Curs de BiofizicProf.dr. Cipriana tefnescuDisciplina de Biofizic i Fizic medical5V rugm: gndii!CromatografiaMetod de separare i identificare a componenilor unui amestec.! faze: faza staionar i faza mo"il. Mecanisme diferite de retenie - 4 tipuri de cromatografie:1. De adsorbie 3. De permeaie2. De schimb ionic 4. De afinitateCromatografia: sc#em de principiu$e "azeaz pe retenia diferit a componenilor amestecului %n faza staionar: coeficient de distri"uie sau de parta&.Definiie:Concentraia component ' %n faza staionarConcentraia component ' %n faza mo"ilCoeficient de distri"uie sau de parta&:21cccP(')$arcini electrice* (B)Filtrare prin pori*(C) +egturi co,alente sau neco,alenteA.Cromatografia de adsorbieMi-#ael.s,et* (/01!2/3/3) "otanist rus 2 /34/* separarea clorofilei prin cromatografie de adsor"ie pe coloan5etenia la suprafaa fazei staionareB. Cromatografia de afinitate6n cromatografia de afinitate un !igand care se cupleaz specific la o protein este fi7at co,alent de o matrice poroas (faza staionar).Cnd un amestec de proteine tra,erseaz faza staionar:8 Proteina de separat se cupleaz cu ligandul* iar celelalte proteine din amestec sunt eliminate din coloan fr a fi reinute deloc. 8 Modificnd condiiile de eluie (p9 acid) proteina reinut se detaeaz de faza staionar i este eliminat (recuperat).+igand fi7at la matriceProteina cu afinitatepentru ligand.'lteproteine$epararea unui anticorp dintr8un amestecprincromatografie de afinitateC. Cromatografie prin schimb ionic"#$ %eneratoru! de &&m-'c (). Ap!icatii radioi*otopi+:oni legai electrostatic la un suport insolu"il i c#imic inert sunt %nlocuii re,ersi"il de ali ioni din amestecul de separat:$uport;'8 ; :on8 $uport;:on8 ; '8Cromatografie prin schimb ionic6n cromatografia de permeaie sau de fi!trare ,n ge!* (cromatografie de e#c!udere sau tamisa- mo!ecu!ar+* proteinele sunt separate dup mrimea i forma lor..rec)ent fa*a staionar/ este: de#tran (0ephade#+ agaro*/ sau po!iacri!amid/D.Cromatografie de permeaie - prin fi!trare ,n ge!Cromatografie de permeaie Cromatografia de permeaie se poate fo!osi pentru estimarea masei mo!ecu!are"#emp!u: 1urificarea nuc!ea*ei stafi!ococu!ui prin cromatografie de afinitate - compusu! repre*entat ,n (b+ a fost !egat co)a!ent !a fa*a staionar/ (agaro*/+