Microscopul Optic

Biologia celulara = stiinta fundamentala care se ocupa cu studiul celulei ca unitate structurala si functionala a oricarui organism viu

Microscopul optic = dispozitiv cu ajutorul caruia se pot examina structuri cu dimensiuni mult sub puterea de rezol 12212t1921m utie a ochiului uman

Componenete microscop optic :

1. SURSĂ DE LUMINA

2. CONDENSOR

3. DIAFRAGMĂ

4. MASA

5. DISPOZITIV DE DEPLASARE A LAMEI

6. REVOLVER

7. OBIECTIVE

8. SISTEM DE PRISME

9. OCULAR

10. MACROVIZA

11 MICROVIZA

Modul de formare al imaginii la MO :

Obiectivul formeaza o imagine marita , reala si rasturnata a obiectului

Ocularul- are ca obiect imaginea data de obiectiv si va forma imaginea finala mult marita , rasturnata si virtuala , la infinit deci nu necesita efort de acomodare

Performantele MO sunt :

Puterea de marire

Puterea de rezolutie

PUTEREA DE MARIRE :

Puterea de marire = produsul dintre puterea de marire a obiectivului si cea a ocularului

Puterea de marire maxima x1500 ori

Puterea de marire - ×4, ×10 ;- ×20, ×40 – diagnostic histologic ;- ×60, ×100 – diagnostic citologic

PUTEREA DE REZOLUTIE =Cea mai mica distanta dintre doua puncte la care acestea pot fii percepute distinct

De ea depinde claritatea si bogatia în detalii a imaginii

Depinde de lentila obiectivului

FORMULA LUI ABBÉ :

d=l/ n sinα

l= lungimea de unda a radiatiei electromagnetice ( 0,55 µm)

n= indicele de refractie al mediului dintre preparat si obiectiv

a= ½ din aperura unghiulara a obiectivului

Limitarile puterii de rezolutie a microscopului optic in practica

l este o constanta naturala ce nu poate fi influentata (0,55)

Mediul dintre preparat si obiectiv este de obicei aer (n = 1)

Obiectivul cu imersie – intre obiectiv si preparat se interpune o picatura de lichid cu un indice de refractie supraunitar, cum este uleiul de cedru (n=1,51)

Apertura unghiulara maxima teoretica este 180 , deci a=90, limita teoretica maxima a sin a=1

Rezolutia maxima a microscopului optic= 0,2m

STUDIUL CELULELOR VII NECOLORATE

1.MICROSCOP CU CÂMP ÎNTUNECAT

2. M. CU CONTRAST DE FAZĂ

3. M. CU INTERFERENŢĂ

4. M. TIP NOMARSKI

5. MICROSCOPUL RANVERSAT

1.MICROSCOP CU CÂMP ÎNTUNECAT

PRINCIPIU – exista un diafragm in condensor care selecteaza doar lumina laterala iar imaginea finala este formata de catre razele reflectate de componentele din preparat

2. M. CU CONTRAST DE FAZĂ

PRINCIPIU

- lumina care trece prin medii cu indici de refractie diferiti îsi modifica directia si viteza

- micoscopul transforma aceste diferente în diferente de intensitate luminoasa

3. M. CU INTERFERENŢĂ

PRINCIPIU

- mai foloseste înca o raza de lumina care nu traverseaza tesutul analizat ,dar interfera cu raza provenita de la sursa de lumina

- ofera informatii despre densitatea obiectului analizei

4. M. TIP NOMARSKI

Un tip modificat al microscopului cu contrast de faza, oferind imagini aparent tridimensionale

5. MICROSCOPUL RANVERSAT

- pentru examinarea celulelor din flacoane sau placi Petri

- obiective sub masuta

- sursa de lumina deasupra

MICROSCOPUL CU FLOURESCENTA

LUMINISCENTA = proprietatea unor substante de a emite lumina atunci cand sunt stimulate luminos =FOTOLUMINISCENTA

FLUORESCENTA – proprietatea unei substante de a emite radiatii lumioase doar in timpul stimularii

FOSFORESCENTA –proprietatea unei substante de a emite radiatii lumioase si dupa incetarea stimularii

TERMOFLUORESCENTA = proprietatea unor substante de a emite lumina atunci cand sunt stimulate termic.

Aplicatii practice MICROSCOP CU FLOURESCENTA:

1.AUTOFLUORESCENŢA

capacitatea tesuturilor vii de a absorbi radiatii luminoase cu o anumita lungime de unda si de a o emite ulterior alte radiatii, cu o alta lungime de unda, mai mare

2. FLUORESCENTA SECUNDARA – dupa marcare cu compusi fluorescenti :

a. Acridine orange – ADN-verde/ ARN-rosu

b. Quinacrina – cromozomi = bandare

MICROSOPUL CU FLORESCENTA

IMUNOFLUORESCENŢA : punerea în evidenta a diferitilor antigeni cu ajutorul unor anticorpi specifici marcati cu un compus fluorescent IZOTIOCIANAT DE FLUORESCEINA (FITC)

-2 tipuri: directa si indirecta

IMUNOFLOUESCENTA DIRECTA=Ag + Ac specific marcat

IMUNOFLOURESCENTA INDIRECTA Ag + Ac specific + Ac sec. marcat

- are o sensibilitate mai mare ca metoda a—se foloseste in cazul in care antigenele se gasesc in cantitate mica in tesut

4.SONDE FLUORESCENTE , molecule care detecteaza concentratia i.c. a ionilor , a rad. liberi , a variatiilor de pH i.c. si isi modifica proprietatile in functie de valorilor acestora.