evaluarea biologică a pacientului alergic

Evaluarea biologică a pacientului alergic

Universitatea de Medicină și Farmacie “Victor Babeș” TimișoaraDisciplina IMUNOLOGIE - ALERGOLOGIE

2013

Metode de evaluare in vitro

A. Hipersensibilitatea de tip imediat

1. Determinarea IgE serice

2. Determinarea triptazei serice

3. Testul de degranulare a bazofilelor

B. Hipersensibilitatea de tip întârziat

1. Testul de transformare limfoblastică

L. C.

IgE serice• reprezintă sub 0,001% din totalul

Ig serice = 0,1-0,4 μg/ml

• nivel seric foarte ↓ → pot fi puse în evidență doar prin metode radio-imunologice sau imuno-enzimatice

• timp de înjumătățire – 3 zile

• concentrația serică ↑ → boli alergice și parazitare

L. C.

• dozarea lor din sânge prezintă:

Sensibilitate - 89%

Specificitate - 91%

• niveluri ↓ de IgE totale → probabilitate redusă de boală clinică

• niveluri ↑ de IgE specifice la un alergen → corelație bună cu afecțiunea clinică

Măsurarea IgE circulante oferă o evaluare obiectivă a prezenței sensibilizării la un alergen.

IgE serice totale

IgE serice specifice

IgE serice • IgE serice totale

– cantitatea totală de IgE circulante din sânge

– apar în urma sensibilizării la alergeni

– utile în diagnosticarea bolilor alergice IgE-mediate

– concentrație serică dependentă de vârstă → ↑ în copilărie → valorile atinse în jurul vârstei de 10 ani tind să se mențină și în viața adultă

L. C.

IgE totale 1-6

luni6-12 luni

1-5 ani

6-9 ani

10-15 ani

adult

(UI/ml) 1,5 15 60 90 200 150

• IgE serice specifice

– cantitatea de IgE alergen-specifice prezente în sânge

– apar în urma sensibilizării la un alergen specific → evaluare obiectivă a sensibilizării la un anumit alergen

IgE specifice Titru (UI/ml) Clasa

Nivel nedetectabil < 0,34 0

Nivel scăzut 0,35 – 0,69 1

Nivel moderat 0,70 – 3,49 2

Nivel semnificativ crescut 3,50 – 17,49 3

Nivel crescut 17,50 - 50 4

Nivel foarte crescut 50 - 100 5

Nivel extrem de crescut > 100 6

IgE – Valoarea clinică

IgE serice totale • valori crescute doar la 30-40% dintre pacienții cu rinită alergică

IgE serice specifice • valoare diagnostică similară cu pricktest-ul • paradoxal – sensibilitate mai mică decât testele cutanate • se utilizează în locul pricktest-ului în următoarele situații:

– lipsa extractelor standardizate pentru alergenul suspicionat– pozitivarea controlului negativ – imposibilitate întreruperii terapiei antihistaminice– prezența de leziuni cutanate generalizate

L. C.

Un test NEGATIV nu exclude existența unei sensibilizări alergice


1. Evaluează stadiul de SENSIBILIZARE prin detectarea timpurie a nivelurilor ↑ de IgE, înaintea dezvoltării tabloului clinic

2. Oferă suport în explicația progresiei afecțiunilor alergice → “MARȘUL ALERGIC”

3. Stabilește SENSIBILIZAREA SPECIFICĂ LA ALERGENII implicați în dezvoltarea simptomelor alergice

4. Oferă o orientare clară în stabilirea MANAGEMENTULUI BOLII

L. C.

Identificarea alergenilor implicați

Elaborarea unor sfaturi individualizate → reducerea expunerii la alergeni

Optimizarea planurilor terapeutice individuale (doză, durată, step up/down)

Stabilirea indicației de imunoterapie specifică

Aprecierea dezvoltării toleranței imune (alergii alimentare, imunoterapie specifică)


Identificarea pacienților cu risc de:

a. Marș alergic

b. Exacerbare

c. Cronicizare

Simptome cutanate → Simptome respiratori

Simptome ușoare → Simptome severe

Simptome recurente → Simptome persistente

trecerea progresiva de la o manifestare alergica la alta intr-o anumita perioada de timp

IgE

L. C.








L. C.

Triptaza serică

• principala componentă proteică conținută în granulațiile mastocitare

• principala sursă de triptază – mastocitele activate în urma unei reacții de hipersensibilitate de tip I

• două forme de triptază serică:

– α-triptaza - secretată de către toate mastocitele - reflectă numărul total de mastocite - ↑ în mastocitoza sistemică

– β-triptaza matură - secretată doar de către mastocitele activate - se corelează cu activarea mastocitară - ↑ în anafilaxie

• majoritatea laboratoarelor determină triptaza totală (α + β)

L. C.

Triptaza serică• nivelul seric de triptază

– atinge un vârf la 30-60 min. de la debutul reacției anafilactice

– timp de înjumătățire ≈ 2 h

– valorile se mențin crescute 4-6 h

VN triptaza totală: < 11,4 ng/ml

β-triptaza matură: < 1 ng/ml

VP: triptaza totală >11,4 ng/ml

β-triptaza matură > 2 ng/ml

triptaza totală > 20 ng/ l → se asociază cu mastocitoză sistemică

L. C.

Momentul optim de recoltare este la 30 min. – 3 h de la debut

→ se asociază cu anafilaxie








L. C.

Testul de degranulare a bazofilelor

• evaluarea in vitro a activării bazofilelor în urma contactului cu un alergen:

INDICAȚIIEvaluarea reacțiilor alergice de tip imediat în cazurile în care istoricul bolii, prick-testul și determinarea nivelului seric de IgE nu sunt suficient de sugestive pentru conturarea unui diagnostic.

L. C.

Bazofilele dețin alături de mastocite un rol esențial în răspunsul imun alergic de tip imediat.

–Reacții IgE-mediate

– Reacții nonIgE-mediate (pseudo-alergii → degranulare celulară produsă în mod direct)

–veninuri de insecte–medicamente–acarieni, scuame de animale–latex, formaldehidă și alte substanțe chimice–alimente–materiale dentare și alți alergeni profesionali


AVANTAJE

• Metodă rapidă de diagnostic (1 h)

• Nu prezintă riscuri pentru pacient

• Test funcțional ce reproduce răspunsul imun in vitro

• Sensibilitate bună

• Specificitate ↑

• Nu necesită întreruperea tratamentului antihistaminic

DEZAVANTAJE

• Necesită celule viabile neactivate

• Necesită aparatură performantă

L. C.


L. C.

TEHNICĂ

1. Izolarea bazofilelor din sângele recoltat

2. Stimularea cu extract alergenic

3. Evaluarea flow-citometrică a expresiei CD63

INTERPRETARE

Test POZITIVCreșterea expresiei CD63 > 10% comparativ cu martorul negativ (activare spontană a bazofilelor)

Obs. Un test NEGATIV nu exclude existența unei reacții de hipersensibilitate de tip imediat








L. C.

Testul de transformare limfoblastică (LTT)•singura metodă de evaluare in vitro a hipersensibilității de tip IV

PRINCIPIU

Limfocitele sensibilizate anterior față de un anumit Ag proliferează și se transformă în blaști la o nouă expunere la același Ag

INDICAȚII

1. Evaluarea hipersensibilității de tip IV la medicamente, metale, materiale dentare, alimente

2. Evaluarea unor defecte sau tulburări funcționale ale imunității celulare

3. Evaluarea reactivității limfocitare față de anumiți agenți infecțioși

L. C.

Momentul optim de efectuare LTT - 10 zile → 6 săptămâni de la episodul alergic

Testul de transformare limfoblastică (LTT)

AVANTAJE

•Nu prezintă riscuri pentru pacient

•Relevanță mai mare comparativ cu patch testul

•Nu necesită întreruperea tratamentului antihistaminic

DEZAVANTAJE

•Metodă costisitoare de diagnostic

•Sensibilitate ↓ – 60-70%

•Specificitate - 85%

•Testul nu este standardizat pentru orice alergen și necesită experiență

•Necesită - control pozitiv – excluderea toxicității induse de medicamente

- control negativ – excluderea activării non-specifice

L. C.


L. C.


TEHNICĂ

1. Izolarea limfocitelor din sângele venos periferic

2. Resuspendarea celulelor în mediu de cultură specific

3. Stimularea limfocitelor cu extracte alergenice

4. Adăugarea în ziua 6 de cultură de timidină marcată cu 3H, care se va încorpora în celulele-fiică ale limfocitelor activate (în urma replicării ADN)

5. Cuantificarea sintezei noi de ADN induse de alergen prin măsurarea ratei de incorporare a 3H-timidinei → direct proporțională cu rata de proliferare limfocitară

L. C.

Pe baza ratei de incorporare a a 3H-timidinei se calculează indexul de stimulare (SI)

SI = radioactivitatea încorporată în culturile cu antigenradioactivitatea încorporată în culturile fără alergen


INTERPRETARE

Test NEGATIV

SI < 2 → nu există sensibilizare de tip IV față de alergenul testat

Test POZITIV

2 < SI < 3 → intens sugestiv pentru o reacție pozitivă

SI > 3 → rezultat net pozitiv

Test NECONCLUDENT

Nu s-au întrunit criteriile de validare a testului: – Invalidare controlului pozitiv (lipsa de activare policlonală a

limfocitelor)– Invalidarea controlului negativ (proliferare spontană crescută)

L. C.

Obs. Un test NEGATIV nu exclude existența unei reacții de hipersensibilitate mediată celular

Eozinofilele

VN: 1-4 %

< 350/mm3

Creșterea numărului de eozinofile

> 4%

> 500/mm3

• Afecțiuni alergice • Parazitoze• Neoplazii • Boli inflamatorii autoimune

> 1500/mm3 → sindrom hipereozinofilic

L. C.

→ eozinofilie

Activitatea diaminoxidazei (DAO)alimente cunoscute a

conţine un nivel ridicat de histamină - supuse fermentaţiei microbiene în cadrul procesului de fabricație

histidină (aa conținut în toate proteinele) → histamină

alimente care stimulează eliberarea de histamină în mod fiziologic : albuș de ou nefiert, crustacee, peşte, ciocolată, căpşuni, roşii, ananas, alcool

L. C.

Intoleranța la histamină – consecința dezechilibrului dintre cantitatea de histamină acumulată în organism și capacitatea de degradare a acesteia de către enzima DAO

Deficitul DAO este dobândit:

–afecțiuni gastrointestinale care ↓ producția sa

–inhibarea activității enzimatice prin consum de alcool, medicamente

NU este o afecțiune IgE-mediată → testarea cutanată și IgE serice specifice NEGATIVE

Activitatea diaminoxidazei (DAO)

Indicații:

Pacienți cu suspiciune clinică de intoleranță la histamina (prezența a ≥ 2 simptome tipice cu răspuns favorabil la dieta fără alimente cu conținut ↑ în histamină)

VN: 14-33 UI/ml

INTERPRETARE

L. C.

• activitatea DAO ↓ → capacitate enzimatică ↓ de degradare a histaminei•activitatea DAO ↑ → proces alergic activ

evaluarea biologică a pacientului alergic

Documents