Celulele sanguine evideniate prin metoda Maz-Grunwald-Giemsa, sunt:

CAPIT. VI

ESUTUL SANGVINSngele sau esutul sanguin este un esut special al organismului, cu origine n mezodermul sacului vitelin extraembrionar, n care eritrocitele (globulele roii) se formeaz ncepnd cu cea de-a treia sptmn de gestaie (la specia uman). Ulterior (n cel de-al doilea trimestru al gestaiei), ficatul fetal i splina devin organele hematopoietice principale, urmate de mduva osoas fetal.

Factorii care induc formarea mezodermului i a esutului hematopoietic sunt membri ai superfamiliei factorilor de cretere i familiei factorului de cretere fibroblastic.

Formarea eritrocitelor i a altor celule sangvine n sacul vitelin, n splachnopleura (mezodermul) para aortic, n regiunea gonadelor primitive, a esutului mezonefrotic i ficat este necesar din cauza dezvoltrii relativ ncete a sistemului osos i a disponibilitii limitate a cavitilor sale, care pot servi drept medii propice pentru hematopoieza definitiv.

Sngele, esutul lichid al organismului, este format din elemente celulare figurate (globule albe, globule roii i trombocite) suspendate ntr-un lichid transparent, uor glbui, numit plasm.

n mod normal, la aduli, volumul de snge este de 4,5 6 litri, din care 55% reprezint plasm, 45% eritrocite (hematocrit) i 1% leucocite i trombocite (plachete sangvine).

Funciile sngelui sunt numeroase i complexe, implicnd nu numai elementele figurate celulare ci i variatele substane dizolvate n plasm i care reflect activitile metabolice ale esuturilor, conectate prin circulaia sangvin. Dintre principalele funcii amintim:

- transportul oxigenului de la inim la esuturi i a bioxidului de carbon i produilor azotai de la esuturi spre pulmoni i rinichi;

- transportul nutrienilor procesai de ctre intestin i ficat;

- reglarea temperaturii corpului, pH-ului, electroliilor, nivelului de glucoz i colesterol;

- reprezint mediul trofic de maturizare i vehiculare a celulelor sangvine;

- meninerea volumului de lichid vascular;

- protecia mpotriva infeciilor i prevenirea pierderilor de snge n urma accidentelor.

Plasma sangvin, componenta lichid a sngelui, reprezint 5% din greutatea corpului i conine cca. 90% ap, iar restul de 10% sunt reprezentate de diferite substane, n principal proteine: albumine, globuline, fibrinogen (proteina de coagulare), protein-enzime, care intervin n metabolism. n cantiti mai mici, plasma conine gaze respiratorii, nutrieni organici, metabolii, electrolii, vitamine, hormoni.

Proteinele plasmatice intervin n reglarea volumului sanguin, n meninerea balanelor lichidelor organismului i contribuie la meninerea vscozitii sngelui. Ele exercit o for de cca. 25 mmHg (presiune oncotic) asupra peretelui capilar, care permite apei s intre n snge la acest nivel. Unele proteine plasmatice sunt transportori ai unor hormoni, cum sunt hormonii tiroidieni, gonadali, corticosuprarenalieni. n unele boli genetice pot lipsi gammaglobulinele, cu rezisten sczut la infecii sau fibrinogenul, cu defecte n coagularea sngelui.

n cantitate redus, plasma sangvin conine lipide, asociate cu proteinele sub form de lipoproteine, glucoz, precum i sruri anorganice (0,9%).

6.1. Celulele sangvine

Pe frotiurile de snge colorate prin metoda May-Grunwald-Giemsa pot fi identificate trei tipuri majore de celule:

- eritrocitele (globulele roii);

- leucocitele (globulele albe);

- trombocitele (plachetele sanguine).

6.1.1. Eritrocitele

Eritrocitele (gr. erythros = rou; kytos = celul), hematiile sau globulele roii sunt celulele sangvine cele mai abundente (99%), urmate de trombocite i apoi de leucocite. Ele sunt celule anucleate la mamifere, iar la restul vertebratelor sunt nucleate.

La mamifere, n mod normal, forma eritrocitului este sferic (vzut din fa) i de disc biconcav (privit din profil), cu zona central mai subire dect periferia, form care faciliteaz saturarea sa cu oxigen, oferind totodat i o suprafa mai mare a schimburilor cu plasma sangvin.

La psri i peti, eritrocitele au form elipsoidal, cu nucleu oval, colorat n albastru.

n anumite situaii, sub aciunea unor factori fizico-chimici sau patologici se produc modificri de form ale eritrocitelor i apar n sngele circulant alte tipuri de eritrocite, ca de exemplu: sferocite, echinocite (hematii ce prezint pe suprafaa lor prelungiri de dimensiuni egale asemntoare unor epi, localizate echidistant), stomatocite (hematii rotunde ce prezint o nfundtur ca o gur-stom), drepanocite (hematii cu aspect de secer), etc.

12

34

56

78

Fig.62a.Celule sangvine (col. Pappenheim) 1. eritrocite i trombocite cine; 2. eritrocite i trombocite pasre; 3. limfocit mic cine; 4. limfocit mare cine; 5 6. polimorfonuclear neutrofil om; 8. polimorfonuclear pseudoeozinofil pasre; 9. polimorfonuclear eozinofil om (Smollich, A. i colab., 1992)

12

34

5

Fig. 62b. Celule sangvine (col. Pappenheim). 1. polimorfonuclear eozinofil cal; 2. polimorfonuclear bazofil om; 3. polimorfonuclear bazofil pasre; 4 -5. monocit cal, cine (Smollich, A. i colab., 1992)

Dimensiunile eritrocitelor sunt variabile n funcie de specie, individ sau, la acelai individ, n raport cu condiiile fiziologice sau patologice. Astfel, la mamifere, eritrocitele au dimensiuni cuprinse ntre 4-7,5 iar la psri i peti ntre 7,5-12,5 .

Variaiile de diametru eritrocitar poart denumirea de anizocitoz. Astfel, creterea diametrului eritrocitar determin apariia macrocitelor iar scderea diametrului determin apariia microcitelor. Ex. cele mai mari eritrocite megalocite - apar n anemia pernicioas, iar cele mai mici n anemia feripriv.

Numrul eritrocitelor n sngele periferic este de aproximativ 5 milioane / mm3 la sexul mascul i de cca. 4,5 milioane / mm3la cel femel. Numrul variaz ns de la o specie la alta, iar n cadrul aceleiai specii, variaz n raport cu sexul, vrsta, precum i cu anumite condiii fiziologice i patologice. Aceste variaii se pot manifesta fie prin creterea, fie prin scderea numrului lor.

Creterea numrului de eritrocite poarte denumirea de poliglobulie (n stri patologice) sau eritrocitoz (n stri fiziologice normale, ca de exemplu eritrocitoza de altitudine, care se manifest la altitudini mai mari de 3000 m). De asemenea, eritrocitoza fiziologic se ntlnete la nou nscut (cca. 6 7 milioane / mm3 ), apoi scade dup natere i ajunge la numrul existent la adult. Scderea numrului de eritrocite poart numele de eritropenie (n stri fiziologice normale, ca de exemplu la organismele mbtrnite) sau anemie (n stri patologice).

Eritrocitele se formeaz n mduva roie hematogen din areolele oaselor spongioase i parial n splin, trecnd prin mai multe stadii, care mpreun, alctuiesc seria eritroid, al crei stadiu final este globulul rou din sngele circulant.

Globulul rou este o celul ultraspecializat n transportul gazelor (al O2 de la pulmoni la esuturi i al CO2 de la esuturi la pulmon), care, pe msura diferenierii i pierde nucleul i implicit capacitatea de a se nmuli. El este constituit numai din membran i citoplasm.

Absena nucleului n eritrocitele mamiferelor constituie o adaptare la funcia pe care o ndeplinesc aceste celule, permind acumularea unei mari cantiti de hemoglobin, cromoprotein constituit din proteina denumit globin i din grupul prostetic hem.

n molecula hemului se gsete fier, cu rol esenial n legarea oxigenului molecular (O2) ce urmeaz s fie transportat.

Membrana eritrocitului a constituit obiectul unor cercetri intense, deoarece, prin hemoliza eritrocitului, ea i conserv att organizarea, ct i cea mai mare parte a funciilor sale. Ea este organizat dup tipul unitar de membrane celulare i are n constituia sa proteine (50%), lipide (42 43%) i carbohidrai (7 8%).

Proteinele din membrana eritrocitar au o compoziie n aminoacizi asemntoare celor din alte membrane, ns, ele au un procent mai ridicat de reziduuri acide (21%), fa de cele bazice (12%). Proteinele structurale i enzimatice sunt dispuse asimetric pe cele dou fee ale membranei. Astfel, pe faa extern a membranei eritrocitului sunt localizate enzime ca acetilcolinesteraza, nicotinadenindinucleotidaza (NAD-aza), precum i proteine speciale antigenice.

Pe faa intern a membranei eritrocitare sunt localizate enzime implicate n metabolismul celular (ex. ATP aza, proteinkinaza, NADH diaforaza, gliceraldehid 3 dehidrogenaza).

De asemenea, pe faa intern, membrana eritrocitar are ataat o reea dens de proteine citoscheletale (spectrina, actina, miozina, ankirina), care confer membranei o mare rezisten i flexibilitate, astfel nct ele i pot modifica forma traversnd capilare mult mai subiri dect diametrul lor. Eritrocitele deformate sau mbtrnite, care nu mai prezint aceast flexibilitate, sunt imobilizate n capilarele splinei (subiri de cca. 3) i sunt ingerate de macrofage. Aceast rezisten este conferit de interaciunea proteinelor membranare integrale, cu elementele proteice citoscheletale.

Lipidele din membrana eritrocitului sunt reprezentate de fosfolipide, colesterol i glicolipide. Raportul colesterol-fosfolipide este deosebit de important pentru meninerea fluiditii membranei, n vederea bunei funcionri a celulei.

Carbohidraii sunt localizai pe faa extern a membranei i sunt reprezentai de lanurile oligozaharidice ale glicolipidelor i glicoproteinelor i au calitatea de a interaciona cu anticorpi, virui i alte molecule. Cel mai bine reprezentat dintre carbohidraii de suprafa este acidul sialic (acidul N acetil neuraminic), care confer ncrctura negativ a suprafeei eritrocitului.

Membrana eritrocitului prezint pe suprafaa sa extern proteine specializate (antigeni) numii aglutinogeni, dup a cror prezen sau absen se pot identifica grupele sanguine. Cei mai importani aglutinogeni sunt tipul A i tipul B, care formeaz baza sistemului ABO. Aflarea grupei sangvine se impune ntotdeauna naintea unei transfuzii de snge.

Dup prezena sau absena aglutinogenilor pe suprafaa membranei eritrocitare, indivizii se mpart n patru grupe sangvine: A, B, AB i O.

Anticorpii aglutinogeni se numesc aglutinine. Unii indivizi cu aglutinogen A pot avea i un aglutinogen A1, astfel c grupul sangvin A este mprit n dou clase: A1 (cu aglutinogenii A i A1) i A2 (cu un singur aglutinogen A). n consecin, indivizii pot fi inclui n 6 grupe sangvine n loc de 4, respectiv B, O, A1, A2, A1B i A2B.

Grupul A conine aglutinine anti-B, grupul B conine aglutinine anti-A, grupul O conine aglutinine anti-A i anti-B, iar grupul AB nu conine aglutinine circulante.

Indivizii din grupul O sunt cunoscui ca fiind donatori universali, iar cei din grupul AB sunt primitori universali.

Recunoaterea complexelor antigenice i a grupelor sangvine sunt vitale n transfuziile de snge.

Frecvena grupelor ABO variaz n diferite populaii. Astfel, la caucazieni aproape jumtate din populaie are grupa O (nu prezint antigenele A i B, nici aglutinogene), aproximativ 40% au grupa A , 10% au grupa B, iar 3 4% au grupa AB.

Pe suprafaa extern a membranei eritrocitare s-a identificat i factorul Rh (evideniat prima dat la maimuele rhesus), care cuprinde o gam de antigene eritrocitare, cel mai important din punct de vedere clinic fiind antigenul D. El apare la cca. 85% dintre indivizi, numii Rh-pozitivi (Rh+). Restul sunt Rh-negativi (Rh-).

Transfuzia de snge Rh+ la un receptor Rh- nu este periculoas, dei anticorpii mpotriva sngelui Rh+ sunt formai. O transfuzie ulterioar, similar (poate dup cteva luni) poate induce mai trziu o reacie, odat ce anticorpii nou-formai aglutineaz eritrocitele Rh+.

Aspecte similare apar la femeile gravide Rh-, care poart fetui Rh+. Prima sarcin este de obicei lipsit de evenimente, dei n circulaia matern ajung mici cantiti de snge fetal i se formeaz anticorpi anti-Rh. Dac la a doua sarcin apare un fetus Rh+, anticorpii mamei trec prin placent la fetus distrugndu-i eritrocitele, boal numit boala hemolitic a nou-nscutului , asociat cu anemie i hipoxie, putnd fi fatal.

Funciile eritrocitului

Eritrocitele sunt asemenea unor saci gomflabili, care prin coninutul ridicat n hemoglobin intervin n transportul gazelor, respectiv a oxigenului de la pulmoni spre esuturi i a bioxidului de carbon de la esuturi ctre pulmoni.

Atunci cnd oxigenul de la pulmoni difuzeaz n snge i apoi n eritrocite, se combin reversibil cu hemoglobina, pentru a forma oxihemoglobina, de o culoare caracteristic rou deschis.

Bioxidul de carbon preluat din esuturi este n proporie de 70% dizolvat i transportat de plasm, iar o parte din acesta este ncrcat n eritrocite prin reacie cu fraciunea globinic a hemoglobinei, rezultnd astfel carbaminohemoglobina.Cu unele gaze ca oxidul de carbon, hemoglobina realizeaz legturi ireversibile carboxihemoglobina deosebit de toxic

Durata de via a eritrocitelor este n medie de 120-180 zile.

Eritrocitele mbtrnite sunt distruse de macrofage n principal n splin, dar i n ficat sau mduva osoas. Hemoglobina este degradat cu producere de globin i hem. Globina contribuie prin aminoacizii componeni la metabolismul general. Fierul grupului hem este preluat i reciclat pentru sinteza unor noi molecule de hemoglobin, sau este stocat n ficat. Fraciunea porfirinic a hemului este convertit n bilirubin, procesat n ficat i secretat n bil.

Anemia apare atunci cnd concentraia de hemoglobin este sub valoarea normal asociat vrstei i sexului individului i este un simptom al unei tulburri n care capacitatea de transport a oxigenului este anormal de mic. Ea poate fi datorat pierderilor excesive de snge, supravieuirea mult redus a eritrocitelor, scderea funciei eritrocitare, nutriie inadecvat sau volum plasmatic crescut.

Anemia prin deficien de fier este cea mai obinuit anormalitate a sngelui i probabil cea mai ntlnit tulburare non-infecioas din lume. Aprovizionarea neadecvat cu fier poate aprea datorit unei diete neadecvate, malabsorbiei, hemoragiilor cronice i excesive (gastrointestinale, ocazional uterine).

n procesul de eritropoiez, mduva osoas necesit o serie de vitamine precum acidul folic i vitamina B12, pentru sinteza corespunztoare a ADN-ului. n anemia pernicioas, la nivelul intestinului nu se absoarbe suficient vitamina B12, ceea ce conduce la apariia de celule mrite n linia eritroblastic i n snge.

Anemiile ereditare n care se sintetizeaz anormal hemoglobina, pot fi asociate cu boli severe (nu neaprat consecin direct a anemiei), iar transplantul de mduv osoas poate fi un tratament eficient. Variantele anormale ale structurii hemoglobinei (hemoglobinopatiile) includ anemiile cu celule n form de secer, n timp ce stagnarea vitezei de sintez a hemoglobinei constituie sindromul talasemiei. n primul caz, celulele transport puin oxigen i au o via scurt aprnd astfel anemia. n tulburrile talasemice, unul din lanurile globinice ale hemoglobinei este absent sau inadecvat produs, iar eritrocitele au dimensiuni mici, aspect pal i o via scurt.

6.1.2. Leucocitele

Leucocitele (gr. leukos = alb; kytos = celul) sau globulele albe se gsesc n sngele circulant n numr de cca. 4000 10000 / ml, la natere numrul lor fiind aproape dublu (15000 25000 / ml). Ele se clasific n dou clase majore: granulocite (prezint granule citoplasmatice) sau polimorfonucleare (datorit nucleilor neregulai multilobulari) i agranulocite (nu prezint granule proieminent vizibile n citoplasm) sau mononucleare (prezint nucleu unic, nesegmentat).

Granulocitele se clasific n trei clase, n funcie de afinitatea tinctorial a granulaiunilor specifice: neutrofile, eozinofile i bazofile. Aceste celule sunt implicate n fagocitoz i n inflamaii.

Agranulocitele sunt de dou tipuri: limfocite i monocite. Limfocitele sunt elemente cheie n imunitatea umoral i cea mediat celular, iar monocitele sunt surse de celule fagocitare.

Proporia diferitelor tipuri de leucocite din sngele circulant realizeaz formula leucocitar, care n mod normal se prezint astfel:

- neutrofile 40 75%;

- eozinofile 1 5%

- bazofile - 0,1%

- limfocite - 20 45%

- monocite - 2 10%

Numrul leucocitelor ca i procentul lor n sngele circulant sufer modificri fiziologice sau patologice. Creterea numrului de leucocite poart denumirea de leucocitoz, iar scderea numrului de leucocite se numete leucopenie. n general exist modificri numerice n funcie de vrst, sex, starea de activitate a organismului etc. Astfel, la tineret i aduli numrul leucocitelor este mai mare comparativ cu indivizii btrni. De asemenea, n raport cu sexul individului, la sexul femel numrul granulocitelor este mai mare comparativ cu sexul mascul. Exist i variaii diurne ale numrului de leucocite, cel mai mic numr de leucocite nregistrndu-se dimineaa dup repaus. n efort fizic, stres sau postprandial, n perioada de sarcin i la fumtori are loc de asemenea creterea numrului de leucocite, cu peste 30%.

Cnd leucocitoza se produce printr-o nmulire anarhic a leucocitelor se instaleaz leucemia, caracterizat prin prezena n circulaie a unor forme imature de leucocite.

Leucemiile apar o dat cu neoplasmele medulare osoase n care se formeaz multe globule albe anormale, care ptrund n circulaie i se infiltreaz n esuturi. Celulele leucemice sunt produse de celulele stem hemopietice pluripotente (HSC) sau de celulele (unitile) formatoare de colonii (CFU) transformate, care prolifereaz incontrolabil pentru a forma clone. Leucemiile sunt asociate cu un numr redus de eritrocite (anemie), globule albe cu funcionalitate redus (infecii) i un numr mic de plachete (tulburri de sngerare).

Dei etiologia leucemiei nu este bine neleas, printre factorii etiologici sunt radiaiile (ex. radiaiile nucleare), substanele chimice (benzenul, agenii alchilani), viruii (virusul leucemiei limfocitelor T umane), tulburri genetice, factori nucleari.

Leucocitele au capacitatea de diapedez i micare, mecanisme prin care ele traverseaz endoteliul vaselor i ajung n esutul conjunctiv n care rmn de la cteva zile, pn la cca 60-80 zile (monocitele). n esutul conjunctiv, prin micri chemotactice, leucocitele migreaz spre antigene sau spre suprafaa mucoaselor, unde i ndeplinesc funciile.

6.1.2.1. Granulocitele (Leucocitele polimorfonucleare)

6.1.2.1.1. Neutrofilele

Neutrofilele reprezint 40 75% din totalul leucocitelor i sunt celule efector ale sistemului de aprare. Ele nglobeaz, fagociteaz i ucid bacterii sau celule moarte sau deteriorate, de obicei la locul inflamrii esutului, de care sunt atrase chemotactic.

Creterea numrului de neutrofile neutrofilie se manifest n stri fiziologice, dar mai ales n stri patologice cu infecii acute. Scderea numrului de neutrofile neutropenie se manifest n patologia sngelui, dar i n unele infecii i boli generale ale organismului.

Forma neutrofilelor este sferic n sngele circulant, cu diametrul cuprins ntre 12 - 15. La trecerea din capilar n esutul conjunctiv, neutrofilele iau o form neregulat, prin emiteri i retracii de pseudopode.

Nucleul este segmentat, prezentnd 2 5 lobi nucleari, unii ntre ei prin filamente fine de cromatin. La 1 5% din neutrofilele indivizilor de sex femel, pe unul din lobii nucleari se observ prezena corpusculului Barr sau cromatina sexual (condensarea ntr-un singur bloc a unuia din cei doi cromozomi X n intercinez), care apare la microscop ca o prelungire a lobului nuclear, sub forma bului de tob (drum stick).

Citoplasma este abundent, uor acidofil, colorat n roz palid. Ea conine organite generale, puin dezvoltate i numeroase granulaiuni specifice mici, rspndite n toat masa citoplasmatic, care se coloreaz metacromatic n violet.

Granulaiunile neutrofile sunt de dou tipuri: granule azurofile sau primare i granule specifice sau secundare.

Granulele azurofile (primare), singurele existente n primele etape de formare a leucocitelor n mduva hematogen, se reduc treptat, pe msura diferenierii i maturrii n sngele periferic. Granulele azurofile reprezint forme de lizozomi, bogai n hidrolaze acide, care fuzioneaz cu microbii i/sau cu particulele ingerate pentru a forma fagolizozomi, n cadrul crora inta este degradat sau ucis. Granulele neutrofile conin de asemenea multe alte substane antimicrobiene, precum lizozim, complex enzimatic implicat n hidroliza glicozidelor din peretele bacteriilor (rol bacteriostatic), mieloperoxidaza, care, acionnd asupra apei oxigenate, elibereaz i activeaz O2, devenind bactericide. Granulele specifice (secundare) conin lizozim, lactoferin (complex enzimatic care leag fierul circulant, sustrgndu-l bacteriilor, care astfel nu se mai pot dezvolta intrnd ntr-un ciclu involutiv), fagocitine (cu rol bacteriostatic), fosfataz alcalin, lecitine, cu rol inhibitor asupra dezvoltrii microorganismelor.

Prin utilizarea metodei May-Grnwald-Giemsa, ele se coloreaz n brun.

Postnatal, neutrofilele se formeaz n mduva hematogen dup care trec n sngele periferic, unde rmn 6 8 zile. Dup acest interval, neutrofilele trec n esuturile conjunctive, unde i desfoar activitatea.

Durata lor de via este limitat la 1 2 zile, majoritatea fiind fagocitate de macrofage, un numr redus sunt distruse n sngele circulant sau sunt eliberate prin tractul gastro-intestinal. Astfel, ele trebuie nlocuite n permanen cu altele, produse n esuturile hemopoietice medulare osoase.

Funciile neutrofilului

Funcia neutrofilului este cea de microfagocitoz, fagocitnd particule de dimensiuni mici n special microorganisme patogene (bacterii, virui) sau particule inerte. Ele sunt primele elemente celulare de atac, care ajung n esutul invadat de microbi, fiind i cele mai rapide celule n locomoie, deoarece conin aproximativ 10% actin din totalul proteinelor citoplasmatice.

Deplasarea lor ctre locul de invazie microbian se realizeaz pe baz de stimuli chimici denumii chemotaxine. Acetia sunt reprezentai de diferii metabolii bacterieni (endotoxine), metabolii elaborai de limfocitele sensibilizate, leucotriene, prostaglandine, factori serici (C3 i C5) etc.

Fagocitoza realizat de neutrofile se realizeaz n urmtoarele etape: chemotaxia i motilitatea, opsonizarea, ingestia, degranularea i omorrea intracelular a microorganismelor.

Chemotaxia. Recunoaterea factorilor chemotactici de ctre neutrofile se realizeaz prin intermediul receptorilor specifici, situai pe membrana plasmatic a neutrofilelor. Receptorii de suprafa sunt dispozitive chimice de recunoatere,, care vor lega uniti efectoare ce vor declana sau iniia funcia specific a neutrofilelor.Dup ce factorii chemotactici sunt receptai de neutrofile, aceste celule emit pseudopode, expansiuni membrano-citoplasmatice care conin microfilamente de actin, miozin i microtubuli, elemente care faciliteaz migrarea celulei n esuturi.

Opsonizarea const n nvelirea sau legarea microorganismelor cu opsonine, care s stimuleze motilitatea i chemotactismul neutrofilelor. Principalele opsonine pentru neutrofile sunt anticorpii (IgG) precum i unele componente ale complementului (C3 i C5).

Ingestia i fagocitoza se realizeaz dup ce acestea au fost opsonizate. Fagocitoza este realizat prin pseudopodele emise de neutrofile, ale cror vrfuri fuzioneaz i nchid particula ntr-o vacuol delimitat de o endomembran.

Vacuola endocitat sau fagozomul este mpins ctre centrul celulei cu ajutorul microtubulilor, dup care se unete cu granulele secundare i ulterior cu cele primare. Urmeaz apoi degranularea i eliberarea enzimelor n interiorul fagozomilor, proces soldat cu distrugerea microorganismelor.

Degranularea este un proces activ ce necesit energie, obinut prin glicoliz anaerob.

Dup distrugerea materialului strin ingerat, neutrofilele mor, iar dac participarea lor n reaciile inflamatorii este intens sau prelungit, enzimele lor pot lichefia celulele gazd i materialul strin pentru a forma un reziduu semilichid vscos, numit puroi.

Absena fenomenului de degranulare se poate manifesta la unii indivizi cu defecte genetice, ceea ce atrage dup sine lipsa de reactivitate a acestora la contactul cu microbii, deci rezistena mult mai sczut sau chiar inexistent la infecii a acestor indivizi. Omorrea microorganismelor n interiorul fagolizozomului se poate realiza fie printr-un sistem dependent de oxigen, fie printr-un sistem independent de oxigen.

n sistemul dependent de oxigen este implicat mieloperoxidaza, protein bazic ce leag apa oxigenat de suprafaa microbian.

Sistemul independent de oxigen se realizeaz prin aciunea lizozimului, lactoferinei, proteinelor cationice, histonelor nucleare, eliberate n esuturi dup moartea celulei, cu activitate antimicrobian direct.

Nu toate microorganismele sunt ns rezistente la aciunea microorganismelor, ca de ex. bacilul leprei, bacilul tuberculozei, etc.

6.1.2.1.2. Eozinofilele (acidofilele)

Eozinofilele sunt mult mai reduse numeric comparativ cu neutrofilele, ele reprezentnd cca. 1-5% din totalul leucocitelor circulante.

Att creterea numrului eozinofilelor eozinofilia , ct i scderea numrului eozinopenie - se manifest n stri patologice ale sngelui i organismului (alergii, boli de piele, parazitoze).

Puin mai mari dect neutrofilele (12 - 17), eozinofilele au form rotund i citoplasma uor acidofil, care nglobeaz granulaiuni sferice mari, egale, delimitate de endomembrane i uniform rspndite n citoplasm. Prin coloraia May-Grunwald-Giemsa, ele se coloreaz n rou crmiziu.

Granulele mature prezint n axul longitudinal un cristaloid, format din fosfolipide i acizi grai nesaturai, nconjurat de o zon mai clar, bogat n fosfataz acid i alte hidrolaze acide de tip lizozomial (catepsine, glucuronidaze, arilsulfataza etc.), precum i mieloperoxidaz.

Nucleul este bilobat, mai rar multilobat i se coloreaz n rou-violaceu n coloraia May-Grnwald-Giemsa.

Membrana eozinofilului poate emite pseudopode rare i mici, care intevin n locomoia de tip ameboidal.

Dup formare n mduva hematogen, eozinofilele trec n sngele periferic , unde rmn cteva ore sau zile dup care ptrund n esuturi i se localizeaz n mucoasele tractului digestiv, uterului i vaginului, n piele etc. unde i desfoar activitatea i se distrug.

Funciile eozinofilului

Eozinofilele sunt microfage cu proprieti fagocitare mai reduse dect neutrofilele. Ele intervin n bolile parazitare, au o capacitate limitat de a fagocita bacterii i moduleaz rspunsurile alergice i inflamatorii prin fagocitarea complexelor antigen anticorp.

6.1.2.1.3. Bazofilele

Bazofilele sunt cele mai puin numeroase dintre leucocite, ntlnindu-se n proporie de 0,5-1% din totalul leucocitelor circulante.

Variaiile numerice ale bazofilelor circulante nsoesc de obicei boli ale sngelui sau boli generale ale organismului. La tineret, numrul lor este mai mare.

Bazofilele sunt cele mai mici dintre granulocite, avnd diametrul cuprins ntre 9 - 12.Au form sferic i nucleul incomplet lobat, de form neregulat.

Citoplasma este acidofil i conine granulaiuni sferice, de mrimi i forme variate, care se coloreaz n albastru sau violet i se concentreaz n anumite zone din citoplasm. O parte din aceste granule sunt lizozomi, ns majoritatea pot fi considerate granule specifice care conin histamin, heparin, serotonin i o substan slab reactiv de natur lipidic, probabil din acelai grup cu prostaglandinele.

Membrana bazofilelor este acoperit cu glicocalix i prezint receptori pentru IgE.

Ca i neutrofilele i eozinofilele, bazofilele i au originea n mduva roie hematogen din care sunt eliberate n sngele periferic, unde rmn un timp scurt i apoi trec n esuturi.

Funciile bazofilului

Bazofilele au proprieti fagocitare reduse, ele intervin n strile inflamatorii, de oc, de stres, datorit substanelor coninute n granule specifice, pe care le elibereaz la contactul cu antigenii. Astfel, n reaciile alergice ele sunt activate prin receptorii lor de suprafa, se degranuleaz, iar substanele eliberate cauzeaz reacii tisulare locale, asociate cu rinite, urticarie, astm alergic.

6.1.2.2. Agranulocitele

(Leucocitele mononucleare)6.1.2.2.1. Limfocitele

Limfocitele reprezint 1/3 dintre leucocite, proporia lor de participare n sngele circulant fiind de cca. 25 45%. Creterea numrului de limfocite n sngele periferic limfocitoz se ntlnete n inflamaiile cronice (ex. tuberculoz, sifilis), iar scderea numrului de limfocite limfocitopenie nsoete boli ale sngelui sau boli generale ale organismului.

Dup diametru, limfocitele se clasific n limfocite mici, cu diametrul cuprins ntre 7 - 10 i limfocite cu dimensiuni mijlocii i mari, cu diametrul de 11 16 , ns dimensiunea i morfologia lor nu reprezint clase distincte sau limfocite diferite din perspectiv funcional.

Limfocitele au nucleul rotund i mare, iar citoplasma bazofil este redus la un inel perinuclear, care conine granule azurofile, reduse numeric.

n sngele periferic, limfocitele triesc de la cteva zile la un an, ns exist i limfocite care triesc ntre 5 i 25 ani. Aceast variabilitate a duratei de via se datoreaz posibilitii de circulare i recirculare a acestor celule ntre snge i limf. Astfel, ele prsesc fluxul sangvin traversnd endoteliul vaselor i intr n esuturi diferite, unde i desfoar activitatea, dup care, unele sunt distruse local, altele sunt eliminate la suprafaa mucoaselor digestive sau respiratorii, iar cea mai mare parte sunt fagocitate de macrofagele ganglionilor i foliculilor limfatici.

Dup traversarea unui esut, unele limfocite se acumuleaz n vase limfatice mici, care leag o serie de noduli limfatici n aval, apoi n vase cu diametrul tot mai larg i n final limfocitele ajung n ductul toracic (vasul limfatic principal), care le transport napoi n snge (ciclu care se repet de 2 3 ori). Prin aceast recirculare continu, limfocitele potrivite vin n contact cu antigenul i servete dispersrii limfocitelor activate (T i B) care rezult, spre esuturile limfoide din corp.

Funciile limfocitului

Limfocitele au capacitatea de a recunoate proteinele proprii organismului n care se gsesc (proteine self) de proteinele strine organismului, mpotriva crora limfocitele B acioneaz prin producere de anticorpi, iar limfocitele T prin sintez de limfokine, substane care stimuleaz alte celule n reaciile imune sau produc limfocite citotoxice, care ucid celulele int.

Limfocitele prezint micri de locomoie, la fel de active ca i granulocitele. Ele fagociteaz numai particule mici, care dup ce se prind pe receptorii membranari, sunt transportate ntr-o zon mic a membranei, cu aspect de semicerc, numit cap, iar fenomenul poart denumirea de capping.

Uneori limfocitele se ataeaz de alte celule (epiteliele, macrofage), proces denumit peripolesis, implicat n schimburile de informaii ntre celule. Alteori, limfocitele ptrund temporar n citoplasma altor celule, n care se pot divide, proces denumit emperipolesis.

Din punct de vedere morfofuncional, limfocitele se mpart n dou clase majore:

- limfocite B sau timoindependente

- limfocite T sau timodependente

Limfocitele B sunt responsabile pentru imunitatea umoral i produc anticorpi.

n perioada prenatal, limfocitele B se formeaz cronologic n ficat, splin i mduva hematogen, iar postnatal, n mduva hematogen. Dei un numr mare de limfocite mor rapid dup formarea lor ntr-un esut limfoid central, altele migreaz prin snge la esuturile limfoide periferice: ganglionii limfatici, splina, esutul limfoid asociat tubului digestiv (plcile Peyer, apendicele, amigdalele).

La psri, limfocitele B se formeaz ntr-un organ limfoid asociat intestinului, unic, bursa lui Fabricius.

Funciile limfocitului B.

Limfocitele B realizeaz imunitatea umoral a corpului.

Legarea antigenului la receptorii specifici de pe membrana plasmatic a limfocitului, activeaz celula, transformnd-o ntr-un limfoblast sau imunoblast, productor de imunoglobuline. n procesul de transformare, limfocitul crete n volum i se caracterizeaz printr-un nucleu bogat n eucromatin i nucleoli (24) i citoplasm abundent n care organitele sintezei sunt dezvoltate (reticulul endoplasmatic rugos, complexul Golgi, mitocondriile).

Dup activare, limfocitele B se divid prin mitoze repetate i genereaz clone celulare B. Din acestea, unele imunoblaste se difereniaz n plasmocite, celule care secret imunoglobuline, iar altele se rentorc la forma de limfocit circulant, devenind celule cu memorie, care memoreaz n acizii nucleici primul contact cu antigenii. Astfel, la urmtorul contact cu acelai tip de antigen, rspunsul imun este mai rapid i mai puternic (rspunsul imun secundar).

Activitatea limfocitelor B este stimulat de limfocitele T helper, care produc limfokine stimulatoare i de macrofage. Macrofagele capteaz antigenul pe suprafaa lui sau l fagociteaz, dup care l prelucreaz n citoplasm crescndu-i puterea antigenic (de activare a limfocitelor).

Principalele organe n care se formeaz imunoglobuline de ctre limfocitele B sunt tractul digestiv, respirator, mduva hematogen, splina, zona medular a foliculilor limfatici.

Imunoglobulinele pot aciona n trei feluri:

- prin atac direct asupra agentului invadant, prin urmtoarele mecanisme: aglutinare (determin conglomerarea mai multor antigeni), precipitare (complexul antigen-anticorp devine insolubil ), neutralizare (anticorpii acoper toate poziiile toxice ale unui antigen) i liz (anticorpul atac membrana celular n mai multe puncte, care prin rupere determin distrugerea agentului patogen).

- prin activarea complementului. Complementul este reprezentat printr-un numr de cca. 15 proteine plasmatice, care sunt activate secvenial de complexele antigen anticorp, de la C1` la C9`, sau alternant, de la C3` la C1 i de la C3 ctre C9`. Enzimele activate ale complementului pot distruge apoi agentul patogen prin liz, opsonizare i fagocitoz, neutralizare, aglutinare etc.

Complementul completeaz aciunea anticorpului n procesul de ucidere a celulelor. De fapt, el este mijlocul principal prin care anticorpii apr vertebratele mpotriva majoritii infeciilor bacteriene, iar indivizii care prezint o deficien a uneia dintre componentele centrale ale complementului (C3`) sunt supui la infecii repetate. Pe lng rolul su n liza celular mediat de anticorp, complementul atrage celulele fagocitare la locul infeciei i mrete abilitatea acestor celule de a ingera i distruge microorganismele.

- prin activarea sistemului anafilactic. Astfel,unii anticorpi, n special IgE, prin ataarea la suprafaa bazofilelor i mastocitelor, determin, la contactul cu antigenul, degranularea i eliberarea histaminei, heparinei, enzimelor lizozomiale, produi care dau reacii locale de tip anafilactic.

n concluzie, imunitatea umoral sau imediat este realizat de ctre limfocitele B (plasmocite), care sintetizeaz anticorpi ce trec n snge sau n lichidele extracelulare.

La vertebratele superioare exist 5 clase diferite de imunoglobuline (anticorpi): IgA, IgD, IgE, IgG i IgM.

IgG constituie principala clas a imunoglobulinelor sangvine. Ele sunt produse n cantiti mari n timpul celui de-al doilea rspuns imun. Prin legare la receptorii specifici de pe celulele fagocitare precum macrofagele i leucocitele polimorfonucleare, mrete eficiena cu care aceste celule pot ingera i distruge microorganismele infectante.

Moleculele IgG sunt singurii anticorpi care pot trece de la mam la fetus prin intermediul placentei.

IgG este principala clas de anticorpi secretat n snge n primele etape ale rspunsului imun primar. mpreun cu IgD se afl n cantitatea cea mai mare pe suprafaa limfocitelor B, fiind i cea mai eficient imunoglobulin n fixarea complementului.

IgA este principala clas de anticorpi ntlnii n secreii (lapte, saliv, lacrimi, secreiile respiratorii, intestinale i vaginale).

IgE prezint o afinitate foarte mare pentru membrana mastocitelor i a leucocitelor bazofile din snge. Moleculele de IgE legate servesc n schimb, ca receptori pentru antigeni. Legarea antigenilor la aceti receptori (IgE) declaneaz secreia celular a unei varieti de amine biogene (ex. histamina, serotonina, etc.), responsabile pentru manifestrile clinice ale reaciilor alergice (rinite, urticarii, astm bronic).

Limfocitele T sau timodependente sunt responsabile pentru imunitatea mediat celular. Ele sunt stimulate numai de anumii antigeni i de unele substane mitogene nespecifice (fitohemaglutinina, concavalina).Limfocitele T i au originea n celulele stem, care se localizeaz n perioada fetal n ficat, splin i apoi n mduva hematogen. Unele celule migreaz prin snge din aceste esuturi hemopoietice, n timus, unde prolifereaz i se difereniaz n limfocite T. Deoarece este un loc al producerii de limfocite, timusul este numit i esut limfoid central.

n timus, limfocitele se difereniaz diferit, dup aezarea lor n corticala sau medulara lobulilor timici. Astfel, limfocitele din zona cortical a lobulilor timici, care reprezint cca. 85% din totalul limfocitelor T, se divid rapid i sunt foarte sensibile la liz prin aciunea corticosteroizilor. n schimb, limfocitele T din zona medular, reduse numeric, se divid lent i sunt rezistente la cortizon.

Celulele stem din mduva hematogen, ptrund mai nti n zona cortical, dup care migreaz spre medular, timp n care se difereniaz morfologic i funcional. Limfocitele T difereniate vor migra spre periferie, n organele limfoide secundare.

Diferenierea limfocitelor T este stimulat de hormonii timici, iar completa maturare a lor este marcat de recunoaterea antigenilor majori de histocompatibilitate, la ai cror stimuli, limfocitele T declaneaz procesele de imunitate celular.

Antigenii de histocompatibilitate sunt inclui n dou clase majore: clasa I (complexul major de histocompatibilitate MHC I) din care fac parte o serie de antigeni prezeni pe suprafaa tuturor celulelor nucleate (HLA-A, HLA-B, HLA-C) i clasa II (MHC II), prezeni numai pe suprafaa limfocitelor B, macrofagelor i limfocitelor T activate.

Limfocitele T sunt activate de anumii antigeni, dar i de unele substane mitogene (fitohemaglutinina, concavalina A), proces n urma cruia, limfocitele T vor secreta limfokine. n procesul de activare se formeaz clone de limfocite T, din care unele vor aciona prin producere de limfokine, iar altele vor deveni celule cu memorie circulante.

Atunci cnd limfocitele T sunt stimulate de antigeni, ele se divid i se difereniaz n celule efector activate, care sunt responsabile pentru diferite reacii imune mediate celular. Cel puin trei reacii diferite sunt desfurate de celulele T:

- ucid n mod specific celulele vertebratelor infectate cu virus sau pe cele strine organismului.

- instruiesc limfocitele B sau T s rspund la antigeni i pot activa unele celule non-limfocitare precum macrofagele.

- suprim rspunsurile limfocitelor B sau T specifice.

Aceste reacii diferite sunt desfurate de ctre diferitele subpopulaii de limfocite T:

- Limfocite T ajuttoare (helper) sunt limfocite cu marker T4 acioneaz ca reglatori ai rspunsului imun. Intervin ca stimulatori ai activrii limfocitelor B i T la antigeni.Unele celule T helper rspund la antigen prin secreia unei varieti de substane care activeaz diferite leucocite, inclusiv limfocite. Aceti factori sunt numii limfokine sau, n unele cazuri, interleukine (ntre leucocite). Spre deosebire de anticorpi, ele nu recunosc specific sau nu interacioneaz cu antigenul care induce producerea lor.

Una dintre limfokinele bine studiate este factorul de inhibiie a migrrii macrofagelor (MIF), care activeaz macrofagele din apropiere pentru a deveni mult mai eficiente n fagocitarea i digerarea organismelor invadatoare. O alt funcie a acestei limfokine (aa cum sugereaz i numele) este aceea de a inhiba migrarea macrofagelor. Aceast abilitate a celulelor T de a activa macrofagele este deosebit de important n procesul de aprare mpotriva infeciilor produse de microorganisme care pot supravieui fagocitozei simple de ctre macrofagele neactivate (ex tuberculoza).

O alt limfokin important, secretat de celulele T helper este factorul de cretere al limfocitelor T (interleukina-2). Acesta se leag la receptorii de pe membrana plasmatic a limfocitelor T activate i le stimuleaz proliferarea.

Ali factori sintetizai de limfocitele T:

- Interleukina 3- stimuleaz creterea i diferenierea monocitelor;

- factorul de inhibare leucocitar inhib migrarea neutrofilelor;

- interferoni gamma stimuleaz activitatea citolitic a macrofagelor;

- factorul de stimulare a formrii coloniilor stimuleaz creterea i diferenierea monocitelor n macrofage;

- factorul de activare a fibroblastelor stimuleaz proliferarea fibroblastelor;

- factorul de cretere a limfocitelor B stimuleaz creterea i diferenierea limfocitelor B.

Limfocitele T supresoare (limfocitele cu marker T8) previn activarea limfocitelor B i T la contactul cu antigenul, inhibnd diferenierea i proliferarea imunoblastelor;

Limfocitele citotoxice sau killer (cu markeri T8) au calitatea de a distruge direct celulele strine dup ce au fost activate de ctre antigenii de pe suprafaa acestor celule. Ele realizeaz imunitatea celular responsabil de instalarea hipersensibilitii ntrziate, determin rejecia sau eliminarea alogrefelor (schimb de esuturi ntre indivizii aceleiai specii) i a celulelor tumorale. De asemenea, sunt responsabile de procesele de autoimunitate i de rezistena la unii ageni patogeni.

Limfocitele natural killer (NK) constituie o populaie limfocitar redus, care prezint toxicitate pentru celulele infectate cu virusuri, celulele tumorale, prin absena receptorului specific de antigen. Pot fi activate de citokine (IL2), care determin proliferarea i creterea capacitii citotoxice.

6.1.2.2.2. Monocitele

Monocitele reprezint 2 8% din totalul leucocitelor circulante.

De obicei mult mai mari dect celelalte leucocite (15 - 40), monocitele prezint un nucleu central n form de U sau de potcoav, cu cromatina n blocuri mari, iar citoplasma bazofil conine numeroi lizozomi (granulaiuni azurofile) implicai n degradarea microbilor sau a substanelor strine (resturi celulare etc.).

De asemenea, citoplasma conine i alte organite celulare relativ abundente: reticul endoplasmatic rugos, ribozomi, complex Golgi, vacuole, microtubuli i microfilamente.

Membarana monocitului este de natur lipoproteic, identic altor tipuri de celule, cu glicocalix bine dezvoltat. Ea prezint pe suprafa numeroase microviloziti i emite frecvent pseudopode, formaiuni prin intermediul crora monocitul se deplaseaz, ns cu o vitez mai redus comparativ cu granulocitele. n membrana monocitului, ca i n cea a macrofagului, exist receptori pentru IgG i pentru fraciunea a treia a complementului (C3).

Monocitele se formeaz n mduva roie hematogen dup care trec n sngele circulant, unde rmn cteva ore sau zile (20 60 ore) n funcie de specie i individ. Din compartimentul sanguin, ele migreaz i se stabilesc n esuturi unde se transform n macrofage, realiznd n totalitatea lor sistemul macrofag al organismului. n esuturi, macrofagele au o durat de via lung (luni sau ani), macrofagele mbtrnite fiind fagocitate de macrofagele active.

Funciile monocituluiMacrofagele prezint urmtoarele funcii: fagocitoza, capacitatea de prezentarea a antigenului i funcia de secreie.

FagocitozaMacrofagele fagociteaz particule mari (bacterii, virusuri, complexe antigen-anticorp, resturi celulare sau celule ntregi mbtrnite, corpuri strine) pe care le diger parial prin intermediul enzimelor lizozomiale. Pentru distrugerea particulelor endocitate ele folosesc un sistem generator de ap oxigenat, n care este implicat catalaza. De asemenea, macrofagele au calitatea de a ingera particule mici lichide i solubile (proces numit pinocitoz) sau pot include particule opsonizate cu IgG i IgE prin endocitoz mediat de receptori.

Macrofagul activ (care a fagocitat antigene) se caracterizeaz printr-o serie de modificri structurale: formarea pseudopodelor, creterea numrului de lizozomi, intensificarea metabolismului oxidativ.

Capacitatea de prezentare a antigenului

Macrofagele nglobeaz prin endocitoz antigenul, l proceseaz i apoi l prezint limfocitelor T helper antigen specifice, care au un rol cheie n direcionarea rspunsului imun celular sau umoral (limfocitele T helper activeaz limfocitele B sau T).

Funcia secretorie a macrofagelor

Macrofagele sintetizeaz i secret interleukine pentru stimularea hematopoezei n mduva osoas, hidrolaze acide, lipaze, mieloperoxidaze, metabolii ai acidului arachidonic (prostaglandine, leucotriene), componente ale complementului, factori de coagulare etc.

Macrofagele pot prezenta o serie de caracteristici n funcie de organul n care se afl. Astfel, celulele Kupffer (macrofagele ficatului) se divid numai cnd sunt stimulate de diferii factori chimici sau infecioi. Macrofagele pulmonare (pneumocite), localizate la interfaa aer-esut, se formeaz n mduva hematogen , dar se pot divide i local.

6.1.3. TrombociteleTrombocitele (lat. thrombus = cheag; kytos = celul) sau plachetele sanguine se formeaz n mduva osoas hematogen i n splin, prin fragmentarea megacariocitelor. Aria de activitate a trombocitelor este esutul mieloid, splina i plasma sngelui.

Numrul de trombocite/mm3 de snge este variabil, cu diferene marcante de la o specie la alta i influenat de factori fiziopatologici. n mod normal, numrul de trombocite este cuprins ntre 150000 300000 / mm3 snge. n anumite situaii fizio-patologice are loc creterea numrului de trombocite peste normal, proces numit trombocitoz, sau scderea sub normal a numrului, proces numit trombocitopenie.Trombocitele sunt elemente anucleate la mamifere i nucleate la psri i peti. Ele sunt cele mai mici celule sangvine, avnd diametrul cuprins ntre 2 - 5 la mamifere i 5 8 la psri i peti.

Pe frotiurile sangvine colorate prin metoda May-Grunwald-Giemsa, trombocitele apar formate dintr-o zon central, granular, intens colorat n rou numit granulomer i o zon periferic, omogen, colorat n albastru, numit hialomer.Granulomerul conine 2 3 mitocondrii mici, 2 3 peroxizomi, un numr redus de lizozomi, ribozomi liberi, microvezicule golgiene, reticul endoplasmatic slab dezvoltat i granule dense, care conin adrenalin, serotonin, ioni de calciu.

Hialomerul conine microtubuli, microfilamente i diferite proteine implicate n procesul de coagulare sangvin (ex. trombostenina).

Microtubulii, dispui n citoplasma periferic, sunt implicai n meninerea formei trombocitului.

Microfilamentele (actin, miozin, troponin, tropomiozin, -actinin sunt dispersate n toat citoplasma i sunt responsabile de modificarea formei trombocitului n procesul de secreie i n retracia coagulului sanguin.

Hialomerul conine de asemenea, o serie de enzime (trombochinaze, trombocatalizine, retractozim), care intervin n formarea i retracia cheagului.

Membrana trombocitului are grosimea de cca. 17 20 nm i conine o cantitate mare de glicoproteine, care permit absorbia unor proteine plasmatice (fibrinogen, factorul 8), intervenind astfel n interaciunile dintre trombocite i peretele vascular, precum i n agregarea plachetar.De asemenea, glicoproteinele membranare servesc ca receptori pentru agenii stimulatori sau inhibitori ai procesului de agregare plachetar.

Funciile trombocituluiPrincipala funcie a trombocitelor este aceea de a realiza hemostaza, fiind astfel responsabile pentru coagularea sngelui. Acest proces cuprinde o serie complex de interaciuni ntre plachete, endoteliul lezat i numeroase protein-enzime circulante din plasma sangvin.

n mod normal, atta timp ct peretele vascular este intact, trombocitele circul o dat cu sngele, fr s adere la peretele vascular.

Dup lezarea vasului, local se manifest urmtoarele evenimente:

aderarea plachetelor la peretele vascular lezat, datorit interaciunii dintre glicoproteinele din membrana plachetar cu factorul plasmatic VIII, care leag placheta de esutul subendotelial, sau a interaciunii dintre fibronectina din membrana trombocitului cu colagenul din peretele vascular;

- gruparea sau agregarea trombocitelor (agregare plachetar), dup ce au aderat la peretele vascular lezat, proces facilitat de prezena ATP-ului, prostaglandinelor G2 i H2, tromboxanul A2, trombina, colagenul, adrenalina, noradrenalina etc. Legarea acestor ageni de receptorii specifici ai membranei plachetare determin metamorfoza trombocitelor astfel c, ele i modific forma, devenind sferice i emit o serie de pseudopode. Procesul de agregare plachetar se realizeaz n prezena ionilor de calciu.

formarea unui coagul sanguin.

Dup agregarea plachetar, urmeaz procesul de trombocitoliz, determinat de contactul plachetelor cu colagenul din peretele vascular sau cu colagenul din esutul conjunctiv perivascular. Coninutul trombocitelor este deversat, astfel c, substanele eliberate din granulele plachetare stimuleaz factorii de coagulare tisulari (ex. tromboplastina), producerea trombinei (din protrombina plasmatic), care transform fibrinogenul plasmatic, n fibrin insolubil. Prin polimerizare, fibrina formeaz o reea, n ochiurile creia se dispune plasma i celulele sangvine, constituindu-se astfel dopul hemostatic stabil (coagulul).

- dizolvarea cheagului sanguin i vindecarea leziunii.

Coagularea sngelui se ntrerupe n mod normal, ca rspuns la aciunea unor inhibitori specifici, locali sau din circulaie (ex. antitrombina, heparina) i prin diluarea factorilor de coagulare n fluxul sanguin.

Asupra fibrinei vor aciona ulterior o serie de molecule contractile (trombosteina, ionii de calciu), precum i factori vasomotori (serotonina), care produc retracia coagulului i contracia peretelui vascular.

Unele granule plachetare elibereaz factorul de cretere al plachetelor, care stimuleaz proliferarea i regenerarea fibroblastelor i celulelor musculare netede, n faza de vindecare a peretelui vascular.

Unii indivizi sufer de boli genetice, care determin tulburri ale procesului de coagulare. De exemplu, n cazul hemofiliei, factorii de coagulare (ex. factorul VIII) fiind deficieni, formarea coagulului sanguin este imposibil, ceea ce determin sngerri spontane la nivelul muchilor sau articulaiilor.

Realizarea hemostazei nu este ns singura funcie a trombocitelor, ele ndeplinind i alte funcii:

- intervin n unele procese inflamatorii,, acumulndu-se la locul de invazie microbian, unde elibereaz factori care mresc permeabilitatea vascular;

- intervin n reaciile imune, rspunznd prin agregare i eliberare de diferite substane n momentul n care sunt stimulate de complexe imune sau agregate de IgG;

- pot fagocita particule mici (microorganisme, particule inerte). Datorit coninutului sczut n hidrolaze acide, trombocitele nu diger n totalitate microorganismele, fiind fagocitate la rndul lor de macrofagele tisulare;

- intervin n vindecarea plgilor prin eliberarea unor factori de cretere: EGF (Epidermal Growth Factor), PDGF (Platelet Derived Growth Factor), factori capabili s stimuleze sau s inhibe activitatea celulelor musculare netede arteriale, a fibroblastelor pielii etc..

Concentraia celulelor sangvine sau valorile procentuale i intervalele de referin pentru valorile hematologice, difer n funcie de sursa bibliografic, iar la adulii normali se nregistreaz diferene n funcie de vrst, sex i localizare geografic. Tabelul 2 prezint cteva aspecte de morfologie cantitativ a celulelor sangvine

Tabelul 2

Morfologia cantitativ a celulelor sangvine

(Smollich, A., Michel, G., 1992)

SpeciaEritrociteLeucociteTrombocite

Nr.

(Mil/mm3)MrimeNr.

(Mii/mm3)Ponderea (%)

Diametru

()Grosime

()LimfociteGranulociteMonocite

NeutrofileEozinofileBazofile

Om5 (3,8-6,4)7,5 (7,2-7,7)2,2

(1,8-2,5)9 (3,5-10)26 (19-48)65 (36-74)3 (0,2-6)0,5 (0-2)5 (1-9)250

(150-600)

Cabaline7,5 (6-10)5,5 (4,5-5,5)1,99 (6-11)35 (16-43)59 (54-65)3 (2-4)0,5 (0,1-0,6)3 (0,3-6)350

(200-500)

Bovine6,3 (5-7)5,7 (4,4-7,7)2,28 (5-10)53 (37-70)35 (25-50)6 (3-10)0,4 (0-0,8)5 (3-10)400

(260-700)

Ovine10 (6-13)5,1 (2,5-7)1,812 (6-20)55 (47-70)34 (20-45)8 (2-15)0,5 (0-1)3 (1-5)370

(150-980)

Caprine14 (10-20)4,1 (2,5-4,2)1,512 (6-23)55 (49-72)37 (30-45)5 (3-8)0,5 (0-1)2,2 (2-4,5)500

(190-940)

Suine6,5 (5-8)6,1 (4-9)2,115 (8-20)37 (19-62)59 (32-81)2,3 (0,3-10)0,3 (0-1,3)2 (0,3-6)300

(200-500)

Cine6,2 (5,2-8,4)7,3 (6,6-7,7)2-2,49 (7-18)23 (13-32)70 (60-82)3 (2-8)0,3 (0,1)4 (0,1-5)300

(200-600)

Pisic8 ((6,5-11)6,2 (5,6-6,5)1,912 (5,8-15)33 (10-71)60 (28-89)4 (0-12)0,2 (0-0,6)2,7 (2-4)400

(170-710)

Iepure5 (4-6)6,6 (6,2-7,2)-8 (9-12)55 (37-69)40 (30-50)1,5 (1-3)1 (0,5-3)2,5 (1-4)240

(110-460)

Gin3,5 (3-4,5)7,5-123,525 (18-30)60 (45-70)33 (20-50)5 (2-8)2 (1-5)10,2-1530

(20-110)

Ra3,8 (3-4,5)6,2-12,13,523 (11-51)62 (45-83)24 (8-40,5)2,1 (0-9)1,5 (0-4)10,8 (4-20)90

(70-130)

6.2. Hematopoieza

Hematopoieza este procesul de formare a celulelor sangvine, desfurat pe toat durata vieii individului n mduva hematogen.

Prenatal, la embrionul de cca. 3 sptmni, n mezodermul sacului vitelin, se organizeaz insule de celule mezenchimale (insulele Wolff-Pander). Celulele de la periferia insulelor se vor transforma n celule endoteliale, care vor forma primele vase sangvine (circulaia sangvin extraembrionar) care, ulterior, vor comunica cu vasele embrionului. Celulele din centrul insulelor vor forma eritrocitele (primele elemente celulare sangvine).

Ulterior (ncepnd cu cea de-a doua lun de via intrauterin), hematopoieza se desfoar n ficat, mezodermul perivascular, splin, timus i mduva hematogen. La sfritul perioadei de dezvoltare intrauterin (nainte de natere) devin activi i foliculuii limfoizi.

Postnatal mduva hematogen (cantonat n stern, coaste, vertebre, clavicule, scapule, pelvis, oasele craniene, extremitile proximale ale femurului i humerusului) rmne principalul organ productor de elemente sangvine. Ficatul, dei este considerat din punct de vedere hematopoietic inactiv, n anumite situaii (hemoragii mari, degenerri ale mduvei osoase) poate fi reactivat, proces numit hematopoiez extramedular.

Limfocitele se formeaz, dup natere, n principal n mduva hematogen, dar i n esuturile limfoide din timus, splin, ganglionii limfatici, formaiunile limfoide ale tractului digestiv.

n privina formrii celulelor sangvine, n prezent este acceptat teoria unicist sau unifiletic, potrivit creia, toate celulele sangvine se formeaz n mduva hematogen dintr-o singur celul stem multipotent (celul su).

Celula stem multipotent (denumit i hemocitoblast) este o celul mononuclear mic, ntlnit predominant n mduva hematogen, ns este semnalat i n sngele circulant.

Prin diviziuni mitotice, celulele stem genereaz dou populaii de celule: una care asigur depozitul pluripotent al mduvei osoase i alta care se angajeaz n difereniere, realiznd grupul celulelor precursoare sau progenitoare (comitted) pentru fiecare linie celular sangvin.

Reglarea hematopoiezei se bazeaz pe interaciunile dintre celulele stem i stroma mduvei osoase i pe aciunea numeroilor factori de cretere, n principal glicoproteine cu efecte asemntoare hormonilor, specifici pentru fiecare linie celular sangvin. Marea majoritate a factorilor de cretere sunt produi local n mduv, de ctre celulele endoteliale, reticulare, macrofage i limfocitele T. Excepie face eritropoietina, care este sintetizat i eliberat de rinichi.

Factorii de cretere hematopoietici includ interleukinele, factorul stem-celular i o gam de factori stimulatori ai coloniilor (CSF), care promoveaz dezvoltarea uneia sau mai multor colonii de celule hematopoietice: CFU-GM (colony-forming unit granulocite/macrofage). Aceti factori por aciona sinergic sau se pot potena reciproc. Toi par s inhibe apoptoza i astfel permit proliferarea i/sau maturarea continu a celulelor.

6.2.1. Eritropoieza

Eritrocitele se formeaz n mduva hematogen, din celulele stem multipotente, care pot genera celule precursoare angajate (comitted), care pot fi incluse n dou categorii: precursori neidentificai morfologic i precursorii identificai morfologic. Prima grup cuprinde celulele stem multipoteniale, erythroid burst forming units (BFU-E) i erithroid colony forming units (CFU-E).

Precursorii identificai morfologic cuprind proeritroblastele (pronormoblastele), eritroblastele (normoblastele) bazofile, eritroblastele (normoblastele) policromatofile i reticulocitele.

Eritropoieza sau dezvoltarea celulelor roii este recunoscut prin apariia proeritroblastelor (pronormoblastelor), celule nedifereniate, cu dimensiuni de cca. 14-19. Citoplasma, intens bazofil, este bogat n organite (ribozomi,reticul endoplasmatic rugos, complex Golgi, mitocondrii, lizozomi), iar nucleul este bogat n eucromatin i conine 1-2 nucleoli.

Proeritroblastele au o activitate secretorie intens, n acest stadiu fiind iniiat sinteza proteic, a hemoglobinei i a antigenilor de suprafa. Prin diviziunea lor se formeaz eritroblastele (normoblastele) bazofile, celule cu diametrul de cca. 13-16, cu citoplasma bazofil, bogat n organite i n care se semnaleaz apariia feritinei, sub form dispersat sau grupat n grmezi denumite siderozomi. Nucleul voluminos, ocup din celul.

Eritroblastul bazofil continu s se divid i s sintetizeze hemoglobina.

Eritroblastele (normoblastele) policromatofile sunt celule cu dimensiuni mai mici dect precedentele (12-15), cu nucleu mai mic, fr nucleol. n citoplasm se reduc organitele celulare, dar se acumuleaz hemoglobina i feritina, sub form de siderozomi.

Prin diviziuni mitotice, eritroblastele policromatofile genereaz celule cu un potenial ridicat de difereniere, numite eritroblaste (normoblaste) ortocromatice (oxifile). Acestea sunt celule mici (8-10), cu citoplasma acidofil (datorit ncrcrii cu hemoglobin), n care sunt prezente rare organite. Nucleul este mic i excentric.

Dup trei diviziuni, eritroblastele ortocromatice i extruzioneaz nucleul i devin reticulocite medulare.

Reticulocitele sunt celule anucleate, cu dimensiuni de cca. 9. Ele conin ARN sub form de granule i un numr redus de organite citoplasmatice. n cca. 24-48 ore, reticulocitele se matureaz i nainte de a intra n circulaia sangvin i elimin resturile de organite prin contracii repetate devenind eritrocite funcionale. Trecerea lor n circulaia sangvin se realizeaz prin diapedez, proces n care celulele emit pseudopode ce strbat endoteliul capilarului medular.

n sngele circulant, reticulocitele se ntlnesc n proporie de 1-3%. Creterea numrului lor n sngele circulant indic o stimulare a procesului de eritropoiez, ca urmare a scderii fiziologice sau patologice a eritrocitelor circulante.

Eritropoieza este reglat de o serie de factori stimulatori sau inhibitori.

Dintre factorii stimulatori, un rol important l deine eritropoietina, glicoprotein secretat la adult n principal de rinichi i n cantiti mici de ficat sau splin. Ea stimuleaz att eritropoieza, ct i sinteza de hemoglobin. De asemenea, un efect stimulator l au unii hormoni (ACTH-ul, corticosteroizii, tetraiodtironina, androgenii), srurile de cobalt, anemiile, hipoxia, hemoragiile.

Dintre factorii inhibitori ai procesului de eritropoiez fac parte estrogenii i chalonele secretate de eritrocitele adulte.

6.2.2. Granulocitopoieza

Granulocitopoieza genereaz leucocitele granulare sau polimorfonucleare, reprezentate de neutrofile, eozinofile i bazofile pornind de la celula precursoare angajat (comitted).

Prin proliferarea celulelor precursoare angajate rezult mieloblastele, celule cu dimensiuni cuprinse ntre 10-15, la care raportul nucleo-citoplasmatic (N/C) este de 6/1. Citoplasma, redus cantitativ, este bazofil. Prin mitoz, mieloblastul genereaz dou promielocite, celule mai mari dect mieloblastele (cca. 20). Citoplasma lor este bazofil, bogat n organite, ns apar i numeroase granulaiile primare reprezentate de lizozomi. Raportul nucleo-citoplasmatic este de 4/1.

Prin diviziune mitotic, fiecare promielocit va genera cte dou mielocite.

Mielocitele sunt celule mari (16-25) cu raportul nucleo/citoplasmatic de 2/1 i citoplam abundent, bazofil, bogat n organite i granulaiuni (primare i secundare) specifice neutrofilelor, eozinofilelor i bazofilelor. Dup o durat de via de cca. 24-48 ore, mielocitele se divid de 2-3 sau chiar de 5 ori genernd metamielocite, celule mai difereniate, care nu se mai divid. Ele se matureaz complet, proces care const n creterea numeric a granulocitelor specifice secundare i n segmentarea nucleului.

Granulocitul segmentat este ultimul stadiu de difereniere, n sngele periferic existnd cca. 65-75% neutrofile, 1-3% eozinofile i 0,5-1% bazofile.

6.2.3. Limfocitopoieza

Limfocitopoieza este procesul prin care se formeaz cele dou clase de limfocite: B i T.

n perioada prenatal, limfocitopoieza se desfoar progresiv n ficat, splin i mduva hematogen. Dup natere, limfocitele B se formeaz n mduva hematogen, iar limfocitele T n timus, att mduva, ct i timusul fiind organe limfoide centrale.

Limfocitele B vor popula organele limfoide periferice (ganglionii limfatici, splina, plcile Peyer, n timp ce limfocitele T se localizeaz n timus n perioada fetal i postnatal, unde sunt procesate pentru a forma limfocitele T imunocompetente.

Celulele stem limfocitare din mduva hematogen genereaz, prin mitoz, limfoblastul, celul cu dimensiuni cuprinse ntre 10-18 i cu nucleu mare, ocupnd cea mai mare parte a celulei (raportul nucleo-citoplasmatic: 6/1). Citoplasma bazofil conine, pe lng organitele celulare i granule azurofile, reduse numeric.

Prin diviziune mitotic, limfoblastul genereaz celule mai difereniate denumite prolimfocite, cu talie mai redus dect a limfoblastului (9-17) i cu raportul nucleocitoplasmatic de 5/1.

Fr a se mai divide, prolimfocitele genereaz limfocitele circulante.

6.2.4. Monocitopoieza

Monocitele i au originea n mduva hematogen, din celule stem progenitoare. Astfel, prin diviziunea celulei stem se formeaz monoblastul (precursorul monocitar), care se divide mitotic genernd promonocitul, celul cu dimensiuni cuprinse ntre 10-20 i n a crei citoplasm bazofil este bine reprezentat varietatea rugoas a reticulului i lizozomii.

Dup cca. 3-4 diviziuni, promonocitele genereaz monocitele, care sunt eliberate n sngele periferic, unde rmn cca 6-8 ore, dup care traverseaz pereii capilarelor i migreaz n esuturi, transformndu-se n macrofage tisulare.6.2.5. Trombocitopoieza

Trombocitele se formeaz n mduva hematogen din celulele stem angajate (comitted) pentru formarea plachetelor.

Celulele stem angajate vor genera, prin self-replicare, celule precursoare diploide, care, prin diviziuni succesive, vor forma megacarioblastul.Megacarioblastul, celula cap de serie, are citoplasma bazofil, iar raportul nucleo-citoplasmatic este n favoarea nucleului. Pe msura maturrii, prezint mai multe stadii evolutive, cu diferite grade de poliploidie. Primul stadiu are mrimea unui limfocit, se divide rapid prin endoamitoz (divizarea nucleului, nu i a citoplasmei) i are patru nuclei (tetraploid 4n). Al doilea stadiu, reprezentat de megacariocitul bazofil, a crui citoplasm bazofil conine un numr mare de organite implicate n secreie (ribozomi, reticul endoplasmatic rugos, complex Golgi), continu procesul de maturare i nu se mai divide. Gradul de poliploidie este complt (8n sau 16n, mai rar 32n).

Stadiul III sau megacariocitul granular continu maturarea, proces care decurge paralel cu creterea taliei i apariia pseudopodelor. Prin maturarea megacariocitului granular rezult megacariocitul trombocitogen, celul de dimensiuni mari (35-150) cu nucleul polilobulat i citoplasma ncrcat cu granule (complex Golgi), care vor realiza viitorul granulomer. Membrana prezint numeroase pseudopode, care ptrund prin spaiile intercelulare ale peretelui capilarelor, iar prin fragmentare, genereaz trombocitele.

n reglarea procesului de trombocitopoiez intervin o serie de factori, cel mai cunoscut fiind trombocitopoietina, secretat la nivelul rinichiului, ca i eritropoietina.

PAGE 207