anticorpii in microscopie

7/23/2019 Anticorpii in Microscopie

http://slidepdf.com/reader/full/anticorpii-in-microscopie 1/18

Anticorpii in examinarea

celulelor



Anticorpi - Defnitie

• ANTICORPI: proteine specifce elaborate de organismca răspuns la prezenta unui antigen.

• Antigen: orice proteină străină organismului producator de anticorpi; prin extensie, orice

proteina (sau glican, proteoglican) care nu apartinein mod normal unui compartiment al organismului

• Epitop: o portiune dintr-un antigen care este legatade un anticorp;

• Uneori defnita si ca “Cea mai mica portiune din

antigen care poate f legata de un anticorp”• O imunoglobulină, în orma literei “Y, produsă de

limocitele !, olosită de sistemul imun pentruidentifcarea "i neutralizarea particulelor străine.



#tructura unui anticorp

Situsuri de combinare cu antigenul

Lantusor(L)

Lantusor(L)

LantGreu(H) LantGreu(H)

Portiuneariabila

Portiune!"a

#ragment $#C% & #ragment legare a

com'lementului



$ipuri de anticorpi

• Anticorpi policlonali% sunt anticorpii produsiin mod normal in organisme. #unt produside mai multe tipuri de limocite ! sirecunsoc epitopi dieriti ai aceluiasi antigen.

• Anticorpi monoclonali% produsi prin metodede recombinare, de “&ibridoame 'produside uziune intre un (imocit ! si o celulatumorala 'mielom). Au capacitate dereplicare infnita '*) si sintetizeazaAnticorpi '(!). +n A* recunoaste unsingur epitop al unui antigen.



aracteristici

• A!nitatea anticor'ului masoara taria interactiunii dintre unepitop si un situs de legare a anticorpului

• ste defnita de principiile generale ale termodinamicii priindinteractiile intermoleculare%

• A / constanta de afnitate• Ab* / concentratia molara a situsurilor de legare neocupate de pe

anticorp• Ag* / concentratia molara a asitusurilor de legare 'epitopi) de pe

antigen• Ab,Ag* / concentratia molara a complexelor anticorp-antigen• u alte cuinte, 1 A descrie cantitatea de complexe A!-Ag la punctul

de ec&ilibru. ste cuprinsa intre sub 234 mol-2 si peste 2325 mol-2,.•

Afnitatea A* se poate masura cu acuratete, deoarece suntomogeni.• Afnitatea A6 este inexact determinata, deoarece reprezinta

amestecuri de A pentru dieriti epitopi si cu caracterisitici delegare dierite



• Aiditatea Anticor'ilor• Aiditatea da o masura a tariei generale a

complexullui anticorp-antigen. Depinde de%• Afnitate• 7alenta anticorpului si antigenului• Aran8amentele structurale ale partilor in contact• $oti A sunt multialenti9 :g; sunt bialente iar

:g* sunt decaalente9 cresterea alenteiinseamna cresterea capacitatii de antigen carepoate f legat.

• A; pot de asemenea sa fe multialente,deoarece se pot lega la mai mult decat un A

• :ntercatiile multimerice a8uta la stabilizare.



*arcarea 'coloratia) directa



$estele de tip “(:#A



oloratia indirecta'anticorp secundar marcat)



$e&nica

• #ectiunile pe lama se “bloc&eaza pentrulegarea nespecifca cu Albumina sau cu(actalbumina

•

#e incubeaza cu A primar 'nemarcat)9• #e spala A primar9 blocare• :ncubare cu A secundar• :ncubare cu amestecul de izualizare -

dupa caz, DA! 'peroxidaza), p-nitroenilosat 'osataza alcalina)

• xaminare la *O



7izualizarea :< a “6ar=inei lapacienti cu $!

:< ? t i 7;@ '



:< > ?eceptori 7;@ 'ancermamar)

oloratie @osataza alcalina



Amiloid beta, creier uman'6eroxidaza)



O<d > piele umana '6A)

@ ti &i t d d



@-actina, musc&i neted desoarece,

col. DA!



-mc, < uman, col.6eroxidaza 'brun)

anticorpii in microscopie

Documents