ftiziologie umfcv c1

7/24/2019 Ftiziologie UMFCV C1

1/36


2/36

Genul Mycobacterium: 50 specii cu

urmatoarele caracteristici:forma bacilara;imobilitatea;acidoalcoolorezistenta;multiplicarea lenta;

aerobioza.


3/36

Clasificarea micobacteriilor:Complexul M. Tuberculosis-strict patogen:

M. tuberculosis;

M. bovis; M. africanum.

Micobacterii netuberculoase potential patogene : cu crestere lenta:

Complexul M.avium;

M. kansasii !"; M.scrofulaceum #";

M. ulcerans $";

M. marinum !";

M. xenopi #";

M. s%ulgai #";

M. simiae !&$";M. 'aemop'ilum $".

cu crestere rapi(a:

M. fortuitum $";

M. c'elonei $". M. leprae.


4/36

Micobacterii netuberculoase nepatogene: cu crestere lenta:

M. gor(onae #";

M. gastri $";

Complexul M. terrae;

M. flavescens #".

cu crestere rapi(a:

M. smegmatis $";

M. vaccae;

Complexul M. parafortuitum $".

Principalul agent patogen la om este Myc. Tuberculosis.

M. Bovis intervine in 5-7% din imbolnavirile tuberculoase

frecvent in localizari e!trapulmonare "#$%.


5/36

Morfologie si structura& acidoalcoolorezistenta-proprietate caracteristica genului

Mycobacterium;

forma de bastonas fin cu lungime '-5(m grosime $#-$)(m;

frecvent grupati sau izolati.

*tructura microscopica& perete format din + straturi "confera forma si elasticitate

corpului bacilar;

membrana celulara cu structura lipoproteica;

citoplasma; structura nucleara& fibre de , ce controleaza metabolismul

si multiplicarea germenilor;

vacuolegranulatii si incluziuni citoplasmatice.


6/36

/ompozitie bioc0imica&1rganism comple! constituit din&

apa;

lipide;protide;

glucide.

Cantitatea de lipide este de 3 ori maimare fata de celelalte bacterii.


7/36

acizi grasi comuni& acidul palmitic "2% oleoc "+%stearic $7% lignoceric cerotic;

acidul mycolic 3 determina acidoalcoolorezistenta;aminoacizi& acidul aspartic "#% leucina "')% alanina"'2% glicina "''% serina prolina valina lisina0istidina arginina etc;

fractiuni ceroase;

cord-factorul 3 to!ina glico-lipidica situata in pereteraspunzatoare de patogenia tuberculoase;

protide - tuberculinace induce 0ipersesibilitatea de tipintarziat;

enzime& catalaza aconidazaizocitric de0idrogenazafumeraza malic de0idrogenaza piruvic de0idrogenaza

mycolat sintetaza etc.


8/36

Forma L, spheroplasts de micobacterii :au peretii alterati;sferoidale;

dimensiuni mici;nu se dezvolta pe medii de cultura;nu induc raspuns celular;sunt persistente in organism;

isi pot dobandi forma bacteriana initiala;raspunzatoare de reaparitia bolii prin revenirea la

forma initiala datorita cord-factorului din peretelebacilar.


9/36

Proprietati generale ale Myc tuberculoase se multiplica mult mai lentdecat bacteriile comune "bacilul

4oc0- #$ ore; colibacil sau salmonella ore; rezista la agentii fizici mult mai bine decat alte microorganisme; bacilul 4oc0 nu se dezvolta in afara unui organism animal; prezinta o to!icitate foarte redusa pentru tesutul animal;

reactia specifica a organismului apare dupaapro!imativ # saptamani de la in0alarea bacilara;

absenta reactiei tisulare permite multiplicareagermenilor fara obstacol timp de # saptamani;

reactia de aparare la '5 zile dupa in0alarea primului

b.4. si va impiedica multiplicarea nestingerita agermenilor. numai Myc. Tuberculosis Myc. Bovis si Myc. ,fricanum

determina boala la om "astazi tipul bovin isi reduce considerabilponderea pretutindeni.


10/36

Punerea in evidenta a bacilului tuberculosMetode microscopice;

Metode biologice.ecoltarea produselor patologice

inaintea administrarii medicatiei antibacilare; la bolnavii sub tratament dupa + zile de intrerupere;

in camere speciale; 6n recipiente speciale&

-cu capac etans;-cu benzi adezive pentru identificare.

e!aminarea a minim + produse patologice "5-'$ produsepentru leziuni paubacilare;perioada de recoltare #-+ zile consecutive; prelucrarea produsului la cel mult +-5 zile;

pastrarea produsului la frigider "la 2/.


11/36

8/6P68T P8T9 8/1:T,8, *P9T86


12/36

Te'nici (e recoltare a pro(uselor patologice

Pentru diagnosticul tuberculozei pulmonaresputa e!pectorata spontan;

cantitate minima de #-+ ml.

Metode de provocare a expectoratiei:efortul voluntar de tuse;

tubaul gastric;

aerosoli e!pectoranti cu a/l '$% timp de '$-'5 minute;

spalatura laringo-tra0eala;

aspiratul bronsic in timpul bron0oscopiei.


13/36

Pentru diagnosticul tuberculozei e!trarespiratorii

Tuberculoza renala&

toata urina de dimineata -toaleta e!terna anterioara;interzis anti0istaminice si vitamina / cu #2 ore anterior;

intreruperea tratamentului antibacilar minim 5-7 zile;

baloane de sticla #5$ ml cu gatul lung si fundul plat.

Tuberculoza genitala&

la barbati& urina sau sperma;

la femei& -sange menstrual;

-fragment din c0iureta uterin;

-secretii cervico-uterine;

-lic0id de spalatura uterina.


14/36

Meningita tuberculoasa& lic0id cefalora0idian recoltat prin punctie ra0idiana.

Tuberculoza abdominala peritoneala intestinala lic0id ascitic;

fragmente de peritoneu intestin ganglioni mezentericiprin lapatotomie.

Tuberculoza osoasa fragment din c0iureta bioptic al leziunilor osoase;

punctate din abcesele osteo-articulare.

Tuberculoza ganglionarapuroi fistulizat;

punctat ganglionar;

fragment bioptic.


15/36

/onservarea si transportul produselor patologiceconservare la temperaturi de


16/36

6. Metode microscopice de evidentiere,naliza frotiului efectuat -direct din produsul patologic;

-dupa omogenizarea si concentrarea produsului.

Te0nica frotiului directdesc0iderea recipientelor;intinderea frotiului pe lama "cat mai subtire;

uscarea si fi!area frotiului pe lama.


17/36

Te0nica frotiului dupa omogenizare- concentrareomogenizarea produsului patologic;concentrarea bacililor prin centrifugare la +$$$

rotatii=minut timp de +$ de minute;

intinderea frotiului din sediment;uscarea frotiului.

/olorarea frotiuluicoloratie >ie0l-eelsen;

coloratie pentru microscopia cu fluorescenta"colorant auramina-r0odamina timp de 5 minute.


18/36

8!aminarea microscopica a frotiurilormicroscop binocular cu obiectiv de

imersie "?$@ '$$@ si ocular cu putere

de marire moderata pentru frotiuricolorate >ie0l-eelsen;

microscop binocular cu sursa deultraviolete pentru frotiuri colorate cu

auramina-r0odamina.


19/36

Nr. BAAR Nr. campuri decitit

Notarea rezultatelor

Cantitativ Semicantitativ

0

1-3/300 1-9/100 1-9/10 1-9/1

>9/1

300

300 300 100 50 5

BAAR ne!ativ Nr./300 "#e repeta$ Nr./100c Nr./10c Nr./1c Nr./1c

BAAR ne!ativ % "#e repeta$

1&"&$ &"&&$ 3&"&&&$ '&"&&&&$

otarea rezultatelor pentru metoda >ie0l-eelsen


20/36

(luore#centa

"00-50)$

Notare #emicantitativa *ie+l-Neel#en

",00-1000)$

0 1-3/300c 1-9/10c

1-9/1c 10-90/1c

>90/1c

BAAR ne!ativ % "#e repeta$

1&"&$ &"&&$ 3&"&&&$ '&"&&&&$

0 1-3/300c 1-9/100c

1-9/10c 1-9/1c >9/1c

otarea rezultatelor la e!amenul microscopic prin fluorescenta siec0ivalarea lor cu rezultatele metodei >ie0l-eelsen


21/36

,vantaele metodei microscopice de diagnostic

rapida;

simpla;ieftina;

usor de repetat.

Aezavantaele metodei microscopice de diagnostic&

aport informational limitat- evidentiaza B,,6numai in produsele intens bacilifere "5$$$-'$$$$germeni=ml produs;

nu ofera informatii despre&

viabilitatea bacililor;

identitatea bacililor;

sensibilitatea la medicamente specifice.


22/36

8rori de te0nica si interpretare!eultate fals poitive

alte particule acidoalcoolorezistente;

zgarieturi ale lamelor;precipitate de coloranti vec0i;transportul de B,, de la un produs patologic;inversarea etic0etelor.

!eultate fals ne"ativerecoltarea incorecta a produsului patologic;pastrarea si transportul deficitar;inversarea benzilor adezive de identificare;nealegerea particulelor purulente din produsul

patologic;frotiu prea gros intins;nerespectarea te0nicii de fi!are si colorare;e!aminarea prea rapida si superficiala a lamelor;

defectiuni optice sau mecanice ale microscopului;


23/36

66. Metode biologice

6nsamantarea pe medii de cultura specifice&

solide& :Censtein-Densen;

lic0ide& Doumans Aubos MiddlebrooE 4irc0ner.

8tape&

omogenizare=decontaminare cu concentrarea germenilor prin

centrifugare;insamantarea pe medii de cultura si intubarea la termostat;

controlul cresterii culturilor si interpretarea rezultatelor.


24/36

/ontrolul cresterii culturilor si interpretarea rezultatelor

incubare la termostat la +7/;

primul control la #2 sau 2F de ore;

al doilea control dupa 5-7 zile de la incubare- pentruidentificarea micobacteriilor atipice.

controalele ulterioare vor fi saptamanale pana la Fsaptamani de la incubare.

La fiecare control se vor nota mediile infectate totalsau partial si mediile pe care s#au devoltat

colonii$ inclusiv caracterele morfolo"ice ale coloniilor.


25/36

Cre#terea !emenilor Notarea rezultatului

A#enta coloniilor Su 50 colonii 50-100 colonii

100-00 colonii Colonii numeroa#e "00-500$ Aproape conluente nenumaraile

Colonii conluente ">500$

Ne!ativ Se noteaza numarul eact de colonii

& && &&&

&&&&

%ia"nosticul de cultura b& poitiv se face prinexamenul morfolo"ic al coloniilor si examenul

microscopic al frotiului efectuat din colonii si colorat

'iehl#(eelsen.


26/36

/oloniile de Mycobacterium tuberculosis tipul uman auurmatoarele caracteristici&

crestere eugonica "colonii bine dezvoltate;

colonii cu suprafata neregulata aspect rugos "Groug0conopidiforme;

colonii uscate de culoare galbuie;crestere lu!urianta.

/oloniile de Mycobacterium tuberculosis tip bovin se caracterizeaza prin&

pe medii de cultura solide sunt netede "de tip *Gsmoot0 platemai mici;

crestere disgonica; culoarea coloniilor este albicioasa cremoasa;se disociaza usor in apa distilata;

/0imioterapicele specifice determina disgonia culturilor bacililorde tip uman si cresteri eugonice la tulpinile bovine.

/ulturile micobacteriilor atipice au aspect neted lucios disociaza rapid inapa distilata. 9nele micobacterii sunt pigmentate


27/36

/olonii de Mycobacterium Tuberculosis "0ominis


28/36

Aiagnosticul de cultura pozitiva esre completat de&

microscopia germenilor cultivati;

testul inactivarii catalazei "negativ la M. bovis si

M. tuberculosis si pozitiv pentru micobacteriiatipice;

testul niacinei- pozitiv la M. tuberculosis.


29/36

8rori de te0nica si interpretare a culturii!eultate fals ne"ative:

erori de identificare a produsului patolo"ic$

produs patolo"ic incorect recoltat si pastrat$omo"eniare)decontaminare deficitara$nerespectarea indicatiilor centrifu"arii$medii incorect prelucrate *vechi, uscate+$ timp insuficient de incubare, cu variatii de temperatura$contaminarea mediilor inoculate.

!eultate fals poitive:micobacterii netuberculoase sau alte microor"anisme etichetate

drept M.tuberculosis$contaminari de laborator in cursul prelucrarii produsului patolo"ic.

xamen microscopic poitiv neconfirmat prin cultura:

eroare de tehnica si interpretare$ instrumentar de prelevare a sputei steriliat chimic, dar imperfect

curatat cu persistenta de -!/ morti si identificati la examenulmicroscopic$

bacili morti sau cu viabilitate compromisa la pacientii cu tuberculoapulmonara aflati sub tratament specific *bacili colorabili+$

-!# dar necultivabili.


30/36

Testarea sensibilitatii bacililor tuberculosiGcompararea cresterii bacililor pe mediul martor "faramedicamente si pe mediul-test "cu medicamenteincorporate dupa insamantarea unui esantion din

populatia bacilara de testat "61/9:.

M8T1A8&

Metoda concentratiilor absolute;

Metoda proportiilor;Metoda raportului rezistentei.


31/36

Metoda concentratiilor absolutefoloseste inocule standardizate

turbidimetric ce contin 5@'$+-'$2 unitati

viabile care dezvolta colonii confluente pemediul martor;

pe mediul-test cresterea este nula saunesemnificativa pentru tulpini sensibile sisemnificativa pentru culturi rezistente.


32/36

Metoda proportiilorinsamantarea de suspensii bacilare cu mai multe

dilutii zecimale pentru a obtine la cel putin una dindilutii colonii numarabile.

Metoda raportului rezistenteidetermina concomitent sensibilitatea tulpinii test si

pe cea a unei tulpini standard sensibile iar

rezultatul e!prima raportul dintre concentratia demedicament necesara in0ibarii tulpinii test fata decea martor.


33/36

Metode moderne de diagnostic micobacteriologic

Metoda -C0Cmonitorizeaza cresterea micobacteriilor in medii de cutura lic0ide

prin dozarea radiometrica a /1#marcat cu carbonradioactiv "'2/produs de metabolismul bacterian;

rezultat cu 7 zile mai rapid; testeaza si c0imiosensibilitatea in timp scurtat.

Metoda M-)-ac0elimina dezavantaul radioactivitatii ;monitorizeaza colorimetric cresterea micobacteriilor; foloseste detectorul colorimetric a carui culoare vireaza de la

verde la galben pe masura acumularii de /1#;

rezultatul cu '$-'5 zile mai rapid fata de mediile de cultura solideclasice.

Cromato"rafia aciilor micolicidetermina profilul acizilor micolici din peretele bacilar cu

identificarea speciei in mai putin de #2 ore.

metoda pur stiintifica laborioasa si costisitoare


34/36

1onde "enetice

bazate pe identificarea ,A micobacterian cu sondemoleculare.

1erodia"nosticul si detectarea anti"enelor in

produsele patolo"ice

au fost clonate gene pentru identificarea maoritatii

antigenelor micobacteriene recunoscute de anticorpiimonoclonali;

metoda nu are specificitate pentru micobacteria de tipuman;

reactia de polimerizare in lant produce replicarea naturala aacizilor nucleici cu inalta specificitate pentru micobacteriade tip uman "P/.


35/36

Micobacteriile atipicemicroorganisme acidoalcoolorezistente caracterizate

prin aspectul coloniilor;

de obicei saprofite pentru om;

uneori pot devenii patogene determinandmicobacterioze;

tabloul clinic similat tuberculozei;

rezistenta obisnuita la medicamentele antituberculoase;

dificultati terapeutice.

/lasificare


36/36

/lasificareFotocromo"ene

/oloniile sunt incolore la intuneric M. Eansasiipigmentandu-se in galben-portocaliu M. marinum

dupa o e!punere de '-# ore la lumina M. simiae1cotocromo"ene

/olonii colorate si la intuneric M.scrofulaceumM. szulgai

(efotocromo"ene

/oloniile nu se coloreaza la intuneric M. avium si nici la lumina M. inracellulare

M. ulceransM. !enopi

Cu crestere rapida

/olonii dezvoltate sub '$ zile M. fortuitumM. c0elonei

ftiziologie umfcv c1

Documents