru a se ndeplini aceste condiii, agenii microbieni trebuie s se multiplice pe alimentele contaminate, s ating concentraii nalte sau n unele cazuri sproduc cantiti mari de toxine, iar consumatorul s ingere cantiti relativ mari din alimentul contaminat.

n noiunea de toxiinfecie alimentar sunt incluse urmtoarele grupe deentiti morbide :

a) infeciile alimentare care sunt produse de ageni infecioi ingerai o dat cu alimentele i care se multiplic la nivelul epiteliului intestinal, lezarea acestuia determinnd tulburrigastrointestinale (xemplu: gastroenterita acut viral);

b) toxiinfeciile alimentare propriu - zise, produse de bacterii i parazii care i exercit aciunea patogen n acelai timp prin invazie i toxinele pe care le elaboreaz att n aliment ct i n organismul bolnavilor (exemplu: gastroenteritele produse de salmonella , shigella , E. coli, V. cholerae , V. parahaemolyticus, C. jejuni , B. cereus (forma diareic), C. Perfringens, toxoplasmoza , trichineloza);

c) toxiinfeciile de origine microbian n care mbolnvirea este determinat de prezena n alimentul ingerat a toxinelor performate ca urmare a multiplicrii n aliment a unor bacterii (C. Botulinum, S. aureus, B. cereus - forma vomitiv, scrombotoxismul), micei (micotoxicoze), sau a acumulrii n timpul vieii n esuturile comestibile ale unor vieuitoare marine (peti, molute bivalve ) a toxinelor prezente n organismul unor dinoflagelai cu care acestea se hrnesc: cignatera, intoxicaia paralitic prin consumul de molute bivalve,tetrodointoxicaia . n ambele situaii , toxinele care provoac mbolnvirea omului sunt produse de microorganisme i ajung n organismul acestuia odat cu ingerarea alimentelor n care se gsesc, ceea ce motiveaz includerea acestor mbolnviri n grupa toxiinfeciilor alimentare.Capitolul I - TOXIINFECII ALIMENTARE COLECTIVE1.1 GeneralitiBolile cu origine alimentar ocup o pondere nsemnat n patologiaactual, numrul mbolnvirilor datorate alimentelor fiind n continu cretereAceste aspecte sunt cu att mai ngrijortoare cu ct agenii cauzatoribacterii, virusuri, parazii) sunt confirmai n mai puin de 40% din cazuri(CDC-Centrul pentru controlul bolilor, Morbidity and Mortaly Weekly Report,1922)

Majoritatea alimentelor se altereaz rapid deoarece conin nutrieni pecare microorganismele i utilizeaz pentru dezvoltare. n cazul n care serealizeaz un control adecvat al dezvoltrii microorganismelor, alimentele sepot supune conservrii ndelungate i scade probabilitatea de apariie abolilor cu transmitere alimentar. Alterarea alimentelor i bacteriilecauzatoare de boli sunt controlate prin respectarea normelor de igien pecarcursul procesrii i conservrii alimentelor.

Cele mai frecvente microorganisme ntlnite n alimente sunt bacteriile,urmate de fungi i drojdii, iar virusurile sunt transmise de obicei n mod directde la purttor la persoana receptiv sau prin intermediul alimentelorcontaminate de purttori. Paraziii nu sunt n mod obinuit ntlnii nalimentele procesate sau preparate termic i nu se multiplic n alimente.

Factorii care influeneaz dezvoltarea microorganismelor suntreprezentai de: temperatur, oxigen, umiditate relativ, activitatea apei, pH,nutrieni i diferite tipuri de inhibitori.

Fiecare microorganism se dezvolt cel mai rapid la temperaturaoptim, dar se poate multiplica ntr-un interval delimitat de temperaturimininime i maxime. Cu ct temperatura este situat mai la distan de valoareaoptim , cu att viteza de dezvoltare este mai redus . Temperatura mediului controleaz astfel rata de cretere i realizeaz o selecie a microorganismelor care se vor dezvolta cel mai rapid. Cele mai multe microorganisme se dezvolt bine ntre 14 - 40 C dei unele se pot dezvolta chiar sub 0 C, iar altele pot crete la temperaturi de pn la 100 C.

n funcie de valoarea de temperatur optim pentru dezvoltare,microorganismele se clasific n: termofile (prefer temperaturile mari, peste 45C);

mezofile (prefer temperaturile ntre 20-45 C);

psichrofile (tolereaz temperaturi sczute, sub 20 C)Unele microorganisme necesit oxigen pentru a se dezvolta (aerobe), altele nu se pot dezvolta n prezena oxigenului (anaerobe), iar o alt grup este indiferent fa de prezena acestui factor (facultativ).

Toate microorganismele au nevoie de ap pentru a se dezvolta. ncazul n care cantitatea de ap disponibil este mai redus dect necesarul,microorganismul se dezvolt mai ncet. Creterea microorganismelor nu esteafectat de cantitatea total de ap, ci de apa disponibil pentru utilizareapropriu-zis de ctre bacterie. Activitatea apei (aw) reprezint procentul deap "liber", coninut de aliment. Multe microorganisme prefer o aw de99. Valoarea umiditii relative reprezint o examinare procentual a activitiiapei (pentru o activitate a apei de 95, umiditatea relativ este 95%).Mucegaiurile se dezvolt pe alimente cu umiditate sczut cu o probabilitatemai mare dect bacteriile. Umiditatea relativ mare din mediu poate realiza ohidratare a stratului superficial al alimentelor, permind astfel dezvoltareamicroorganismelor, chiar dac restul alimentului are o activitate redus aapei. Asigurarea unei ambalri corespunztoare mpiedic umiditateaatmosferic s influeneze structura original a alimentului, evirnd astfeldezvoltarea microorganismelor.

Cele mai multe microorganisme prefer un pH neutru (mai alespacteriile). Drojdiile se pot dezvolta bine n mediu acid, valorile optime de pHfiind de 4,0-4,5. Ciupercile pot tolera valori de pH ntre 2,0-8,0, dei sedezvolt cel mai bine la pH acid. Unele bacterii acidofile se pot dezvolta i la pH de pn la 5,2, sub aceast valoare dezvoltarea microorganismelor fiind mult ncetinit.

Alturi de oxigen i ap, microorganismele au nevoie pentru a se dezvolta i de diferite surse de energie (carbohidrai , grsimi , proteine ) , azot (minerale i vitamine). Cele mai multe microorganisme utilizeaz diferii aminoacizi sau alte substane (uree) drept surs de azot. Ciupercile sunt capabile s utilizeze proteine, carbohidrai i grsimi datorit echipamentelor enzimatice complexe pe care le dein.

n ceea ce privete vitaminele, cele mai multe ciuperci i bacterii le potsintetiza, dar sunt i microorganisme care necesit resurse de vitamine, n special cele din grupul B.

Factorii inhibitori sunt reprezentai de substane care ncetinescdezvoltarea bacteriilor, denumii bacteriostatici, iar cei care distrug bacteriilesunt denumii bactericizi. Unele substane bacteriostatice pot fi folosite dectre procesatori n tehnologia unor produse alimentare (nitriii).

n industria alimentar este adesea utilizat noiunea de biofilm, cereprezint colonii mici de bacterii aderente la suprafee prin intermediul unuimatrix adeziv care retine uor nutrienii sau microorganismele, fiind dificil dendeprtat de ctre substanele dezinfectante. Componentele matrixuluiadeziv sunt secretate de ctre bacterii imediat dup ce acestea ajung pesuprafee, iar biofilmul este complet n numai cteva ore. Pentru ndeprtareaacestora este necesar utilizarea unor substane dezinfectante cu oconcentraie de 10 pan la 100 de ori mai mare.

Procesele alterative se produc n urma aciunii factorilor fizico-chimici,activitii sistemelor enzimatice specifice substratului, dar i aciuniimicroorganismelor. Aceste procese, de cele mai multe ori, se produc frmodificri organoleptice ale produselor.Transformrile fizice sunt vizibile n comparaie cu cele chimice i serefer la: culoare, consisten, textur, miros i arom, fiind relativ uor deapreciat.

Modificrile chimice sunt consecina activitii enzimelor proprii alimentelor i ale microorganismelor care contamineaz alimentele, aceasta reducnd proteinele, grsimile, carbohidraii i alte molecule cu dimensiuni mari, la compui simpli. Descompunerea nutrienilor din alimente avanseaz pe msur ce crete numrul de microorganisme.

Intoxicaia alimentar reprezint o entitate morbid de natur alimentar provocat de toxine de origine bacterian. Infeciile alimentare sunt boli neprovocate de toxine bacteriene ci de ingerarea unor microorganisme (bacterii, virusuri sau parazii). Toxiinfeciile alimentare sunt boli cu origine alimentar provocate de factori combinai, realizndu-se att intoxicaia ct i infecia alimentar.

Bolile alimentare psihosomatice sunt urmarea unui mecanism tipplacebo, determinate de observarea simptomelor specifice la alte persoanecare au consumat acelai aliment sau prin identificarea unui element strin(insecte sau roztoare ) n acesta.1.2 CauzeOu, carne, lapte, ngheat, fric, maionez, etc aceste alimente alterate, alturi de fructele i legumele nesplate sunt cauzele cele mai frecvente ale toxiinfeciilor alimentare. Simptomele toxiinfeciilor alimentare diaree, greuri, vrsturi, dureri abdominale apar la 3-16 ore dup consumarea alimentelor alterate.

Cei mai frecveni germeni care dau toxiinfecie alimentar sunt Staphylococcus aureus i Salmonella.

Salmonella este o bacterie care se gsete n carne, preparate din carne, tocturi, mezeluri, preparatele din ou. Staphylococcus aureus se dezvolt mai ales n alimentele care conin proteine i sare n cantitate mare: brnzeturi sau lactate de orice fel.

Cazul cel mai frecvent de infecie stafilococic este cel al persoanelor care mnnc brnzeturi cumprate din pia de la vanztorii ambulani, care le depoziteaz n condiii improprii.

Atentia pentru alimentaie presupune evitarea consumului de produse i buturi alterate, vechi sau de calitate ndoilenic, care sunt contaminate cu bacterii i parazii ce atac organismul.

Toxiinfeciile alimentare sunt datorate i recipientelor nesplate n care se pregtete mncarea. De aceea, prioritare trebuie s fie regulile stricte de splare i curare a fructelor, legumelor i, nu n ultimul rnd, a veselei.

Majoritatea alimentelor care provoac toxiinfeciile alimentare includ produse animale nesupuse corespunztor procesului termic, brnz, ou i pete.

Un alt factor rspunztor de aceast problem este contactul produsului alimentar cu un mediul nconjurtor neigienizat sau contaminat. Fructele pot prezenta risc pentru o toxiinfecie alimentar atunci cnd culturile au fost irigate cu ap contaminat sau cnd, pentru creterea lor, s-au folosit ngrminte chimice ce nu pot fi tolerate de organism.

1.3 SimptomeCel mai adesea, toxiinfeciile alimentare se caraterizeaz prin aparitia diareii, nsoit de dureri abdominale, greuri, vrsturi, balonri, colici abdominale, n unele cazuri dureri de cap, paloare, transpiraii, chiar febr.Numrul persoanelor care fac toxiinfecie alimentar dup ce au consumat produse din carne este mai mare decat al celor care se mbolnvesc de la brnzeturi. Carnea i oule, dac nu sunt inute la rece sau dac nu sunt gtite corespunztor, dau toxiinfecie salmonelozic.

Simptomele toxiinfectiilor alimentare apar la cteva ore de la ingestia alimentului contaminat. Microorganismele sunt rezistente la aciditatea gastric, de aceea trec prin stomac i ajung la nivelul intestinului subire, unde se prind de pereii acestuia i ncep s se multiplice. Unele microorganisme rmn n peretele intestinal, altele produc toxine care sunt eliberate n circulaia sangvin, iar altele invadeaz diferite esuturi i organe.Nu toate toxiinfeciile alimentare au aceste simptome "clasice". Unele intoxicaii alimentare au alte simptome mult mai grave: intoxicaia alimentar cu Clostridium botulinum, bacterie care provoac botulismul i care conine o neurotoxin capabil s provoace paralizie nervoas i muscular. Simptomele apar la aproximativ 18-36 ore de la infecie i includ slbiciunea generalizat i vederea dubl. Paralizia progreseaz din regiunea capului (nervii cranieni) i cuprinde apoi ntreg corpul;

toxoplasmoza, o infecie produs de un parazit, Toxoplasma gondi, nu are de obicei simptome sau are doar simptome minore precum cele aprute n rceal. Uneori se pot identifica adenopatii (inflamaia ganglionilor limfatici), dureri i crampe musculare, care pot dura de la cteva zile la cteva sptmni.1.4 Diagnostic

Din moment ce majoritatea toxiinfeciilor alimentare se vindec de la sine, fr a necesita un tratament medicamentos, nu este necesar un consult medical.

Medicul poate formula diagnosticul de toxiinfecie alimentar pe baza istoricului medical, al simptomelor i examenului clinic general. Este important ca pacientul s relateze ce alimente a consumat i dac i ceilali membrii ai familiei sau anturajului au dezvoltat simptome asemntoare.

De cele mai multe ori sunt efectuate urmtoarele teste i investigaii:

coprocultura, poate fi cerut de medic n cazul n care este suspectat ingestia unor alimente contaminate bacterian (virusurile i parazitii care pot de asemenea determina toxiinfecii alimentare, nu cresc n cultur) i care provoac simptome grave cu o evoluie sever a bolii. Experii recomand efectuarea unei coproculturi n cazurile de intoxicaie alimentar cu diaree cu durata mai mare de o zi, mai ales dac aceasta este nsoit de febr, scaun sanghinolent, deshidratare sever sau n cazul n care pacientul a efectuat de curnd un tratament antibiotic, a fost internat n spital sau are grij de un copil mic;

examenul microscopic al scaunului, poate identifica parazitul responsabil de intoxicaia alimentar cu giardia;

teste de snge (hemoleucogram complet i biochimia sngelui) sunt utile n determinarea etiologiei intoxicaiei alimentare (virale sau bacteriene) sau n cazul evalurii severitii sindromului de deshidratare;

teste pentru toxoplasmoz (anticorpii antitoxoplasma), n cazul persoanelor cu sistem imun deficitar (n special cele cu infecie HIV-SIDA) sau n cazul femeilor nsrcinate, unde exist suspiciunea expunerii la parazit (pisica este purttor al acestui parazit i poate contamina direct femeia nsrcinat)

Medicul trebuie s raporteze boala (toxiinfecia alimentar este o boal infecioas), pentru a identifica un posibil focar i a elimina posibilitatea apariiei unei epidemii.

1.5 Tratament

n majoritatea cazurilor simptomele intoxicaiei alimentare dispar n cteva zile (2-3 zile) fr apariia unor complicaii, astfel c nu este necesar nici un tratament medicamentos.

Este suficient controlul adecvat al simptomelor precum diareea i evitarea apariiei complicatiilor, fr a fi necesar un tratament antibiotic. Deshidratarea cauzat de diareea sever este principala complicaie care poate aprea. De asemenea, sunt necesare 2-3 zile pn la atenuarea sau dispariia simptomelor i mai multe zile pn la apariia unui scaun de consisten normal.

Scopul principal al tratamentului este nlocuirea lichidelor i electroliilor pierdui prin diaree sau vrsturi. Dac deshidratarea este sever i reechilibrarea hidroelectrolitic nu poate fi realizat la domiciliu, este recomandat internarea n spital cu efectuarea tratamentului parenteral.

Medicaia antidiareic nu este de obicei recomandat n tratamentul intoxicaiilor alimentare, pentru c se stopeaz astfel mecanismul de curire a intestinului de microorganismele patogene, precum i de toxinele acestora, cu nrutirea diareei i a celorlalte simptome. Antidiareicele sunt folosite doar n cazul recomandrii medicului.

De asemenea, antibioticele nu sunt recomandate decat n cazul n care infecia a depit intestinul i afecteaz alte esuturi i organe.

Tratamentul medicamentos este ns obligatoriu n cazul femeilor nsrcinate care sunt diagnosticate cu toxoplasmoz i listerioz.

Opiuni de medicamente

Tratamentul medicamentos este rar folosit n toxiinfeciile alimentare, antibioticele sunt folosite doar n cazurile severe.

Botulismul necesit ca i tratament administrarea de antitoxin botulinic, precum i monitorizarea atent a complicaiilor posibile.

Campilobacterioza, se trateaz de obicei n ambulator (acas), n cazurile severe fiind necesar tratamentul antibiotic.

Listerioza poate fi grav mai ales dac apare la femeile nsrcinate pentru c poate provoca moartea ftului. n acest caz este, de asemenea, obligatoriu tratamentul antibiotic.

Toxoplasmoza este, de asemenea, grav n cazul femeilor nsrcinate i este tratat cu spiramicin, un medicament cu afinitate mare pentru placent. 1.6 Regim alimentar

Majoritatea toxiinfecilor alimentare se rezolv de la sine la domiciliu fr necesitatea unui tratament medicamentos.

Cel mai important lucru n evolutia intoxicaiilor alimentare este prevenirea deshidratrii care poate fi destul de grav n unele cazuri. Persoanele care au un risc crescut de a dezvolta deshidratare sever sunt nou-nscuii i vrstnicii.

Este recomandat folosirea soluiilor speciale pentru rehidratare, concepute special pentru restabilirea echilibrului hidroelectrolitic. Dieta de tranziie este nlocuit cu dieta normal la 2-3 zile dup dispariia simptomelor.

Odat cu mbuntirea strii generale, se poate ncepe dieta de tranzitie cu banane, orez, sos de mere (compot de mere proaspt), pine prjit sau biscuii. Trebuie evitate alimentele condimentate (irit tractul gastrointestinal), fructele proaspete, alcoolul, cafeaua pentru primele 2 zile de diet i produsele lactate pentru primele 3 zile de la dispariia simptomelor.

Medicaia antidiareic nu este de obicei recomandat n tratamentul intoxicaiilor alimentare, pentru c se stopeaz astfel mecanismul de curire a intestinului de microorganismele patogene, precum i de toxinele acestora, cu nrutirea diareei i celorlalte simptome. Antidiareicele sunt folosite doar n cazul recomandrii medicului.

De asemenea, antibioticele nu sunt recomandate decat n cazul n care infecia a depit intestinul i afecteaz alte esuturi i organe.

Tratamentul medicamentos este ns obligatoriu n cazul femeilor nsrcinate care sunt diagnosticate cu toxoplasmoz i listerioz.1. 7 PrevenirePentru prevenirea toxiinfeciilor alimentare este recomandat evitarea:

alimentelor vechi, nesplate;

crnii insuficient fierte sau pregtite n snge la grtar;

laptelui nefiert.

Totodat, e bine de tiut c depozitarea i pstrarea unor alimente cu un nivel de perisabilitate ridicat oule, carnea de pui, petele, lactatele trebuie fcut n cele mai bune condiii.

Cel mai important remediu in toxiinfeciile alimentare este prevenirea deshidratrii, cauzat de diaree i vrsturi. De aceea este necesar s se consume ct mai multe lichide, fr acid, pentru rehidratare, dar i pentru eliminarea toxinelor din organism.

Sistemul digestiv (implicit colonul) are rolul unui sistem colector al organismului nostru. De aceea, curarea lui este vital. Cel mai important pas ar fi s inem o cur de detoxifiere pentru a ne restabili starea de sntate.

Un organism intoxicat nu are capacitatea de a elimina singur toate reziduurile nocive; o dat cu acest proces de acumulare a toxinelor, autointoxicarea devine mai pronunat. Aceste fenomene de autointoxicare nu sunt rare i pasagere, este bine s cunoatem faptul c multe boli ncep cu afeciunile colonului care sunt neglijate.

n aceste condiii, este oportun o cur de dezintoxicare cu ColonHelp care, prin ingredientele sale speciale, produce o dezintoxicare lent, uoar, fr a fora organismul restabilind starea de sntate. 1.8 Enterocolita la copiiEnterocolita acut este o afeciune infecios inflamatorie a intestinului, caracterizat prin apariia diareei (scaune frecvente, lichide sau cu consisten modificat, cu elemente patologice de tip mucus, puroi sau snge) alturi de alte semne clinice: febr, anorexie, vrsturi, stagnarea ponderal, colici abdominale (manifestate la sugari prin agitaie, iritabilitate).

Frecvena mare a scaunelor i uneori modificarea pH-ului acestora poate favoriza i apariia eritemului fesier, care accentueaz agitaia sugarului.

Etiologia enterocolitei poate fi infecia bacterian (Escherichia coli, Shigella, Salmonella, Yersinia etc.), viral (cel mai frecvent cu Rotavirus) sau parazitar (Giardia).

Transmiterea se face cel mai frecvent pe cale fecal-oral, dar i prin alimente, ap contaminat sau direct de la o persoan la alta.

Factorii care favorizeaz apariia enterocolitei acute sunt: vrsta mic: pe de o parte n primul an de via sistemul imunitar al sugarului este nc incomplet format iar imunitatea dobndit este nc precar, pe de alt parte prin comportament sugarul i copilul mic au o rat mare de expunere la germeni (tendina de a duce obiectele la gur); greutate mic n raport cu vrsta, malnutriia sau rahitismul preexistent; alimentaia artificial n primul an de via (alimentaia natural, la san, are efect protector); frecventarea unor colectiviti de copii; tratamentul prelungit cu antibiotice.

Principalele consecine negative ale enterocolitelor acute sunt deshidratarea i pe termen lung, malnutriia. Riscul de deshidratare este mai mare la sugar decat la alte vrste, deoarece avnd o suprafa corporal mai mare raportat la greutate, pierderea de lichide este mai mare i mai rapid; de asemenea corpul sugarului are o proporie mai mare de ap decat adultul, ceea ce l face mai sensibil la pierderea de lichid.

Riscul de malnutriie apare n legatur cu enterocolitele recurente, fiind determinat att de dietele restrictive ct i de malabsorbia intestinal care apare n aceste perioade.

Pentru a preveni aceste consecine negative, apariia enterocolitei acute la sugar impune tratament prompt.

Tratamentul corect se face n funce de examenul clinic, prin care medicul poate aprecia starea de hidratare a organismului i se poate orienta n privina unei posibile etiologii, deoarece rezultatele de laborator (coprocultura) sunt obtinue mai trziu i sunt de multe ori neconcludente.

Tratamentul are ca principii terapeutice: rehidratarea: care n funcie de gradul deshidratrii i de starea clinic a copilului (dac prezint vrsturi, dac accept aportul oral) se poate face fie pe cale oral fie pe cale parenteral (perfuzii); tratamentul dietetic: dup nlocuirea pierderilor hidroelectrolitice se ncepe realimentarea, care variaz n funcie de vrst i alimentaia anterioar a copilului; la sugarii alimentai la sn se poate menine alimentaia natural, ns la cei alimentai artificial se va nlocui preparatul anterior cu o formul de lapte fr sau srac n lactoz; la copiii mai mari care primesc alimente solide realimentarea va ncepe cu alimente bogate n pectine de tipul morcovilor, orezului, apoi brnz de vaci, pine prjit, carne slab fiart, paste finoase etc.; medicamente antidiareice de tipul: Smecta; tratamentul cu antibiotice: este indicat cnd coprocultura a relevat etiologia bacterian sau cnd aspectul clinic i epidemiologic este sugestiv pentru o diaree acut bacterian (scaune cu puroi snge sau mucus, frecventarea unei colectiviti de copii, vrsta mic, alimentaie artificial, malnutriie, rahitism etc.). ns tratamentul cu antibiotice n cazul diareei acute va fi instituit numai la recomandarea medicului i cu preparatul, doza i pe durata stabilit de ctre medic.

Aadar, dac medicul care a consultat copilul a indicat un tratament cu antibiotice, nseamn c starea clinic a sugarului impune acest tratament i/sau are motive s suspicioneze o enterocolit bacterian.Capitolul II - BACILI GRAM NEGATIVI DE INTERES MEDICAL2.1 Familia enterobacteriaceae-taxonomie

Familia Enterobacteriaceae cuprinde cel puin 27 de genuri i 127 de specii, la care se mai adaug 8 grupuri enterice. Fiind controversat, taxonomia familiei Enterobacteriaceae este supus unor schimbri permanente.Genul Enterobacter (Familia Enterobacteriaceae) cuprinde 14 specii, doar 7 fiind ocazional izolate din produsele patologice umane: Enterobacter aerogenes;

Enterobacter agglomerans;

Enterobacter cloacae;

Enterobacter sakazakii;

Enterobacter gergoviae; Enterobacter taylorae; Enterobacter amnigenus; Enterobacter asburiae; Enterobacter hormaechei.Speciile cele mai frecvent ntlnite sunt primele cinci.Enterobacterii cu importan medical Tabelul nr. 1GenulSpeciaPrincipalele afeciuni

EscherichiaE. coliInfecii urinare, ale plgilor, gastroenterite

ShigellaS.dysenteriaeDizenteria bacilar

S. flexneri

S. boydii

S. sonnei

SalmonellaS. typhyFebrele enterice

S. paratyphi A, B, C

S.typhimuriumToxiinfecii alimentare

numeroase alte serotipuri

KlebsiellaK. pneumoniaeInfecii urinare, infecii cu diverse localizri

K. ozenae

K. rhinoscleromatis

K. oxytoca

ProteusP. mirabilis

P. vulgaris

P. penneri

P. myxofaciens

MorganellaM. morgani

ProvidenciaP. stuartii

P. rettgeri

P. alcalifaciens

YersiniaY. pestisCium, septicemii, enterite, adenit mezenteric

Y. pseudotuberculosis

Y. enterocolitica

EnterobacterE. cloacaePatogenitate general redus

E. aerogenes

SerratiaS. marcescens

CitrobacterC. freundii

2.2 Habitat

Enterobacteriile sunt germeni ubicuitari - se izoleaz din sol, ap, plante, intestinul omului i animalelor. Majoritatea (Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis etc.) fac parte din flora normal a organismului i pot produce infecii oportuniste. Unele specii ca de pilda Salmonella typhi - au habitat exclusiv uman (bolnav sau purttor sntos).

Din punct de vedere al patogenitii, germenii din aceast familie se mpart n nalt patogeni (Salmonella, Shigella, Yersinia), condiionat patogeni (E. coli, Klebsiella, Enterobacter, Proteus, Serratia, Citrobacter) sau lipsii de importan n patologia uman.

2.3 Rezistena la aciunea factorilor fizici i chimici

Germenii din aceast familie sunt rezisteni n mediul extern. Rezist 5-6 luni n apele poluate cu materii fecale (genul Shigella rezist doar 2-6 sptmni). Supravieuiesc i se multiplic la temperatura camerei n medii umede, n alimente, n soluii perfuzabile. De aici decurg posibilitile largi de rspndire a lor n colectiviti i n spitale (enterobacteriile se izoleaz frecvent din infecii nosocomiale).

Sunt distrui de caldur (n 30 min la 55-60( C i instantaneu la fierbere), antiseptice i dezinfectante.

Din ce n ce mai multe specii sunt rezistente la numeroase antibiotice, n special prin transfer de plasmide.

2.4 Morfologie, caractere culturale

Morfologie

Sunt bacili gram-negativi de dimensiuni medii (0,3-1 x 1-6( ), cu capetele rotunjite, cu dispoziie n general necaracteristic. Pot fi mobili (cili peritrichi) sau imobili. Nu sporuleaz. Majoritatea enterobacteriilor sunt necapsulate. Unele pot avea o capsul proeminent (Klebsiella), iar altele (Salmonella, E.coli) pot fi nvelite de un material capsular.

Fig. 1 Colonii de enterobacterii (http://www.google.ro/imgres)

Caractere culturale

Facultativ anaerobe, enterobacteriile sunt nepretentioase nutritiv. Se dezvolt cu uurin att pe mediile uzuale (bulion, geloz, geloz-snge), ct i pe mediile selective lactozate (Mac Conkey, AABTL, ADCL, XLD, Istrati-Meitert), pe care putem diferenia enterobacteriile lactozo-pozitive de cele lactozo-negative.

Tulbur uniform mediile lichide (bulionul). Pe medii solide se dezvolt sub form de colonii S sau R. ntre cele dou tipuri pot exista i forme intermediare sau uneori colonii mucoase de tip M (Klebsiella, unele tulpini de E. coli). Proteusul prezint pe unele medii solide (geloz, geloz-snge) fenomenul de invazie.

Caractere biochimice

Clasificarea enterobacteriilor se bazeaz pe studiul caracterelor biochimice, ele constituind criterii importante de identificare a genului i a speciei.

Enterobacteriile prezint unele caractere biochimice comune care le permit ncadrarea n familia Enterobacteriaceae: ( fermenteaz glucoza;( reduc nitraii la nitrii (tab. 2);( sunt catalazo-pozitivi;( sunt oxidazo-negativi (testul oxidazei permite diferenierea enterobacteriilor de ali bacili gram-negativi).Familia Enterobacteriaceae: identificarea preliminar* (dup Ivana, S. .a., 2010)

Tabelul nr. 2GenulMediul T.S.I.Mediul M.I.L.F.UreazCitrat(Simmons)

Glucoza(coloana)H2SLactoza/ZaharozaMobi-litateIndolLizin-decar-boxilazFenil-ala-nindeza-minaz

AcidGaz

Escherichia++b-+b+d+---

Shigella+----V----

Salmonella+--+f--+h

Citrobacter++V++ V--D+

Klebsiella+-+i-V+i-V+i

Enterobacter++-++- V-V+

Hafnia++--+22C-+---

Serratia+V- V+- +j--+

Proteus++-+V-++V

Providencia+V--++-+VV

Morganella++--++-++-

Yersinia+-- V+22-30C V--+-

aSimboluri: + = majoritatea tulpinilor pozitive; - = majoritatea tulpinilor negative; V =variaii n funcie de specie.bCu excepia E. coli inactiv.

cEscherichia fergusonii i majoritatea tulpinilor de E. vulneris i E. coli inactiv nu formeaz lactoz/zaharoz.dExceptnd E. vulneris.

eExceptnd serovarurile typhi i tallinarum de S. enterica.

^Exceptnd serovarul paratyphi A de S. enterica.

gExceptnd serovarurile gallinarum i pulorum de S. enterica.

hExceptnd serovarurile tiphy, paratiphy A., gallinarum ipullorum de S. enterica.

exceptnd K. rhinoscleromatis.

jExceptnd Serratia plymuthica.

kTulpinile de P. myxofaciens nu produc H2S, iar cele de P. penneri produc doar n proporiede 30%.

Unii germeni fermenteaz lactoza (lactozo-pozitivi), iar alii nu (lactozo-negativi), fermentarea fiind un criteriu practic de difereniere preliminar. Astfel, utilizarea mediilor selective lactozate, cum este de exemplu mediul Mac Conkey, permite diferentierea germenilor lactozo-pozitivi (E.coli, Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter, Serratia etc.) care formeaz colonii roii pe acest mediu, de cei lactozo-negativi (Salmonella, Shigella, Proteus, Yersinia) care formeaz colonii transparente (tab. 3, 4 i 5).Caractere de cultivare a enterobacteriaceelor pe medii nutritive simple (incubate 24 ore la 35-37 C) (dup Ivana, S. .a., 2010) Tabelul nr. 3Mediul Aspecte comune ale culturiiAspecte particulare

Forma SForma R

Bulion simplu (bulion glucozat, mediul I)Tulbure, uniform, fr depoziteLimpede ori tulbure n grade diferite, cu inel ori vl i cu depozit

Agar nutritivColonii de 2-3 mm, rotunde, bombate, umede, cu suprafaa neted i marginile regulateColonii de 2-3 mm, rotunde, plate, cu suprafaa rugoas i marginile regulate colonii mucoide de 4-5 mm, rotunde, bombate, cu margini regulate, tendin la confluare, aspect mucos (frecvente la Klebsiella i Escherichia);

colonii pigmentate*

cretere invaziv: n jurul coloniei se dezvolt zone de migrare concentrice (caracteristic pentru genul Proteus)

Agar-snge Ca pe agarul nutritiv; unele tulpini dezvolt hemolizSimilare formei SDepind de tipul hematiilor

* Pigment rou (Serratia spp.), galben (Enterobacter spp., Xenorhabdus spp.), brun (Xenorhabdus spp.)

Medii folosite n diagnosticul enterobacteriaceelor (dup Ivana, S. .a., 2010)

Tabelul nr. 4

Mediul

Substanainhibant

Substanahidrocar-bonat

Indicator

Aspectul coloniilor

PozitivNegativ

Mac Conkey(MC)sruri biliareintegrale icristal violetlactozrouneutruroii, cu halouopalescentnecolorate

Leifson(ADCL)sruri biliare(dezoxicolatde Na)lactozrouneutruroiinecolorat (la bacteriicu H2S pozitiv, centrul negru)

SalmonellaShigella (SS)sruri biliareintegralelactozrouneutruroii, cucentrul opacnecolorate semi-transparente

Istati Meitert(M)bil uscatlactozalbastrubromtimolgalbene opaceverzui sau albastre

Geloz verdebriliant sauChristensen(V.B.)verdebriliantlactozrou fenolgalbene-verzuiroii

Wilson Blair(W.B)verdebriliantglucozasulfit debismutmajoritatea enterobacteriaceelor se dezvolt greu, exceptndSalmonella

Levin (EMB)-lactozeozinalbastrumetilennegre, cu luciumetalicnecolorate sau rod

Drigalski(dup LeMinor)-lactozbromtimolgalbenealbastre

Endo-lactozfuxin,hiposulfitde Naroiiincolore

Gelozalactozati albastrubromtimol-lactozalbastrubromtimolgalbenealbastre

Gassner-lactozmeta-cromgelbi Wasser-blaualbastregalbene

Aspectul coloniilor la principalele genuri de enterobaceriacee (dup Ivana, S. .a., 2010)Tabelul nr. 5MediulSalmonellaShigellaEscherichiaProteus

Wilson Blaircolonii umede,negre pentruS. typhimurium;colonii plate,verzui pentruS. suipestifer iS. typhimuriumnu se dezvolt(afar deS. flexneri iS. sonnei, caredau coloniibrune)nu crete saud colonii rare,mici, gricolonii verzi,neinvadante

Leifsoncolonii incolorecolonii incolorecolonii roiicolonii cucentrul negru

ChristensenLester iJrgenscolonii netede,roii sau rozstrlucitoarecolonii netederoii, strlucitorecolonii groase,galbene-verzuistrlucitoarecolonii izolate,mucoase,galbene sau roz

SScolonii incolore,cu centrul negrupentru salmonelelece dau H2Scolonii incolorerare colonii rozsau rou aprinscolonii rareneinvadante

Istrati Meitertcolonii verzi,albstruicolonii verzi sauverzui-albstruicolonii galbeneopacecolonii izolate,central opace,devenind negre

Geloza verde

briliant

(Christensen)colonii roiinu cretecolonii verzuiuneori coloniirare roii,neinvadante

Mac Conkeycolonii incolorecolonii incolorecolonii roiicu inele

periferice de bilprecipitatinvadeaz

Levin(E.M.B.)colonii incolorecolonii incolorecolonii negre saucu centrul negru,cu reflex metalicinvadeaz

Gelozlactozatturnesolat(Drigalski)colonii albastrecolonii albastrecolonii roiiinvadeaz

Endocolonii incolorecolonii incolorecolonii roiiinvadeaz

2.5 Structura antigenic

Clasificarea antigenic a enterobacteriilor se bazeaz pe trei grupe majore de antigene: antigenul somatic O (polizaharidul O) face parte din structura lipopolizaharidului (LPZ) din peretele celular. Sunt antigene cu specificitate de grup - mpart genul n grupe. Cu anticorpii omologi aglutineaza granular (grunji mici, care nu dispar la agitare); antigenele flagelare H, prezente la bacteriile mobile sunt de natur proteic, pot prezenta variaii. Variaia antigenelor H este cunoscut sub denumirea de variaie de faz. La antigenele H se descriu astfel dou faze: specific (H1) i nespecific (H2). Sunt antigene cu specificitate de tip care mpart grupele n tipuri. Cu anticorpii omologi formeaz aglutinate floconoase, care dispar la agitare; antigenul capsular K este de natur polizaharidic sau proteic i este prezent numai la unele enterobacterii (Klebsiella).

La Salmonella typhi, Salmonella paratyphi C i Salmonella dublin acest antigen de suprafa se numete AgVi.

Studiul antigenic bazat pe determinarea antigenelor somatice O, capsulare K i flagelare H permite ncadrarea bacteriilor aparinnd unui gen n specii sau serotipuri. Tipizarea serologic se efectueaz n mod obinuit n reacia de aglutinare pe lam. n prima etap se execut reacia de aglutinare cu seruri polivalente, apoi cu seruri monovalente.

2.6 Patogenitate

Pricipalii factorii de virulen ai enterobacteriilor sunt: Endotoxina sau lipopolizaharidul (LPZ) face parte din structura peretelui celular i se elibereaz n mediu numai dup distrugerea celulei. Efectele ei nu sunt specifice speciei, ci sunt identice la toate bacteriile gram-negative: dozele mici produc "reacii de alarm" benefice organismului, care cresc rezistena antiinfecioas; dozele mari produc efecte nocive organismului, cu oc endotoxic, hipotensiune, CID. Capsula, prezent la enterobacteriile capsulate, este un factor de virulen - asigur rezistena la fagocitoz. Sinteza de exotoxine. Numeroase exotoxine au fost evideniate la enterobacterii: enterotoxine termostabile i termolabile, Shiga i Shiga-like toxine, hemolizine.

Enterotoxine termolabile au fost evideniate la E. coli i ocazional la Klebsiella, Salmonella.

Enterotoxine termostabile au fost evideniate la E. coli i ocazional la Yersinia enterocolitica i Citrobacter freundii. Ambele tipuri de enterotoxine sunt responsabile de apariia unor scaune diareice.

Shigella dysenteriae elaboreaz o exotoxin cu efect neurotoxic, enterotoxic i citotoxic. Fimbriile sunt factori de ptrundere i aderen. Supravieuirea i multiplicarea intracelular - protejeaz bacteria fa de numeroase antibiotice i de rspunsul imun al gazdei. Astfel, Salmonella, Shigella, E. coli enteroinvaziv i Yersinia sunt germeni cu habitat facultativ intracelular. Supravieuirea lor n diverse celule i mai ales n fagocite favorizeaz diseminarea lor n organism. Rezistena la puterea bactericid a serului. Dei majoritatea bacteriilor pot fi rapid eliminate din torentul circulator, exist i microorganisme virulente capabile s produc infecii sistemice deoarece sunt rezistente la puterea bactericid a serului. Aceast caracteristic poate fi mediat de prezena capsulei, dar exist i alti factori mai puin cunoscui care mpiedic legarea componentelor complementului de bacterie i implicit clearence-ul bacterian mediat de acesta. Rezistena la antibiotice - apare n special prin transfer de plasmide. S-a descris astfel transferul de plasmide ntre specii, genuri i familii diferite.

2.7 Semnificaie clinic

Enterobacteriile sunt germeni responsabili de producerea a numeroase infecii intestinale i extraintestinale. Foarte rar pot aprea infecii generalizate pe un fond de rezisten sczut a organismului.

Enterobacteriile reprezint 80( din totalitatea bacililor gram-negativi izolati i peste 50( din totalul germenilor izolai. De asemenea, sunt implicate n etiologia a 30-35( din septicemii, n peste 70( din infeciile urinare i n majoritatea toxiinfeciilor alimentare. Sunt cauza frecvent a infeciilor nosocomiale.

Germenii care produc infeciile extraintestinale sunt E. coli, unele specii de Klebsiella, Proteus, Enterobacter i Serratia. Patogenii enterici sunt Salmonella, Shigella, E. coli, Yersinia, mai rar Citrobacter, Proteus, Klebsiella, Enterobacter i Serratia, implicaia acestora din urm n infeciile intestinale fiind discutabil.

Sursa de germeni este reprezentat de un rezervor animal (infeciile cu Salmonella), un purttor uman (Shigella, Salmonella typhi) sau flora oportunist a organismului (E. coli etc.).Semnificaia clinic, n cazul evidenierii unor enterobacterii n probele biologice, ine cont de natura produsului patologic i de habitatul normal al germenilor. Astfel, prezena germenilor n probe natural sterile sau n alte zone dect habitatul lor normal, permite implicarea lor etiologic. n cazul produselor normal contaminate se ia n considerare numrul bacteriilor observate, importana reactiei celulare inflamatorii i se determin caracterul de patogenitate al germenului.

Izolarea unor enterobacterii nalt patogene (Salmonella, Shigella, Yersinia pestis) din produsele patologice are ntotdeauna semnificaie patologic (bolnav sau purttor sntos).

2.8 Rspunsul imun, profilaxie i tratament

Rspunsul imun este n general slab, deoarece infeciile sunt localizate la poarta de intrare. n febra tifoid, care este o infecie generalizat, rspunsul imun este foarte puternic.

Profilaxia este nespecific, dar exist i situaii n care se efectueaz profilaxia specific: vaccinarea antitifoidic, la anumite persoane care lucreaz n sectorul alimentar sau al apelor; vaccinare antidizenteric cu vaccin atenuat, mai ales n colectiviti; vaccinare antipestoas - cu germeni inactivai n formalina, persoanelor care pleac n zone endemice.

Tratamentul antiinfecios se face conform antibiogramei, deoarece foarte multe tulpini i mai ales cele izolate din infeciile nosocomiale au dobndit multirezisten, n special prin transfer de plasmide.n organismul uman apar anticorpi anti-O i anti-H care nu au rol protectiv.Patogenitatea tulpinilor de Enterobacter se datoreaz virulenei (tab. 6).Tabelul nr. 6

Factorul de virulenEfectul biologic

Pili de tip 2Favorizeaz afeciunile n afara zonei lor normale de aciune

EnterotoxineIzolate la nou-nscui i sugari cu gastroenterite acute

Adezine Cu rol n aderare i invazie

Sunt enterobacterii foarte rezistente i frecvent ntlnite n patologia nosocomial, factorii de risc ai infeciilor fiind imunodepresia, vrsta fraged, utilizarea diferitelor instrumente i dispozitive medicale contaminate, lipsa controlului riguros al soluiilor perfuzabile, a alimentelor etc. E. coli, Klebsiella i Enterobacter (numrul bacteriilorcoliforme) sunt bacterii lactozo-pozitive pe a cror prezen se bazeaz studiul calitii apei potabile. Controlul infeciilor nosocomiale reprezint principalul pas n profilaxia afeciunilor determinate de Enterobacter spp. PARTEA A II-A

CERCETRI PROPRII Capitolul 3 - SCOPUL LUCRRIIn prezent sunt cunoscute dou tipuri de toxiinfecii alimentaredeterminate de Bacillus cereus: tipul vomitiv, determinat de o toxin cu efectemetizant (o polipeptid ciclic numit i cereulid) i tipul diareic, determinatde cel puin trei enterotoxine (enterotoxina NHE, hemolizina BL ienterotoxina T).Bacillus cereus este o bacterie Gram pozitiv, sporulat, aerob saufacultativ anaerob, izolat relativ frecvent din sol, ap, aer i din alimente, n ceea ce privete alimentele Bacillus cereus este cunoscut ca agent spoliator dar mai ales ca agent etiologic al toxiinfecii lor alimentare.

Abilitatea de a sporula i de a crete la temperaturi sczute constituiefactori care contribuie la incidena crescut a bacteriilor din aceast specie n produsele alimentare de origine vegetal i animal, iar echipamentul enzimatic bogat determin reducerea considerabil a conservabilitii acestor produse.

Bacillus cereus este strns nrudit cu alte specii ale genului Bacillus (B.anthracis, B. mycoides, B. thuringiensis), nrudire manifestat prin asemnri morfologice, biochimice i chiar genetice, fiind, deseori, dificil de difereniat de acestea.Escherichia coli este o bacterie comun ce se gsete n mod obinuit n tubul digestiv al omului i al animalelor cu snge cald. Majoritatea tulpinilor de Escherichia coli sunt nepatogene. cu toate acestea, sunt tulpini, printre care i Escherichia coli O157H7 (EHEC) care produc mbolnviri severe. Aceast tulpin se transmite la om prin consumul de alimente contaminate, cum ar fi carnea de vit consumat crud sau insuficient tratat termic sau laptele crud de vac. Escherichia coli O157H7 a devenit o problem de sntate public n adevratul sens al cuvntului n anul 1982, Escherichia coli O157H7 produce toxine cunoscute sub denumirea de verotoxine sau Shiga-like toxine deoarece sunt similare cu toxinele produse de Shighella dysenteriae. Escherichia coli O157H7 se dezvolt la temperaturi cuprinse ntre 7 C i 50 C cu un optim de temperatur de 37 C; se dezvolt n alimente acide-la un pH de 4,4, precum i n alimente cu un coninut sczut de ap. Este distrus prin tratarea termic a alimentelor, astfel nct temperatura n interiorul produsului s ating 70 C. Escherichia coli O157H7 reprezint serotipul de referin al grupului de bacterii enterohemoragice n relaie cu sntatea public, fiind cel mai des implicat n episoade de toxiinfecii alimentare.

Avnd n vedere aceste detalii, am considerat oportun s efectum un studiu care s ne dea informaii referitoare la gradul de contaminare a alimentelor de origine animal (carne de vit i carne tocat de vit, precum i telemeaua de vac i produsele lactate).

n intervalul de timp luat n discuie s-au analizat un numr total de 181 probe, reprezentnd cele trei tipuri de matrici. probele au fost recoltate din uniti de procesare carne sau lapte i de la productori particulari.

Probele recoltate se individualizeaz prin etichetare, se ambaleaz separat, astfel nct s nu se deterioreze n timpul transportului i se sigileaz pentru a mpiedica substituirea acesteia. Apoi se trimit la laborator, n condiii care s nu determine modificri ale nsuirilor avute n momentul recoltrii.

Capitolul 4 MATERIAL I METODEn perioada ianuarie 2011 - aprilie 2011 au fost examinate 210 probe delapte i produse lactate, precum i 180 de probe de carne de vit, carne tocat de vit i telemea vac recoltate de la diferii comerciani, care aveau lavnzare aceste produse pentru consum sau pentru prepararea unor produseca materii prime. Probele au fost recoltate n funcie de specificul alimentului,cu respectarea condiiilor care s previn modificarea caracteristiciloracestora. Probele au fost pstrate la temperatura de refrigerare pn laanalizare. Probele au fost examinate n vederea izolrii, identificrii icaracterizrii biochimice a tulpinilor de Bacillus cereus i Escherichia coli O157H7 din alimente-carne de vit, carne tocat de vit i telemea de vac.

4.1 Izolarea, identificarea i caracterizarea biochimic a unor tulpini deBacillus cereus izolate din lapte i produse lactate

Pentru izolarea i identificarea tulpinilor de Bacillus cereus s-a folosit metoda SR-ISO 7932/1997. Confirmarea coloniilor caracteristice,dezvoltate pe mediul MEYP dup incubare la 30 C timp de 24 ore, s-a realizat pe baza caracterelor morfologice, culturale i prin testareafermentrii glucozei, a reducerii nitrailor i a producerii de acetil-metil-carbinol.

Gradul de contaminare cu B. cereus s-a determinat prin metodadescris n SR-ISO 7932/1997.

Pentru completarea identificrii s-au aplicat teste API, iar pentrudiferenierea speciei B. cereus de speciile nrudite (B. anthracis, B. mycoidesi B. thuringiensis) s-au folosit testul pentru evidenierea activitii hemolitice,testul pentru motilitate i testul pentru identificarea oxidazei.

Caracterizarea biochimic a tulpinilor de Bacillus cereus izolate s-arealizat cu ajutorul sistemul de teste API (API 50CHB i API 20E), testndu-se, n principal, metabolismul hidrailor de carbon dar i alte caracteristicimetabolice ale acestora. Interpretarea rezultatelor obinute n urma efecturii testelor API s-a fcut computerizat, folosind programul APLIAB 3,2 (bio Merieux Frana) (fig. 2, 3 i 4).

Figura. 2 Colonii mari, neregulate de nconjurate de Figura. 3 Colonii mari cu margini aproape ; zon hemolitic larg regulate

Figura. 4 TesteExaminarea probelor de lapte i produse lactate a condus la izolareaunui numr de 41 de tulpini prezumtive de B. cereus din care, prin proceduradescris de metoda standard, au fost confirmate ca fiind B. cereus 37 detulpini (92,6%). Cele trei tulpini prezumtive neconfirmate, au fost izolate dinlapte crud (2 tulpini) i din lapte pasteurizat (1 tulpin). Aceste tulpini aufurnizat rezultate negative fie la testul pentru reducerea nitriilor, fie la testulVoges Proskauer, fie la ambele teste (tab. 7).

n urma examinrii prin teste API a 17 tulpini de B. cereus din cele 37de tulpini confirmate prin metoda standard, au fost nregistrate dou tipuride rezultate: fie sistemul a propus numai o specie (B. cereus), procentulde identificare fiind mare (peste 90%), fie a propus dou sau chiar trei specii,din cadrul grupului B. cereus, cu procente de identificare mai mici.Tabelul nr.7Izolarea i identificarea tulpinilor de Bacillus cereus prin metoda SR ISO 7932/1997

n primul caz, specia a fost considerat identificat dar n cel de-al doilea caz s-au efectuat teste de fifereniere a speciilor nrudite. Rezultatele au confirmat apartenena la specia B. cereus a tuturor celor 17 tulpini testate.

Identificarea tulpinilor de bacillus cereus prin sistemul de teste API

Tabelul nr. 8

Tulpina i sursade infestare

% idTSpeciaprezumtivTeste de difereniereRezultatfinal

Mobilita-

teOxidazaHemoliza

Lapte crud

Proba 193,80,43B. cereus+-+B.

Proba 263,5/36,30,82/0,83B. cereus/B.++B.cereus

Proba 376,6/22,80,46/0,37B. cereus/B.++B.cereus

Proba 481,9/16,1/0,93/0,91B. cereus/ B.++B.cereus

Lapte pasteurizat

Proba 199,90,45B. cereus+-+B.

Proba 263,9/36,10,90/ 0,84B.mycoides++B.cereus

Lapte praf

Proba 197,00,57B. cereus+-+B.

Proba 299,00,63B. cereus+-+B.

Proba 349,1/41,20,88/0,86B.mycoides+-+B.cereus

Proba 495,40,65B. cereus+-+B.

Brnz de vaci

Proba 193,90,55B. cereus+-+B.

Proba 246,8/35,9/17,30,72/0,6 1 / 0,60B.mycoides/B. cereus++B.cereus

V. Smntn consum

Proba 198,50,62B. cereus+-+B.

Prevalena speciei B. cereus n alimentele examinate a variat ntre8,5% i 37,5%. Prevalenta cea mai mare s-a constatat la probele de laptepraf i la cele de urd.

Dei prevalena speciei B. cereus n alimentele examinate este relativridicat, gradul de contaminare este redus, rareori depind valori deordinul 103-104/g. Valorile cele mai mari s-au gsit la urd i la laptele praf(tab. 9).Gradul de contaminare cu Bacillus cereus a probelor de alimente examinate

Tabelul nr. 9

Nr.

Crt.Denumirea

produsuluiNr. probe

examinateNr. probe

pozitive

(%)Intervalul n

care a

variat nr.

de B.Nr. probelor pozitive (%) n

funcie de nivelul de

contaminare*Limita

max.

conf.

ord.