activitatea antimicrobiană si antioxidantă a

7/23/2019 Activitatea Antimicrobian Si Antioxidant A

1/139

ACADEMIA DE TIINE A MOLDOVEIINSTITUTUL DE MICROBIOLOGIE I BIOTEHNOLOGIE

Cu titlu de manuscris

C.Z.U.: 547.915+577.18.05 + 661.122 (478)

LUPACU LUCIAN

ACTIVITATEA ANTIMICROBIAN I ANTIOXIDANT A

PREPARATULUI AUTOHTON ENOXIL

03.00.07 - Microbiologie

Tez de doctor n medicin

Conductor tiinific: Rudic Valeriu,

dr.hab.n biologie,

profesor universitar,

academician

Autorul: Lupacu Lucian

Chiinu, 2011


2/139

Lupacu Lucian, 2011


3/139

CUPRINSADNOTRI...................................................................................................................................6

LISTA ABREVIERILOR.............................................................................................................9

INTRODUCERE.........................................................................................................................10

1. CERCETRI CONTEMPORANE CU PRIVIRE LA INFECIILE

DE PLAG I TRATAMENTUL ACESTORA CU PREPARATE DE

ORIGINE NATURAL.............................................................................................................18

1.1. Aspecte istorice, medico-ecologice i economice ale unor infecii nozocomiale, oportuniste

i de plag......................................................................................................................................18

1.2. Particularitile infeciilor de plag. Fenomenul de rezisten antimicrobian......................19

1.3. Particularitile biologice i patogenice ale unor bacterii (P.aeruginosa,

E.coli, S.aureus) implicate n diverse infecii de plag................................................................21

1.4. Particularitile unor micoze oportuniste hialohifomicoze................................................26

1.5. Aspecte de management al rezistenei patogenilor umani la antibiotice................................28

1.6.Particulariti de structur, activitate i utilizare ale

taninurilor.......................................................................................................................................31

1.6.1. Proprieti fizico-chimice ale taninurilor.............................................................................31

1.6.2. Aplicarea extraselor fenolice din plante la tratarea infeciilor iplgilor...........................................................................................................................................32

1.6.3. Fenomenul stresului oxidant. Taninuri din semine de struguri, activitate

biologic i aplicaii.......................................................................................................................35

1.6.4. Mecanisme de aciune antimicrobian a taninurilor......................................................38

1.6.5. Mecanisme ale activitii antioxidante i regenerative ale taninurilor..............................39

1.7. Concluzii la capitolul 1..........................................................................................................45

2. ELABORAREA COMPUSULUI ENOXIL CU PROPRIETI

POLIFUNCIONALE ANTIMICROBIENE I ANTIOXIDANTE................................47

2.1. Procedeu de obinere a compusului Enoxil............................................................................47

2.2.Proprietile antioxidante ale Enoxilului.................................................................................50

2.3. Studii comparative ale activitii antimicrobiene a Enoxilului i enotaninurilor

asupra unor ageni oportuniti ageni cauzali ai hialohifomicozelor......................................52


4/139

2.3.1. Aspecte metodice de testare a aciunii fungitoxice a Enoxilului i prelucrare statistic a

datelor............................................................................................................................................52

2.3.2. Aciunea Enoxilului i enotaninurilor asupra fungilorFusarium oxysporum i

F.solani in vitro.............................................................................................................................53

2.3.3. Analiza corelaional i regresional a stabilitii fungitoxice

a compusului Enoxil......................................................................................................................61

2.4. Concluzii la capitolul 2...........................................................................................................64

3. ACTIVITATEA ANTIMICROBIAN A PREPARATULUI ENOXIL PENTRU

UNII AGENI INFECIOI AI DIFERITELOR TIPURI DE PLGI..............................65

3.1. Materiale i locul efecturii cercetrilor.................................................................................65

3.2. Pregtirea inoculului bacterian i fungic..............................................................................65

3.3. Titrarea preparatului prin metoda diluiilor duble n serie....................................................66

3.4. Analiza de microscopie electronic a bacteriilorE.coli i S.aureus.....................................67

3.5. Testarea aciunii preparatului Enoxil asupra bacteriei P.aeruginosala nivel biochimic......67

3.6. Determinarea concentraiilor minime inhibitorii i bactericide/fungicide ale Enoxilului......68

3.7. Determinarea timpului eficient de aciune a Enoxilului, n concentraie bactericid.............69

3.8. Microscopia electronic a celulelor bacteriene deE.colii S.aureus,

tratate cu Enoxil...........................................................................................................................72

3.9. Aciunea preparatului Enoxil asupra unor indici biochimici i funcionali ai tulpinilor de

bacteriiP.aeruginosa.....................................................................................................................74

3.10. Influena concentraiei statice de Enoxil asupra rezisteneiP.aeruginosa

la antibiotice...................................................................................................................................76

3.11. Concluzii la capitolul 3.........................................................................................................82

4. STUDII CLINICE ALE PREPARATULUI ENOXIL........................................................83

4.1. Testarea clinic a preparatului Enoxil n tratamentul local al ulcerelor trofice de

gamb.............................................................................................................................................83

4.2. Testarea clinic a preparatului Enoxil n tratamentul plgilor postoperatorii i leziunilor

postradiante la bolnavele oncologice.............................................................................................84

4.3. Aplicarea preparatului Enoxil n tratamentul leziunilor termice...........................................87


5/139

4.4. Testarea eficienei preparatului Enoxil n clinica de chirurgie oro-maxilo-facial

pediatric........................................................................................................................................92

4.5. Concluzii la capitolul 4...........................................................................................................94

5. SINTEZA REZULTATELOR OBINUTE.........................................................................95

CONCLUZII..........................................................................................................................101

RECOMANDARE.................................................................................................................102

BIBLIOGRAFIE...................................................................................................................103

ANEXE ..................................................................................................................................122

Anexa 1:Brevet de invenie. 3113 G2, MD, A 01 N 65/00. Compus ce posed

activitate fungitoxic pentru ciupercaFusarium oxysporumSnyd.et Hans / Cererea depus

02.08.2006, BOPI nr 8/2006........................................................................................................123

Anexa 2: Brevet de invenie. 3125 G2, MD, A01N 65/00. Procedeu de obinere a

enotaninurilor hidrosolubile/ Cererea depus 08.02.2006, BOPI nr

9/2006..........................................................................................................................................125

Anexa 3: Brevet de invenie. 3139 G2, MD, A 01 N 65/00. Compus ce posed

activitate fungitoxic pentru ciupercaFusarium solani (Mart.) App. Et. Wr./ Cererea

depus 08.02.2006, BOPI nr 9/2006...........................................................................................127

Anexa 4: Brevet de invenie. 3979 F1, MD, C 08 H 5/00,C 07 D 311/30. Compus

cu proprieti antioxidante / Cererea depus 30.09.2008, BOPI, nr 11/2009.............................129

Anexa 5: Act de implementare al Regulamentului Tehnologic de producere a preparatului

Farmaceutic Enoxil, soluie alcoolic 5 i 10% din 05.11.2009..................................................131


Farmaceutic Enoxil, soluie apoas 5 i 10% din 05.11.2009.....................................................132


Farmaceutic Enoxil, unguent de 1 i 5% din 05.11.2009............................................................133Anexa 8: Aviz emis de Agenia Medicamentului pentru desfurarea Studiului Clinic............134

DECLARAIA PRIVIND ASUMAREA RSPUNDERII....................................................136

CV-ul AUTORULUI.................................................................................................................137


6/139

ADNOTARE

Lupacu Lucian Activitatea antimicrobian i antioxidant a preparatului autohton

Enoxil. Tez de doctor n medicin, Chiinu, 2011. Teza const din introducere, 5 capitole,

concluzii, recomandri, bibliografie din 238 titluri, 102 pagini coninut de baz, 19 tabele, 28

figuri. Rezultatele obinute sunt publicate n 19 lucrri tiinifice.

Cuvinte cheie: preparat Enoxil, activiti antibacteriene, antifungice, antioxidante, rezisten

antimicrobian, plag, regenerare.

Domeniul de studiu: 03.00.07 Microbiologie.

Scopul lucrrii: elucidarea activitii antimicrobiene i antioxidante a preparatului autohton

Enoxil i utilizarea acestuia n tratamentul local al ulcerelor trofice de gamb, plgilor

combustionale, mecanice i postoperatorii.

Obiectivele lucrrii: elaborarea procedeului de obinere a unui nou compus polifuncional din

enotaninuri, cu solubilitate nalt n ap i alcool; stabilirea activitii antimicrobiene i

antioxidante a compusului elaborat Enoxilului; elucidarea particularitilor activitii

enzimatice i modificrilor morfo-structurale ale celulelor bacteriene sub aciunea Enoxilului;

elucidarea capacitii regenerative a Enoxilului n tratamentul local al ulcerelor trofice de gamb,

plgilor combustionale, mecanice i postoperatorii.

Noutatea i originalitatea tiinific. Elaborarea unui preparat taninic complex, polifuncional

(Enoxil), cu nalte capaciti antimicrobiene (mrirea permeabilitii peretelui celular, inhibiia

activitii enzimatice i a multiplicrii), antioxidante (captarea radicalilor liberi) i regenerative.

Problema tiinific soluionat. Stabilirea activitilor antimicrobiene, antioxidante i

regenerative ale unui nou compus autohton de origine taninic Enoxil.

Semnificaia teoretic. Elucidarea activitii antimicrobiene i antioxidante a unui nou compus

de origine taninic Enoxil.Valoarea aplicativ a lucrrii: Elaborarea unui preparat autohton Enoxil eficient n tratarea

plgilor de divers etiologie, rentabil din punct de vedere economic.

Implementarea rezultatelor tiinifice. n baza Enoxilului au fost implementate tehnologiile de

obinere a loiunilor i unguentelor la .M."FARMACO" S.A. Preparatul Enoxil a fost supus

testrilor clinice la Dispanserul Dermatovenerologic Republican, Secia Mamologie a Institutului

Oncologic, Secia Combustiologie a Spitalului Clinic Traumatologic Republican, Spitalul Clinic

Republican pentru Copii Em.Coaga.


7/139

,

. ,

, 2011. , 5 , , ,

238 , 102 , 19 , 28

. 19 .

: ; , ,

, , , .

: 03.00.07 .

:

,

, . :

-

; ,

; -

;

, ,

. .

() ( ,

),

( ) .

. ,

.

.

. :

.

.

"FARMACO" .

, ,

,

. .


8/139

SUMMARY

Lupascu Lucian The antimicrobial and antioxidant activities of the localy produced

compound Enoxil. The doctor of medicine thesis, Chisinau, 2011.The thesis consists of the

introduction, 5 chapters, conclusions, recommendations, bibliography of 238 sources,102 pages

of basic text, 28 figures, 19 tables. The obtained results were publicated in 19 scientific works.

Key words: Enoxil compound, antibacterial, antifungal, antioxidant activities, antimicrobial

resistance, wound, regeneration.

Theresearch domain: 03.00.07 Microbiology.

The aim of the work: the elucidation of the antimicrobial and antioxidant activities of the

locally produced compound Enoxil and its use in the local treatment of the leg ulcers,

combustional, mechanical and postoperational wounds.

The research objectives: the elaboration of the obtaining procedure of a new polyfunctional

compound from enotannins, with high water and alcochol solubility; the establishment of the

antimicrobial and antioxidant activities of the obtained compound Enoxil; the elucidation of

the enzymatic activity peculiarities and structural modifications of the bacterial cells under the

Enoxil action; the elucidation of the Enoxil regenerative capacity for the local treatment of the

leg ulcers, combustional, mechanical, and postoperational wounds.

The novelty and the scientificoriginality: The elaboration of a complex tannic compound,

polyfunctional (Enoxil), with high antimicrobial (the increase of the wall permeability, inhibition

of the enzymatic and multiplication activities), antioxidant(free-radical scavenging) and

regenerative properties.

The scientific solved problem: The establishement of the antimicrobial, antioxidant and

regenerative activities of a new locally produced compound of tannic origin Enoxil.

The theoretical significance: the elucidation of the antimicrobial and antioxidant properties of a

new tannic origin compound Enoxil.

The applicative value of the work: The elaboration of the locally produced compound Enoxilefficient in the treatment of the plagues of diverse etiology and profitable from the economical

point of view.

The implementation of the scientific results: On the basis of Enoxil were implemented the

obtaining technologies of the lotions and ointments at the FARMACO company. The

compound Enoxil was tested at the: Republican Dermato-Venerology Dispencer, Mamology

Unit of the Oncology Institute, Combustiology Unit of the Clinical Republican Traumatological

Hospital, Clinical Republican Hospital for Children E.Cotsaga.


9/139

LISTA ABREVIERILOR

AA activitate antioxidant;

CMB concentrai minim bactericid;

CMF concentrai minim fungicid;

CMI concentrai minim de inhibiie;

CL chemiluminiscen;

DMSO dimetilsulfoxid;ESS extract de semine de struguri;

HPI hidroperoxidaza;

ISPN infecii septico-purulente nozocomiale;

NINSS Nosocomial Infection National Surveillance Service;

MALDI Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization;

PCT polichimioterapie;

RT radioterapie;

TD Turner Design;

UV ultraviolet.


10/139

INTRODUCERE

Actualitatea temei i importana problemei. Infeciile de plag, din cele mai vechi

timpuri i pn n prezent, sunt o problem major medical, social i economic.

Dei infeciile de plag se ntlnesc cu preponderen n rile cu nivel economic precar

i standarde joase de igien, n ultimele decenii acestea au devenit o preocupare serioas i

pentru rile cu dezvoltare socio-economic nalt [231].

Plgile, de orice origine, sunt periculoase pentru viaa omului datorit hemoragiilor i

dezvoltrii infeciilor, consider unii autori [53, 117, 118, 149].

O mare ngrijorare prezint infeciile intraspitaliceti (nozocomiale) de plag. Conform

datelor recente, acestea complic nsntoirea, produc anxietate, mresc discomfortul

pacientului i pot conduce la deces, prezentnd, totodat, un pericol serios i pentru lucrtorul

medical [198, 231].

Unii autori opineaz c acordarea unei atenii mari pacienilor cu infecii de plag aparent

ar prea lipsit de temei, ntruct exist numeroase preparate antibiotice care pot fi utilizate n

permanen n efortul de a controla agenii cauzali ai infeciilor de plag [65].

Infeciile postoperatorii de plag prezint complicaii importante n cadrul interveniilor

chirurgicale cauzate, n special, de speciile Staphylococcus coagulazo-negative, rezistente la

multe antibiotice, din care cauz un tratament eficient presupune debridarea rnii i terapia

antimicrobian prelungit [142].

n calitate de ageni patogeni ai infeciilor de plag pot fi bacteriile, fungii, protozoarele i

virusurile, efectul depinznd de structura i capacitile metabolice ale acestora [80, 66]. Este

important de tiut c diferite microorganisme pot exista n comuniti polimicrobiene, din care

cauz acestea adesea sunt prezente n cadrul plgilor [54].

Nu sunt neglijabile nici aspectele economice ale problemei. Conform unor date,

pagubele economice anuale n urma infeciilor septico-purulente doar n mun.Chiinu constituie

circa 19 mln 683 mii lei [14].Printre cele mai frecvente microorganisme n plaga purulent se constat bacteriile gram-

pozitive Staphylococcus aureus, gram-negative Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa,

Proteus vulgaris i fungul Candida albicans,considerai ca ageni cauzali ai acestor boli [183].

Una din metodele tradiionale de combatere a infeciilor este utilizarea antibioticelor. n

ultimul timp, ns, se constat un fenomen ngrijortor, tot mai evident rezistena

microorganismelor la aceste preparate [224]. Rezistena bacililor gram-negativi la medicamente

se datoreaz extinciei spectrului de betalactamaze [198].Un impediment serios n tratamentul


11/139

acestor infecii este spectrul diferit al izolatelor bacteriene n dependen de timp i aria

geografic [40].

Prin aciunea de monitoring al rezistenei microorganismelor la preparatele

antimicrobiene, demarat n Republica Moldova n 2002 s-a constatat, ca i n ntreaga lume,

fenomenul tot mai evident de cretere a rezistenei tulpinilor de microorganisme-ageni patogeni

ai multor infecii, la aciunea antibioticelor. Astfel, conform datelor medicilor de la Centrul de

Medicin Preventiv din or. Ungheni [16], rezistena multor ageni patogeni, inclusiv celor din

grupul pseudomonadelor, stafilococilor, candidelor .a. a constituit circa 70-90% pentru

peniciline, n timp ce n anul 2004 indicele constituia 35 i 52%, respectiv, pentru ampicilin i

oxacilin. Chiar i pentru cefalosporinele de ultim generaie, se observ o cretere rapid a

rezistenei. De exemplu, la cefazolin rezistena a crescut de la 38,2 pn la 73,2%, iar la

cefalexin de la 18,8 la 69,2%, respectiv pentru anii 2004 i 2007.

Speciile de Pseudomonas i cele din cadrul familiei de Enterobacteriaceae, printre

bacilii gram-negativi, prezint un procent nalt de rezisten pentru asemenea antibiotice larg

utilizate, ca gentamicina i amikacina, ciprofloxacina, carbenicilina, tobramicina, amoxicilina,

cefotaxim [34]. n mai mult de 90% cazuri, P.aeruginosa este rezistent la gentamicin,

ceftizoxim, carbenicilin, cefalotin, ceftazidim. Antibioticele, pentru care bacteria prezint

sensibilitate sunt amikacina i tetraciclina [113].

Acest microorganism, se poate dezvolta n urmtoarele situaii clinice: arsuri, traume,

proceduri de tatuaj, perioad postoperatorie, celulite la pacienii neutropenici, ulcere cronice

decubitale, foliculite, piodermii. Infeciile pielii cauzate de P.aeruginosa ca complicaii ale

combustiilor prezint o nalt rat de mortalitate, n pofida terapiei agresive cu antibiotice [90].

P.aeruginosa este unul dintre cele mai frecvente microorganisme izolate de la pacienii cu

combustii, atestndu-se n 57% cazuri de culturi tisulare [183].

Pentru testarea activitii antipseudomonadice a preparatelor este important de relevat

indicii biologici de baz care asigur viabilitate bacteriei. Astfel, o particularitate biologiccaracteristic speciei P.aeruginosa, utilizat cu succes la identificarea acesteia este posibilitatea

unical a microorganismului de a sintetiza pigmentul fenazinic hidrosolubil piocianinacare

coloreaz mediul nutritiv sau pansamentele bolnavilor n culoare albastr-verzuie. Se consider,

c lipsa sau diminuarea capacitii de pigmentogenez a tulpinilor de P.aeruginosa este

determinat de aciunea inhibitorie a microflorei asociate, antibioticelor sau a insuficienei de

oxigen. S-a stabilit, ca piocianina are rol de protecie a celulelor de P.aeruginosa mpotriva

influenei negative, produse de schimbarea concentraiei de oxigen n atmosfer i de aciunea


12/139

letal a razelor ultraviolete (UV). Prezena pigmentului, ajut bacteriei s suporte hipoxia n

timpul dezvoltrii infeciei n esuturile profunde, iar rezistena mpotriva razelor UV determin

supravieuirea patogenului la sterilizarea cu raze UV a obiectelor mediului nconjurtor. Aceste

proprieti ale pigmentului relev c tulpinile cu capaciti de sintez a piocianinei fiind mai

rezistente, sunt i mai periculoase [26]. Totodat, piocianina particip la diverse mecanisme

patogenice, precum ar fi traumarea epiteliului respirator i declanarea proceselor proinflamatorii

ale fagocitelor. Un alt grup de enzime al bacteriei hemolizinele (fosfolipaza, lecitinaza) care se

identific n majoritatea cazurilor prin apariia zonelor de hemoliz a eritrocitelor n jurul

coloniilor crescute pe mediu agarizat cu snge de 5% [133, 197], contribuie la invazia bacterian

datorit efectelor citotoxice asupra celulelor implicate n reaciile imunitare neutrofilelor i

limfocitelor [114].

Tratamentul permanent i, adesea, abuziv cu antibiotice a condus la selectarea noilor

virulene, agresive i severe cu potenial genetic nalt de rezisten. Aceast situaie orienteaz

specialitii n domeniu spre elaborarea preparatelor antimicrobiene, n special, de origine

vegetal i bazate pe mecanisme de aciune principial noi [15]. Dei utilizarea extractelor

taninice din plante pentru tratarea diferitelor infecii ale dermului i plgilor este cunoscut de

mult vreme, totui, acestea nu prezint efectul scontat pentru multe microorganisme [188].

Totodat, la moment nu exist o gam vast de preparate medicinale eficiente, elaborate n baza

acestor compui.

Astfel, creterea rezistenei microorganismelor la medicamente i a adaptrilor

evoluioniste ale acestora a redus mult eficiena agenilor antimicrobieni [190].

Oportunitatea obinerii preparatelor medicinale antimicrobiene eficiente n baza

extractelor din diverse specii de plante ce conin taninuri, fenoli, flavonoizi a fost menionat n

mai multe lucrri [46, 141, 164, 219]. Totodat, aplicabilitatea compuilor taninici n scopul

vizat este restrns, n mare parte, datorit insolubilitii multora din ei n soluii apoase sau

alcoolice.Dezvoltarea intensiv a industriei n plan global n ultimii 50 de ani ai secolului XX i

primii ani ai secolului XXI, a produs perturbri fr precedent n corelarea ecosisteme

biosisteme pe planeta Pmnt. Organismul uman zi de zi este inta unor factori nocivi cum ar fi:

ageni poluani, stres, conservani, fum de tutun, pesticide, raze X, radiaii ultraviolete,

ultrasunete, microunde, computere, etc. Recent, Organizaia mondial a Sntii a prezentat un

studiu statistic prin care se pune n eviden corelaia ngrijortoare ntre gradul de dezvoltare

industrial a societii i incidena maladiilor cardio-vasculare i canceroase, care sunt o


13/139

consecin direct a complexului de fenomene reunite sub termenul de stres oxidant i care

este definit ca o producie exagerat de radicali liberi oxigenai n organismul uman, nsoit de

diminuarea agenilor antioxidani. O soluie posibil de rezolvare a acestei probleme este

folosirea antioxidanilor naturali, care neutralizeaz radicalii liberi i protejeaz celulele

organismului uman.

Este cunoscut faptul c seminele de struguri prezint o surs bogat de aa numitele

enotaninuri taninuri condensate care reprezint o gam vast de substane naturale cu structur

polifenolic, remarcate prin coninut nalt de proantocianidine [126]. Cea mai mare parte a

enotaninurilor sunt insolubile n ap, din care motiv utilizarea lor n calitate de antioxidani este

dificil.

Cercetrile tot mai intense cu privire la capacitatea extraselor fenolice (taninice) de a

dezinfecta i trata mai rapid rnile au demonstrat c aceasta se bazeaz pe dou fenomene de

baz activitatea antimicrobian i antioxidant. La rndul lor, aceste fenomene se bazeaz pe

un ir de mecanisme, dintre care cele cunsocute sunt captarea ionilor de fier din substrat i, deci,

deprivarea microorganismelor de compuii necesari pentru activitatea fiziologic; jonciunea

acestora cu proteinele microbiene i formarea complecilor; captarea radicalilor liberi; absorbia

radicalilor de oxigen; inhibiia oxidrii lipoproteinelor de densitate joas. Totodat, mecanismele

de rezisten a microorganismelor mpotriva taninurilor se realizeaz prin detoxifierea acestora

ca urmare a sintezei polimerilor de complexare a taninurilor, oxidarea compuilor, biodegradarea

acestora i sinteza sideroforilor [109].

Polifenolii plantelor sunt cunoscui ca taninuri i percepui, n general, ca compui toxici

[191], probabil din cauza abilitii lor s precipite proteinele. Aceast proprietate, numit

astringen n sens chimic, se menioneaz n cazul cnd unguentele de acid tanic se utilizeaz

pentru tratarea combustiilor superficiale [100].

Toxicitatea taninurilor este determinat de aciunea acestora asupra membranelor

microorganismelor i de formare a complecilor cu ionii de metal. Astfel, acidul tanic cu efectinhibitoriu asupra creterii unor bacterii intestinale, aa ca Bacillus fragilis, Clostridium

perfringens, Escherichia coli i Enterobacter cloacae, capteaz fierul din mediul nutritiv,

fcndu-l inaccesibil pentru microorganismele ce activeaz n condiii aerobe, n special, pentru

bacteriile intestinale, care au nevoie de fier pentru activitile vitale [61, 62].

Taninurile formeaz compleci ireversibili cu proteinele, ceea ce conduce la inhibarea

sintezei proteinelor celulare [99], formnd precipitate care ulterior se transform n cicatrice

protectoare i antiseptic [31] i acest lucru este important n tratarea esuturilor inflamate i


14/139

ulceroase [153]. Capacitatea antimicrobian i antioxidant a preparatelor taninice asigur

aplicarea acestora la tratarea rnilor [30, 124, 136].

Cercetarea aciunii antibacteriene, prin testul de plasmocoagulare, a ctorva tanine

acidului tanic, acidului galic, acidului elagic, epicatechinei, epicatechingalatului,

epigalocatechingalatului asupra S.aureus a relevat c acidul tanic este prioritar n investigaii ca

posibil agent adjuvant mpotriva infeciilor de plag cauzate de S.aureus i tratate cu antibiotice

-lactamice. Se consider c mecanismele antimicrobiene de baz ale taninurilor constau n

complexarea acestora cu enzimele microbiene sau substraturile nutritive datorit proprietii

astringente ale taninurilor. Multe enzime microbiene, n filtratele de cultur sau n form

purificat i inhib activitatea la amestecarea cu taninuri [105].

n Republica Moldova exist taninuri din semine de struguri (enotaninuri) n cantiti

industriale. Lund n consideraie faptul c multe taninuri cu proprieti antimicrobiene sunt

insolubile n ap, i, totodata, apariia rezistenei microbiene la taninurile vegetale, de mare

perspectiv se prezint cercetrile cu privire la posibilitatea de modificare structural a

enotaninurilor, mririi gradului de oxidare n scopul sporirii eficienei i aplicrii acestora la

tratarea infeciilor de plag. Pentru realizarea acestui deziderat este necesar obinerea noilor

compui taninici cu activiti antimicrobiene i antioxidante nalte care ar asigura un tratament

eficient, rapid i economic avantajos al infeciilor de plag.

Scopul prezentei lucrri a constat n elucidarea activitii antimicrobiene i antioxidante a

preparatului autohton Enoxil i utilizarea acestuia n tratamentul local al ulcerelor trofice de

gamb, plgilor combustionale, mecanice i postoperatorii.

Obiectivelecercetrilor:

- elaborarea procedeului de obinere a unui nou compus polifuncional din enotaninuri,

cu solubilitate nalt n ap i alcool;

- stabilirea activitii antimicrobiene i antioxidante a compusului Enoxil elaborat;

- elucidarea particularitilor activitii enzimatice a celulelor bacteriene sub influenaEnoxilului;

- stabilirea modificrilor morfo-structurale ale celulelor bacteriene sub aciunea

Enoxilului;

- elucidarea capacitii regenerative a Enoxilului n tratamentul local al ulcerelor trofice

de gamb, plgilor combustionale, mecanice i postoperatorii.


15/139

Noutatea tiinific a rezultatelor. Pentru prima dat a fost elaborat un preparat

complex polifuncional Enoxil, cu nalte capaciti antimicrobiene, antioxidante i regenerative

n baza enotaninurilor autohtone.

S-a constatat c activitatea antioxidant a preparatului Enoxil, stabilit prin metoda de

chemiluminiscen, se bazeaz pe capacitatea nalt de captare a radicalilor liberi din sistem.

Prin microscopie electronic i teste biochimice s-a stabilit c activitatea antibacterian a

preparatului Enoxil are la baz marirea permeabilitii peretelui celular, precum i inhibiia unor

enzime importante pentru activitatea fiziologic a organismului bacterian, ceea ce contribuie, n

final, la blocarea procesului de diviziune celular a bacteriilor.

Problema tiinific important soluionat n lucrare const n stabilirea activitilor

antimicrobiene, antioxidante i regenerative ale unui nou compus autohton de origine taninic

Enoxil.

Importana teoretic i valoarea aplicativ a lucrrii. Au fost elucidate activitile

antimicrobiene i antioxidante ale unui nou compus de origine taninic. Activitatea

antibacterian a preparatului Enoxil se bazeaz pe capacitatea de inhibiie a activitii unor

enzime importante ceea ce conduce la reprimarea procesului de multiplicare, antifungic pe

reprimarea creterii lineare a coloniilor fungice (Fusariumspp.), iar activitatea antioxidant pe

capacitatea nalt de captare a radicalilor liberi din sistem.

n tratamentul local al ulcerelor trofice de gamb preparatul Enoxil, n soluie apoas de

0,6% a demonstrat eficien prin reducerea fenomenelor inflamatorii, micorarea eliminrilor din

plag, accelerarea cicatrizrii, durata tratamentului fiind cu 5-7 zile mai mic n comparaie cu

tratamentul obinuit.

S-a constatat c preparatul Enoxil, n soluie apoas de 1-5%, n tratamentul leziunilor

postradiante ale bolnavelor oncologice a manifestat eficien n ceea ce privete indicii clinici de

baz, micornd durata de tratament cu 3 zile.

n tratamentul leziunilor termice, preparatul Enoxil n soluie apoas de 1% a demonstrateficien prin diminuarea eliminrilor purulente din plag, accelerarea proceselor de epitelizare,

reducerea timpului de cicatrizare a zonelor donore i a transplantelor, ameliorarea riiei i

decolrii timpurii a crustei, reducerea fenomenelor toxice generale i gradului de infectare a

plgilor, epitelizarea rapid cu rezultat estetic bun, micornd durata de tratament (comparativ cu

preparatul Betadin), termenul depinznd de suprafaa plgii.

n clinica de chirurgie oro-maxilo-facial pediatric preparatul Enoxil, n soluie apoas de

5%, a prezentat eficien n tratamentul leziunilor traumatice ale esuturilor moi, afeciunilor


16/139

inflamatorii, manifestat prin micorarea termenelor de lichidare a eliminrilor purulente din

plag i micorarea duratei de vitalizare a plgii cu 2-3 zile comparativ cu tratamentul obinuit.

Aprobarea rezultatelor tiinifice. Rezultatele tiinifice expuse n lucrare au fost

comunicate i discutate n cadrul diferitelor foruri tiinifice naionale i internaionale:

Conferina IV-a Internaionala a Tinerilor Cercettori, Chiinu, 10 Noiembrie, 2006; Conferina

de Inginerie Biomedical INGIMED 2006, Editia VII, Bucureti, Romnia, 9-10 noiembrie

2006; Conferina Internaional a Tinerilor Cercettori, Ediia VI, Chiinu, 06-07.11.2008;

Congresul VI al Igienitilor, Epidemiologilor i Microbiologilor din R.Moldova, Chiinu, 23-

24 octombrie, 2008; a XII-a Conferin Naional de Microbiologie cu participare internaional,

Sibiu, Romnia, 30.10.2008-01.12.2008.

Tema tezei de doctor n tiine medicale Activitatea antimicrobian i antioxidant a

preparatului autohton Enoxil a fost aprobat la edina Catedrei de Microbiologie, Virusologie

i Imunologie a Universitii de Stat de Medicin i Farmacie Nicolae Testemianu, proces

verbal nr.12 din 10.06.2009. Rezultatele tezei au fost discutate i aprobate la edina Catedrei de

Microbiologie, Virusologie i Imunologie din 22.06.2010, proces verbal nr.8 din 22.06.2010 i n

cadrul Seminarului tiinific de Profil, specialitatea 03.00.07 Microbiologie , proces verbal nr.1

din 17.02.2011.

Sumarul compartimentelor tezei. Teza cuprinde adnotri n limbile romn, rus i

englez, lista abrevierilor, introducere, 5 capitole, concluzii generale, recomandare practic,

bibliografia, declaraia privind asumarea rspunderii, CV-ul autorului.

n partea introductiv a lucrrii, sunt prezentate actualitatea i importana tiinifico-

practic a problemei abordate, scopul, obiectivele, descris noutatea tiinific, importana

teoretic i valoarea aplicativ a lucrrii, aprobarea rezultatelor.

Capitolul 1 Cercetri contemporane cu privire la infeciile de plag i

tratamentul acestora cu preparate de origine natural (reviul literaturii)prezint

analiza detaliat a datelor bibliografice referitor la aspectele istorice, medico-ecologice ieconomice ale unor infecii nozocomiale, oportuniste i de plag; fenomenul de rezisten

antimicrobian; particularitile biologice i patogenice ale unor bacterii (Pseudomonas

aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus aureus) implicate n diverse infecii; micozele

oportuniste hialohifomicoze; particularitile de structur, activitate i utilizare n medicin ale

taninurilor, inclusiv, a celor din semine de struguri; mecanismele antimicrobiene i antioxidante

ale taninurilor; mecanismele bacteriene de aciune antitaninic.


17/139

Capitolul 2 Elaborarea compusului Enoxil cu proprieti polifuncionale

antimicrobiene i antioxidante prezint date despre procedeul de obinere i proprietile

antioxidante ale Enoxilului, analizele comparative ale activitii antimicrobiene a Enoxilului i

enotaninurilor asupra unor ageni oportuniti ageni cauzali ai hialohifomicozelor.

Capitolul 3 Activitatea antimicrobian a preparatului Enoxil pentru unii ageni

infecioi ai diferitelor tipuri de plgi descrie materialul i aspectele metodice ale

cercetrilor: mediile de cultur geloz peptonat, bulion peptonat, agar Miuller-Hinton, bulion

Sabouraud; pregtirea inoculului bacterian i fungic; determinarea concentraiilor minime

inhibitorii i bactericide/fungicide ale Enoxilului; analiza de microscopie electronic a bacteriilor

E.coli i S.aureus; aciunea Enoxilului asupra tulpinilor de bacterii P.aeruginosa la nivel

biochimic; determinarea timpului eficient de aciune a Enoxilului n concentraie bactericid;

influena concentraiei statice de Enoxil asupra rezisteneiP.aeruginosala antibiotice.

Capitolul 4Studii clinice ale preparatului Enoxil conine date cu privire la eficiena

clinic a preparatului Enoxil n tratamentul ulcerelor trofice de gamb, plgilor postoperatorii i

leziunilor postradiante la bolnavele oncologice, leziunilor termice i n clinica de chirurgie oro-

maxilo-facial pediatric.

Capitolul 5 Sinteza rezultatelor obinuteprezint analiza comparativ a datelor din

literatur despre activitatea antimicrobian, antioxidant i regenerativ a preparatelor taninice

cunoscute i a rezultatelor obinute cu privire la activitile menionate pentru preparatul

autohton de origine taninic Enoxil.


18/139

1. CERCETRI CONTEMPORANE CU PRIVIRE LA INFECIILE DE PLAG

I TRATAMENTUL ACESTORA CU PREPARATE DE ORIGINE NATURAL

1.1. Aspecte istorice, medico-ecologice i economice ale unor infecii nozocomiale,

oportuniste i de plag

Conform unor autori, infeciile intraspitaliceti, numite nozocomiale prezint unele din

problemele de baz ale medicinii contemporane, n patologiile acestora predominnd infeciile

septico-purulente. Aceste infecii conduc la implicaii multiple: prelungirea duratei de spitalizare,

agravarea bolii de baz, apariia complicaiilor, sechelelor sau deceselor, creterea cheltuielilor

pentru tratamentul i ntreinerea bolnavilor [14].

n Republica Moldova, frecvena morbiditii i letalitii n cazul infeciilor nozocomiale

constituie, respectiv, 6,5 i 2,0 la 1000 persoane spitalizate, acestea revenind, n special, nou-

nscuilor. Pagubele economice anuale n urma infeciilor septico-purulente nozocomiale (ISPN),

doar n mun. Chiinu constituie circa 19 mln 683 mii lei [14].

Investigaiile bacteriologice ale agenilor care provoac ISPN au demonstrat c 53,8%

cazuri au fost provocate de bacterii grampozitive, dintre care 83,9% au revenit bacteriilor

Staphylococcus spp. n seciile chirurgicale se constat infecii mixte de E.coli (27,6%) i

S.aureus(26,8%). De mare importan se prezint problema creterii rezistenei agenilor cauzali

la antibiotice. Printre factorii ce contribuie la apariia i intensificarea fenomenului este

considerat utilizarea neraional a preparatelor antibacteriene [14].

Unii autori consider c majoritatea infeciilor fungice nozocomiale sunt cauzate de

speciile Candida[175]. De menionat, c multe specii de fungi, anterior considerai nepatogeni,

de exemplu, cele din genurile Malasezzia, Fusarium, Trichosporons-au dovedit a fi implicate n

aceste tipuri de infecii [193]. Conform unor opinii, acordarea unei atenii mari pacienilor cu

infecii de plag aparent ar prea lipsit de temei, ntruct exist numeroase preparate antibiotice

care pot fi utilizate n permanen n efortul de a controla agenii cauzali ai acestor infecii [65].Infeciile postoperatorii de plag prezint complicaii importante n cadrul interveniilor

chirurgicale spinale cauzate, n special, de speciile Staphylococcus coagulazo-negative,

rezistente la multe antibiotice, din care cauz un tratament eficient presupune debridarea rnii i

terapia antimicrobian prelungit [142].

S.aureusi Streptococii grupului A, invadatori comuni ai pielii exematoase, traumatizate

i imunocompromise prezint infecii clinice primare: impetigo, foliculite, furuncule, carbuncule,

celulite i secundare: ulcere i exeme infectate [214].


19/139

1.2. Particularitile infeciilor de plag. Fenomenul de rezisten antimicrobian

Plgile, de orice origine, sunt periculoase pentru viaa omului datorit hemoragiilor i

dezvoltrii infeciilor [53, 117, 118, 149]. Cu referin la datele NINSS [161], unii autori

comunic c infeciile de plag complic nsntoirea, produc anxietate, mresc discomfortul

pacientului i pot conduce la deces [230].

Problemele socio-economice, importana profesionalismului n tratarea infeciilor de

plag sunt considerate probleme prioritare chiar i pentru rile cu economie dezvoltat [66, 91,

158, 210], iar msurile igienice de rutin sunt adesea determinante n evoluia infeciilor de plag

i, totodat, destul de costisitoare [92]. Evoluia infeciilor de plag depinde de un ir de factori:

statutul imunologic al pacientului, virulena i patogenitatea microorganismelor colonizatoare

[84, 68], statutul hidric, nutriia, condiiile medicale, asistena postoperatorie [103].

Odat cu stabilirea diagnosticului infeciei de plag i a sensibilitii antibioticelor,

managementul trebuie asigurat imediat pentru a impiedica infeciile intersectate [52, 54, 87,

119]. Alegerea corect a antibioticelor n infeciile de plag [166] i a antisepticelor [111] este

important pentru evoluia bolii.

Contaminarea, colonizarea [48], colonizarea critic [56, 81, 117] sunt noiuni bine

definite pentru infeciile de plag. Criteriile clasice de recunoatere a infeciilor de plag sunt

urmtoarele: eritem, durere, fierbineal localizat, celulite, edeme, iar criteriile recente

abscese, eliminri vscoase, decolorri i purulen, cicatrizare ntrziat, decolorare a esuturilor

la marginile plgii, durere brusc, miros specific. Dezvoltarea infeciei de plag depinde de un

complex de factori. Dac integritatea i funcia protectoare a pielii este compromis, cantiti

mari de diferite tipuri de celule pot ptrunde n plag i iniia un rspuns inflamator care va

prezenta semne clasice [59]. Rspunsul inflamator este un mecanism de aprare pentru

neutralizarea, nimicirea agenilor toxici n locul traumat i restabilirea homeostaziei tisulare

[64]. Exist un ir de indicatori ai infeciilor care includ semne clasice ale procesului inflamator

i semne recente [69].Conform unor date, infeciile plgilor chirurgicale sunt unele dintre cele mai comune

infecii achiziionale, intraspitaliceti, i prezint cauze importante de morbiditate i mortalitate.

Totodat, acestea conduc la mrirea perioadei de staionare n spital, ceea ce implic consecine

economice fiecare pacient cu infecii ale plgilor chirurgicale va necesita 6,5 zile suplimentare

de edere n spital, ceea ce conduce la dublarea cheltuielilor intraspitaliceti [49, 177].

Infeciile de plag n urma arsurilor i septicemia cateteric cele mai frecvente la copii,

sunt cauzate de asemenea ageni infecioi, ca S.aureus, C.albicans, P.aeruginosa, Enterococcus


20/139

spp., E.coli, K.oxytoca, S.pneumoniae [183]. Se consider c prima faz a procesului infecios n

cadrul plgilor este determinat de dezvoltarea E.coli, Enterococcus spp., Bacterioides fragilis

care produc o varietate larg de factori viruleni enzime i toxine [120].

n calitate de ageni patogeni ai infeciilor de plag pot fi bacteriile, fungii, protozoarele i

virusurile, efectul depinznd de structura i capacitile metabolice ale acestora [66, 80]. Este

important de tiut c diferite microorganisme pot exista n comuniti polimicrobiale, din care

cauz adesea sunt prezente n cadrul plgilor [54].

Bacilii gram-negativi (P.aeruginosa, E.coli, Klebsiella, Proteus, Acinetobacter,

Enterobacter spp.) apar n rana deschis la aproximativ 4 saptamni de la iniierea acesteea.

Bacteriile menionate, n general, nu penetreaz, dar se asociaz la un numar mare de

microorganisme pe biofondul rnii. Bacilii gram-negativi posed mecanisme antifagocitare i de

aderen, iar endotoxinele i unele exotoxine, premit toxinelor s prelungeasc rspunsul

inflamator printr-un proces cronic. Exotoxina pseudomonadic piocianina, albastr-verzuie poate

cauza extensia de plag. Bacteriile gram-negative elibereaz endotoxine i fac ca procesul

inflamator cronic s dureze. ntr-o cantitate anumit, aceste microorganisme, datorit expresiei

factorilor de virulen pot produce un biofilm. Eficiena preparatelor antimicrobiene depinde n

mare msur de colonizarea critic a bacteriilor. Produsele care omoar bacteriile i nltur

endotoxinele acestora sunt considerate avantajoase [119].

De importan vital se prezint problema rezistenei microorganismelor la antibiotice.

Astfel, principalii factori ce influeneaz ecologia bacterian n plaga combustional sunt agenii

antibacterieni i antibioticele sistemice [234].

Prin cercetarea plgilor chirurgicale s-a constatat c microorganismele predominante au

fost coliforminele (63,5%), iar n ulcere au fost prevalenteProteusspp. care prezentau rezisten

semnificativ la antibioticele, de obicei, utilizate ampicilina, tetraciclina, co-trimaxazol, dar i

sensibilitate la asemenea antibiotice ca ciprofloxacina i ofloxacina [168]. Investigrile

bacteriologice ale infeciilor plgilor nechirurgicale au pus n eviden prevalena detaat aizolatelor bacteriene asupra celor fungice, n majoritatea cazurilor atestndu-se culturile

monomicrobiene. Dintre speciile mai frecvent izolate s-au remarcat S.aureus, P.aeruginosa,

Klebsiella spp., E.coli, Proteus spp., S.epidermidis, Streptococcus spp., cu rezisten nalt la

antibiotice, multe dintre ele pstrnd, totui, sensibilitate la ceftriaxon, gentamicin i

ofloxacin [162].

Din plgile cauzate de leziuni mecanice n urma cutremurelor de pmnt s-au izolat mai

frecvent S.aureus, la mod general bacteriile gram-pozitive prezentnd o inciden mai nalt


21/139

(73,2%) [215]. Specia P.aeruginosa s-a atestat, n special, printre infeciile de plag, care

deseori conduc la amputaii [36]. Speciile Pseudomonaserau cele mai ntlnite i n seciile de

combustiologie, i prezentau rezisten moderat la piperacilin (41,42%), rezisten nalt la

asemenea remedii antimicrobiene ca amikacina, gentamicina, ciprofloxacina, carbenicilina,

tobramicina, ceftazidim. Totodat, acestea erau mai sensibile la imipenem, acid clavulanic,

cefoperazon, n timp ce speciile deEnterobacteriaceaeiAcinetobacternu a prezentat rezisten

la imipenem [147].

n majoritatea cazurilor, tulpinile de bacterii Staphylococcus spp. i E.coli implicate n

ISPN din or. Chiinu manifest rezisten nalt pentru preparatele grupului penicilinelor i

tetraciclinelor. Printre tulpinile de E.coli, 51,4% manifest rezisten la cefalosporine [14].

Rezistena tulpinilor de S.aureus, izolate din piodermitele primare i secundare a fost destul de

difereniat: rezistente la penicilin i ampicilin, relativ rezistente la eritromicin i sensibile la

cloxacilin, cefalexin i co-trimaxazol [214].

Speciile de bacterii Pseudomonas i Enterobacteriaceae, printre bacilii gram-negativi,

prezint un procent nalt de rezisten pentru asemenea antibiotice ca gentamicina, amikacina,

ciprofloxacina, carbenicilina, tobramicina, amoxicilina, cefotaxim [34]. n mai mult de 90%

cazuri P.aeruginosa este rezistent la gentamicin, ceftizoxim, carbenicilin, cefalotin,

ceftazidim. Antibioticul, pentru care bacteria prezint sensibilitate este amikacina [113]. S-a

constatat c majoritatea tulpinilor de P.aeruginosaaprute prin mutaii demonstreaz rezisten

la cefpirom, ceftazidim i cefotaxim, n timp ce pentru cefepim rezistena s-a manifestat la 25%

tulpini [94]. n calitate de patogeni ageni cauzali ai infeciilor de plag pot fi cocii gram-

pozitivi S.pyogenes*, Enterococcus faecalis, S.aureus*, bacilii aerobi gram-negativi

P.aeruginosa*, bacilii gram-negativi facultativi anaerobi Enterobacter spp., E.coli, Klebsiella

spp., Proteus spp., anaerobii Bacteroides, Clostridium, fungii Candida, Aspergillus (*ageni

cauzali comuni, asociai cu infeciile de plag) [64].

1.3. Particularitile biologice i patogenice ale unor bacterii (P.aeruginosa, E.coli,

S.aureus)implicate n diverse infecii de plag

P.aeruginosa. Istoricul studierii bacteriei P. aeruginosa ncepe n anul 1862, cnd

A.Lucke pentru prima dat a descris supurarea plgii cauzat de bacilul piocianic, izolat n

cultur pur de ctre C. Gessard n 1882 i numitB.pyocyanea(bacilul puroiului albastru). Chiar

n 1897 a fost nregistrat primul focar de infecie intraspitaliceasc n care rolul etiologic

principal l jucaP.aeruginosa[24]. Se menioneaz faptul c aciunea patologic aP.aeruginosa


22/139

mai frecvent se atest la bolnavii cu imunitate sczut i la copii. De la nceputul anilor 70 ai

sec.XIX, acest microorganism a ocupat un rol primordial att n etiologia proceselor purulent-

inflamatorii locale, ct si a celor generalizate, patogenitatea crora este determinat de

producerea unei fitotoxine, structura chimica a creia nefiind elucidat complet [27], dar

presupunndu-se a fi o proteinaz [211].

Timp ndelungat, majoritatea cercetrilor asupra P.aeruginosa, s-au efectuat n baza

materialului prelevat n seciile de combustiologie i staionarele chirurgicale [27, 178].

P.aeruginosa, n baza clasificrii Bergey B. (1980) face parte din genul Pseudomonas,

familia Pseudomonadaceae, pentru medicin fiind mai importante speciile P.aeruginosa,

P.malleii P.pseudomallei.P.aeruginosaprezint o bacterie gram-negativ cu dimensiunile 1-3

mcm n lungime i 0,5-1 mcm n lime. n frotiul preparat din cultur pur bastonaele se pot

dispune solitar, pereche sau formeaz lanuri scurte. Sunt mobile datorit prezenei unuia sau a 2

flageli dispui polar, nu formeaz spori. P.aeruginosa este un patogen oportunist, care rareori

cauzeaz maladii la persoanele sntoase. Speciile pseudomonadice sunt att invazive, ct i

toxigene [26].

Conform unor date, exist 3 faze ale rspndirii bacteriei: 1) ataarea la substrat i

colonizarea, 2) infecia local, 3) diseminarea n snge i dezvoltarea maladiilor sistemice.

Capacitatea microorganismului de a produce proteaze extracelulare mrete virulena acestuia,

ajutndu-l n aderen i invazie [179].

Infeciile pseudomonadice pot fi implicate n orice sistem de organe: tract respirator

(pneumonie), inim (endocardite), sistem nervos central (meningit i abcese ale creierului),

urechi (otit medie), ochi (cheratite bacteriene, abscese sclerale, endoftalmite), oase i articulaii

(coloana vertebral, pelvis, articulaie sternoclavicular, osteomielite vertebrale, pioartroze),

sistem gastro-intestinal (enterocolite necrozante, enterite), tract urinar (infecie dup cateterizare,

chirurgie), piele (foliculite, ectima gangrenosum) [179].

P.aeruginosa este unul din cei mai rspndii bacili aerobi gram-negativi, destul depericulos prin dezvoltarea infeciilor nozocomiale severe, n special la gazdele

imunocompromise. Adesea bacteria este rezistent la antibiotice, astfel, punnd n dificultate

alegerea corect a procedeelor de tratament. Acest microorganism se poate dezvolta n

urmtoarele situaii clinice: n urma arsurilor, traumelor, procedurilor de tatuaj, postoperatoriu,

celulite la pacienii neutropenici, ulcere cronice decubitale, foliculite, piodermii. Infeciile pielii

cauzate deP.aeruginosaca complicaii ale combustiilor prezint o nalt rat de mortalitate, n

pofida terapiei agresive cu antibiotice [90]. P.aeruginosa este unul dintre cele mai frecvente


23/139

microorganisme izolate de la pacienii cu combustii, atestndu-se n 52-57% cazuri de culturi

tisulare [147, 183]. Datele pentru o perioad de 25 ani relev c 9% din arsuri au avut ca

complicaii bacteriemii pseudomonadice, mortalitatea fiind de 77%. Cele mai comune

microorganisme izolate de la pacienii seciilor de combustiologie erau cele de Pseudomonas,

urmate de S.aureusiKlebsiella[127, 167].

Actualitatea studierii infeciilor pseudomonadice este determinat i de faptul ca

agenii ei infecioi pot fi reprezentani ai ctorva specii de bacterii, patogene nu doar pentru om,

dar i pentru animale. Aceti ageni adesea afecteaz tractul urogenital al vitelor cornute. Avnd

mai multe organisme-gazd, P.aeruginosa este deosebit de periculoas, ntruct se mrete

posibilitatea de contaminare a organismelor sntoase.

O particularitate adaptiv, specific pentru P.aeruginosa este utilizarea limitat a

substanelor nutritive de ctre aceasta, ceea ce determin pstrarea viabilitii chiar i n condiii

limit de existen a sursei nutritive. Totodat, s-a constatat posibilitatea meninerii viabilitii

culturii deP.aeruginosachiar i n soluii de antiseptici (de exemplu, n furacilin) care servesc

pentru aseptizarea cateterelor i instrumentariului chirurgical, precum i pentru splarea rnilor

n seciile de combustiologie i chirurgie [114].

Conform unor date, contaminarea cateterelor i instrumentelor cu tulpini intraspitaliceti

ale bacteriei P.aeruginosa poate atinge nivelul de 90% [25], iar a echipamentului sanitar din

seciile de hematologie 4,5... 20,0% [79]. Nivel nalt de supravieuire al acestui microb se

constat n ape reziduale i soluii de iodofor [42]. Tulpinile deP.aeruginosa se pot adapta i la

aciunea bactericid a bromidei de didecildimetilamonium, un rol mare n declanarea

mecanismelor de rezisten avndu-l acizii grai din membrana bacteriei [146]. Totodat,

P.aeruginosa este sensibil la uscare, aciunea preparatelor dezinfectante cu coninut de clor,

uor se inactiveaz la temperaturi nalte. n prezena unei cantiti suficiente de mas nutritiv

acest microorganism poate s rmn viabil pn la 2 sptmni n condiii anaerobe [202].

n calitate de patogen oportunistic, P.aeruginosa depete mecanismele de aprare agazdei i poate produce maladia. Nu s-a atestat vreodat ca bacteria s infecteze esuturile

necompromise. Implicarea patogenului n infeciile tractului urinar, sistemului respirator,

esuturilor moi, afectarea oaselor/articulaiilor, aparatului gastrointestinal, n diverse dermatite,

dezvoltarea endocarditelor, meningitei, absceselor creierului, otitelor, keratitelor, foliculitelor,

acneiei. Totodat, P.aeruginosa prezint o problem serioas pentru pacienii spitalizai cu

cancer, fibroz chistic i arsuri [114]. Exist date despre implicarea bacteriei P. aeruginosa n


24/139

pneumoniile acute i inflamarea corneiei, constatndu-se, totodat, c reaciile de aprare ale

gazdei sunt ineficiente n cazul unui nivelul nalt al concentraiei bacteriene [96].

S-au atestat infecii de piele, n special pe picioare, declanate de ctre P.aeruginosa,

constatndu-se c patogenul manifest sensibilitate nalt la antibiotice, cu excepia minociclinei

[104, 196]. Exemplele prezentate relev dificultile majore existente n elaborarea msurilor

orientate spre profilaxia sanitaro-igienica a infeciilor intraspitaliceti de etiologie

pseudomonadic.

O particularitate biologic caracteristic speciei P.aeruginosa, utilizat cu succes la

identificarea acesteia este posibilitatea unical a microorganismului de a sintetiza pigmentul

fenazinic hidrosolubil piocianinacare coloreaz mediul nutritiv sau pansamentele bolnavilor

n culoare albastr-verzuie. Se consider, c lipsa sau diminuarea capacitii de pigmentogenez

a tulpinilor de P.aeruginosa este determinat de aciunea inhibitorie a microflorei asociate,

antibioticelor sau insuficienei de oxigen. S-a stabilit, ca piocianina deine rol de protecie a

celulelor deP.aeruginosampotriva influenei negative, produse de schimbarea concentraiei de

oxigen n atmosfer i de aciunea letal a razelor ultraviolete (UV). Prezena pigmentului ajut

bacteriei s suporte hipoxia n timpul dezvoltrii infeciei n esuturile profunde, iar rezistena

mpotriva razelor UV determin supravieuirea patogenului la sterilizarea cu raze UV a

obiectelor mediului nconjurator. Aceste proprietai ale pigmentului relev c tulpinile cu

capaciti de sintez a piocianinei fiind mai rezistente, sunt mai periculoase dect cele care nu

prezint aceast proprietate. Totodat, piocianina particip la diverse mecanisme patogenice,

precum ar fi traumarea epiteliului respirator i declanarea proceselor proinflamatorii ale

fagocitelor [26].

Un alt grup de enzime al bacteriei P.aeruginosa hemolizinele (fosfolipaza, lecitinaza)

care se identific n majoritatea cazurilor prin apariiazonelor de hemoliz a eritrocitelor n jurul

coloniilor crescute pe mediu agarizat cu snge de 5% [133, 197], contribuie la invazia bacterian

datorit efectelor citotoxice asupra celulelor implicate n reaciile imunitare neutrofilelor ilimfocitelor [114].

O alt particularitate specific a pseudomonadelor este cea de sintez a citocromoxidazei.

Citocromoxidaza bacterian este membr a superfamiliei oxidazice Fe-hem, important pentru

conservarea energiei la condiii limitate de oxigen. Fermentul catalizeaz reducerea oxigenului

molecular pn la ap. La cultivarea pe medii nutritive, celulele pseudomonadelor sintetizeaz

trimetilamina,care confer culturii un miros specific ce amintete mirosul de iasomie [26].


25/139

La moment, polimorfismul patogenic al bacteriilorPseudomonaseste determinat nu doar

de particularitile biologice de origine i evoluie fireasc, ci i de presiunea de selecie a

fondalurilor medicamentoase, n special a antibioticelor. n legtur cu aceasta devine atractiv

prin oportunitile i avantajele sale strategia de utilizare a preparatelor naturale, de origine

taninic n tratamentul infeciilor bacteriene.

E.coli. Bacteria E.coli abiteaz colonul i intestinul omului, multor mamifere, psri,

peti, reptile, amfibieni i insecte. Este un anaerob facultativ, temperatura optim de cretere

fiind 30-37C. Pe agar peptonat, dezvolt colonii uor bombate, semitranslucide, de nuan gri,

iar n bulion peptonat produce opalescen omogen cu formare de sediment.E.colisunt bacterii

condiionat-patogene. Unele tulpini produc enterotoxine i posed activitate hemolitic. La

aciunea factorilor fizici nefavorabili, este mai rezistent dect alte bacterii, supravieuind

sptmni i luni de zile, dar uor se inactiveaz sub aciunea dezinfectanilor. Contaminarea se

produce de la persoanele bolnave pe cale oro-fecal sau pe cale aerian, prin picturi i praf

[228].

S.aureus. Se consider c stafilococii, fiind reprezentai de circa 30 de specii, sunt

membri ai florei normale a pielii, tractului respirator i gastrointestinal. Totui, 3 specii

principale ale genului Staphylococcus S.aureus, S.epidermidis, S.saprophyticuss-au dovedit a

fi de mare impact clinic, cauznd intoxicaii alimentare, infectarea plgilor, endocardite,

osteomielite hematogene, meningite i infecii pulmonare. Producnd o varietate mare de enzime

extracelulare i toxine, stafilococii patogeni adesea hemolizeaz sngele i coaguleaz plasma. n

condiii in vitro s-a constatat existena multor remedii cu activitate antibacterian pentru

Staphylococcus. Cu toate acestea, stafilococii dezvolt rezisten pentru multe remedii

antimicrobiene i prezint probleme terapeutice majore [106].

S.aureuseste o bacterie gram-pozitiv, cauzeaz la om i animale procese inflamatorii,

nsoite de formarea puroiului, din care cauz aceasta este numit coc piogen. Bacteria are form

sferic cu diametrul de 0,8-1 m, dispus sub form de aglomerri neregulate. Pe frotiurile dinculturi i din puroi se ntlnesc lanuri scurte, uneori coci perechi sau izolai. Cocii lipsii de cili,

asporulai i unele tulpini formeaz capsul. S.aureuseste anaerob facultativ. Se dezvolt bine pe

medii nutritive cu pH 7,2-7,4, la temperatura de 37C. Pe agar peptonat formeaz colonii

bombate cu margini regulate, avnd diametrul de 1-4 mm. Sintetizeaz peste 25 de proteine,

toxine i enzime. Hemolizinele acestora se caracterizeaz prin aciune hemolitic, letal i

dermatonecrotic. Ca i ceilali stafilococi, S.aureusse caracterizeaz printr-o rezisten relativ

pronunat la desicare, congelare, aciunea luminii solare i substane chimice. n afeciunile


26/139

stafilococice se aplic antibiotice i sulfanilamide [13]. S-a constatat o nou gen stafilicocic

mprF care determin rezistena bacteriei la peptidele umane de aprare defensinele i

protegrinele [174].

S-a constatat o cretere semnificativ a ratei de izolare a speciilor deAcinetobactercare,

conform unor autori prezint o cauz important a infeciilor nosocomiale n seciile de

combustiologie [195].

1.4. Particularitile unor micoze oportuniste hialohifomicoze

Micozele oportuniste ale omului, produse de fungii condiionat-patogeni prezint

afeciuni de proporii ale membranelor mucoase sau plmnilor, cauzate de ctre miceliul

fungului la pacienii cu stri imunodeficitare sau n perioada postoperatorie. Ca surs de infecie

a acestora pot servi resturile organice n putrefaie sau solul, straturile superficiale ale cruia se

transform n praf i se transport la distane mari, ptrunznd n ncperile pentru trai sau

instituiile curative. Analiza componenei speciilor microscopice a demonstrat prezena n

solurile din pdure a speciilor oportuniste, fitopatogene i fitotoxice [21].

Conform datelor unor autori, mediul urbanistic prezint unul din factorii importani care

influeneaz viaa i sntatea omului. Mediul urban se caracterizeaz prin poluri de transport i

industriale ale solului, apei, aerului, factori cu impact negativ deosebit asupra ecologiei tuturor

sistemelor urbanistice. Ciupercile microscopice prezint componeni structurali i funcionali ai

sistemelor terestre i reacioneaz promt la schimbrile antropogene ale mediului. Printre

micromicetele care abiteaz aerul, solul, elementele de infrastructur i ncperile locative, se

enumr i speciile care produc diverse boli micotice, numrul crora cu fiece an crete [17, 18,

22]. De exemplu, printre speciile din complexul ciupercilor mediului aerian al or. Sankt-

Petersburg se enumr Fusarium culmorum, F.moniliforme, F.oxysporum, F.sambucinum,

F.sporotrichiella[20].

Speciile de fungi FusariumLink.ex Fr. sunt cunoscute, n special, ca ageni patogeni aidiferitelor boli la plante, adic n calitate de fitopatogeni. Totodat, se cunoate capacitatea

fungilor de a produce diverse afeciuni organismului uman n form de micotoxicoze sau micoze.

Micotoxicozele sunt atestate mai frecvent i, deci, mai bine investigate. Aceasta se refer, n

special, la speciile Fusariumcare, datorit contaminrii boabelor/cariopselor de diverse culturi

agricole cu micotoxine (dezoxinivalenol, zearalenon, nivalenol, trihotecin, toxin T-2,

fumonizine, moniliformin, acid fuzaric .a.), prin produsele de panificaie i alte produse


27/139

alimentare produc grave tulburri, sub form de toxicoze, leucemii, cancer al esofagului,

anorexie, convulsii, cefalee, neoplasme, boli autoimune .a. [19, 50, 132, 144, 155, 229].

Este cunoscut faptul c solurile Republicii Moldova sunt puternic infectate cu fungi

Fusarium, n special cuF.oxysporumi F.solani, aceste specii atestndu-se cu frecven nalt

n rdcinile i tulpinile plantelor agricole [8].

Sunt mai puin cercetate aspectele cu privire la implicarea speciilor Fusarium n

dezvoltarea micozelor umane. Informaiile cu privire la aciunea ciupercilor menionate asupra

pielii se refer cu preponderen la speciaF.sporotrichiella, metaboliii creia au fost atestai ca

factori cu aciune toxic asupra dermului, producnd hiperemie, descuamare, ngroare, necroze,

edeme [135, 160, 229]. Date recente relev c unele specii Fusarium care, de obicei, atac

rdcinile i partea bazal a tulpinilor de plante, sunt implicate n iniierea i dezvoltarea

hialohifomicozelor micozelor umane, manifestate prin edeme, ulceraii ale pielii .a. ntruct

n apariia i manifestarea bolii sunt implicai numeroi patogeni Fusarium, care elaboreaz n

calitate de metabolii toxine cu spectru larg de aciune, problema hialohifomicozelor este doar

parial investigat. Conform unor date, speciileF.solani, F.oxysporum, F.moniliformepot cauza

infecii localizate ale ochilor (endoftalmite, keratite) i pielii. Manifestri severe se atest la

pacienii imunocompromii, infectarea producndu-se prin plmni sau cile respiratorii

inferioare, dar i prin deteriorarea pielii sau mucoaselor. Aceste din urm conduc la leziuni

subcutanate masive [39, 78, 185, 238].

Autorii Guarro, Gene [97] comunic c speciileFusarium, saprofii hialinici ai solului i

patogeni ai plantelor sunt, totodat, i ageni etiologici ai infeciilor fuzariene severela oameni.

Circa 15 specii de Fusarium au fost constatate ca ageni ai diverselor infecii la oameni i

animale. n cele mai frecvente cazuri, aceste infecii sunt implicate n micozele superficiale, dar

recent numrul infeciilor esuturilor profunde i infeciilor diseminate a crescut considerabil, n

special la pacienii cu stri imunosupresive. Semnele caracteristice ale acestor infecii sunt

nodulii diseminai ai pielii, fungemia, mialgia i implicrile multiorganice. Implicri ale pielii nmanifestarea infeciilor s-au atestat n mai mult de 80% de cazuri ale infeciilor diseminate.

Leziunile produse sunt pronunate, ceea ce determin necesitatea unui diagnostic timpuriu, n

baza biopsiei.

n cazul ulcerelor cutanate ale picioarelor provocate de F.oxysporum, constatate la

persoanele implicate n munci agricole, prin studii histopatologice s-a atestat o reacie

inflamatorie nespecific, format din neutrofile polimorfonucleare, limfocite i macrofage, dar i

prezena filamentelor hialinice, ramificate, de 4...10 m. Fungul, cultivat pe agar suplimentat cu


28/139

glucoz, la 7 zile de incubare la 28C prezenta un miceliu filamentos, hialin, cu ramificaii de 3

i 5 m n diametru, cu clamidospori intercalai n grup, a cte 2-3. Caracterele descriptive bine

definite au permis stabilirea apartenenei fungului la specia F. oxysporum. Aspectele clinice

prezente au permis identificarea acestei maladii n calitate de fuzarioz cutanat focalizat, pe

fondal de depresie imun. Tratamentul hialohifomicozei s-a efectuat prin administrarea

amfotericinei B (1 gr/zi) i, ulterior, a itraconazolului (400 mg/zi), asociat cu aplicaia local a

ciclopiroxolaminei [159].

Din aceste considerente, fungii Fusarium reprezint poteniali ageni etiologici ai

hialohifomicozelor pentru populaia rural din republic, implicat activ n munci agricole. Sub

aspectul dat, este important detectarea sau elaborarea preparatelor medicamentoase de origine

natural, eficiente i accesibile pturilor largi ale populaiei.

1.5. Aspecte de management al rezistenei patogenilor umani la antibiotice

Conform World Health Report of Infectious Deseases 2000, creterea rezistenei

patogenilor umani la antibiotice prezint o problem major a Organizaiei Mondiale a Sntii

pentru mileniul prezent [190]. Rezistena bacterian la antibiotice continu s creasc rapid i

constituie o problem de baz n dermatologie [224].

Prin aciunea de monitoring al rezistenei microorganismelor la preparatele

antimicrobiene, demarat n Republica Moldova n 2002 s-a constatat, ca i n ntreaga lume,

fenomenul tot mai evident de cretere a rezistenei tulpinilor de microorganisme ageni

patogeni ai multor infecii, la aciunea antibioticelor. Astfel, conform datelor medicilor de la

Centrul de Medicin Preventiv din or.Ungheni [16], rezistena multor ageni patogeni, inclusiv

celor din grupul pseudomonadelor, stafilococilor, candidelor .a. a constituit circa 70-90% din

tulpini pentru peniciline, n anul 2004 indicele constituind 35 i 52%, respectiv, pentru

ampicilin i oxacilin. Chiar i pentru cefalosporinele de ultim generaie, se observ o cretere

rapid a rezistenei. De exemplu, la cefazolin rezistena a crescut de la 38,2 pn la 73,2%, iarla cefalexin de la 18,8 la 69,2%, respectiv pentru anii 2004 i 2007.

S-a constatat c tulpinile de P.aeruginosaprelevate de la bolnavii din raionul Cueni,

prezint polirezisten la multe antibiotice, de exemplu la piperacilin (57,1%), ticarcilin

(33,3%) i ciprofloxacin (25% cazuri) .a. [5].

Conform autorilor Matcovschi, Procopiin, Parii [11], caracteristica unor preparate

antimicrobiene de baz, omologate n Republica Moldova este urmtoarea:


29/139

Cefalotin cefalosporin de generaia I. Activ fa de bacteriile gram-pozitive:

stafilococi; inclusiv productori de penicilinaze, streptococi, inclusiv S.pneumoniae,

Corynebacterium diphtheriae, Bacillus anthracis, bacterii gram-negative:Neisseria meningitidis,

Shigella spp., Salmonella spp., E.coli, Haemophilus influenzae, Klebsiella spp., Treponema

pallidum, Leptospira spp. Ineficient fa de Proteus spp., Mycobacterium tuberculosis,

bacteriile anaerobe. Mecanismul aciunii const n inhibiia peptidoglicansintetazelor bacteriene

i n liza bacteriilor aflate n faza creterii.

Cefoxitin Cefalosporin de generaia II, din grupa cefamicinelor, rezistente la beta-

lactamazele bacteriilor gram-negative. Activ fa de bacteriile gram-pozitive: S.aureus,

S.epidermidis, streptococcii beta-hemolitici, S.pneumoniae, bacteriile gram-negative: E.coli,

Klebsiellaspp.,Haemophilus influenzae, Neisseria gonorrhoeae, inclusiv tulpinile productoare

de penicilinaze, Proteus mirabilis, Morganella morganii, P.vulgaris, Providencia spp., inclusiv

Providencia rettgeri, bacteriile anaerobe:Peptococcusspp., Clostridiumspp., Bacteroidesspp.,

inclusiv Bacteroides fragilis. Este inactiv fa de P.aeruginosa i Enterobacter cloacae.

Mecanismul aciunii const n inhibiia peptidoglicansintetazelor bacteriene i liza bacteriilor

aflate n faza creterii.

Cefuroxim Cefalosporin de generaia II. Activ fa de S.aureus, inclusiv fa de

tulpinile penicilinorezistente, cu excepia celor metilinorezistente, S.epidermidis, Haemophilus

influenzae, Klebsiella spp., Enterobacter spp., S.pyogenes, E.coli, S.mitis (grupa viridans),

Clostridium spp., P.mirabilis, P.rettgeri, S.typhii alte Salmonellaspp.,Neisseriaspp., inclusiv

productoare de beta-lactamaze, Bordetella pertussis, Bacteroides fragilis sunt rezisteni. Este

ineficient fa de Pseudomonas, Campylobacter, Acinetobacter calcoaceticus, Serratia,

Clostridium difficile. Cefuroximul axetil este eficient i n administrarea oral. Mecanismul

aciunii const n inhibiia peptidoglicansintetazelor bacteriene i liza bacteriilor aflate n faza

creterii.

Ciprofloxacin fluorochinolon cu spectru antibacterian larg, activ fa de E.coli,Salmonella spp., Shigellaspp.,Proteusspp., inclusiv indol-pozitiv i indolnegativ, M.morganii,

Citrobacterspp., Klebsiellaspp., Enterobacterspp., Yersinia spp., Vibriospp., Campylobacter

spp., Hafnia spp., P.stuartii, H.influenzae, Pasteurella multocida, Pseudomonas spp.,

Gardnerella spp., Legionella pneumophila, Neisseria meningitidis, N.gonorrhoeae, Moraxella

catarrhalis, Acinetobacter spp., Brucella spp., Chlamydia spp., Staphylococcus spp.,

Streptococcus pyogenes, S.agalactiae, Corynebacterium diphtheriae, Listeria monocytogenes.

Mecanismul aciunii const n blocarea ADN-girazei microorganismelor sensibile i a replicrii


30/139

ADN-ului. Fluorul este responsabil de lrgirea spectrului antibacterian pentru gram-negativi i

extinderea spectrului la gram-pozitivi. Ciclul piperazinic face preparatul activ contra

Pseudomonadelor.

Cloramfenicol activ fa de S.aureus, Streptococcus spp. (inclusiv S.pneumoniae),

E.coli, H.influenzae, Klebsiella spp., Enterobacter spp., Moraxella lacunata, Neisseria,

Salmonella, Shigella, Rickettsia, Chlamydia.a. Inhib subunitile 50S ribozomale bacteriene i

sinteza proteinelor. Are aciune bacteriostatic, iar n concentraii mari, sau pentru bacteriile

foarte sensibile la cloramfenicol bactericid.

Eritromicin antibiotic izolat din Streptomyces. Se fixeaz pe subunitile 50S ale

ribozomilor organismelor susceptibile i inhib sinteza proteinelor. Este activ fa de

Streptococcus, Staphylococcus (poate deveni rezistent), Mycoplasma, Treponema,

Corynebacterim, Listeria, Bordetella, Legionella, Ureaplasma, Neisseria, Chlamydia,

Entamoeba.

Gentamicin unul dintre cele mai utilizate aminoglicozide. Este activ fa de

Escherichia, Proteus, Pseudomonas, Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Citrobacter,

Staphylococcus, inclusiv productorii de beta-lactamaze, Salmonella, Shigella. Sunt rezisteni la

gentamicin speciile de bacterii: Streptococcus pneumoniae, streptococii grupei D i toate

bacteriile anaerobe.

Imipenem inhib sinteza peretului bacterian al unui ir de bacterii gram-pozitive i

gram-negative, aerobe i anaerobe. Este rezistent la beta-lactamaze ceea ce-l face eficient pentru

Pseudomonas, Serratia, Enterobacter, Staphylococcus, Streptococcus, Bacteroides.

Pefloxacin este o fluorochin activ fa de Escherichia, Enterobacter, Serratia,

Proteus, Citrobacter, Salmonellla, Shigella, Haemophilus, Staphylococcus, inclusiv productor

de beta-lactamaze,Neisseria, Legionella. Sunt rezisteni la pefloxacin anaerobii gram-negativi,

spirochetele,Mycobacterium. Mecanismul aciunii const n inhibiia ADN-girazei, fragmentarea

ADN, ceea ce conduce la distrugerea bacteriilor.Piperacilin activ fa de bacterii gram-pozitive: Staphylococcus, Streptococcusspp.,

inclusiv, bacterii gram-negative: Escherichia, Proteus, Morganella, Providencia, Serratia,

Klebsiella, Enterobacter, Salmonella, Shigella, Pseudomonas, inclusiv Pseudomonas,

Acinetobacter, Haemophilus (tulpinile neproductoare de beta-lactamase), Neisseria

gonorrhoeae, bacterii anaerobe: Actinomyces, Bacteroides, inclusiv Bacteroides fragilis,

Clostridium spp.,Eubacterium, Fusobacterium, Peptococcus, Peptostreptococcus, Veillonella.


31/139

Tetraciclin preparat de elecie n infeciile cu Rickettsia, Mycoplasma, agenii

limfogranulomului veneric i inghinal. Activ fa de Haemophilus, Yersinia, Francisella,

Bartonella, Bacteroides, Vibrio, Campilobacter, Brucella, Escherichia, Enterobacter, Shigella,

Mima, Herella, Klebsiella, Streptococcus, S.aureus (numai bolile respiratorii, ale pielii i

esuturilor moi). Mecanismul aciunii tetraciclinei const n complexarea cu proteinele

subunitilor 30S ribozomale i inhibiia sintezei proteinelor.

Tobramicin aminoglicozid ce se deosebete printr-o activitate sporit fa de

Pseudomonas. n afar de aceasta este activ fa de Proteus spp., inclusiv P.mirabilis,

P.vulgaris, Morganella, Escherichia, ns relativ slab mpotriva Streptococcusspp.

Deci, printre mecanismele importante ale aciunii antibioticelor menionate se enumr

inhibiia acivitii enzimelor implicate n sinteza peptidoglicanului bacterian, ADN-girazei sau

fragmentarea ADN-ului.

1.6. Particulariti de structur, activitate i utilizare ale taninurilor

1.6.1. Proprieti fizico-chimice ale taninurilor

Taninurile reprezentani importani ai fenolilor sunt compui vegetali cu o structur

chimic complex (care cuprinde multe grupri hidroxil-fenolice, dar i grupri carboxilice),

capabile s precipite proteinele din pielea crud, proteine cu care formeaz precipitate insolubile,

imputrescibile, impermeabile (pielea tbcit). Taninurile fac parte alturi de alcaloizi din

categoria metaboliilor secundari care se acumuleaz n plante i n organele acestora. Dup

capacitatea de hidroliz, taninurile se mpart n taninuri catehice (condensate sau nehidrolizabile)

i taninuri galice (condensate sau nehidrolizabile) [82].

Taninurile, att cele catehice, ct i cele galice sunt substane solide, de regul amorfe,

inodore de culoare alb-brun (culoarea se intensific cu ct greutatea moleculara este mai mare),

au un gust astringent (care dispare cu creterea gradului de polimerizare). Sunt solubile n ap

(formeaz soluii coloidale din care n prezena electroliilor salefiaz), alcool, aceton, glicerol,i insolubile n eter, benzen, cloroform [33].

Datorit gruprilor hidroxil fenolice i uneori a gruprilor carboxilice din molecul,

taninurile prezint un caracter acid. Au capacitatea de precipitare a alcaloizilor i substanelor cu

caracter bazic. Structura polifenolic este responsabil n mediul alcalin de caracterul puternic

reductor al soluiilor de taninuri, nsuire pus n eviden de reducerea soluiilor: Fehling,

permanganatului de potasiu, reactivului Tollens, iodului, apei oxigenate [12].


32/139

1.6.2. Aplicarea extraselor fenolice din plante la tratarea infeciilor i plgilor

Creterea rezistenei microorganismelor la medicamente i a adaptrilor evoluioniste ale

acestora a redus cu mult eficiena agenilor antimicrobieni [190]. Majoritatea medicamentelor

sintetice sunt de origine vegetal [205], de aceea, elaborarea noilor medicamente n baza materiei

prime vegetale, prezint interes comercial major n domeniul famaceuticii.

Remedii de tratare ale diferitor infecii cu ajutorul extraselor din plante sunt cunoscute pe

larg n medicina popular [102, 182]. Astfel, extrasele din scoara plantelor de Stryphnodendron

ce conin 20% de taninuri, datorit proprietilor antibacteriene, au fost utilizate cu succes de

ctre btinai la tratarea rnilor [188]. Conform autorilor [194], majoritatea plantelor

medicinale antimicrobiene sunt mai eficiente fa de bacteriile gram-pozitive n comparaie cu

cele gram-negative.

Oportunitatea obinerii preparatelor medicale antimicrobiene eficiente n baza extractelor

din diverse specii de plante ce conin taninuri, fenoli, flavonoizi a fost menionat n mai multe

lucrri [46, 141, 150, 164, 219]. De exemplu, n calitate de materie prim, speciile de plante

L.inermis, Eucalyptus sp., H.antidysenterica, H.indicus i cele din familia Aizoaceae prezint

interes biotehnologic pentru obinerea preparatelor antistafilococice, antisalmonelice,

antieerihice, anticandidice, antipseudomonadice [35, 208], iar polifenolii, inclusiv

proantocianidinele din extrasele apoase ale plantelor de Vigna angularis a preparatelor

antibacteriene pentru S.aureus, Acromonas hydrophila, Vibrio parahaemolyticus[107].

Pentru tratarea plgilor de piele sunt eficiente extrasele de plante ce conin compui

fenolici, inclusiv taninici [77]. Beneficiile principale ale extraselor fenolice constau n absena

efectelor sistemice adverse i incidena diminuat a rezistenei microorganismelor [207].

Prin extragerea din plante medicinale a unui ir de polifenoli i terpenoizi i testarea

acestora cu privire la activitatea antibacterian pentruHelicobacter pyloria fost pus n eviden

eficiena unei tanine hidrolizabile, dependent de doz i timp, mpotriva bacteriei. De

menionat, totodat, c tanina nu a afectat viabilitatea celulelor epiteliului gastric, ceea ce estedestul de important [88]. Testarea in vitro a aciunii extraselor eteropetrolice, cloroformice,

metanolice dinAspila africana ce conin muli compui bioorganici activi, printre care taninurile

sunt prezente n cantiti considerabile, asupra bacteriilor S.aureus, B.subtilis, E.coli,

P.aeruginosa i fungilor C.albicans, Aspergillus flavus a demonstrat proprietile

antimicrobiene ale extractelor, ceea ce le fac de mare perspectiv n tratamentul dizenteriei, la

cicatrizarea rnilor [31]. Extractele metanolice ale unor specii de Hypericumcare prin analiz


33/139

fitochimic au demonstrat prezena taninurilor, flavonoizilor i acizilor fenolici, au activitate

antistafilococic [70].

Se consider c plantele ce conin taninuri n cantiti mari, au proprieti astringente i se

utilizeaz cu succes la tratarea unor dereglri intestinale, aa ca diareea i dizenteria, tocmai

datorit activitii antimicrobiene [73].

Prin separarea taninurilor extrase din scoara plantelor de Rhizophora apiculata s-a

constatat c taninurile hidrolizabile, spre deosebire de cele condensate, prezint activiti

antifungice semnificative pentru C.albicans [130].

n medicina modern, majoritatea tratamentelor mpotriva infeciilor stafilococice se

bazeaz pe utilizarea: eritromicinei, gentamicinei, rifampicinei, vancomicinei. Extractele din

scoara de Parkia biglobosa au fost utilizate cu succes n tratamentul numeroaselor maladii

infecioase: diaree, pneumonie, bronit, traheit, sepsis al plgilor, carii dentare, conjuctivite,

otit, dermatoz, agentul etiologic al crora a fost S.aureus. Totodat, taninurile izolate din

Vaccinium vitis-idaea L., datorit proprietilor antimicrobiene, sunt eficiente la tratarea

maladiilor periodontice [106].

Testrile in vitro i in vivo au demonstrat c extractele metanolice din Hemidesmus

indicus, cu coninut bogat de taninuri, steroizi, triterpenoizi i carbohidrai prezentau efect

antienterobacterian asupra Salmonella typhimurium, E.coli i Shigella flexneri, mai pronunat

dect remediul antidiareic Lomotil, efectul antidiareic datorndu-se inhibiiei motilitii

intestinale i activitii bactericide a extractelor [71].

Prin cercetarea efectelor procianidinelor patachinei de mare asupra cicatrizrii leziunilor

stomacale ale obolanilor induse de acidul acetic, evoluia crora a fost evaluat cu ajutorul

indicelui ulceros i metodelor imunohistochimice, s-a constatat mrirea factorului de cretere

epidermal din plasm, expresiei receptorului factorului de cretere epidermal (RFCE) i

proliferrii antigenului nuclear celular (PANC) n jurul ulcerului. Ca rezultat, s-au micorat

considerabil dimensiunile ulcerelor la ziua 7 i 14, funcie de doza aplicat, tratarea leziunilorgastrice induse de acidul acetic datorndu-se, probabil, accelerrii reparaiei mucoasei [235].

Conform unor autori, fraciile mbogite cu taninuri din Myracrodruon urundeuva

plant utilizat n Brazilia de Nord n calitate de antiinflamator, cicatrizant de ran n ulcerele

stomacale i n procese ginecologice, datoreaz aceste caliti aciunii antioxidante a compuilor

polifenolici [206].

Au fost constatate unele mecanisme ale aciunii antiulceroase a extractelor apoase din

coaja de copac Rhizophora mangle, bogate n taninuri. Astfel, la obolani extractele de


34/139

R.mangleau micorat suprafaa ulcerului, s-a recuperat nivelul de prostoglandine E2 care a fost

iniial micorat de ctre diclofenac. Dozele nalte de extract au provocat o cretere a activitii

peroxidazei glutatienice i superoxidismutazei, i o inhibare a nivelurilor de oxidare lipidic.

Rezultatele relev c efectul gastroprotectiv alR.manglese datoreaz proprietilor antioxidante

prostoglandin-dependente [51].

Angiogeneza joac un rol important n cicatrizarea plgilor, iar factorul de cretere

endotelial vascular este important n stimularea angiogenezei n plag, de obicei, bogat n

asemenea oxidani, ca H2O2, produs de neutrofile i macrogagi. Extractul proantocianidinic din

seminele de struguri regleaz necroza oxidant i temporal n keratinocitele umane [115].

Extractele etanolice ale taninurilor scoarei de Terminalia arjuna studiate cu privire la

activitatea cicatrizant n plagi, prin administrare oral sau prin aplicri topice, au contribuit la

o cretere semnificativ a forei tensiunii superficiale a plgilor prin incizie i o cretere

procentual a reducerii dimensiunilor plgilor prin excizie, comparativ cu grupul de control.

Aplicrile topice cu taninuri s-au dovedit a fi superioare celorlalte n cadrul studiilor plgilor prin

incizie i excizie. Coninutul nalt al hidroxiprolinei n esutul de granulaie din plgile prin

excizie relev o proliferare colagenic activ care conduce la o cicatrizare rapid a acestora

[180].

Colagenul, o protein unical a esutului conjunctiv, i-a gsit o aplicare larg n calitate

de material biocompatibil pentru cicatrizarea de plag. S-a constatat c catechinele polifenolice

stabilizeaz colagenul de tip 1 datorit implicrii legturilor de hidrogen i interaciunilor

hidrofobe n calitate de fore majore [140].

Specia Aspira africana, utilizat pe larg n Africa n medicina tradiional pentru

stoparea sngerrii din plag i tratarea durerilor reumatice, reduce sngerarea i durata acesteia

la obolani. Extractele de A.africana produc diverse grade de inhibiie a creterii izolatelor

clinice de P.fluorescens, P.aeruginosa i S.aureus, i reduc perioada de epitelizare a plgilor

experimentale. Prezena de alcaloizi, saponine, taninuri, flavonoizi, steroli, terpenoizi,carbohidrai n extractele frunzelor de A.africana face posibil stoparea sngerrii de plag,

sanarea suprafeelor de inflamaii, inhibiia creterii microorganismelor ce contamineaz plaga,

ceea ce, n definitiv, accelereaz cicatrizarea plgii [163].

Constituienii polifenolici dinMimoza pudica, n extractele metanolice de 2%, prezint la

obolani un efect cicatrizant puternic prin contracia de plag i perioada de epitelizare n cazul

plgilor prin excizie, i prin mrirea forei superficiale de tensiune i coninutului de

hidroxiprolin n plag [123].


35/139

n timpul cicatrizrii plgii, suprafaa acesteia este bogat n oxidani, aa ca H2O2.

Acidul ascorbic i taninurile cu greutate molecular joas emblicaninele A i B, p

activitatea antimicrobiană si antioxidantă a

Documents