TEMA 25: DIAGNOSTICUL DE LABORATOR A HEPATITELOR VIRALE I HIV/SIDA

1. Virusurile hepatice. Virusurile hepatitei A(VHA) si E(VHE). Caracterele morfobiologice. Sursa de infectie, mecanismele de infectare, patogeneza hepatitelor A si E.

HEPATITE leziuni inflamatoare ale ficatuluiORIGINE infecioas, medicamentoas, toxic, autoimun, etc Hepatitele virale leziuni determinate de aciunea citopatic direct a virusului n cauz, sau, mai frecvent, de reacia imun contra celulelor hepatice infectateVIRUSURILE HEPATITICEVirusuri dominant hepatotropeVirusul hepatitei A HAV- (fam. Picornaviridae)Virusul hepatitei B HBV- (fam. Hepadnaviridae)Virusul hepatitei C HCV- (fam. Flaviviridae)Virusul hepatitei D HDV - (neclasificat)Virusul hepatitei E HEV - (fam. Hepeviridae)Virusul hepatitei G HGV?Virusurile TT (Circovirus ?)Virusuri ce afecteaz ficatul ocazional: Coxsackie, virusul citomegalic (CMV), virusul Epstein-Barr (EBV), virusul herpes simplex (HSV), .a.MANIFESTRI CLINICO-BIOLOGICE ALE HEPATITELORIncubaia variabil (15 zile 6 luni)Gravitatea hepatitele A i E au evoluie benign, hepatitele B, C, D acute i cronice, complicaii graveForma clinic clasic febr, artralgii, astenie, erupii, dereglri digestive, urmate de icter (3 sptmni), asociat cu anorexie, oligurie, decolorarea maselor fecale, bilirubinurieForme anicterice, asimptomatice (80-90% cazuri)Hepatita fulminant foarte gravHepatita cronic persistent i cronic activ (cu citoliz)Complicaii ciroz, cancer primitiv al ficatuluiManifestri extrahepatice, determinate de complexe imune circulante periarterit nodoas, poliartrit, glomerulonefrit, poliradiculonevrite, etc.

RM - ar endemic prin hepatitele B i C. Indicele de prevalen a HBV este de peste 8%, iar al HCV de 5%.Program naional de combatere a hepatitelor virale B, C i D (Hotrrea Guvernului RM nr 1143 din 19 octombrie 2007)

VIRUSUL HEPATITEI AFamilia PicornaviridaeGenul HepatovirusSpecie Virusul hepatitei A (HAV)Dimensiuni 28-30 nmGenom ARN+, liniar Capsid icosaedric, 60 capsomeri, compui fiecare din 4 polipeptide VP1, VP2, VP3, VP4Rezisten: total la 60 grade 1 or, parial - 12 ore, rezist la % de clor uzuale. Inactivat de formol, beta-propiolacton, UV, hipoclorit de sodiu. Primul vaccin 1992Se cunosc 7 genotipuri (om, maimue)Cultivarea :-Marmozete, cimpanzei-Celule de hepatocarcinom uman-Celule diploide umane-Celule din rinichi de maimu

PATOGENEZA HEPATITEI ASurs i rezervor de infecie omul bolnavMecanismul de transmitere fecal-oral (mini murdare, alimentele, apa contaminate); cazuistic transfuzionalHAV se multiplic n esutul limfoid intestinal i citoplasma hepatocitelor. Se elimin cu masele fecale dup 2 sptmni de la infectare, diminueaz odat cu apariia semnelor clinice. Viremia 1-2 sptmniHepatocitoliza este determinat de LT CD8, NK. Incubaia 30 zile (15 50 zile)Forme clinice forme asimptomatice (90%), forme benigne (1-2 spt.), rareori forme grave, fulminante. Lipsa cronicizrii!Markerii virali n cursul maladiei:HAV (Ag viral) (mase fecale, snge) n ultimele 2 sptmni de incubaie i cteva zile de la apariia icterului IgM anti-HAV depistate de la debutul fazei icterice, titru maxim peste o sptmn i dispar dup 8-12 sptmni. IgG anti-HAV persist toat viaa ARN viral (n mase fecale, snge, hepatocite)

VIRUSUL HEPATITEI VIRALE E (HEV)HEV depistat n 1983 prin MEFamilia HepeviridaeGenul - HepevirusStructura HEVDimensiuni 27 30 nmGenom ARN+ (descris n 1990)Capsid icosaedric (protein unic glicozilat)HEV se repartizeaz n 3 grupe genomice: I asiatic, II mexican, III nord-american (include i tulpini porcine)

PatogenezaSursa de infecie omul bolnavMecanismul de transmitere fecal-oral (ap, alimente), posibil parenteral (la hemofili, persoane cu transfuzii, hemodializ)Perioada de incubaie 30 zileClinica hepatit acut, asemntoare cu hepatita A. Forme grave la femei gravide, n special n trimestrul III al sarcinii (20-40% mortal). Risc de avort i natere prematur (12 30% cazuri)

Markerii HEV:

Virusul (Ag viral) prezent n mase fecale n faza acut (ME)IgM (3 luni de la debut) i IgG anti-HEVGenomul viral n mase fecale, hepatociteVIRUSUL HEPATITEI VIRALE B (HBV)Ag Australia a fost detectat n 1964 de Blumberg, actualmente numit Ag HBsHBV virus ADN, ciclul de replicare comport o etap de transcripie invers;Extrem de contagios i prezent n titruri mari n lichide biologice. Provoac hepatite acute, chiar fulminante, hepatite cronice, ciroz, hepatocarcinom. Peste 350 mln persoane infectate n lumePeste 1,5 mln decesuri anual

2. Virusurile hepatitei B (VHB), C (VHC), D (VHD). Caracterele morfobiologice. Sursa de infectie, mecanismele de infectare, patogeneza si consecintele hepatitelor virale B, C, D.

Virusul hepatitei B (HBV)

Familia HepadnaviridaeGenul OrthohepadnavirusSpecia Virusul hepatitei B (HBV)MorfologiaParticule sferice de 42 nm (particulele Dane), infecioase virionul complet (109 part/ml) Particule sferice, lipsite de acid nucleic, de 22 nm, neinfectioaseStructuri tubulare, 200-700 nm lungime, neinfectioase

Structura HBV (particula Dane)Genomul: ADN circular bicatenar parial (2/3). Posed catena lung L(-) i catena scurt S(+). Se disting 8 genotipuri (A H). Nucleocapsida (NC, core) icosaedric, comport Ag HBc, asociat cu Ag HBe (solubil). n NC se afl i ADN-polimeraza i timidin kinaza.Supercapsida dublu strat lipidic asociat cu proteine virale (Ag HBs). Un receptor pentru albumin din supercapsid intervine la etapa de penetrare a virusului.

Rezistena : HBV este rezistent la aciunea eterului, la desicare i cldur. HBV i pstreaz infeciozitatea mai muli ani la -20 grade, cteva luni la +30 grade, cteva ore la +60 grade. Este distrus la fierbere i cu hipoclorit de sodiu.Animale experimentale maimue cimpanzei Structura antigenic a HBV (markeri epidemiologici)Ag HBs, de suprafa. Posed determinani de grup (a) i de tip (d/y i w/r). Serotipuri ale Ag HBs : ayw, ayr, adw, adr, etc. Anticorpii anti-HBs au rol protector.Ag HBc, din NC, nu este detectabil n ser, doar n nucleul hepatocitelor infectate.Ag HBe, solubil, component al NC. Prezent n ser i martor de infeciozitate (replicare viral).ADN polimeraza Timidin kinazaAg suscit sinteza Ac anti-HBs, anti-HBc, anti-HBe, anti-ADN polimeraz.

Multiplicarea HBVVirusul penetreaz n hepatocit debarasat de supercapsid datorit receptorului su pentru albuminDup decapsidare ADN este completat de polimeraza viral, devenind bicatenar ADN-ul viral ptrunde n nucleul celuleiARN polimeraza gazdei transcrie catena ADN L(-) n ARN-pregenomic (+) i ARNmn citoplasm are loc translarea ARNm i sinteza proteinelor viraleARN-pregenomic (+) este ncorporat n capsid i ADN polimeraza viral sintetizeaz catena L (-) activitate de reverstranscriptaz Pe matricea catenei L (-) este sintetizat catena S (+)Polimeraza manifest activitate de RNaz H i degradeaz ARN-pregenomicNC capt supercapsida la nivelul MC i virionul nou format este eliberat prin nmugurire (particulele Dane, infecioase).Proteinele externe (HBs) sunt produse n exces i se asambleaz n ser n particule sferice sau tubulare, neinfecioase.

HBV nu este citolitic. Hepatocitoliza este determinat de rspunsul imun al gazdei. Hepatocitele infectate prezint pe suprafaa lor antigene virale, ce stimuleaz un rspuns imun.Limfocitele T CD8 i celulele NK atac i distrug celulele bolnave, iar anticorpii specifici neutralizeaz virusul circulant.

DE REINUT !!!ADN viral dublu catenar este extrem de stabil, poate persista sub form de plasmid n hepatocit, fiind la originea portajului cronic i fenomenelor de reactivare.ADN viral se poate integra n cromozomul hepatocitelor (aciune oncogen posibil)Implicarea transcriptazei inverse se afl la originea unei rate de mutaii crescute (rezisten la chimioterapice, eec n cursul seroterapiei sau vaccinare, mutante fr Ag HBe)

Patogeneza hepatitei virale BSursa de infecie omul. HBV este prezent n sngele bolnavului, secreii genitale i sperm, saliv, lapte, urin, lacrimi.Cile de transmitere a HBV:- Parenteral prin snge i derivate (transfuzii, tratament cu produse sangvine, activitate profesional, injecii cu seringi contaminate -toxicomani, tatuaj, piercing, acupunctur)Sexual (homo- hetero)Vertical de la mam la copil (la natere sau n perioada neonatal)Transmiterea direct (contact, srut) nu este exclus

Riscul infeciei prin injecie 20-30%Contagiozitate sangvin extrem de 10 ori superioar infeciei cu HCV i de 100 ori HIV.Perioada de incubaie - 30180 zile (10 sptm)Perioada de stare simptomatic la 20-30% pacieni (forme anicterice 70-80%) Vindecare 90%Hepatita viral B poate evolua spre cronicizare (10% la persoane imunocompetente).Hepatita fulminant 0,1 - 1%Ciroza hepatic sau cancer 20%

CINETICA MARKERILOR Hepatita acut Ag HBs este primul marker depistat n ser dup 1-3 luni de la contagiu, persist 1-2 luni i dispare peste cteva sptmni dup normalizarea transaminazelor. Persist la purttorii croniciAg HBe apare imediat dup HBs, marker de replicare viral, dispare naintea Ag HBsAc anti-HBc (IgM) apar peste 2-4 spt dup Ag HBsAc anti-HBe apar dup ncetarea replicrii virale, odata cu dispariia Ag HBe. Marker de pronostic favorabilAc anti-HBs apar peste 2-3 sptmni dup dispariia Ag HBs (fereastr imunologic). Neutralizani. Markeri ai vindecrii. Lipsesc la purttorii croniciEvoluie favorabil: dispariia Ag HBs i Ag HBe, apariia succesiv a Ac anti-HBc, anti-HBe i anti-HBsHepatita fulminant prezena constant a IgM anti-HBc n titru naltHepatite cronice (evoluie peste 6 luni)Hepatit cronic activ (persistena Ag HBs, Ag HBe i Ac anti-HBc - IgG)Hepatit cronic persistent (Ag HBs, Ac anti-HBe, anti-HBc) - purttor cronic de Ag HBs(Reactivri sunt posibile, supraveghere necesar).

VIRUSUL HEPATITEI DAgent viral defectiv, satelit al HBV, 36-37 nm. Descoperit n 1977Genul DeltavirusGenom ARN-, circular (3 genotipuri)Capsida sferic, 2 proteine, Ag DeltaSupercapsid derivat din HBV, cu 3 forme de Ag HBsSe replic n nucleu, independent de HBV, dar care i asigur supercapsida cu Ag HBs.Manifest efect citopatic direct sau via rspunsul imun celular.Markerii HDV Ag HDV, Ac anti-HDV, ARN viral (asociai cu markeri ai HBV)Patogeneza hepatitei DMecanismele i cile de transmitere identice cu HBV. Infecia Delta se poate manifesta n acelai timp cu hepatita B (co-infecie, evoluie acut, risc de forme fulminante) sau survine la un purttor cronic (suprainfecie, risc de hepatit cronic activ cu evoluie rapid n ciroz, forme fulminante sunt posibile)

VIRUSUL HEPATITEI CIdentificat n 1989. n prezent 180-200 mln infectaiFamilia FlaviviridaeGenul HepacivirusDimensiuni 55-65 nmGenom ARN+, liniar. Heterogenitate genetic - se disting 6 (11 ?) genotipuri i numeroase subgenotipuri. HCV circul sub forma de un amestec complex i instabil de populaii virale genetic distincte. n Europa predomin genotipul 1, care este mai puin sensibil la tratamentul cu IFN. Capsida icosaedric, protein unicSupercapsida derivat din membrana reticulului endoplasmatic, cu 2 glicoproteine virale E1 i E2 Replicarea HCV are loc in citoplasma hepatocitelor i a celulelor mononucleate din sngeMarkeri epidemiologici Ag HCV, Ac anti-HCV, ARN viralTransmitere:Prin transfuzii, transplant de esut i organeDroguri administrate i/vNozocomial (n mediu medico-chirurgical, stomatologie, piercing, tatuaj, acupunctur)Vertical Sexual Intrafamilial (foarfece, peptene, aparat de ras, etc)

Incubaia 4 12 sptmniHepatita C acut: 70-90% - asimptomatic, activitatea seric a transaminazelor (n special ALAT) este moderat crescut i tranzitorie, uneori oscilant. Se poate vindeca spontan n 20 % cazuri, fr a conferi imunitate complet.Hepatita C fulminant co-infecie cu HBV sau HAVHepatita C cronic (80% cazuri) persistena HCV peste 6 luni de la infecia acut. Cretere cronic a activitii ALAT, care este moderat i fluctuant. Co-infecia cu HIV factor stimulatorComplicaii ciroz (20% cazuri), cancer

3. Diagnosticul de laborator al hepatitelor virale. Prelevatele. Metodele de diagnostic. Markerii sero-epidemiologici ai infectiei hepatice i semnificatia lor diagnostica.

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL HEPATITELOR VIRALEDiagnostic paraclinic: dozarea transaminazelor, bilirubinei, raportul albumine/globuline. Trombopenie, leucocitoz, diminuarea protrombinei factori de alert.Diagnostic etiologicDetectarea virionilor (ME, IME) sau Ag virale (ELISA, RIF) n bioptate hepatice sau snge Detectarea AN virali ntrahepatic sau n snge (hibridare, PCR)Evidenierea anticorpilor antivirali n serul sangvin prin tehnici ELISA, ARI, imunoblot, RIFIDiagnosticul hepatitei AEvidenierea Ig M anti-HAV (Ig G imunitate)Diagnosticul hepatitei BDepistarea Ag HBs, Ag HBe, Ac anti-HBc, anti-HBs, anti-HBe, anti-polimeraz n ser; Ag HBc n hepatocit)Diagnosticul hepatitei CDepistarea Ac anti-HCV (80% peste 15 spt de la expoziie, 95% - 5 luni, 97% - 6 luni )Diagnosticul hepatitei D- Evidenierea Ac anti-HDV

4. Imunitatea, profilaxia i tratamentul specific al hepatitelor virale.

PROFILAXIA HEPATITELOR VIRALE1- Control eficace al donatorilor de snge, esuturi, organe, sperm, prevenirea MST i nozocomiale, utilizarea materialelor de uzaj unic, ameliorarea condiiilor sanitare, etc. 2 Imunizarea activAnti-hepatita A vaccin inactivat (10-20 ani)Anti-hepatita B (vaccin recombinant Ag HBs). Vaccin anti-hepatita D i E n curs de studiu3 Imunizarea pasiv- Imunoglobuline specifice anti- HAV, anti-HBV, anti-HEV

Tratament specific al hepatitelor A i E nu exist.Tratamentul specific al hepatitei B Interferon alfaVidarabin, lamivudin, entecavir, telbivudin, adefovir (!!! Selecia tulpinilor rezistente)ImunoterapieTratamentul specific al hepatitei CInterferon alfaRibavirinImunoterapie

5. Familia Retroviridae. Clasificarea. Rolul n patogenie.

FAMILIA RETROVIRIDAE. VIRUSUL HIV I INFECIA HIV/SIDAPrima descriere clinic a SIDA 19811983HIV a fost identificat la Paris, ins. Pasteur1986 - propus denumirea HIV (Human Immunodeficiency Virus)1986 a fost izolat HIV-2, Africa de VestZilnic se infecteaz 5-6 mii persoane (6 pers/sec)

CLASIFICAREA FAM. RETROVIRIDAERetroviridae familie numeroas de virusuri ARN dotate cu o enzim numit transcriptaz invers (reverstranscriptaz).ARN ADNd.cSubfamilia OrthoretrovirinaeGenurile: Alpharetrovirus, Betaretrovirus, Gammaretrovirus, Deltaretrovirus, Epsilonretrovirus (induc tumori i leucemii), Lentivirus (virusul HIV, SIV)Subfamilia SpumaretrovirinaeGenul: Spumavirus (nepatogeni)

6. Caracterele morfostructurale comune ale retrovirusurilor. Organizarea genomului. Multiplicarea, Aspecte genetice.

CARACTERE MORFOSTRUCTURALE GENERALE ALE FAMILIEI RETROVIRIDAEDimensiuni 80-130 nmForm sfericGenom dou molecule de ARN+, capacitate de integrare n nucleu sub form de ADN proviralEnzima reverstranscriptazaCapsid icosaedricSupercapsid derivat din MCP, lipidic cu GP virale nserateCiclul replicativ este identicVIRUSUL HIV. STRUCTURA I ORGANIZAREA GENOMULUIHIV-1 i HIV-2 responsabili de Sindromul Imuno-Deficienei Achiziionate (SIDA)HIV-1 repartiie mondialHIV-2 limitat la Africa de VestParticule sferice, 80-120 nmStructura virusului HIV-1 Genomul: diploid 2 molecule de ARN+ identice, nu sunt utilizate n calitate de ARNm Enzime: reverstranscriptaza (RT, p66), integraza (p31), proteaza (p9)Capsida: n form de trunchi de con, constituit din 2 proteine - p24 (CA, a capsidei, major) i p7 (NP, a nucleocapsidei, asociat ARN)Supercapsida: dublu strat lipidic de origine celular n care sunt nserate 2 GP viraleGp120, de suprafa, asigur fixarea virusului de receptorul celular CD4 i de coreceptori. Regiunea V3 (variabil) induce anticorpi neutralizani specifici Gp41, transmembranar, legat de gp120, responsabil de fuziunea supercapsidei cu membrana celularProteina p17, (MA), matrice, cptuete stratul intern al supercapsidei, este asociat cu proteazaGenomul, proteinele interne (p24, p7, p17) i enzimele constituie nucleoidul (core) viral

Structura genomului (apr. 10 mii nucleotide)Gena gag (group antigens), codeaz proteinele structurale interne (p24, p7 i p17)Gena pol (polimerase), codeaz 3 enzime: RT (p66), integraza (p31), proteaza (p9)Gena env (enveloppe), codeaz o protein precursor gp160, clivat ulterior n gp41 i gp120Gene regulatoare tat, rev, nef, vif, vpr i vpu (HIV-1) sau vpx (HIV-2)

7. Subfamilia LENTIVIRINAE. Virusuri HIV I si HIV II (virusuri SIDA). Caracterele morfostructurale. Organizarea genomului. Structura antigenica. Rezistena la ageni fizici i chimici.

Omologia dintre HIV-1 i HIV-2 este de 42%, mai nalt la nivelul genelor gag i pol (peste 50%) i redus la nivelul genelor env (39%)Se disting 3 grupe genomice ale HIV-1: M (major), O (outlier) i N (new). Grupul M comport 10 subtipuri (A-H, J i K), repartizate geografic neuniform (majoritatea n Africa, B Europa occidental i America de Nord, F, B Romnia, G Rusia, etc)Structura antigenic toate proteinele i glicoproteinele virale sunt imunogene.Rezistena HIVHIV este sensibil la solveni lipidici i detergeni, la 56 grade C este inactivat n 30 min, n 5 minute - 0,2 % hipoclorit de Na, 70% etanol, 0,2% glutaraldehid. Labil la pH-uri extreme, radiaii UV i RXCultivarea Celule mononucleate de la persoane sntoase Linii celulare din LT MT2Animale sensibile maimuele cimpanzei (HIV-1), Rhesus (HIV-2) CELULELE-INT I REZERVORUL CELULAR1. Limfocite TCD4+ (Th) (99% de replicare, ECP-sinciii)2. CPA: monocite/macrofage tisulare (replicare redus, ECP minim), celulele dendritice (prezente n timus, tegument, mucoase, organe limfoide, SNC i snge perif.), celulele microgliei. Ele au rol de vector i rezervor de virus (adsorb HIV la suprafaa lor i-l transport n organele limfoide, unde el este prezentat celulelor CD4+ n care se replic).Se disting tulpini ale HIV cu tropism macrofagic (M, sau R5), utilizeaz coreceptorul CCR5, i tulpini cu tropism limfocitar (T, sau X4), coreceptorul CXCR4.Limfocitele T pot fi infectate cu ambele tulpini (prezint ambii receptori).n primo-infecie sue R5, n stadiu de SIDA sue X4

8. Patogeneza. Etapele infectiei HIV. Formele clinice. Imunitatea.

CICLUL DE REPLICAREAtaarea HIV la celula-gazd prin legarea gp120 la receptorul celular CD4. Rezult o modificare conformaional a gp120, ce permite buclei V3 a acestei gp s se fixeze de coreceptorii de pe suprafaa celulei: CCR5 i CXCR4, CCR3, CCR2b .a.Penetrarea NC prin fuziunea supercapsidei (gp41) cu MCPDecapsidarea i eliberarea ARN viral asociat cu RTRetrotranscrierea ARN+ n ADN- (RT). In continuare RT (funcie de RNA-aza H) degradeaz ARN+, apoi transcrie ADN- n ADNd.c., care va fi circularizat, apoi integrat (integraza) n cromozomul celular, constituind provirusul.Transcrierea ADNv n ARNm i ARN viral prin intermediul ARN-polimerazei II celulareSinteza proteinelor virale sub controlul factorilor celulari i proteinelor reglatoarePoliproteina gag/pol 160 kd (p17 MA, p24 CA, p7 NC, p9 (proteaza), p66 (RT), p31 (integraza)Poliproteina env 160 kd (gp41 i gp120)Asamblarea NCEliberarea prin nmugurire la nivelul MCP modificat prin inserarea gp virale gp120 i gp41.1-10 mlrd de virioni/zi/o persoan infectatVariabilitatea HIV este determinat de erorile comise de RT (o eroare la fiecare 10 mii baze). Mutaiile survin n special la nivelul genei env (bucla V3 din gp120, care intervine n fixarea HIV de coreceptori, reprezint epitopul major de neutralizare). Nu exist 2 tulpini virale identice. La bolnav este prezent o populaie viral polimorf, cu genotipuri diferiteConsecine: dificultatea de a obine vaccin eficientselecia mutantelor rezistente la antiretroviraleMecanismele de distrugere a limfocitelor T CD4:Liza direct a celulelor infectate (ECP)Limfocitele T CD8 elimin limfocitele T CD4 infectateApoptoz n urma stimulrii antigenice a celulelor care au fost n contact cu Ag HIVLimfocitele infectate, acoperite cu gp120 pot provoca fixarea, fuziunea i moartea limfocitelor neinfectateHiperstimulare celular cu dezvoltarea anergiei celulare

PATOGENEZA I CLINICA INFECIEI CU HIVTransmiterea:Cale sexual (hetero-, homo). Cale sangvin (toxicomani, hemofili, transfuzii de snge sau transplante de organe, manopere medicale penetrante -injecii, acupunctur, tatuaj, piercing)Cale vertical (in utero n ultimele sptmni de sarcin, n timpul naterii sau n timpul alptrii)EVOLUIA MALADIEIPrimo-infecia (perioada de timp de la infectare pn la apariia Ac). Durata 4-6-8 sptmni. Are loc multiplicarea intens i diseminarea virusului, scderea numrului de limfocite T CD4 i creterea numrului limfocitelor TCD8. Diminuarea ulterioar a arjei virale i creterea nr LT CD4 este determinat de rspunsul imun specific celular (limf TCD8) i umoral (Ac anti-gp120, anti-gp41, anti-p24, apar la finele primoinfectiei). Persoana infectat devine seropozitiv. Factorii care influeneaz evoluia primo-infeciei: tipul virusului, raspunsul imun al gazdei i factori genetici (homozigoii cu mutaie la nivelul genei receptorului CCR5 prezint rezisten la infecia cu HIV 1)Evoluia poate fi asimptomatic sau simptomatic (50%): adenopatie cervical, febr, faringit, ulcere ale mucoasei bucale, oboseal, mialgie, artralgie, erupii cutanate. Durata simptomelor 7 10 zileFaza asimptomatic, de laten clinic (durata variabil: 3 - 18 ani). Virusul se replic n organele limfoide, numrul LT CD4 diminueaz lent sau rmne stabil. Apar variante noi de virus care se multiplic, Sistemul Imun le recunoate i reacioneaz specific, ciclul se repet de multiple ori. Aceasta duce la diminuarea progresiv a LT CD4 i LT CD8 i epuizarea Sistemului Imun, urmat de multiplicarea necontrolat a HIV i dispariia complet a LT CD4.Faza clinic (SIDA) Numrul LT CD4 - 500-200 celule/ml.Se manifest clinic prin febr cronic, pierdere n greutate, diaree, afeciuni ale tuturor organelor i sistemelor, tumori (sarcomul Kaposi, limfoame), infecii oportuniste cu:Parazii: Toxoplasma, Histoplasma, LeishmaniaBacterii: Mycobacterium, Salmonella, enterobacterii condiionat patogene, etcFungi: Pneumocystis carinii, Cryptococcus neoformans, Cryptosporidium, Candida, etcVirusuri: HSV, HZV, CMV

Rspunsul imun: Celular LT CD8 recunosc i elimin celulele infectate (n special LT CD4) prin citotoxicitate direct (restricie CMH I) sau prin intermediul citokinelor, chemokinelor. Imunitatea celulara este crucial pentru controlul replicrii HIV i are un impact substanial n evoluia infecieiUmoral Ac apar precoce n infecie primar, dar depistarea lor poate fi efectuat dup 6-12 sptmni de la infectare. Rolul neutralizarea virionilor, Ac anti-gp120 mpiedic fixarea HIV pe celulele-int. Eficien maxim n fazele precoce ale infeciei5-10% din infectai sunt asimptomatici de lung durat:arj viral redusNumrul LT CD4 stabil (peste 500 celule/ml)Rspuns imun celular i umoral constantAbsena semnelor clinice

9. Diagnosticul de laborator a HIV infectiei. Produse patologice. Indiarea Ag virale. izolarea i indentificarea virusului. Serodiagnosticul, examenul hematologic n HIV infectie.

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIEI HIV/SIDATeste indirecte de depistareTeste ELISA de depistare a Ac (dup minimum 22 zile de la contagiu)Teste combinate Ag - Ac (detectarea Ag p24 i Ac anti-p24 prin tehnici ELISA)Teste rapide (RA cu particule de gelatin sensibilizate cu Ag)Teste de confirmare (n caz de reacie pozitiv) Tehnica de referin Western-blot (separarea el-for. a proteinelor virale, transferarea lor pe o band de nitroceluloz, tratarea cu serul cercetat, apoi efectuarea RIE). Pot fi detectai Ac contra tuturor Ag HIV.

Criterii de apreciere: un ser este considerat pozitiv dac sunt prezeni Ac contra cel puin 2 Ag de suprafa (gp160, gp120, gp41), asociai cu Ac contra cel puin o protein intern (p24, p17 sau a enzimelor) Teste directe1. Detectarea Ag p24 (marker direct al infeciei HIV) prin tehnici ELISA. Poate fi detectat n primo-infecie pn la seroconversie. Ag p24 reapare n momentul evoluiei spre SIDA.

2. Detectarea ARN-lui plasmatic sau ADNv prin teste de amplificare genic.Prezena ARNv n ser denot replicarea constant a virusului. Determinarea arjei virale este utilizat pentru monitorizarea unui pacient infectat.3. Izolarea HIV n culturSe realizeaz prin inocularea cu plasm sau celule mononucleate de la bolnav a unei culturi de celule mononucleate de la donatori sntoi.Replicarea este detectat prin evidenierea Ag p24, RT sau a ARNv.

Diagnosticul primo-infeciei (markerii virali)ARNv plasmatic (apare dup 8-17 zile de la contagiu)Ag p24 n ser (pn la apariia Ac anti-p24)Ac anti-HIV (dup minimum 3 sptmni de la contagiu)Monitorizarea seropozitivilorParametrii imuno-hematologici - formula sangvin, determinarea subpopulaiilor de LT (valori absolute, raport T CD4/T CD8), dozarea Ig, microglobulinei beta2Markerii virali - arja viral plasmatic (ARNv), Ag p24, Ac anti-p24

10. Imunitatea. Profilaxia i tratamentul specific al HIV infectiei.

PROFILAXIA INFECIEI HIV/SIDAMsuri nespecifice: prevenirea transmiterii HIVProfilaxia specific dificil!!!Existena a 2 virusuri HIV-1 i HIV-2 cu numeroase subtipuri genetice i antigenice, variabilitatea geneticaInfecia natural nu este stopat de rspunsul imun, iar memoria imunologic este mediocrNu este definitif clar rolul LT CD8+ (Tc)Lipsa unui model animal satisfctor STRATEGII DE VACCINAREElaborarea vaccinurilor vii atenuateElaborarea vaccinurilor inactivateVaccinuri recombinante subunitare (numai imunitate umoral)Epitopi peptidici anti-gp 120 (numai imunitate umoral)Utilizarea vectorilor (inseria genelor env) Vaccinuri ADNVIRUSURILE HTLV (Human T-cell Lymphotropic Virus)Genul DeltaretrovirusSpecii HTLV-1 i HTLV-2Structura comun retrovirusurilorTransmiterea contact sexual, vertical, prin snge (cu limfocite).Puterea oncogen determinat de gena transactivatoare tax.Manifestri clinice 1-5% din persoanele infectate dezvolt peste 20-30 ani leucemie acut cu celule T.Diagnostic depistarea virusului prin ELISA i confirmarea W-B, PCRTratament antiretrovirale, IFN

TratamentEste indicat asocierea a 3 chimioterapice: 2 INRT + 1 IP; 2 INRT + 1 INNRT, 3 INRT, 1 INRT+1 INNRT+IPzidovudina (300 mg) + lamivudina (150 mg)+abacavir (300mg)zidovudina (300 mg) + lamivudina (150 mg) + nevirapina (200 mg)stavudina (40 mg) + lamivudina (150 mg) + nevirapina (200 mg)stavudina (30 mg) + lamivudina (150 mg) + nevirapina (200 mg) pentru pacientii cu greutatea < 60kg

Dificulti:Durata i costul tratamentuluiToxicitatea preparatelorDezvoltarea rezisteneiMonitorizarea terapiei antiretrovirale:Msurarea arjei virale (copii ARNv n plasm fiecare 6 luni)Determinarea numeric a LT CD4+ fiecare 3 luni