documentl3

• PREPARATE MICROSCOPICE

• CATEDRA DE MICROBIOLOGIE

• LP 3

• COLORATII DIFERENTIALECOLORATIA ZIEHL - NEELSEN

INDICATII:

- colorarea la cald a micobacteriilor din prelevate patologice sau culturi


• Reactivi:

1. Solutie de fucsina fenicata Ziehl

2. Solutie decoloranta: amestec acid – alcool (H2SO4 + alcool etilic 95°)

3. Solutie recoloranta: albastru de metilen


Procedura:

1. Se aseaza lama cu frotiul fixat pe un suport metalic

2. Se acopera frotiul din abundenta cu sol. de fucsina fenicata

3. Se lasa 15’, timp in care se fac 3 treceri cu flacara becului de gaz Bünsen pe sub lama de sticla, astfel incat sa incalzim colorantul pana la emitere de vapori.


• Atentie! Colorantul nu trebuie sa ajunga la fierbere!

• Daca colorantul se evapora sau se usuca pe lama, trebuie sa adaugam colorant proaspat!

4. Se spala frotiul din abundenta cu apa de robinet


5. Se decoloreaza frotiul cu amestec acid – alcool – 2’

6. Se spala cu apa de robinet

7. Recolorare cu sol. albastru de metilen – 1’


• Citire si interpretare:

- bacilii acido – alcoolo - rezistenti (BAAR) –

apar rosii stralucitori

- celulele inflamatorii, celulele de

descuamare sau celulele tisulare, bacteriile

neacido – alcoolo – rezistente – se vor

colora in nuante de albastru

• COLORATII DIFERENTIALECOLORATIA KINYOUN

• INDICATII:

Coloratie la rece a micobacteriilor din prelevate patologice sau culturi


• Reactivi:

A. Solutie de fucsina fenicata Kinyoun

B. Solutie decoloranta de acid – alcool

(HCl + alcool etilic 95°)

C. Solutie recoloranta: albastru de metilen


Procedura:

1. Colorare la rece cu sol. de fucsina fenicata Kinyoun – 5’

2. Spalare cu apa de robinet

3. Decolorare cu amestec acid – alcool – 30”


5. Recolorare cu albastru de metilen – 1’

6. Spalare cu apa de robinet.



- bacilii acido – alcoolo - rezistenti (BAAR) –

apar rosii stralucitori

- celulele inflamatorii, celulele de

descuamare sau celulele tisulare, bacteriile

neacido – alcoolo – rezistente – se vor

colora in nuante de albastru

• COLORATII SIMPLE

• Coloratia cu albastru de metilen: 2’

• Coloratia cu albastru de metilen, varianta Wayson: 10”

• COLORATII NEGATIVE

1. Coloratia negativa cu tus de India

Principiu:

particulele colorate nu pot penetra capsula bacteriilor sau levurilor, care apare necolorata pe fondul colorat al preparatului

Indicatii:

depistarea Cryptococcus neoformans, depistarea capsulei bacteriene in primoculturi, urmarirea reactiei de umflare a capsulei etc.



Bacteriile si levurile capsulate apar inconjurate cu un halou clar pe fondul uniform intunecat al preparatului.


2. Coloratia negativa cu nigrozina

• COLORATII FLUORESCENTE

Coloratia cu auramina – rhodamina

Principiu:

• Structuri speciale, lipoidice, asociate peretelui unor bacterii confera rezistenta la decolorarea protoplastului prin solutii de acizi sau/si alcool. Bacteriile care nu poseda asemenea structuri sunt decolorate si trebuie recolorate pentru a putea fi observate.

• Endosporii bacterieni, ascosporii, chistele unor protozoare (ex. Cryptosporidium) sunt de asemenea acidorezistenti gratie invelisurilor lor.


• Invelisurile unor microorganisme (micobacterii,endospori, chiste de Cryptosporidium etc.) sunt impermeabile si pentru colorant, care trebuie sa actioneze in solutii concentrate fie la cald, fie in prezenta unor detergenti.


Indicatii:

Triajul frotiurilor din prelevate patologice

pentru depistarea rapida a bacililor

tuberculozei.


Reactivi:

1. Solutie coloranta cu Auramina O – Rhodamina B

2. Solutie decoloranta (HCl conc. + alcool etilic 95°)

3. “Contracolorant”: KMnO4


Procedura:

1. Colorare cu sol. Auramina O – Rhodamina B– 15’


3. Decolorare cu acid – alcool – 2’


5. “Contracolorare” cu KMnO4 – 2’



• Examinare la microscopul cu fluorescenta cu obiectivele de 20x si 40x, asociate cu oculare de 10x.


Citire si interpretare:

Bacilii acido – alcoolo – rezistenti se coloreaza fluorescent stralucitor in galben – portocaliu cu Auramina O – Rhodamina B.

“Contracolorarea“ cu KMnO4 face fondul frotiului negru eventual numai cu resturi celulare cu fluorescenta galbena slaba.

• ALTE TIPURI DE COLORATII

1. Coloratia May – Grünwald – Giemsa (aprecierea celularitatii)

2. Coloratia pentru Fe. (hemosiderina, sangerari tisulare)

3. Coloratia PAS (depistarea fungilor – se coloreaza in rosu)

4. Coloratia cu albastru de toluidina (pentru Pneumocystis carinii, P.jirovecii)

• ALTE TIPURI DE COLORATII

5. Coloratia cu SUDAN III – pentru lipide

6. Coloratii imunocitochimice, reactii peroxidaza – antiperoxidaza

etc.

documentl3

Documents