lucrare lab.3-metode de recoltare a embrionilor

8/13/2019 Lucrare Lab.3-Metode de Recoltare a Embrionilor

1/10

TEHNICI DE RECOLTARE A EMBRIONILOR

Succesul embrio-transferului depinde de abilitatea de a realiza o serie de

etape i n acelai timp de a minimaliza simultan o serie de factori cunoscui a aveaefecte negative asupra reuitei transferului.

Pentru acest deziderat momentul recoltrii embrionilor trebuie ales n

conformitate cu timpul scurs de la nsmnare, innd cont de migraia acestuia din

oviduct spre coarnele uterine.

Din oviduct, la toate speciile domestice ovulele i embrionii se pot preleva la

cteva ore dup fecundaie, ei aungnd n coarnele uterine la ! zile la vac

"Newcomb R,. 1983#, $-% zile la scroaf.

&n funcie de stadiul embrionar dorit, prelevarea embrionilor din tractul genital

al femelelor donatoare se efectueaz la intervale variabile, prin te'nici c'irurgicale la

oaie i scroaf sau prin te'nici c'irurgicale sau nec'irurgicale la vac.

Dezvoltat iniial ca o te'nic c'irurgical, embrio-transferul a devenit datorit

perfecionrii metodelor de recoltare i transfer o metod nec'irurgical care

vizeaz( mbuntirea performanelor reproductive a femelelor prin mbuntirea

calitilor productive i abilitilor genetice.

1.1. Recoltarea embrionilor prin tehnici chirurgicale

Practicarea te'nicilor c'irurgicale de recoltare a embrionilor reprezint

singura alternativ atunci cnd dorim ovule nefecundate, ovule n diferite stadii de

fecundabilitate sau embrioni n primele stadii de dezvoltare "$-%-) blastomere#.

Prelevarea prin te'nici c'irurgicale este de preferat dac femelele sunt

destinate sacrificrii datorit ratei mari de recuperare comparativ cu te'nicile

nec'irurgicale.

1


2/10

1.1.1. Recoltarea de la animalele vii

1.1.1.1. Prelevarea embrionilor prin laparotomie pe linia alb

Pentru realizarea prelevrii, femela donatoare, supus anterior unei diete de

$% ore, este contenionat pe masa de operaie n decubit dorsal fcndu-i-se

anestezie general i regional.

Dup pregtirea cmpului operator i efectuarea laparotomiei, prin traciuni

uoare efectuate asupra ligamentului larg se aduce n plag ovarul i cornul uterin

congener, se nregistreaz rspunsul la tratamentul poliovulator prin numrarea

corpilor galbeni de pe ovar, dup care se trece la perfuzia oviductelor i coarnelor

uterine "fig. *#.

Fig. 1 - Recoltarea embrionilor de la nivelul oviductului de oaie,

prin metode chirurgicale

+e'nica mai des utilizat const n perfuzia postero-anterioar a oviductului

mpreun cu umtatea anterioar a cornului uterin.ceasta este inut etan prin presiune digital sau prin ligaturare, n lumenul

uterin introducndu-se mediu de prelevare cu autorul unui ac ataat la o sering de

! ml.

ornul uterin este presat cu autorul degetelor sau cu o pens intestinal n

vederea refulrii mediului sper cervi/.

Se introduc cte $-0 ml mediu n $-% reprize, iar prin presiuni uoare,

embrionii din cornul uterin i cei din oviduct sunt antrenai mpreun cu mediul deperfuzie i recoltai n vase cu perei dubli. 1peraia se repet la cornul uterin opus.

2


3/10

2ecoltare embrionilor poate fi efectuat i prin perfuzia antero-posterioar,

cnd mediul de perfuzie este introdus n oviduct, cu o canul sau direct n lumenul

uterin, cu autorul unui ac bont ce puncioneaz peretele uterin la nivelul onciunii

utero-tubare. 3aza cornului uterin este obturat prin presiunea e/ercitat cu degetul

mare i arttor sau cu autorul unei pense intestinale, dup care se introduce

mediul de perfuzie pn ce cornul uterin capt o anumit turgescen.

Puncia cornului uterin cu un ac bont, cu lumen mare fi/at la un tub din plastic

permite recoltarea lic'idului n recipientele pregtite.

Se mai poate recurge la introducerea n lumenul uterin a unui cateter 2us'

prevzut cu bastona n vederea evitrii refulrii mediului. Dup recoltare embrionilor

i scoaterea cateterului, zona puncionat se sutureaz cu catgut.

Metoda chirurgical de recoltare prezint avantajulobinerii unei rate de

recuperare superioar te'nicilor nec'irurgicale, procentul aungnd la )-*4.

Metoda prezint i dezavantajedatorit(

manoperelor laborioase5

posibilitii apariiei de aderene datorit interveniei n zona periovarian5

costurilor ridicate5

necesitatea unor dotri specifice i a unei ec'ipe de intervenie bine pregtite5 este mai dificil de aplicat la vacile n lactaie datorit dezvoltrii glandei

mamare.

1.1.1.2. Recoltarea embrionilor prin laparotomie n !lanc

6etoda presupune aceeai timpi operatori i de pregtire respectai n cazul

laparatomiei pe linia alb diferena constnd n contenia femelei i abordarea

aparatului genital care se realizeaz la nivelul flancului drept sau stng.7ncizia se face vertical, n zona flancului, ct mai posterior posibil dup care

muc'ii abdominali sunt dilacerai, peritoneul puncionat i incizat vertical.

8/teriorizarea aparatului genital permite e/aminarea ovarului, contorizarea corpilor

galbeni i desfurarea manoperei propriu-zise de splare "fig. $#.

3


4/10

Fig. 2 - Recoltarea embrionilor de la animalul viu prin metoda chirurgical

Metoa are a!anta"ul a #i(

mai expeditiv dect metoda laparatomiei pe linia alb;

este mai ieftin;

complicaiile postoperatorii nensemnate;

ofer posibilitatea re!tili"rii flanc!l!i op!s la sc!rt interval.

&n general te'nicile c'irurgicale de prelevare a embrionilor presupun splarea

oviductului pe la nivelul fimbriei, splarea oviductului pe la nivelul onciunii utero-

tubare sau splarea uterului la baza cornului uterin.

1.1.2. Prelevarea embrionilor pe cale chirurgical de la animale

"acri!icate

Procedeul a fost utilizat n special pentru studii de fecunditate 9in vitro: dar i

pentru transferul de embrioni n stadii diferite de dezvoltare.

;a timpul stabilit, animalul donator este sacrificat i n timpul cel mai scurt se

procedeaz la recoltarea embrionilor.

olectarea eventual a ovulelor nefecundate poate servi la elucidarea

proceselor de maturare, fecundare i cultivare 9in vitro: a acestora n scop tiinific

sau de creare a unor bnci de ovule sau de embrioni.

Prin intermediul acestei te'nici este deci posibil s recoltm(

ov!le, direct din folic!li prin recoltarea lic#id!l!i folic!lar din folic!li avnd

diametr!l de 3$% mm &i identificarea la stereol!p. 'etoda este !tili"at

pentr! st!di!l morfolo(ic al ov!lelor, st!di!l condiiilor de mat!rare &i

fec!ndare )in vitro*;

4


5/10


6/10

acces. Printre cele mai cunoscute citm te'nicile( Sugie, assou, ?e@comb, 8lsden,

2asbec' i ?eustadt is'.

+oate aceste te'nici sunt utilizate pentru recoltarea embrionilor din coarnele

uterine, adic n zilele = < A dup fecundaie.

Pregtirea femelelor donatoare n vederea prelevrii embrionilor prin

cateterism cervical, const n instituirea dietei timp de $% de ore, contenia ntr-un

stand special prevzut cu posibilitatea ridicrii trenului anterior cu circa $ < 0 cm.

&n condiii de ferm, recoltarea embrionilor se efectueaz pe locul obinuit de

contenie a femelelor.

Dup realizarea conteniei, se trece la igienizarea regiunii ano-vulvare i

dezinfecia cu produse neiritante. ;a fel se procedeaz cu instrumentarul necesar,

care n prealabil este degresat, splat i sterilizat, iar sticlria i instrumentarul din

plastic sunt siliconate impunndu-se sterilizarea cu etilen < o/id.

1peraia de prelevare a embrionilor se efectueaz pe femela supus

anesteziei epidurale, cu % < = ml procain $ 4. ;a vacile cu uter aton, anestezia

regional se completeaz cu ,! < * ml 2ompun, n vederea stimulrii tonicitii

uterine. ateterismul cervical poate fi realizat cu autorul mai multor tipuri de sonde

care au dat i denumirea metodei de recoltare.

1.2.1. $ehnici de prelevare a embrionilor

1.2.1.1. $ehnicile de prelevare a embrionilor utilizatoare de catetere

tipFolle% & 'l"den

ceste te'nici utilizeaz catetere de tip BolleC cu $ i 0 ci de acces care sunt

introduse sub control transrectal n cornul uterin "fig. %# (atetere de tip Folle%.

6


7/10

7ntroducerea la nivel cervical este facilitat de rigidizarea sondei prin

intermediul unui manon metalic.ateterele sunt poziionate la circa ! < ) cm de

bifurcaia coarnelor uterine, fi/area realizndu-se prin umflarea balonaului cu circa

) < *! ml de aer. &n acest mod se evit i refularea mediului de prelevare introdus n

uter n vederea splrii "fig. !#.

Fig. ) - Modalit*i de !i+are a balonaului "ondelor de recoltare

1.2.1.2. $ehnica Robert"on "Robertson 2.,1999# poziioneaz balonaul

cateterului BolleC imediat dup pasaul cervi/ului, recoltarea fcndu-se pe ambele

coarne n acelai timp. &n cazul sondei BolleC cu $ ci de acces irigarea uterin se

face individual pentru fiecare corn prin introducerea i evacuarea liber a mediului cu

autorul unei seringi.

&n cazul sondei cu 0 ci de acces irigarea uterin se efectueaz n flu/

continuu prin conectarea cii de admisie la un vas de sticl ce conine mediu i care

este suspendat la * < *,! m deasupra solului. antitatea de mediu utilizat pentru

fiecare corn uterin este de 0 < ! ml, o bun recoltare nsemnnd recuperarea

integral a mediului introdus.

1.2.1.#. $ehnica ecomb de recoltare a embrionilor descris de

Newcomb &i col. n 1944utilizeaz cateterul cu trei ci tip Branlin.

Sonda se introduce intrauterin cu autori unei canule tubulare metalice de !$

cm lungime i E cm diametru. Plasarea se face la 0 < ! cm dup bifurcaia coarnelor

uterine. ceast canul este dotat cu un mandren care i obtureaz lumenul n

timpul tunelizrii cervi/ului. Dup introducerea canulei sub control transrectal, se

e/trage mandrenul i se introduce cateterul n lumenul cornului uterin la ! < E cm ce

vrful acestuia.

7


8/10

;ungimea cateterului este de **! cm, este confecionat din plastic i are 0

orificii de acces ( una este destinat pentru gonflarea balonaului plasat la *! cm de

vrful cateterului, o cale este pentru introducerea mediului de splare i este plasat

la $! cm de vrful cateterului iar a treia cale este pentru evacuarea mediului i

ncepe cu $ orificii plasate imediat anterior balonaului. Dup gonflarea balonaului

se realizeaz introducerea mediului cu autorul unei seringi de ! < = ml, folosindu-

se n general circa $! ml pentru fiecare corn uterin. Prin presarea cu degetul mare

i arttor a onciunii utero < tubare i prin masaul uterin n direcia antero mflarea balonaului i splarea propriu

lucrare lab.3-metode de recoltare a embrionilor

Documents