Imunofluorescenta Imunofluorescenta in microscopiein microscopie

IMUNOFLUORESCENŢAIMUNOFLUORESCENŢA reprezinta  reprezinta punerea în evidenţă a diferiţilor antigeni punerea în evidenţă a diferiţilor antigeni cu ajutorul unor anticorpi specifici marcaţi cu ajutorul unor anticorpi specifici marcaţi cu un compus fluorescent cu un compus fluorescent IZOTIOCIANAT DE IZOTIOCIANAT DE FLUORESCEINA FLUORESCEINA (FITC)(FITC)

Tehnica imunofluorescenteiTehnica imunofluorescentei se bazeaza se bazeaza pe proprietatea fluorocromilor de a se pe proprietatea fluorocromilor de a se fixa pe imunoglobuline (anticorpi cu fixa pe imunoglobuline (anticorpi cu specificitate fata de anumite antigene ) specificitate fata de anumite antigene ) fara a le modifica proprietatile biologice fara a le modifica proprietatile biologice

Tehnica iminofluorescentei se refera la Tehnica iminofluorescentei se refera la marcarea cu un colorant a unui antigen marcarea cu un colorant a unui antigen sau anticorp sau anticorp

Reactia de imunoflorescenta este Reactia de imunoflorescenta este

de 3 feluride 3 feluri

Reactia de imunoflorescenta este de 3 Reactia de imunoflorescenta este de 3 feluri feluri

Directa

Indirecta

Cu fixarea complementului

Reactia de imunofluorescenta Reactia de imunofluorescenta directadirecta

Reactia de imunofluorescenta directa Reactia de imunofluorescenta directa

Metoda directa ( Coons) permite Metoda directa ( Coons) permite identificarea Ag specifice in preparate identificarea Ag specifice in preparate cu ajutorul conjugatului fluorescent cu ajutorul conjugatului fluorescent anti-Ac .anti-Ac .

2.Reactia de imunofluorescenta 2.Reactia de imunofluorescenta

indirectaindirecta Reactia de imunofluorescenta indirecta (IFG) Reactia de imunofluorescenta indirecta (IFG)

vizualizeaza reactia Ag-Ac prin aplicarea unui vizualizeaza reactia Ag-Ac prin aplicarea unui conjugat fluorescent anti Ac. Se foloseste pentru conjugat fluorescent anti Ac. Se foloseste pentru detectarea Ac fixate pe Ag . detectarea Ac fixate pe Ag .

Testul poate fi folosit atat pentru determinarea Ag Testul poate fi folosit atat pentru determinarea Ag necunoscut cu ser imun cunoscut cat si pentru necunoscut cu ser imun cunoscut cat si pentru detectarea necunoscuti cu Ag cunoscut detectarea necunoscuti cu Ag cunoscut

3.Reactia de imunofluorescenta 3.Reactia de imunofluorescenta

cu fixarea complementuluicu fixarea complementului

Tehnica fondată pe fixarea C:Tehnica fondată pe fixarea C:Markerul Markerul fluorescent este un ser anti-complement fluorescent este un ser anti-complement care se va lega de complementul fixat pe care se va lega de complementul fixat pe complexul Ag-Ac. complexul Ag-Ac.

Microscoape cu lumina fluorescent si Microscoape cu lumina fluorescent si epi-fluorescentaepi-fluorescenta

Microscoape cu Fluorescente sunt microscoape care folosesc o metoda de iluminare pentru localizarea materialelor marcate fluorescent (proteine, enzime, gene, .. etc) extragand o lungime de unda cu scopul ca elemente fluorescente vor aparea emitand o lumina la o lungime de unda distincta; iar lumina de fluorescente este obtinuta cu o lampa cu temperatura mica;

este puternica lumina, alba si ofera imagini clare, comfortabile pentru ochi. Este foarte indicata pentru observarea specimenelor vii. Sunt de obicei de 5W sau 10W si dau o luminozitate echivalenta cu sursele halogen sau tungsten. Pot fi montate pe baza microscopului sau pot fi atasate.

Microscopului de fluorescentaMicroscopului de fluorescenta --

O lampa xenon

Oglinda dicroica

Filtru de excitatie

Filtru de emisie

Sursa de lumina

Aplicatii practice MICROSCOP CU Aplicatii practice MICROSCOP CU

FLOURESCENTAFLOURESCENTA

Autofluorescenta Fluorescenta secundara