mutagenaza si clonarea

8/7/2019 Mutagenaza si clonarea

1/26

APLICAAPLICAIILE TEHNOLOGIEIIILE TEHNOLOGIEI

ADN RECOMBINATADN RECOMBINATMUTAGENEZA IN VITROMUTAGENEZA IN VITRO


2/26


3/26

SSchemchemaa de bazde baz aa procedeelor deprocedeelor de

mutagenezmutagenez in vitroin vitro ADNADN--ul plasmidiul plasmidialal care conine gena de interes estecare conine gena de interes estesupussupus in vitroin vitro unei proceduri de mutagenez chimic sauunei proceduri de mutagenez chimic sauenzimatic care modific ADNenzimatic care modific ADN--ulul

ADNADN--ul plasmidiul plasmidialal care a suferit mutaia este introdus ncare a suferit mutaia este introdus nE.coliE.coli prin transformareprin transformare

CColoniile care conin moleculeleoloniile care conin moleculele dede plasmidplasmidee suntsuntselectate pe baza rezistenei la antibiotice.selectate pe baza rezistenei la antibiotice.

Plasmidele mutante pot fi izolate dintrPlasmidele mutante pot fi izolate dintr--o singur colonieo singur colonie

i testate individual sau se poate obine o bibliotec dei testate individual sau se poate obine o bibliotec deplasmide care sunt testate din punct de vedereplasmide care sunt testate din punct de vederefuncional utiliznd un ecran geneticfuncional utiliznd un ecran genetic


4/26

Mutageneza indusMutageneza indus in vitroin vitro poate fipoate fi

de dou feluride dou feluri -- mutageneza ntmpltoaremutageneza ntmpltoare (necontrolat)(necontrolat)

Metodele mutagenezei ntmpltoare potMetodele mutagenezei ntmpltoare potproduce modificri n secvena nucleotidelorproduce modificri n secvena nucleotidelor

(mutaii) n oricare parte a plasmidei.(mutaii) n oricare parte a plasmidei. -- mutageneza dirijatmutageneza dirijat-- Metodele mutagenezeiMetodele mutagenezei

dirijate pe situsuri permit realizarea unor mutaiidirijate pe situsuri permit realizarea unor mutaiin locuri precise, acolo unde ele sunt necesare,n locuri precise, acolo unde ele sunt necesare,pentru a defini rolul secvenelor specificepentru a defini rolul secvenelor specifice


5/26

Mutageneza ntmpltoareMutageneza ntmpltoare

-- modificarea secvenelor din situsurilemodificarea secvenelor din situsurileendonucleazelor de restricie ;endonucleazelor de restricie ;

-- inseria unui linker oligonucleotidic, lainseria unui linker oligonucleotidic, lantmplare ntrntmplare ntr--o plasmid ;o plasmid ;

-- modificarea ADNmodificarea ADN--ului plasmidicului plasmidic in vitroin vitro(realizarea de substituii ntmpltoare) cu(realizarea de substituii ntmpltoare) cu

ajutorul substanelor chimice sau prinajutorul substanelor chimice sau prinncorporarea greit a unor nucleotide pencorporarea greit a unor nucleotide peparcursul sintezeiparcursul sintezei in vitroin vitro a ADNa ADN--ului.ului.


6/26

Mutageneza ntmpltoare realizat prinMutageneza ntmpltoare realizat prinmodificarea secvenelor din situsurilemodificarea secvenelor din situsurile

endonucleazelor de restricieendonucleazelor de restricieADNADN--ul plasmidul plasmidialial este clivat cueste clivat cu enzimaenzima Eco RIEco RI,,

ce produce capetece produce capete 5 adezive5 adezive Tratamentul cu nucleaza S1 diger specific ADNTratamentul cu nucleaza S1 diger specific ADN--

ul monocatenar, determin ndeprtarea celorul monocatenar, determin ndeprtarea celorpatru nucleotide de la capetele 5, rezultndpatru nucleotide de la capetele 5, rezultndcapete boante.capete boante.

FFragmentul liniar de ADN este tratat cu ADNragmentul liniar de ADN este tratat cu ADN--ligaza care leag capetele boante aleligaza care leag capetele boante ale

fragmentului.fragmentului. Molecula circular de ADN plasmidiMolecula circular de ADN plasmidialal care rezultcare rezultconine oconine o deleiedeleie a patru perechi de bazea patru perechi de baze


7/26

Alternativ:Alternativ:

-- SeSe adadaaugug ADNADN--polimeraz ipolimeraz i cei 4cei 4 dNTPdNTPla plasmida clivat de endonucleaza dela plasmida clivat de endonucleaza derestricierestricie Eco RIEco RI care vacare va extinde capeteleextinde capetele3 prin sinteza ADN3 prin sinteza ADN--ului.ului.

-- Dup ligarea capetelor, molecula de ADNDup ligarea capetelor, molecula de ADNplasmidic rezultat conine oplasmidic rezultat conine o inserieinserie(adiie) a patru perechi de baze(adiie) a patru perechi de baze


8/26

Inseria unui linker oligonucleotidic laInseria unui linker oligonucleotidic la

ntmplare ntrntmplare ntr--o plasmido plasmid clivarea unei plasmide cu o enzim de restricieclivarea unei plasmide cu o enzim de restricie obinerea de capete boante prin tratarea cu ADNobinerea de capete boante prin tratarea cu ADN--

polimeraz care extinde capetele 3 prin sinteza ADNpolimeraz care extinde capetele 3 prin sinteza ADN--uluiului

ligarea capetelor boante cu ADNligarea capetelor boante cu ADN--ligazaligaza n prezena unein prezena uneioligonucleotide sintetice linker, care adesea codificoligonucleotide sintetice linker, care adesea codificsitusul unei enzime de restricie.situsul unei enzime de restricie.

Inseria linkerului ntrerupe secvena genic iar poziiaInseria linkerului ntrerupe secvena genic iar poziialinkerului inserat poate fi cartat cu uurin prin clivarealinkerului inserat poate fi cartat cu uurin prin clivarea

plasmidei cu enzima de restricie care taie linkerulplasmidei cu enzima de restricie care taie linkerulformnduformndu--i acestuia capete adezivei acestuia capete adezive ((a fost folosita fost folositpentru a carta regiunile funcionale ale unui elementpentru a carta regiunile funcionale ale unui elementtranspozabil bacterian (o gen sritoaretranspozabil bacterian (o gen sritoare -- jumpingjumpinggene)gene)


9/26

Inducerea substituiilor intmpltoare de nucleotideInducerea substituiilor intmpltoare de nucleotidecu ajutorul substanelor chimice sau princu ajutorul substanelor chimice sau prinncorporarea greit a unor nucleotide.ncorporarea greit a unor nucleotide.

Mutaiile induse prin substiia nucleotidelor din aciziiMutaiile induse prin substiia nucleotidelor din aciziinucleici se pot realiza prin :nucleici se pot realiza prin :

-- dedezzaminarea citozinei ;aminarea citozinei ;

-- ncorporarea unor analogi ai bazelor azotate ;ncorporarea unor analogi ai bazelor azotate ; -- ncorporarea greit a nucleotidelor.ncorporarea greit a nucleotidelor.Substane ce induc substituia:Substane ce induc substituia: bisulfitul de sodiu (NaHSObisulfitul de sodiu (NaHSO33))

care decare dezzamineaz citozina transformndamineaz citozina transformnd--o n uracil io n uracil iunii reactivi (hidrazina, acidul formic etc.) careunii reactivi (hidrazina, acidul formic etc.) care

degradeaz sau ndeprteaz bazele azotate, n acest fel,degradeaz sau ndeprteaz bazele azotate, n acest fel,prevenind mperecherea normal a bazelor azotate prinprevenind mperecherea normal a bazelor azotate prinlegturi de tip Watsonlegturi de tip Watson--Crik.Crik.


10/26

Mutaiile de substituie pot fi generate iMutaiile de substituie pot fi generate iprinprin ncorporarea enzimatic greit ancorporarea enzimatic greit a

nucleotidelornucleotidelor pe parcursul proceselor depe parcursul proceselor debiosintez ADN reparatorie.biosintez ADN reparatorie.

SSinetzainetza in vitroin vitro a ADNa ADN--ului se realizeului se realizeaazz

n condiii neideale (condiii ionicen condiii neideale (condiii ionicesuboptime, cantiti inegale alesuboptime, cantiti inegale aleprecursorilor nucleotidici). Aceste condiiiprecursorilor nucleotidici). Aceste condiii

ncurajeaz ADNncurajeaz ADN--polimeraza, capolimeraza, ca

ocazional, s ncorporeze greit oocazional, s ncorporeze greit onucleotid pe parcursul sintezei.nucleotid pe parcursul sintezei.


11/26

De exemplu, biosinteza ADNDe exemplu, biosinteza ADN--ului este realizatului este realizatn prezena unor concentraii ridicate a trein prezena unor concentraii ridicate a trei

dintre precursori (deoxinucleotid trifosfai) i adintre precursori (deoxinucleotid trifosfai) i aunei concentraii foarte sczute a celui deunei concentraii foarte sczute a celui de--alalpatrulea. Poziiile din catena de ADN care npatrulea. Poziiile din catena de ADN care nmod normal trebuie s fie ocupate de cea demod normal trebuie s fie ocupate de cea de--aapatra nucleotid (aflat n concentraie sczut)patra nucleotid (aflat n concentraie sczut)

sunt ocupate, uneori, de ctre una dintresunt ocupate, uneori, de ctre una dintrecelelalte trei nucleotide, rezultnd n acest fel ocelelalte trei nucleotide, rezultnd n acest fel omutaie prin substituie. Aceast metod semutaie prin substituie. Aceast metod sebazeaz i pe faptul c enzimei Taq ADNbazeaz i pe faptul c enzimei Taq ADN--polimeraz i lipsete activitatea de corectarepolimeraz i lipsete activitatea de corectare --

un mecanism specific exonucleazelor careun mecanism specific exonucleazelor careverific fiecare pereche de baze dupverific fiecare pereche de baze dupncorporare i ndeprteaz nucleotidele carencorporare i ndeprteaz nucleotidele caresunt mperecheate greit.sunt mperecheate greit.


12/26

Mutageneza dirijatMutageneza dirijat

Mutagenezadirijatpe situsuriprinextensiaMutagenezadirijatpe situsuriprinextensiaenzimaticaoligonucleotidelormutagenice.enzimaticaoligonucleotidelormutagenice.

tehnictehnicaafolosete oligonucleotide sintetice(defolosete oligonucleotide sintetice(de 1155--25 nucleotide) construite25 nucleotide) construite invitroinvitro..Oligonucleotidaare rolde primer pentrusintezaOligonucleotidaare rolde primer pentrusintezaenzimaticenzimaticinvitroinvitro aADNaADN--uluide ctre ADNuluide ctre ADN--polimeraz, care convertete ADNpolimeraz, care convertete ADN--ululmonocatenar n formbicatenarutilizndmonocatenar n formbicatenarutiliznd

catenade tipslbaticcamatricatenade tipslbaticcamatri Orice modificare dorit nsecvenanucleotidelorOrice modificare dorit nsecvenanucleotidelorpoate fiprogramat nsecvenaprimeruluipoate fiprogramat nsecvenaprimeruluisintetic.sintetic.


13/26

Presupune caPresupune ca gena de interes (pasager) de tip slbatic sgena de interes (pasager) de tip slbatic sfie integrat ntrfie integrat ntr--un vector ADN monocatenar, cum esteun vector ADN monocatenar, cum este

fagul M13fagul M13 oligonucleotida este numai parial complementar cuoligonucleotida este numai parial complementar cugena pasager de tip slbatic.gena pasager de tip slbatic.

In condiii de temperatur sczut i concentraie ridicatIn condiii de temperatur sczut i concentraie ridicatde sare, oligonucleotida se poate hibrida molecular cude sare, oligonucleotida se poate hibrida molecular cu

gena pasagergena pasager ADNADN--polimerazei I, celor patru molecule de deoxinucleotidpolimerazei I, celor patru molecule de deoxinucleotid

trifosfai (dNTP) i ADNtrifosfai (dNTP) i ADN--ligazei realizeaz n procesul deligazei realizeaz n procesul dereplicare, sinteza celei dereplicare, sinteza celei de--a doua catene complementare,a doua catene complementare,oligonucleotida sintetic jucnd rolul de primer. In cadruloligonucleotida sintetic jucnd rolul de primer. In cadrul

procesului de replicare se completeaz att gena pasagerprocesului de replicare se completeaz att gena pasagercare integreaz oligonucleotida sintetizat artificial, ct icare integreaz oligonucleotida sintetizat artificial, ct icea decea de--a doua caten a vectoruluia doua caten a vectorului


14/26

CLONAREACLONAREA


15/26

Ce este o clon?Ce este o clon?

un grup de indivizi identici din punct de vedere genetic,un grup de indivizi identici din punct de vedere genetic,rezultai de la acelai printe prinrezultai de la acelai printe prin reproducere asexuatreproducere asexuat..Reproducerea asexuat este ntlnit n mod natural laReproducerea asexuat este ntlnit n mod natural laorganismele inferioare unicelulare (bacterii, protozoare,organismele inferioare unicelulare (bacterii, protozoare,alge, ciuperci microscopice), nevertebrate colonialealge, ciuperci microscopice), nevertebrate coloniale(hidre, madrepori etc) sau n lumea vegetal.(hidre, madrepori etc) sau n lumea vegetal.

un grup de celule identice d.p.d.v. genetic cu celulaun grup de celule identice d.p.d.v. genetic cu celulamam rezultate n urmamam rezultate n urma diviziunii mitoticediviziunii mitotice. Diviziunea. Diviziuneamitotic este caracteristic celulelor somatice (alemitotic este caracteristic celulelor somatice (alecorpului) n care dintrcorpului) n care dintr--o celul cu 2n cromozomi rezult 2o celul cu 2n cromozomi rezult 2

celulele fiice cu acelai numr de cromozomicelulele fiice cu acelai numr de cromozomi i aceeaii aceeaiinformaie genetic cu celula original.informaie genetic cu celula original. o populaie de molecule de ADN identice produse deo populaie de molecule de ADN identice produse de

bacterii sau virusuri care au primit prin tehnici debacterii sau virusuri care au primit prin tehnici debiologie molecular (tehnologia AND recombinant) unbiologie molecular (tehnologia AND recombinant) unfragment de ADN strin poart numele defragment de ADN strin poart numele de clone ADNclone ADN..


16/26

producerea de animale identice genetic prinproducerea de animale identice genetic prin secionareasecionareaunui embrion tnrunui embrion tnr. Un embrion tnr este un embrion. Un embrion tnr este un embrionla care celulele nu sunt nc difereniate (n celulela care celulele nu sunt nc difereniate (n celule

epiteliale, hepatice, musculare, nervoase etc.). La vac,epiteliale, hepatice, musculare, nervoase etc.). La vac,dup secionarea embrionului n stadiul de 4dup secionarea embrionului n stadiul de 4--8 celule,8 celule,fiecare fragment embrionar transplantat ntrfiecare fragment embrionar transplantat ntr--o mamo mamadoptiv a dat natere unui viel, toi produii rezultaiadoptiv a dat natere unui viel, toi produii rezultaifiind identici d.p.d.v. genetic (clone).fiind identici d.p.d.v. genetic (clone). Procedeul seProcedeul sepractic cu succes la vac de mai bine de 10 ani (Vintilpractic cu succes la vac de mai bine de 10 ani (VintilI., 1997).I., 1997). Dezavantajul metodei este c se obin foarteDezavantajul metodei este c se obin foartepuini descendeni identici (2puini descendeni identici (2--3).3).

Producerea unuia sau mai multor animale identiceProducerea unuia sau mai multor animale identiced.p.d.v. genetic prin transferul nucleului unei celuled.p.d.v. genetic prin transferul nucleului unei celulesomatice de adult sau de embrion ntrsomatice de adult sau de embrion ntr--o ovocito ovocit

enucleat (la care i senucleat (la care i s--a extras nucleul). Aceasta extras nucleul). Aceasttehnologie (transferul nuclear) a strnit cele mai multetehnologie (transferul nuclear) a strnit cele mai multecontroverse dup ce n 1996 a fost obinut oaia Dollycontroverse dup ce n 1996 a fost obinut oaia Dolly(Wilmut i colab., 1997) prin transferul nucleului unei(Wilmut i colab., 1997) prin transferul nucleului uneicelule somatice de adult.celule somatice de adult.


17/26

Clonarea animalelor prinClonarea animalelor printransferul nuclear:transferul nuclear:

Clonarea animalelor prin transfer nuclearClonarea animalelor prin transfer nuclearse poate realiza prin dou metode:se poate realiza prin dou metode:

a)a) CLONREA EMBRIONARCLONREA EMBRIONAR

a)a) CLONAREA UNUI INDIVID ADULTCLONAREA UNUI INDIVID ADULT


18/26

CLONREA EMBRIONARCLONREA EMBRIONAR

transferul unor nuclei diplozi (2n) prelevai din celuletransferul unor nuclei diplozi (2n) prelevai din celuleembrionare (n stadiul de 8, 16, 32 sau 64 celule) nembrionare (n stadiul de 8, 16, 32 sau 64 celule) novocite enucleate. Aceast tehnic nu este una nou. novocite enucleate. Aceast tehnic nu este una nou. n1954 Robert W. Briggs i Thomas King au reuit1954 Robert W. Briggs i Thomas King au reuitobinerea de broate adulte, iar n 1980 tehnica a fostobinerea de broate adulte, iar n 1980 tehnica a fostutilizat pentru clonare la vac i la oaie prin transferulutilizat pentru clonare la vac i la oaie prin transferulnucleului din celulele unui embrion tnr. n 1995, Iannucleului din celulele unui embrion tnr. n 1995, IanWilmut/Keith Campbell i colab., de la Institutul RoslinWilmut/Keith Campbell i colab., de la Institutul Roslin(Edinburgh) obin primii miei vii (Megan i Morgan)(Edinburgh) obin primii miei vii (Megan i Morgan)pornind de la nucleii celulelor derivate din embrion,pornind de la nucleii celulelor derivate din embrion,cultivate mai multe sptmni n laborator. Acelaicultivate mai multe sptmni n laborator. Acelaiexperiment a fost fcut i cu nucleiexperiment a fost fcut i cu nuclei unor fibroblatiunor fibroblatitineri.tineri.


19/26

Etapele de lucru:Etapele de lucru:

Clona se obine pornin de la un singur embrion .Clona se obine pornin de la un singur embrion . Din aceste celule se extrage nucleul.Din aceste celule se extrage nucleul. n paralel se utilizeaz ovocite enucleate receptoare, prelevate dinn paralel se utilizeaz ovocite enucleate receptoare, prelevate din

ovare de la abator.ovare de la abator. Nucleul diploid (2n) al celulei embrionare este transferat n ovocitaNucleul diploid (2n) al celulei embrionare este transferat n ovocita

enucleat i apoi fuziunea se face cu stimuli electrici.enucleat i apoi fuziunea se face cu stimuli electrici. Noul ou cu 2n cromozomi se divide i poate fi transferat n uterulNoul ou cu 2n cromozomi se divide i poate fi transferat n uterul

unei femele receptoare.unei femele receptoare. Randamentul clonrii embrionare la mamiferele domestice este ncRandamentul clonrii embrionare la mamiferele domestice este nc

foarte slab: cca. 5% la bovine sau iepure, aproximativ 30foarte slab: cca. 5% la bovine sau iepure, aproximativ 30--40% din40% din

oule reconstituite se dezvolt pn la stadiul de cteva celule,oule reconstituite se dezvolt pn la stadiul de cteva celule,apoi apare mortalitatea embrionar sau fetal pe parcursulapoi apare mortalitatea embrionar sau fetal pe parcursulgestaiei. Au fost clonate prin aceast metod oaia, vaca, porcul,gestaiei. Au fost clonate prin aceast metod oaia, vaca, porcul,iepuroaica, pastrvul .iepuroaica, pastrvul .


20/26

CLONAREA UNUI INDIVID ADULTCLONAREA UNUI INDIVID ADULT

transferul unor nuclei diploizi prelevai dintransferul unor nuclei diploizi prelevai dincelulele somatice de individ adult, n ovocitecelulele somatice de individ adult, n ovocitenefecundate, enucleatenefecundate, enucleate si obinerea oiei Dollysi obinerea oiei Dolly--primul individ adult clonatprimul individ adult clonat

Depirea impedimenDepirea impedimentelor nereuitelor pn ntelor nereuitelor pn nacel momentacel moment ss--a realizat prin crearea condiiilora realizat prin crearea condiiilorde stopare a ciclului celular al celulelor somaticede stopare a ciclului celular al celulelor somaticedonoare n faza Go, prin nfometarea celulelor idonoare n faza Go, prin nfometarea celulelor isincronizarea fazelor de diviziune ale celuleisincronizarea fazelor de diviziune ale celuleidonoare cu ovocita enucleat receptoare. ndonoare cu ovocita enucleat receptoare. nfaza Go celulele se afl n starea de repausfaza Go celulele se afl n starea de repaus

naintea pregtirii unei noi diviziuni mitotice.naintea pregtirii unei noi diviziuni mitotice.


21/26


22/26

Cum a fost clonat oaia Dolly ?Cum a fost clonat oaia Dolly ? (Ian(IanWilmut i colab., 1997)Wilmut i colab., 1997)

Celulele donoare de nuclei:Celulele donoare de nuclei: au fost recoltate celule din epiteliu glandei mamare aau fost recoltate celule din epiteliu glandei mamare a

unei oi din rasa Finn Dorset (cu capul alb) aflat nunei oi din rasa Finn Dorset (cu capul alb) aflat nultimul trimestru de gestaie, cnd celulele prezintultimul trimestru de gestaie, cnd celulele prezintun grad maxim de difereniere i se multipic activ;un grad maxim de difereniere i se multipic activ;

celulele au fost cultivate n laborator cinci zile pe uncelulele au fost cultivate n laborator cinci zile pe unmediu complet, dup care au fost trecute pe unmediu complet, dup care au fost trecute pe unmediu srac pentru nfometare i intrarea lor n fazamediu srac pentru nfometare i intrarea lor n fazaGo a ciclului celular. Aceste celule au numrul deGo a ciclului celular. Aceste celule au numrul decromozomi 2n.cromozomi 2n.

de la aceste celule sde la aceste celule s--au recoltat nucleii i o parte dinau recoltat nucleii i o parte dinconinutul citoplasmaticconinutul citoplasmatic


23/26

Celulele receptoare:Celulele receptoare: ovocitele au fost recoltate chirurgical de la o oaie dinovocitele au fost recoltate chirurgical de la o oaie din

rasa Scotish Blackface (cu cap negru). Aceste celulerasa Scotish Blackface (cu cap negru). Aceste celulesexuale au numrul de cromozomi redus la jumtate.sexuale au numrul de cromozomi redus la jumtate.Nucleul lor i globulul polar adiacent se extrag cuNucleul lor i globulul polar adiacent se extrag cupipeta rezultnd un carioplast. Nucleoplastul estepipeta rezultnd un carioplast. Nucleoplastul estesupus iradierii pentru inactivarea genomuluisupus iradierii pentru inactivarea genomului

mitocondrialmitocondrial Fuziunea nucleului cu ovocita enucleat:Fuziunea nucleului cu ovocita enucleat:

nucleii celulelor glandei mamare au fost transferai n ovocitanucleii celulelor glandei mamare au fost transferai n ovocitaenucleat;enucleat;

celulele ou astfel manipulate au fost stimulate electric pentrucelulele ou astfel manipulate au fost stimulate electric pentru

a permite fuziunea nucleului (2n) cu citoplasma celuleia permite fuziunea nucleului (2n) cu citoplasma celuleireceptoare;receptoare;n urma electrofuziunii celula ou a nceput s se divid pentrun urma electrofuziunii celula ou a nceput s se divid pentru

a produce un embrion;a produce un embrion;


24/26

Transferul embrionului n mamaTransferul embrionului n mama

receptoare:embrionul a fost transferatreceptoare:embrionul a fost transferatntrntr--o oaie receptoare (rasa Scotisho oaie receptoare (rasa ScotishBlackface) i astfel sBlackface) i astfel s--a nscut prima oaiea nscut prima oaieclonat din celule de adultclonat din celule de adult-- oaia Dollyoaia Dolly

Oaia Dolly este copia fidel a oii din rasaOaia Dolly este copia fidel a oii din rasaFinn Dorset (cap alb) de la care sFinn Dorset (cap alb) de la care s--aaprelevat nuceul cu ntreaga zestreprelevat nuceul cu ntreaga zestre

genetic (foto 1.).genetic (foto 1.).


25/26


26/26

Rezultate semnificative ai fost obinute iRezultate semnificative ai fost obinute i

la alte specii de interes economic:bovine,la alte specii de interes economic:bovine,caprine, suine precum i la specii decaprine, suine precum i la specii deinteres tiinificinteres tiinific-- oareci i primateoareci i primate(Wilmut, 2003). Eficiena clonrii este(Wilmut, 2003). Eficiena clonrii este

relativ sczut datorit supravieuiriirelativ sczut datorit supravieuiriireduse a embrionilor clonai sau a unorreduse a embrionilor clonai sau a unoranomalii. Deficienele tehnologiei constauanomalii. Deficienele tehnologiei constau

n desincronizarea materialului geneticn desincronizarea materialului genetic

donor cu cel al celulei receptoaredonor cu cel al celulei receptoareenucleate n ceea ce privete faza cicluluienucleate n ceea ce privete faza cicluluicelular n care se afl cele dou celule.celular n care se afl cele dou celule.

mutagenaza si clonarea

Documents