RENAR Anexa nr. 1 RS-1.3 LM.2

LINII DIRECTOARE PENTRU VERIFICAREA ADECVARII LA SCOP A METODELOR UTILIZATE N

LABORATOARELE DE ANALIZE MEDICALE

CUPRINS

1. SCOP

2. DOMENIU DE APLICARE

3. DOCUMENTE DE REFERIN

4. DEFINIII

5. PRINCIPII DE BAZ

6. DESCRIEREA ACTIVITILOR

7. MODIFICRI FA DE VERSIUNEA ANTERIOAR

Ediia din 10.03.2014 Pag. 1/9

RENAR Anexa nr. 1 RS-1.3 LM.2

1. SCOPPrezentul document ofer linii directoare pentru verificarea adecvarii la scop ametodelor n laboratoarele de analize medicale, n vederea satisfacerii cerinelorSR EN ISO 15189.Acest ghid documenteaz metodele generale si parametrii de performanta caretrebuie evaluati n vederea verificarii metodelor utilizate de laboratoarele deanalize medicale acreditate sau n curs de acreditare.

2. DOMENIU DE APLICAREPrezentul document este aplicabil laboratoarelor care efectueaza analizemedicale.

3. DOCUMENTE DE REFERIN

2.1. SR EN ISO 15189 Cerine particulare pentru calitate i competen 2.2. SR Ghid ISO / CEI 99: 2010. Vocabular internaional de metrologie.Concepte fundamentale i generale i termeni asociai (VIM)

4. DEFINIII

4.1. Validare (SR Ghid ISO / CEI 99) - verificare prin care se confirm ccerinele specificate sunt adecvate pentru o utilizare intenionat.

4.2. Validare de metod (Ghidul EURACHEM - The Fitness for Purpose ofAnalytical Methods. A Laboratory Guide to Method Validation and Related Topics)

1. procesul prin care laboratorul isi stabileste caracteristicile de perfomanta silimitele metodei si prin care identifica factorii care influenteaza acestecaracteristici precum si gradul de influenta al acestor factori

2. procesul prin care laboratorul verifica daca metoda este adecvata scopuluiin care va fil utilizata

4.3. Verificare: confirmare prin examinare i furnizare de dovezi obiective csunt ndeplinite cerine specificate

5. PRINCIPII DE BAZ

SR EN ISO 15189 include cerine privind adecvarea procedurilor utilizate lacerinele beneficiarilor serviciilor de laborator i la scopul n care vor fi utilizate.

Validarea analitic se concentreaz pe analiii int i urmrete identificarea icuantificarea surselor poteniale de variabilitate tehnic n analize efectuate peeantioane de pacient. Validarea clinic se concentreaz pe bolile asociate saupe condiiile pacientului i urmrete, n principal, identificarea i cuantificareasurselor poteniale de variabilitate biologic la analiza unui eantion dat.

Ediia din 10.03.2014 Pag. 2/9

RENAR Anexa nr. 1 RS-1.3 LM.2

Validarea i verificarea reprezint dou proceduri diferite. Validarea implicidentificarea nevoilor utilizatorului i stabilirea dovezilor documentate care ofercea mai bun asigurare c o ncercare ndeplinete consistent acele nevoi.Verificarea implic confirmarea c specificaii pre-determinate sunt ndeplinite nmod consistent.

Un proces de verificare/validare include etape de planificare, implementare i decontrol. Etapa de planificare include definirea responsabilitilor, obiectivelor icerinelor aplicabile i documentarea(inclusiv asigurarea documentatilor dereferinta aplicabile). Implementarea const n experimente a cror rezultate suntnregistrate. Controlul cuprinde verificarea conformitii i declaraia final.

Tehnicile utilizate pentru a determina performana unei metode includ una saumai multe din urmtoarele:- Etalonarea(a se vedea definitia VIM) folosind etaloane sau materiale de

referin certificate cu trasabilitate documentat;- compararea rezultatelor obinute cu metode diferite;- comparri interlaboratoare / scheme de ncercare de competen (control

extern);- evaluarea sistematic a factorilor care influeneaz rezultatele ncercrii;- estimarea incertitudinii de msurare

5.1. CONDITIILE IN CARE TREBUIE SA SE VERIFICE ADECVAREA LA SCOPA METODELOR

5.1.1. Cnd se realizeaz validarea metodei

Un laborator trebuie sa valideze o metoda de lucru atunci cand este necesar sase stabilesca daca parametrii de performanta ai acesteia sunt adecvati pentrurezolvarea problemelor analitice urmarite, cum ar fi:

- atunci cand laboratorul introduce in lucru o metoda pe care nu a mai utilizat-oin trecut

- atunci cand trebuie implementate imbunatatiri ale metodei ca urmare aintroducerii de imbunatatiri de catre producatorul reactivulului, a schimbariiechipamentului, a schimbarii producatorului reactivilor etc.

- atunci cand metoda este extinsa pentru a fi utilizata si pentru un alt scop decatcel de pana in prezent.

- atunci cand rezultatele controlului de calitate indica o modificare aperformantelor metodei

5.1.2. Cand se realizeaza verificarea adecvarii metodeiMetodele si procedurile utilizate trebuie verificate ca produc rezultatesatisfacatoare pentru analize medicale. O evaluare a procedurilor de catre sefullaboratorului sau persoana desemnata trebuie facuta initial si la intervale definirede timp (in mod normal o data pe an).

5.1.3. Stabilirea gradului de extindere al verificariiGradul de extindere al validarii trebuie sa tina cont de:

Ediia din 10.03.2014 Pag. 3/9

RENAR Anexa nr. 1 RS-1.3 LM.2

- relevanta parametrilor evaluati pentru utilizarea intentionata- relevanta parametrilor evaluati pentru a satisface cerintele clientului - natura modificarilor aduse atunci cand se implementeaza imbunatatiri ale

metodei- natura diferentelor atunci cand se compara metode diferite, echipamente

diferite etc.

Chiar si atunci cand se introduc in lucru metode standardizate sau publicate inliteratura de specialitate, este necesara o verificare pentru a stabili modul in carelaboratorul reuseste sa obtina performanta indicata in referential (standard,literatura, specificatiile producatorului date in prospectul de lucru etc.)

Validarea trebuie sa fie un echilibru intre costuri, riscuri si posibilitati tehnice.

5.1.4. Condiiile tehnice n care se realizeaz verificarea adecvarii la scop ametodei

Verificarea metodei trebuie s se realizeze n urmtoarele condiii:

1) Responsabilul activitatii trebuie sa fie o persoana competenta

2) Conditiile de mediu cerute de specificatiile metode (ex. specificatiile date deproducatorul echipamentului, reactivilor, literatura de specialitate) trebuie safie satisfacute

3) Echipamentul de msurare trebuie sa fie in buna stare de functionare

4) Reactivii utilizati sunt adecvati lucrului cu echipamentul care urmeaza a fiutilizat si sunt in termen de valabilitate

5) Materialele de referinta / materialele de referinta certificate utilizate trebuie safie adecvate metodei care urmeaza a fi verificate (ex. tabelele de valori aleconcentratiilor analitilor serului de control intern au valori specifice analizorului siprincipiului chimic ce urmeaza a fi utilizate) si trebuie sa fie in termen devalabilitate.

5.1.5. RESPONSABILITILE LABORATORULUILaboratoarele trebuie s:a) defineasca specificatii clare a a parametrilor de performan si eficien pentru proceduri, echipamente i materiale.b) asigure de competen a personalului implicat n validarea i verificarea procedurilor i echipamentelorc) evalueze critic, acolo unde este necesar, cu expert extern, c orice informa ie furnizata, necesara verificarii, este de incredere si ca au fost efectuate activitati care stabilesc ca procedurile, echipamentele i materialele indeplinesc cerintele de performan cerute. Parametrii care ar putea fi luati n considerare(minim trei) n timpul verificarii includ:- Selectivitatea i specificitatea- Domeniu de masura- Etalonarea msurarilor care au un impact asupra rezultatelor

Ediia din 10.03.2014 Pag. 4/9

RENAR Anexa nr. 1 RS-1.3 LM.2

- Trasabilitatea msurrilor sau a rezultatelor - Bias (eroare de justete)- Liniaritate- Limita de detec ie / limita de cuantificare- Robuste e - Interferen e i efecte de memorie - Fidelitate- Rate de fals negative si fals pozitived) procure echipamente si materiale cu cerinte de performan validate acceptabil, care s rspund nevoilor analitice i de examinaree) verifice ca echipamentul, odat instalat, indeplineste caracteristicile de performan cerute de laborator ( i unde este cazul declaratiile productorului) i s furnizeze dovezi obiective ale modului n care acestea au fost efectuate nainte de utilizare. f) dac procedurile sau echipamentele sunt utilizate in afara scopului intentionat trebuie sa specifice ca acestea au fost validate scopului pentru utilizarea propus.g) sa defineasca criterii de adecvare la scopOdata validata i verificata performan a procedurilor si echipamentelor i materialelor, laboratoarele trebuie in mod continuu :-sa ntreprind in mod periodic i adecvat controlul intern al calit ii -sa realizeze in mod periodic i adecvat evaluarea externa a calitatii (control extern) sau n cazul n care acesta nu este disponibil, sa realizeze activitati alternative de evaluare a performan ei si eficien ei -sa asigure in mod continuu competen a personalului care utilizeaza procedurile de lucru i echipamentele.

5.1.6 ROLUL FURNIZORULUI PRODUCTORILOR DE ECHIPAMENTE IMATERIALE

Furnizorii / producatorii de echipamente i materiale trebuie s furnizeze:-O declara ie precis privind utilizarea intentionata a echipamentelor i materialelor-O declara ie precis cu privire la caracteristicile de performan ale echipamentelor i materialelor cnd sunt utilizate pentru scopul propus-O declara ie precis cu privire la intervalele i procedurile recomandate de mentenan a, cur are, etalonare, cat i verificrile de performan al echipamentelor, precum i recomandri cu privire la etaloanele sau materialelor de referin potrivite pentru etalonare.-Furnizarea de informa ii de validare care sa demonstreze ca echipamentele i materialele indeplinesc caracteristicele de performan adecvate directivei IVD siscopului intentionat. -Furnizarea unei documentatii tehnice care sa includa toti parametrii necesari verificarii adecvarii la scop, de exemplu conditii pentru amplasare si conditii de mediu pentru utiizare.Acesta include, de exemplu validarea oricrei functii de calcul automate efectuatede softul de calculator integrat.-Furnizarea de ghiduri ale utilizatorului, inclusiv, de exemplu, pentru condi iile de mediu pentru echipamente i stocarea materialelor

6. DESCRIEREA ACTIVITILOR

Ediia din 10.03.2014 Pag. 5/9

RENAR Anexa nr. 1 RS-1.3 LM.2

6.1 Parametrii validrii

Informatiile folosite pentru a valida metoda pot fi obtinute prin testari in laboratorsau din alte surse (informatii date de producatorul reactivilor/echipamentului,literatura de specialitate, standarde de metode etc.)

Pot fi evaluati, in functie scopul validarii, urmtorii parametrii:- limita detectie- limitele domeniului de masurare- fidelitatea (repetabilitate/reproductibilitate)- exactitate- incertitudinea de msurare- robustetea metodei- sensibilitatea- specificitatea

n cazul metodelor calitative trebuie evaluat cel puin sensibilitatea ispecificitatea pentru exactitatea diagnosticului precum i fidelitatea.

n cazul metodelor cantitative trebuie evaluate cel puin justeea i fidelitatea,incertitudinea de msurare, limita de detecie, limita de cuantificare(unde esteaplicabil), limitele domeniului de msurare, robusteea i linearitateaIn cazul metodelor automate se va evalua si efectul de memorie (carry over)

6.2 Modaliti de evaluare a unor parametri de performan:

6.2.1 Limita minima de detectie Laboratorul trebuie sa aiba proceduri documentate pentru evaluarea limitei dedetecie pentru utilizare la verificarea adecvarii la scop, in functie de metodautilizata.

6.2.2 Limitele de msurareLimitele de msurare sunt :

a) Limita minima de cuantificare cea mai mica concentratie de analit, diferita de zero, care poate fi determinata cu un nivel acceptabil al repetabilitatii si al exactitii.Aceasta limita se determina prin testarea mai multor probe preparate cu concentratii mici (ex. dilutii diferite ale unui ser de calibrare), apropiate de limita minima de masurare specificata de producatorul kitului de reactivi. Fiecare proba este testata de minim 10 ori si se calculeaza pentru fiecare valoarea medie si abaterea standard.Se considera ca limita minima de masurare proba cu cea mai mica concentratie sipentru care abaterea standard are o valoare acceptabila.

Observaii:1. Daca limita minima a curbei de etalonare este mai mare decat limita minima

de masurare, atunci trebuie acordata atentie modului in care se realizeaza extrapolarea. In acest caz, daca se utilizeaza un analizor automat, atunci

Ediia din 10.03.2014 Pag. 6/9

RENAR Anexa nr. 1 RS-1.3 LM.2

limita minima de cuantificare pe care o poate obtine laboratorul este data de limita minima a curbei de etalonare.

2. Daca limita minima a curbei de etalonare este data de valoarea 0 aconcentratiei, atunci limita minima de masurare a analitului va fi foarte probabilmai mare decat 0 si trebuie determinata de laborator ca mai sus, dacaaceasta limita este relevanta din punct de vedere clinic (exemplu: esterelevant sa se cunoasca limita minima de detectie in cazul markerilor dediagnostic post operator cum sunt markerii tumorali sau markerii de rejectie atransplantului)

3. Pentru determinarile calitative, limita minima de detectie este de exempluvaloarea cut-off, care este indicata in prospectul kitului de reactiv

b) Limita maxim de msurare cea mai mare concentratie de analit carepoate fi determinata fara dilua proba

Observaii :1) In cazul in care curba de etalonare a analizorului este liniara, atunci

limita maxima de masurare este egala cu limita de liniaritate(specificata de producatorul kit-ului reactivi).

2) In cazul in care curba de etalonare nu este liniara (ex. determinariimunologice), atunci atunci trebuie acordata atentie modului in care serealizeaza extrapolarea. In acest caz, daca se utilizeaza un analizorautomat, atunci limita maxima de masurare pe care o poate obtinelaboratorul este data de limita maxima a curbei de etalonare.

Not:Laboratorul trebuie sa arate ca domeniul su de msurare include domeniul dereferinta biologic (domeniul de valori normale) si acopera valorile patologicecorespunzatoare populatiei de pacienti care se adreseaza laboratorului in modobisnuit.

6.2.3 Fidelitate Laboratorul trebuie sa stabileasca repetabilitatea sireproductibilitatea pe materiale de referinta (pentru controlul intern) cu valoricunoscute ale concentratiei analitilor si pe probe de pacienti - atat probe cu valorinormale, cat si probe cu valori patologice

a) Pentru stabilirea repetabilitatii (intra-determinare): laboratorul masoara maimulte replici ale unei pool de seruri sau material de referin, una dupa alta, inaceleasi conditii, cu acelasi echipament, reactivi, operator, intr-un interval de timpfoarte scurt si va estima abaterea standard.

NOTAIn cazul metodelor cantitative se vor efectua minim 10 masurari in conditii derepetabilitate. Pentru analize care necesita o durata mare de timp se acceptareducerea numarului de replici, care, insa, sa nu conduca la o scadere a exactitatiide masurare.

Ediia din 10.03.2014 Pag. 7/9

RENAR Anexa nr. 1 RS-1.3 LM.2

Abaterea standard obtinuta de laborator trebuie sa fie mai mica sau egala cu ceaspecificata de producatorul kitului de reactivi sau al echipamentului

b) Pentru stabilirea reproductibilitatii intralaborator- laboratorul masoara maimulte replici (cu respectarea notei de mai sus) ale unui pool de seruri saumaterial de referin, in aceleasi conditii, cu acelasi echipament, reactivi,operator, in zile diferite si va estima abaterea standard

Abaterea standard obtinuta de laborator trebuie sa fie mai mica sau egala decat ceaspecificata de producatorul kitului de reactivi, al echipamentului, materialului dereferinta(dupa caz).

6.2.4 Exactitate

Laboratorul trebuie sa-si stabileasca exactitatea pe materiale de referinta certificatecu valori cunoscute ale concentratiei analitilor, atat pe probe cu valori normale, cat sipe probe cu valori patologice

a) Bias (eroare de justete): laboratorul masoara mai multe replici ale materialuluide referinta, in aceleasi conditii, cu acelasi echipament, reactivi, operator, in zilediferite, estimeaza valoarea medie a biasului.

Aceasta marime trebuie sa fie mai mica sau egala cu valoarea permisa specificatade producatorul reactivilor sau analizorului.

b) Prin participari la comparari interlaboratoare, laboratorul trebuie saidentifice care este abaterea rezultatului pe care il obtine fata de valoarea cu careeste comparat. Din analiza rezultatelor la comparari interlaboratore, laboratorul vastabili daca perfomanta sa in comparatie cu alte laboratoare este acceptabila.

6.2.5. Incertitudinea de masurare

Laboratorul trebuie sa identifice pentru fiecare masurand sursele de incertitudinesemnificative si sa aiba procedura de evaluare a incertitudinii pentru fiecaremasurand in parte. Masurandul este definit de urmatorii parametrii:-marimea (concentratie masica, concentratie molara, concentratie catalitica,concentratie arbitrara in cantitate de substanta, conform procedurii ... OMS)-analitul (de exemplu proteina, ioni de Na, colesterol, ASO, hemoglobina, numarde eritrocite, etc)-sistemul in care se gaseste (ser, urina, sange venos, fluid pleural, lichid cefalo-rahidian)-unitatea de masura( mM/L; g/L; nkat/L; UI /L )-procedura de masurareBugetul de incertitudine trebuie sa ia in considerare atat factorii preanalitici cat siprocesul de masurare. Variabilitatea biologica, inter-indivizi (eroarea maximatolerata) poate fi declarata separat.

6.2.6. Robusteea metodei

Ediia din 10.03.2014 Pag. 8/9

RENAR Anexa nr. 1 RS-1.3 LM.2

Laboratorul trebuie sa identifice factorii a caror variatie ar putea afecta rezultatulmasurarii.Pentru fiecare din acesti factori se investigheaza efectul variatiei deliberate afactorului asupra repetabilitatii si exactitatii.

6.2.7. Raportul de verificareRaportul de verificare trebuie sa contina urmatoarele:

- prezentarea conditiilor in care a fost realizata verificarea (data, responsabil -competenta, echipamente certificat etalonare, reactivi, calibratori, materialede referinta utilizate loturi, termene de valabilitate, conditii de mediu, etc)

- prezentarea cerintelor (de adecvare la scop si de performanta) pe care trebuiesa le satisfaca metoda

- prezentarea rezultatelor obtinute in urma testelor efectuate de laborator (depreferat sub forma tabelara)

- concluzii cu privire la satisfacerea fiecareia dintre cerinte

- o declaratie de adecvare la scop

Ediia din 10.03.2014 Pag. 9/9