citometria de flux
DESCRIPTION
citometriaTRANSCRIPT
-
CITOMETRIA DE FLUX
-
CE ESTE CITOMETRIA DE FLUX?Metod de msurare a caracteristicilor fizice i/sau biochimice ale particulelor (celule, nuclei, organite celulare):MrimeaGranularitateaCantitatea de ADNAntigene de suprafa
Metod de sortare a celulelor
-
ETAPEPrepararea suspensiei de celule
Marcarea celulelor
Achiziia datelor
Stocarea datelor
Interpretarea datelor
-
PRODUCEREA ANTICORPILOR MONOCLONALIPlasmocite producatoare de AcAntigenFuzionarea celulelor HIBRIDOMMielomAnticorpii monoclonali sunt purificatiClonele dorite se cultiva sau se congeleazaTestarea clonelorHibridoamele se separa si se cultivaCultivarea hibridoamelorMentinerea hibridoamelor in soareci
-
FLUOROCROMIIAcM sunt conjugai cu fluorocromiSpectru de absorbie (excitaie)Spectru de emisiePentru 2 parametri 2 AcM cuplai cu 2 fluorocromi cu spectre de emisie diferite:Izotiocianat de fluorescein (FITC)Phycoeritrin (PE)
-
IMUNOFLUORESCENA101104103102Intensitatea fluoresceneiNumar de evenimente
-
COMPONENTELE CITOMETRULUI DE FLUXSistem fluidic
Sistem optic
Sistem electronic
-
SISTEMUL FLUIDICCelule aflate n suspensie:SngeLichid sinovialLCRGanglioni limfaticiTumori solideLichid de nveli Curent intern unicelular ir indianIntersectare cu un fascicul de lumin
-
SISTEMUL FLUIDICLichid denveliCamer descurgereFluxlaminar
-
SISTEMUL OPTIC DE EXCITAIESursa laser (Ar =488 nm)Fascicul luminos dispersie i stimularea fluorocromilorDispersia luminii:=0 Forward Scatter (FS) dimensiunea=90 Side Scatter (SS) granularitateaEmisia luminii fluorescente:~ cantitatea de fluorocromi info calitative i cantitativeElemente optice de focalizare (lentile)
-
FS I SS
-
SISTEMUL OPTIC DE COLECTAREConversie semnal optic semnal electronic
Detectori pentru:Lumina dispersat: n fa, lateralEmisia de fluorescenFiltre optice
-
CITOMETRUL DE FLUX
-
SISTEMUL ELECTRONICRecepionarea impulsurilor detectorilorPrelucrarea semnaluluiPrezentarea rezultatelor: Histograme 1 parametruGrafice 2 parametri: 1 punct = 1 particul (dot-plot)
-
ELEMENTE FIGURATE
-
GRAFIC DOT-PLOT PENTRUFITC I PEFITC FLPE FLFITC- / PE-FITC+PE+FITC+ / PE+
-
FITC / PE
-
SORTAREA CELULELORSepararea unei (sub)populaii celulare dintr-un amestec:MrimeGranularitateAntigene de suprafa
-
SORTAREA CELULELOR - ETAPEIdentificarea criteriuluiMarcarea cu AcM+fluorocromiIdentificarea celulei e de interes?ncrcare cu sarcini pozitive/negative/frCmp magnetic deflectare spre tuburi colectoareCentrifugare
-
SORTAREA CELULELORLASER 488 nm-Plci ncrcatemagneticTuburi de colectareSenzor FSDetector de fluorescen+--
-
APLICAIIAnaliza subpopulaiilor limfocitareDiagnosticul hemopatiilor maligneBiologie celularIdentificarea unor molecule HLADeterminarea unor autoanticorpiStudiul ciclului i al funciilor celulareDiagnosticul, evoluia, prognosticul tumorilor maligne solideMicrobiologie
-
ANALIZA ADNG2MG0G1s0 200 400 600 8001000sCantitatea de ADNEvenimente
-
ANALIZA ADN0 200 400 600 8001000Fluorescen PE2N4NEvenimente
-
ANALIZA ADN0 200 400 600 8001000Fluorescen PEPeak aneuploidEvenimente