UNIVERSITATEA DE MEDICIN I FARMACIE DIN CRAIOVA

TEZ DE DOCTORAT

STUDIU EXPERIMENTAL PRIVIND INFLUENA

ISCHEMIEI CEREBRALE CRONICE ASUPRA PARENCHIMULUI CEREBRAL

REZUMAT Conductor de doctorat: Prof. univ. dr. Laureniu Mogoant

Doctorand: Pintea Irina Lavinia

CRAIOVA 2012

CUPRINS Introducere

PARTEA I - STADIUL CUNOATERII I. Anatomia, histologia i histofiziologia sistemului nervos central

II. Caracteristici anatomice, histologice i funcionale ale sistemului nervos

central III. Ischemia cerebral

PARTEA II CONTRIBUII PERSONALE IV. Scopul i obiectivele lucrrii V. Evaluarea performanelor motorii i cognitive la obolanii cu ischemie

cerebral produs prin ligatura unilateral i bilateral a arterei carotide interne VI. Studiul histologic al parenchimului cerebral n ischemia cerebral cronic VII. Studiul imunohistochimic al parenchimului cerebral n ischemia cerebral cronic

VIII. Concluzii BIBLIOGRAFIE

Cuvinte cheie: accident vascular cerebral, ischemie cerebral cronic, moarte neuronal, apoptoz

INTRODUCERE

Accidentul vascular cerebral (AVC) reprezint o afeciune neurologic acut

de o mare gravitate, ce poate rezulta fie n urma blocrii fluxului sanguin la nivelul

unei artere care irig un anumit teritoriu cerebral (evenimente vasculare de natur

ischemic), fie prin producerea unei hemoragii cerebrale.

La nivel mondial AVC ucide anual cinci milioane de viei i provoac dizabiliti

severe altor cinci milioane de oameni (Lopez AD et al, 2006). Letalitatea prin

accidente vasculare cerebrale este de 11% pentru femei si 8,4% pentru brbai.

Se estimeaz c riscul de accident vascular cerebral pe durata vieii se

situeaz ntre 8% i 10% (Seshadri S et al, 2006). Multiple studii prospective au

demonstrat faptul c att ca inciden ct i ca prevalen, aceast sindrom clinic se

afl ntr-o continu cretere, experii Organizaiei Mondiale a Sntaii apreciind c

pn n anul 2030, accidentele vasculare cerebrale vor deveni principala cauz de

mortalitate. De notat c accidentele vasculare cerebrale reprezint i n rile

dezvoltate o major problem medical i social, ntruct constituie a treia cauz de

deces dup neoplasm i bolile cardiace i prima cauz de invaliditate.

Potrivit Asociaiei Americane de Stroke, aproximativ 87% dintre AVC sunt de

tip ischemic, restul de 13% fiind de tip hemoragic (Kelly BM, Pangilinan PH Jr and

Rodriguez GM, 2007; American Heart Association/American Stroke Association,

2008). Atacurile hemoragice se asociaz cu o rat mai ridicat a mortalitii, acest

lucru sugernd c o proporie mai mare de atacuri recurente au o etiologie ischemic

(Jamieson DG et al , 2005). Ischemia cerebral este determinat de existena unui

flux sanguin cerebral la un nivel insuficient pentru a satisface nevoile metabolice ale

creierului (Sullivan J, 2008). Reducerea fluxului sanguin cerebral pe o durat de

cteva secunde pn la cteva minute duce la apariia unei ischemii tranzitorii.

Aceasta, n funcie de intensitatea sa, poate cauza leziuni neuronale reversibile sau

ireversibile. n cazul n care oprirea dureaz mai mult de cteva minute, se instaleaz

infarctul esutului cerebral, caracterizat prin apariia necrozelor celulare masive.O

reducere localizat a fluxului sanguin cerebral duce la apariia deficitelor neurologice

focalizate. Efectele hipoxiei asupra neuronilor depind de modalitatea de instalare a

acesteia la nivel cerebral, de durata i intensitatea reducerii aportului de oxigen.

Intervalul de timpul n care se pot evidenia perturbri comportamentale sau cognitive

este, de obicei, mult mai scurt (de ordinul secundelor) dect cel necesar pentru

apariia modificrilor histopatologice care necesit, de obicei, cteva minute

(Bachevalier J and Meunier M, 1989; Lipton P, 1999).

n cazul n care hipoxia atinge pragul critic, apar perturbari ale excitabilitii

neuronale i ale transmiterii sinaptice, fiind afectate multiple circuite neuronale.

ntreruperea circuitelor neuronale este, de regul, atribuit schimbrilor intrinseci i

proprietilor membranei postsinaptice (Pea F and Parkis MA, et al, 2004; Ramirez

JM et al, 2004), modificrii transmiterii sinaptice (Fowler JC and Gervitz LM, 2003) i

schimbrilor mecanismelor de eliberare a veziculelor cu mediatori sinaptici (Kulik A et

al , 2000). Neuronii i circuitele neuronale exprim rspunsuri foarte diferite la

hipoxie. Dei n cazul hipoxiei, cei mai muli neuroni opresc generarea potenialelor

de aciune, unele populaii neuronale sunt mai rezistente la aceasta. Exist unele

mecanisme care permit creierului s nu cedeze n condiii de oxigenare redus,

atunci cnd acesta se afl n repaus, dar cantitatea de oxigen crete atunci cnd

este activat. Astfel, creierul poate rspunde n mod natural pentru a modera hipoxia

prin intermediul mecanismelor cronice i acute de adaptare (La Manna JC, 2007).

Reactivitatea esutului cerebral la hipoxie este direct proporional cu

sensibilitatea hipoxic, ce se modific odat cu naintarea n vrst. n general,

mamifere nou-nscute sunt mai rezistente la hipoxie dect mamifere adulte (Jiang C,

Agulian S, Haddad GG, 1991; Singer D, 1999). Alte studii au demonstrat c diferite

structuri ale sistemului nervos central, cum ar fi trunchiul cerebral, hipocampul

(Friedman JE, Haddad GG, 1993) i cortexul cerebral (Bickler PE et al, 1993),

prezint componente neuronale mai puin sensibile la hipoxie (Ben-Ari Y, 1992).

Pornind de la aceste date din literatura medical de specialitate, n prezenta

tez doctorat ne-am propus s investigam prin metode de histologie i

imunohistochimie, influena ischemiei cerebrale cronice de grade diferite asupra

parenchimului cerebral la animalul de experien. Pentru aceasta am alctuit mai

multe loturi de obolani aduli, rasa Wistar comun, crora le-am ligaturat fie o artera

carotid intern, fie ambele artere carotide, provocndu-le grade diferite de hipoxie

cerebral. Apoi, animalele au fost sacrificate la intervale de timp variabile pentru a

urmri influena ischemiei cronice asupra parenchimului cerebral, n funcie de timpul

scurs de la realizarea ischemiei.

Sperm ca studiul nostru s aduc noi date privind mecanismele microscopice

care stau la baza apariiei i declanrii leziunilor neuronale n hipoxia cronic, date

care s fie utile medicilor neurologi, medicilor de familie i din alte specialiti, care

trebuie sa trateze diferite simptome declanate de ischemia cerebral cronic.

CAPITOLUL I ANATOMIA, HISTOLOGIA I HISTOFIZIOLOGIA

SISTEMULUI NERVOS CENTRAL

Apreciat ca fiind cel mai complex sistem din organismul uman, sistemul nervos

central (SNC) este format din: esut nervos, vase sanguine i esut conjunctiv.

Structur cu permeabilitate selectiv, bariera hemato-encefalic se interpune ntre

esutul nervos i elementele vasculare. Relaia structur-funcie este optim reflectat

la nivelul sistemului nervos central, acesta asigurnd unitatea funcional i

integrarea organismului n mediu (Mogoant L i colab, 2004).

Prin urmare, din punct de vedere neuroanatomic, sistemul nervos este format

din totalitatea structurilor care asigur recepionarea, transmiterea,

procesarea, memorarea, integrarea i compararea informaiilor provenite din

mediul nconjurtor cu experiene stocate anterior i cu rspunsurile reflexe

predeterminate pentru a selecta, elabora i iniia o reacie adecvat (Gartner

LP and Hiatt IL, 1987).

Sistemul nervos central este reprezentat de centrii la nivelul crora se

elaboreaz, integreaz i coordoneaz comenzile nervoase. mpreun cu sistemul

nervos periferic, acesta are un rol fundamental n controlul comportamentului.

Structurile anatomice ale SNC sunt reprezentate de encefal i mduva

spinrii, acestea fiind nconjurate i protejate de trei esuturi conjunctive care l

acoper, alctuind meningele, dar i de structuri osoase, cutia cranian i coloana

vertebral.

CAPITOLUL II CARACTERISTICI ANATOMICE, HISTOLOGICE I

FUNCIONALE ALE CIRCULAIEI CEREBRALE

Sistemul nervos central este unul dintre cele mai bine vascularizate sisteme,

encefalul primind aproximativ 17% din fluxul sanguin, dei reprezint doar 2% din

greutatea corpului; vascularizaia cerebral este intens, fiind comparabil cu cea a

cordului. Creierul utilizez 20% din cantitatea de oxigen furnizat de plmn,

genernd aproximativ 20% din energia acestuia (Kiernan JA, 2009). Fluxul sanguin

principal la nivelul creierului indivizilor sntoi este de 50 ml/100g de esut/minut, n

funcie de regiune. Creierul este similar cu celelalte esuturi din organism, fluxul

sanguin variind cu activitatea funcional din interiorul esutului i cu nivelul

metabolismului (Noback CR et al, 2005).

Creierul este un organ a crui funcionaltate necesit un aport constant i

permanent de glucoz i oxigen. Celulele nervoase sunt foarte sensibile la variaiile

acestor elemente, fie n deficit, fie n exces. Prin urmare, n decursul evoluiei filo-

ontogenetice, paralel cu dezvoltarea structurilor cerebrale, s-a dezvoltat i arborele

arterial, apt s asigure un aport sanguin adecvat funciilor cerebrale.

SNC reprezint unul dintre sistemele cu cel mai activ metabolism, ntreruperi

scurte ale circulaiei cerebrale putnd determina tulburri grave.

Neuronii difer de celulele celorlalte organe prin cerinele lor crescute de

oxigen. Privai de acesta, neuronii mor aproape ntotdeauna n cateva minute, acest

fapt avnd enorme implicaii medicale (Noback CR et al, 2005). n cazul n care fluxul

sanguin ctre creier este complet sistat, pierderea constienei apare n decurs de 5

pn la 10 secunde. Leziunea cerebral ireversibil nsoit de moartea esutului

cerebral urmeaz rapid suspendrii complete a fluxului sanguin cerebral. S-a estimat

c funcia neuronal nceteaz dup aproximativ 1 minut i c schimbrile ireversibile

ncep sa apar dup aproximativ 4 minute (Snell RS, 2010).

Leziunile de origine vascular sunt responsabile pentru mai multe dereglri

neurologice dect orice alt categorie de afeciuni. Stenozarea sau ruptura unei

singure artere de mici dimensiuni sau a unei arteriole poate priva rapid de oxigen o

regiune a creierului vascularizat, producndu-se astfel ischemia cerebral (Squire

LR, 2003).

Exist unele mecanisme care permit creierului s nu cedeze n condiii de

oxigenare redus, atunci cnd acesta se afl n repaus, dar cantitatea de oxigen

crete atunci cnd este activat. Astfel, creierul poate rspunde n mod natural pentru

a modera hipoxia, prin intermediul mecanismelor cronice i acute de adaptare (La

Manna JC, 2007).

La suprafaa nevraxului, arterele realizeaz numeroase anastomoze, ns

dup ce au ptruns n masa nervoas, acestea sunt de tip terminal. Anastomoze fine

exist i ntre vasele din substana nervoas, dar ele sunt insuficiente n cazul

apariiei unui accident obstructiv acut al unei artere. Densitatea capilarelor sanguine

este mai mare la nivelul substanei cenuii dect la nivelul substanei albe iar

structurile filogenetice mai recente sunt mai bogat irigate (ex: cortexul cerebral i

cerebelos) (Afifi AK and Bergman RA, 2005). Dat fiind marea sensibilitate a

esutului nervos la hipoxie, leziunile vasculare cerebrale sunt grave (AVC datorate

trombozelor, emboliilor etc.) (Grigorescu Sido F, 2007).

CAPITOLUL III ISCHEMIA CEREBRAL

Afeciunile vasculo-cerebrale se manifest n general n cea de a doua

jumtate a vieii, ns instalarea lor este insidioas i lent, ncepnd nc de la o

vrst mult mai tnr (aproximativ 30-40 de ani). Prin amploarea pe care o au,

afeciunile cerebro-vasculare reprezint una dintre cele mai importante probleme de

sntate, avnd implicaii majore, medicale i sociale (Arseni C, 1982).

Accidentul vascular cerebral (AVC) a devenit n timp o problem de sntate

public major, mondial, reprezentnd, impreun cu infarctul de miocard, prima

complicaie a ateromatozei, prima cauz de handicap la adult, a doua cauz a

demenelor, a treia cauz de mortalitate n trile avansate economic i dup unii

autori (Popa C i colab, 2011), prima cauz de mortalitate n Romania.

Din punct de vedere patogenic, accidentul vascular cerebral presupune un

grup heterogen de procese. Ocluziile vaselor sanguine (prin accident vascular

cerebral ischemic) sunt luate n considerare pentru 85% din toate accidentele

vasculare cerebrale, n timp ce sngerarea primar intracerebral (accidentul

vascular cerebral hemoragic), pentru restul. Embolii determin aproximativ 75% din

totalul ocluziilor vaselor cerebrale i sunt cea mai frecvent cauz de obstrucie a

fluxului sanguin la nivelul creierului (Woodruff TM et al, 2011).

Circa 85% din toate accidentele vasculare cerebrale iniiale (primare) sunt ischemice,

10% sunt cauzate de hemoragia intracerebrala primara i aproximativ 5% se

datoreaz hemoragiei subarahnoidiane (Rothwell et al, 2004).

CAPITOLUL IV

SCOPUL I OBIECTIVELE LUCRRII

Un numr mare de studii asupra acidentelor vasculare cerebrale ischemice a

determinat dezvoltarea unor metode pentru realizarea ischemiei cerebrale focal sau

global la animalele de laborator, metode ce au permis identificarea unor mecanisme

ce contribuie la apariia leziunilor esutului cerebral.

Reducerea aprovizionrii cu snge la nivelul unei arii din creier conduce la o

cascad complex de evenimnte ce evolueaz n timp i spaiu. nelegerea i

identificarea acestor evenimente permite evidenierea unor inte terapeutice n

vederea dezvoltrii tratamentului AVC.

n prezent, exist relativ puine opiuni terapeutice disponibile pentru a reduce

moartea esutului cerebral n urma unui accident vascular cerebral. Ca atare, exist o

nevoie stringent de a explora, la nivel molecular i celular, mecanismele care duc la

deteriorarea i distrugerea esutului SNC n urma unui eveniment ischemic la nivelul

creierului.

n acest context, scopul tezei de doctorat i cercetrii de fa este reprezentat

de evidenierea i analiza ariei i localizrii modificrilor parenchimului cerebral

consecutive ischemiei cerebrale cronice, n funcie de durata i aadar, de

severitatea acesteia.

Cunoaterea acestor date i informaii va ajuta la recunoaterea precoce a

pacienilor cu risc crescut de AVC ischemic i va contribui la dezvoltarea ulterioar a

unor metode eficiente de prevenie, n scopul scderii frecvenei producerii ischemiei

cerebrale la persoane cu vrste de peste 45 de ani.

CAPITOLUL V

EVALUAREA PERFORMANELOR MOTORII I COGNITIVE LA

OBOLANII CU ISCHEMIE CEREBRAL PRODUS PRIN LIGATURA

UNILATERAL I BILATERAL A ARTEREI CAROTIDE INTERNE

Experimentele efectuate n cadrul acestui studiu au fost efectuate n perioada

octombrie 2009-septembrie 2011, n Biobaza Universitii de Medicin i Farmacie

din Craiova, n cadrul creia se afl un laborator special de teste comportamentale i

un laborator de intervenii chirurgicale pentru animale mici.

Studiul nostru a fost efectuat folosind un lot de 75 de obolani, toi de sex

masculin, din rasa Wistar, aduli, cu vrsta ntre 4 i 6 luni, avnd o greutate cuprins

ntre 300-450g.

obolanii au fost mprii n trei grupuri mari de studiu, fiecare grup avnd 25

de obolani, astfel:

primul grup cu ocluzie permanent a aterei carotide interne stngi;

al doilea grup cu ocluzie permanent a ambelor artere carotide interne;

al treilea grup de control (sham), fr ocluzie.

Fiecare grup mare de studiu a fost mprit n 5 subgrupuri, n funcie de

perioada de supravieuire post stroke, fiecare subgrup avnd 5 obolani. (distribuia

pe subgrupuri i perioada de supravieuire se regsesc n tabelul nr. V.1.)

Metodele folosite au fost urmtoarele:

Modelul experimental de ocluzie unilateral i bilateral a arterei

carotide interne

Evaluarea funciei vestibulo-motorii cu ajutorul testului rotarod

Evaluarea funciei de memorie spaial, cu ajutorul testului labirintului n

T

Monitorizarea fluxului sanguin cerebral cu ajutorul unui Doppler

vascular

n studiul nostru, folosind modele de ischemie cronic unilateral sau

bilateral a arterei carotide interne, am putut evidenia unele diferene n dezvoltarea

unui deficit motor i cognitiv i recuperarea funciilor normale. obolanii din grupul

martor, fr nici un fel de ocluzie a ACI, dar cu intervenie chirurgical, prezint i ei

o diminuare a acestor funcii; acest lucru se poate explica prin tulburrile produse de

stresul postoperator.

n ceea ce privete cele dou grupuri de obolani cu ocluzie uni sau bilateral

a ACI, deficitele mai accentuate pot fi puse pe seama modificrilor secundare

reducerii fluxului sanguin cerebral total, pn la o valoare de 75 % n cazul ocluziei

unilaterale, respectiv 55% n cazul ocluziei bilaterale. Evident c reducerea mai

consistent n al doilea caz a determinat un declin mai accentuat al funciilor motorii

i cognitive, dar i o recuperare mai lent al acestora.

CAPITOLUL VI

STUDIUL HISTOLOGIC AL PARENCHIMULUI CEREBRAL N ISCHEMIA CEREBRAL CRONIC

n prezentul studiu, ne-am propus s evalum modificrile parenchimiului

cerebral n ischemia cerebral cronic prin reducerea fluxului sanguin cerebral n

mod mecanic, prin ligatura unilateral i bilateral a arterei carotide interne (ACI).

Pentru studiul histologic am recoltat de la fiecare lot de animale creierul n

totalitate, la: 2, 4, 6, 8 i 10 sptmni de la producerea ischemiei n urma ligaturii

ACI. Materialul biologic recoltat a fost imediat pus n soluie fixatoare de formol

neutru 10%, fiind apoi trimis la Centrul pentru studii de morfologie microscopic i

imunologie al UMF Craiova, unde a fost prelucrat n vederea examinrii la

microscop.

Metodele histologice utilizate

Tehnica utilizat de noi a presupus urmtorii timpi:

deshidratarea;

clarificarea;

parafinarea;

includerea propriu-zis;

secionarea blocului;

lipirea seciunilor pe lame i uscarea lor;

colorarea seciunilor;

uscarea i depozitarea materialului histologic.

Rezultate

Analiza modificrilor parenchimului cerebral n ischemia produs prin ligatur

unilateral i bilateral a ACI. Diminuarea fluxului sanguin cerebral la nivelul

encefalului s-a materializat prin reducerea numrului de neuroni la nivelul scoarei

cerebrale ca urmare a proceselor de necroz celular, autoliz si apotoz.

Analiza microscopic a preparatelor histologice realizate n cadrul studiului

nostru, ne-a permis s identificm si s evideniem modificri semnificative la nivelul

parenchimului cerebral, aprute n urma ischemiei cronice, realizat prin ligatura uni

sau bilateral a acterelor carotide interne (ACI), la animalul de experien (obolan

Wistar). n studiul nostru, am artat c, n timp ce la animalele din lotul martor am

remarcat o densitate neuronal normal, la animalele la care s-a practicat ligatura de

ACI uni- sau bilateral, diminuarea fluxului sanguin cerebral la nivelul encefalului s-a

materializat prin reducerea numrului de neuroni, n special la nivelul scoarei

cerebrale, probabil ca urmare a proceselor de necroz celular, autoliz si apotoz.

De asemenea, am evideniat faptul c afectarea parenchimului cerebral n

ischemia cronic este neomogen, att la nivelul scoarei cerebrale, ct i la nivelul

scoarei cerebeloase, diminuarea numrului de neuroni variind foarte mult de la o

zon la alta a scoarei cerebrale.

Un aspect particular evideniat n studiul nostru histologic a fost reprezentat de

apariia fantomelor neuronale, ncepnd chiar de la 2 sptmni de la producerea

ischemiei cerebrale cronice prin ligatura unilateral de ACI. Biologia molecular a

leziunilor induse de ischemia cerebral cronic reprezint un domeniu de cercetare

n cretere rapid, putnd conduce la identificarea de noi obiective i posibiliti sau

terapeutice. Astfel, de-a lungul timpului, au fost dezvoltate mai multe modele diferite

de accident vascular cerebral ischemic, pentru a putea simula ct mai fidel

modificrile ce au loc n corpul uman. Datele privind mecanismele de deteriorare a

celulelor SNC determinate experimental prin ligatura unilateral i bilateral a ACI la

animalul de laborator, obinute n studiul nostru, reflect rezultatele de la o etap la

alta a ischemiei i sunt de o importan fundamental pentru stabilirea de noi ferestre

dar i inte terapeutice, ce pot duce la o cretere a recuperrii dup un AVC

ischemic.

CAPITOLUL VII

STUDIUL IMUNOHISTOCHIMIC AL PARENCHIMULUI CEREBRAL N ISCHEMIA CEREBRAL

Imunohistochimia (IHC) reprezint o tehnic de microscopie relativ nou, fiind

utilizat pentru identificarea antigenelor celulare i tisulare. Acest procedeu se

bazeaz pe interaciunea dintre antigen-anticorp.

Materialul histopatologic studiat prin tehnici de imunohistochimie a fost

reprezentat de fragmente de encefal, recoltate de la toate animalele incluse n studiu.

n studiul de IHC am utilizat urmtoarele tehnici:

tehnica pentru evidenierea modificrilor neuronale, utiliznd anticorpul

Anti-NeuN;

tehnica pentru evidenierea modificrilor astrocitare, utiliznd anticorpul

Anti-GFAP;

tehnica pentru studiul apoptozei neuronale, utiliznd anticorpul Anti-

Caspaza 3;

tehnica pentru evidenierea modificrilor microcirculaiei cerebrale,

utiliznd anticorpul Anti-CD34;

tehnica pentru evidenierea astrocitelor, utiliznd anticorpul Anti-GFAP

n studiul nostru, am artat c unii neuroni din jurul focarului de necroz

celular au aprut cu dimensiuni mrite i citoplasma (neuroplasma) slab colorat,

nucleul fiind mare i hipocrom, ca urmare a creterii permeabilitii membranei

celulare pentru ionii de Na+, Ca2+ i ap.

n studiul nostru imunohistochimic am putut remarca, asemenea altor autori

(Schaller B, Graf R,2002), evidenierea unui proces de toleran ischemic a celulelor

la hipoxia cerebral cronic. Noi considerm c ischemia cerebral cronic poate

impune unor neuroni un proces de readaptare a metabolismului celular, ceea ce

permite supravieuirea acestora, mai ales a celor din straturile profunde.

Prin tehnicile de imunohistochimie pe care le-am utilizat, s-a evideniat, de

asemenea, aspectul specific de fantome celulare, rezultate n urma proceselor de

autoliz i respectiv autofagie neuronal, induse de ischemia cerebral.

n ceea ce privete populaia astrocitar, n studiul nostru, utiliznd anticorpul

anti-GFAP (un anticorp ndreptat mpotriva unei proteine filamentare prezente n

astrocite), am putut identifica reacia acestora n ischemia cerebral cronic, n

funcie de gravitatea ischemiei i de durata scurs de la producerea acesteia.

n studiul nostru, o analiz atent a reaciei imunohistochimice ne-a permis s

remarcm faptul c procesul de apoptoz a afectat mai ales straturile granular intern

i piramidal, adic neuronii de mari dimensiuni din scoara cerebral. Straturile

superficiale au prezentat o reacie imunohistochimic mai redus i la acest nivel,

marea majoritate a pierderilor neuronale s-au produs printr-un proces de autoliz.

Analiza preparatelor imunohistolochimice ne-a permis s mai observm o

reducere a neuronilor caspazo-pozitivi, n paralel cu depleia neuronal semnificativ,

aceasta dovedind c procesul de apoptoz neuronal nu se agraveaz odat cu

durata ischemiei.

Aceste modificri observate de noi prin tehnicile de imunohistochimie ne

demostreaz c n ischemia cerebral cronic sunt implicate mecanisme

complexe, att n ceea ce privete modificarea populaiei neuronale dar i a

celei de celule gliale, care, mpreun cu dezvoltarea edemului cerebral i

inflamaiei, contribuie la conturarea tabloului morfopatologic specific ischemiei.

CONCLUZII Rezultatele studiului nostru au artat faptul c, dup clamparea unilateral

permanent (cronic) a arterei carotide interne stngi i apoi clamparea bilateral

permanent a ambelor artere carotide interne, se dezvolt modificri ireversibile sau

parial reversibile, att la nivel histologic, ct i n ceea ce privete performanele

motorii i cognitive, la animalele de experien.

Datele rezultate n urma cercetrilor noastre demonstreaz faptul c n cazul

reducerii fluxului sanguin cerebral pn la o valoare de aproximativ 55% fa nivelul

bazal (ocluzie bilateral a ACI), se observ un declin mai accentuat al funciilor

motorii i cognitive, dar i o recuperare mai lent i nu n totalitate a acestora, fa de

celellalt grup cu reducere a fluxului sanguin cerebral la o valoarea de aproximativ

75% fa de nivelul bazal (ocluzie unilateral) i bineneles fa de grupul control.

De asemenea, putem spune c diferenele nregistrate ntre cele dou grupuri

de obolani i grupul control i chiar la obolanii aceluiai grup, n ceea ce privete

declinul i recuperarea funciilor motorii i cognitive, pot fi explicate prin

heterogenitatea arhitecturii circulaiei cerebrale, la obolani diferii, cu distribuie

diferit a zonelor arteriale de grani.

n ceea ce privete analiza modificrilor parenchimului cerebral supus

ischemiei cronice, prin ligatur unilateral i bilateral la nivelul arterelor carotide

interne, am demonstrat c diminuarea fluxului sanguin cerebral la nivelul encefalului

s-a materializat prin reducerea populaiei neuronale la nivelul scoarei cerebrale, ca

urmare a proceselor de necroz celular, autoliz si apotoz. n acest sens am

observat c la nivelul emisferei contralaterale, leziunile parenchimului cerebral au

fost mult mai reduse fa de leziunile aprute de aceeai parte cu ligatura, n cazul

ocluziei unilaterale a arterei carotide interne. De asemenea, din punct de vedere al evoluiei leziunilor ischemice, am

demonstrat c, odat cu trecera timpului, datorit unui fenomen de obinuin

asemntor precondiionrii ischemice, diferena nregistrat n intensitatea leziunilor

la cele dou grupuri pare s se micoreze, dar fiind totui evidente, lucru observat i

n ceea ce privete evaluarea recuperrii funciilor motorii i cognitive.

Analiza efectelor ischemiei cerebrale produse prin ocluzie bilateral de arter

carotid intern, la dou sptmni, ne-a permis s remarcm faptul c pierderile

neuronale au fost mult mai severe dect n cadrul ischemiei unilaterale; n intervalul

4-6 sptmni, diferenele nregistrate au fost maxime iar la finalul experimentului, 10

sptmni, diferenele se pstreaz, dar ritmul n care apar pare a fi diminuat.

Din punct de vedere imunohistochimic, modificrile populaiei neuronale

observate de noi au coincis cu studiul histologic, i n plus putem spunec aceste

modificri nu au avut aceeai intensitate pe toat suprafaa scoarei cerebrale,

existnd zone cu pierderi neuronale importante i zone cu depleii neuronale reduse.

De aceea noi putem concluziona c ischemia cerebral cronic a impus

celulelor neuronale un proces de readaptare a metabolismului celular, la noul nivel

de irigare, ceea ce a permis supravieuirea unor grupuri de neuroni, mai ales a celor

din straturile profunde.

n urma analizei populaiei celulare gliale, am demonstrat c i celulele gliale

sunt sensibile la ischemie, ele suferind procese de necroz asemntor neuronilor,

totui, n jurul focarului de necroz cerebral s-au evideniat astrocite reactive, acest

aspect histologic demonstrnd capacitatea astrocitelor de a reaciona la ischemie i

la produii de necroz celular.

Cercetarea noastr, conform obiectivelor propuse, a realizat modelul

experimental pentru studiul ischemiei cerebrale cronice, care este util n explorarea

fenomenelor ischemice cronice cauzate de reduceri ale fluxului sanguin cerebral.

Modificrile evideniate prin studiul de fa pot fi utile n dezvoltarea unor terapii care

s mbunteasc recuperarea funciilor cognitive i motorii, alterate datorit

ischemiei cerebrale cronice.