explorarea_proteinelor_plasmatice

8/7/2019 Explorarea_proteinelor_plasmatice

1/9

Lucrri practice Fiziologie I

1

EXPLORAREA PROTEINELOR PLASMATICE

Plasma, mediul lichidian al sngelui, are n componena sa ap n proporie de aproximativ90% i substanele solvite organice i anorganice n proporie de 10%. Substanele organice sunt

azotate i neazotate iar cele anorganice sunt reprezentate de electrolii i oligoelemente. Dintretoate substanele solvite, proteinele plasmatice reprezint principalul constituent (8%) indeplinesc roluri variate.

1. ROLURILE PROTEINELOR PLASMATICE

Importana proteinelor plasmatice reiese din numeroasele funcii pe care acestea lendeplinesc: Suport plastici nutritiv pentru esuturi, unele proteine fiind preluate i utilizate de ctre

celule pentru sinteza unor constitueni proprii; Transportul unor compui:

- hormoni: de exemplu, prealbumina (TBPA) transport tiroxina (T4), transcortinatransport cortizol;

- vitamine: de exemplu,transcobalamina transport vitamina B12;- metale: de exemplu, ceruloplasmina transport cuprul; transferina transport fierul;- lipide: de exemplu, 2-lipoproteina i -lipoproteina transport lipide;- medicamente i metabolii: albumina leag acidul acetilsalicilic, lidocaina i diazepamul.

Rol de enzime:- unele enzime sunt active la nivel plasmatic: de exemplu, renina degradeaz

angiotensinogenul n angiotensin, plasmina degradeaz fibrina;- alte enzime doar tranziteaz plasma: ASAT (aspartat aminotransferaza), ALAT (alanin

aminotransferaza), FA (fosfataza alcalin), LDH (lacticodehidrogenaza), CK(creatinkinaza). Rol de hormoni: de exemplu, insulina, hormonul de cretere (STH), glucagonul, prolactina

sunt polipeptide; Intervin n procesul de coagulare (factorii plasmatici ai coagulrii sunt proteine) i n

fibrinoliz(plasminogenul este protein); Intervin n aprarea organismului: imunoglobulinele (IgA, IgG, IgM, IgE, IgD) i

complementul (factorii C3i C5) sunt proteine; Intervin n echilibrul acido-bazic prin sistemul tampon al proteinailor; Asigur presiunea coloid-osmotic (p), contribuind la meninerea volumului sanguin i

realizarea schimburilor transcapilare; Influeneazvscozitatea idensitatea sngelui; Influeneazviteza de sedimentare a hematiilor (VSH-ul).

Tehnicile moderne precum imunoelectroforeza, RIA (Radio Immuno Assay),spectofotometrie de mas au permis identificarea ctorva mii de proteine plasmatice (ctevaexemple se gsesc n Tabelul I.).


2/9


2

Tabelul I. Fraciuni proteice plasmatice.Principalele proteine serice Rol Simbol Concentraia

seric (mg%)Prealbumin, Thyroxine-

bindingproteinLeag T4 (tiroxina) TBPA 10-40

Retinol-binding protein Leag retinolul RBP 3-6Albumine Alb 3500 - 5000-Globuline1-Antitripsina Inhib enzime serice 1AT 200-4001-Fetoproteina Marker tumoral 1F ~1gCeruloplasmina Transport Cu Cp 15-602-Macroglobulina Antiproteaz 2M 150-4201-Antichimotripsina Inhib enzime serice 1X 30-60Colinesteraza Seric Hidrolizeaz Acetilcolina CE 0.5-1.5Thyroxine-binding globulin Leag T4 TBG 1-2Transcortina Transport cortizolul TC ~7

-GlobulineTransferina Transport Fe Tf 200-3202-Microglobulina Component a sistemului

HLA I2m Urme

Proteina C Reactiv Marker inflamator CRP


3/9


3

TEHNICI DE DOZARE. Se folosete snge recoltat pe anticoagulant utiliznd urmtoarelemetode: Metoda biuretului: proteinele i peptidele n prezena ionului de cupru, n soluie alcalin,

formeaz un complex de culoare violet a crui extincie se citete ulterior spectroscopicdeterminndu-se concentraia proteic;

Metoda refractometric: se determin indicele de refracie al serului dup tratarea cu acidacetic i ulterior dup coagularea proteinelor prin nclzire, diferena dintre cele doudeterminri reprezentnd concentraia proteinelor;

VALORI NORMALE. Proteinemia variaz ntre 5,5 8 g% sau 55 80 g/l. Valoareanormal este meninut prin mecanisme complexe, fiind rezultatul unui echilibru dinamic ntreprocesele de sintez, n principal la nivel hepatic i intestinal, i cele de utilizare din diferiteorgane.

MODIFICRI PATOLOGICE Scderea proteinemiei sub 5,5 g% se numete hipoproteinemie. Cauze:

- Administrarea intravenoas de lichide n cantiti excesive (scdere relativ);- Aport insuficient (nfometare, malnutriie protein-caloric);- Malabsorbie intestinal (enteropatie exudativ, rezecii de intestin subire);- Sinteza defectuoas la nivel hepatic (afeciuni hepatice cronice);- Catabolism proteic excesiv (neoplasme, hipertiroidism);- Pierderi de proteine pe cale:

- digestiv (enteropatia exudativ, boala Crohn);- cutanat (plamoragiile din arsurile severe i extinse ca suprafa);- renal (glomerulonefrite, sindrom nefrotic).

Cretereaproteinemiei peste 8 g% se numete hiperproteinemie. Cauze:- Deshidratare sever (cretere relativ);- Mielomul multiplu (transformarea malign a limfocitelor B);- Macroglobulinemia Waldenstrm (proliferare malign a limfocitului B care secret IgM).2.1.2. DETERMINAREA CONCENTRAIEI PRINCIPALELOR FRACIUNI

PROTEICE

Principalele fraciuni proteice au urmtoarea concentraie plasmatic normal: Albuminemia: 3,5 - 5,5 g% sau 35 55 g/l; Globulinemia: 2 - 3,5 g% sau 20 35 g/l; Fibrinogenemia: 2 4 g/l.

Raportul albumine/globuline are valoarea normal 1,5 - 2.

2.2. DETERMINAREA CONCENTRAIEI FRACIUNILOR PROTEICEPLASMATICE (VALORI RELATIVE)

2.2.1. ELECTROFOREZA PROTEINELOR PLASMATICE (ELFO)

PRINCIPIU. Se bazeaz pe migrarea fraciunilor proteice n cmp electric, n funcie degreutatea moleculari ncrctura electric, la un pH dat.

TEHNICI DE DOZARE

ELFO pe hrtie de filtru serul migreaz pe o band de hrtie de filtru, oinndu-se oelectroforegram. Aceastareprezint o succesiune de 5 zone ce corespund celor 5 fraciuni


4/9


4

proteice plasmatice majore. Mrimea zonei i intensitatea culorii sunt direct proporionalecu cantitatea de proteine din fiecare fraciune (Fig.1.).

Fig. 1. Electroforeza proteinelor plasmatice (aspect normal)

ELFO pe gel de agaroz - proteinele migreaz n gelul de agaroz spre anod n funcie demasa moleculari dup cteva operaii de colorare, decolorare i uscare se obine un filmcare se introduce ntr-un densitometru pentru citire (Fig.2.).

Fig. 2. Electroforeza n gel de agaroz.


5/9


5

REZULTATEPrin ambele metode se obine un grafic cu ajutorul cruia, fie prin calcule (n cazul

electroforezei pe hrtie de filtru), fie automat (la electroforeza pe gel de agaroz), rezultproteinograma.

VALORI NORMALE

Denumire Valori absolute (g/l) Valori relative (%)Albumine 35 55 50 - 601-globuline 2 4 4,2 - 7,22-globuline 5 9 6,8 - 12-globuline 6 11 9,3 - 15-globuline 7 17 13 - 23

VARIAII PATOLOGICE. Modificrile concentraiei proteinelor plasmatice sau adiverselor fraciuni se ncadreaz n cteva tipuri de disproteinemie (Tabelul II.): Inflamaia acut (exemplu: abcesul dentar, panariiul) Inflamaia cronic (exemplu: tuberculoz) Hipogamaglobulinemia Sindromul nefrotic (pierdere urinar de proteine de peste 3,5g/24h) Enteropatia exsudativ (pierdere de proteine la nivel intestinal) Afeciuni hepatice cronice (ciroza hepatic) Paraproteinemia (hipergamaglobulinemia)

Tabelul II. Tipuri de disproteinemii.Tipul de disproteinemie Proteinemia Alb. 1-glob. 2-glob. -glob. -glob.

Inflamaie acut

Inflamaie cronic Hipo--globulinemie Normal

Sindrom nefrotic Enteropatia exsudativ Afeciuni hepatice cronice

Paraproteinemie(mielom multiplu)


6/9


6

Fig. 3. Aspectul electroforezei n cazul disproteinemiilor.

2.2.2. IMUNOELECTROFOREZA PROTEINELOR PLASMATICE

PRINCIPIUSe bazeaz pe separarea electroforetic n gel de agar a proteinelor din ser, cuplat cu

difuzarea perpendicular pe axa de migrare a unui imunoser poli- sau monovalent. Imunoserurile

au proprietatea de a reaciona specific cu una sau mai multe din componentele specifice dinplasma de cercetat. Reacia antigen-anticorp ntre antigenul plasmatic i imunoser (anticorpi), seevideneaz prin apariia unor arcuri de precipitare ce pot fi colorate, permind identificarea maimultor fraciuni proteice plasmatice (Fig.4.).

Fig.4. Principiul imunoelectroforezei.


7/9


7

3. CALCULAREA PRESIUNII COLOID-OSMOTICE (ONCOTICE) A

PLASMEI

DEFINIIE. Presiunea coloid-osmotic (p) este presiunea dat de proteinele plasmatice, n

special de albumine, care se calculeaz dup formula:

p = 5,5 Albumine (g%) + 1,4 Globuline (g%)

VALOAREA NORMAL. Presiunea coloid-osmotic (p) a plasmei are valoarea normalde 25 30 mm Hg.

IMPORTANA. Presiunea coloid-osmotic (p) este foarte important n schimburiletranscapilare, reprezentnd fora care se opune filtrrii (la captul arterial) i care favorizeazreabsorbia (la captul venos). Scderea concentraiei proteinelor sub 5,5 g% determin scderea

p cu producerea edemelor hipoproteice (Fig.5.).

Fig.5. Rolul presiunii coloid-osmotice la nivelul circulaiei capilare

BULETINE DE INTERPRETARE

S se interpreteze urmtoarele buletine:1. Proteine totale = 79 g/l 2. Proteine totale = 63 g/l

Albumine = 55g/l Albumine = 48%1-globuline = 2g/l 1-globuline = 7%2-globuline = 5g/l 2-globuline = 13%-globuline = 7g/l -globuline = 9%-globuline = 10g/l -globuline = 23%

3. Proteine totale = 50 g/l 4. Proteine totale = 48 g/lAlbumine = 45% Albumine = 40%1-globuline = 5% 1-globuline = 6%2-globuline = 15% 2-globuline = 11%-globuline = 19% -globuline = 13%-globuline =16% -globuline = 30%

S se calculeze i s se interpreteze presiunea coloid-osmotici raportul albumine/globuline nurmtoarele situaii:

5. Proteine totale = 8 g%, din care albumine = 58% i globuline = 42%.6. Proteine totale = 50 g/l, din care albumine = 46% i globuline = 54%.


8/9


8

TESTE (CU UN SINGUR RSPUNS CORECT)

1. Proteinemia are valoarea normal:A. 55 - 80 mg/lB. 5,5 - 8 g%C. 60 - 80 g/lD. 40 - 50 g/l

2. Hipoproteinemia se poate ntlni n:A. Inflamaii acuteB. Mielom multipluC. Aport exagerat de proteineD. Sindrom nefrotic

3. Care din urmtoarele afirmaii este adevrat?A. Proteinemia reprezint concentraia proteinelor din urinB.

p are valoarea normal 25 - 30 mm HgC. p este dat n special de globulinele plasmatice

D. Creterea proteinemiei determin scderea p4. Care din urmtoarele afirmaii este adevrat?

A.n afeciunile hepatice cronice gama-globulinele sunt sczuteB.n afeciunile hepatice cronice albuminele sunt sczuteC.Scderea proteinelor plasmatice sub 7 g% duce la apariia edemelor hipoproteiceD.Proteinele plasmatice nu influeneaz VSH-ul

5. Care din urmtoarele afirmaii este adevrat?A.Majoritatea proteinelor plasmatice sunt produse de rinichiB.n inflamaia acut proteinele totale au valori sczuteC.n sindromul nefrotic proteinele totale i albuminele au valori normaleD.p are importan n schimburile de la nivel capilar

6. Care rspuns, din urmtoarele, este corect?A. Valoarea absolut a albuminelor este 50 60%B. Fibrinogenul are valoarea absolut de 2 4 g/lC. globulinele au valoarea relativ de 7 17 g/lD. Valoarea absolut a proteinemiei este de 50 80 g/l

7. Urmtoarele afirmaii despre disproteinemii sunt corecte:A. Reprezint variaii fiziologice ale concentraiei fraciunilor proteiceB. Inflamaia acut reprezint un proces cu evoluie lenti de lung duratC. n afeciunile hepatice cronice proteinemia are valoare crescutD. n sindromul nefrotic se pierd albumine la nivel renal

8. Urmtoarele afirmaii despre disproteinemii sunt false:A. n inflamaia acut proteinele totale au o valoare normalB. n afeciunile hepatice cronice globulinele sunt crescuteC. n mielomul multiplu globulinele sunt sczuteD. n enteropatia exsudativ se pierd proteine la nivel intestinal

9. Care dintre urmtoarele rspunsuri despre hipoproteinemie este corect?


9/9


9

A. Reprezint o cretere a proteinemiei peste 8 g%B. Poate s apar n rezeciile intestinaleC. Apare n mielomul multipluD. Apare n deshidratare

10. Care dintre urmtoarele afirmaii sunt false?A. Concentraia total a proteinelor plasmatice poart denumirea de proteinemieB. Proteinele au rol nutritiv i plastic pentru esuturiC. Proteinele asigur presiunea coloid-osmoticD. Imunoglobulinele nu intervin n aprarea organismului

Rspunsuri: 1-B, 2-D, 3-B, 4-B, 5-D, 6-B, 7-D, 8-C, 9-B, 10-D

explorarea_proteinelor_plasmatice

Documents