UNIVERSITATEA DE TIINE I MEDICIN VETERINAR ION IONESCUDE LA BRAD DIN IAI

FACULTATEA DE MEDICIN VETERINAR

Managementul i biotehnica reproduciei aniamlelor de rent

= Trasnferul de embrioni la vaci =

Student: Amariei Ioana-IrinaGrupa B

Biotehnica transferului de embrioni la vaci

Transferul de embrioni reprezint o metod biotehnologic pentru intensificarea reproduciei n general i a reproduciei bovinelor pentru carne n special, la care transferul de embrion are numeroase aventaje, dintre care cel mai imprtant este obinerea de ftri gemelare dirijate n proporii ridicate. Rata fecunditii dup transferul de embrioni reprezint testul de eficien a biotehnicii transferului de embrioni. Dac n 1984 se raporta un indice de gestaie de 58%, astzi acesta a ajuns la aproximativ 80% prin aplicarea acestei tehnologii.Pentru consideraii de ordin economic i zootehnic, la femelele donatoare de ovule sau embrioni, are loc obligatoriu inducerea poliovulaiei, pentru ca n acelai ciclu sexual s se produc pn la 25 de ovule fa de 1-2, produse n mod obinuit.Progresul genetic depinde de posibilitatea obinerii unui numr ct mai mare de descendeni de la animalele cu valoare genetic mare. Prin nsmnrile artificiale, de la un taur valoros se pot obine 50.000 de urmai, n timp ce de la o vac, n toat viaa ei productiv se obin n medie 4-5 viei. Prin superovulaie se permite obinerea a aproximativ 100 de produsi, mult peste capacitatea de producie a unei femele.Tehnica transferului de embrioni bovini a fost aplicat n vederea nmulirii rasei N,Dama din Africa de Vest, care este rezistnt la tripanozomiaz.La noi n ar, primele transferuri de embrioni au fost efectuate la ovine i porcine, prin metoda chirurgical de ctre V. Oel i T. Feredean. Primul centru de transfer de embrioni a fost inaugurat n 1975 la sediul S.C.Z. Tg. Mure. n 1982 s-au congelat 11 blastociti, din care 5 au supravieuit decongelrii i s-au dezvoltat normal. n 1989 s-au obinut primii 2 miei din embrioni congelai 74 de zile n azot lichid la I.C.P.C.B. BalotetiAstzi, biotehnologia transferului de embrioni a ctigat o mare amploare, existnd centre comerciale specializate. Astfel n SUA, de la o vac donatoare s-au obinut 136 viei, n Frana 80, iar n Danemarca 57.Transferul de jumti de embrioni, la taurine, a avut ca urmare oobinerea de viei gemeni identici, prin secionarea embrionului n jumtate, urmat de inocularea uneia din jumti ntr-o alt zon pellucid, cealalt pstrnd membrana iniial.O alt direcie de perspectiv n transferulde zigoi o reprezint fecundarea in vitro, care include o seriede etape precum: Obinerea ovocitelor. Se poate face fie din foliculii maturi ai femelelor cu ovulaie spontan sau supraovulate, imediat dup ovulaie, fie din foliculii maturi provenii din ovarele femelelor sacrificate. Ovocitele se recolteaz n primele 6 ore dup ovulaie n mediul Krebs-Ringer, dup care se incubeaz la 38oC, cu 5% CO2, umiditatea 100%. Maturarea in vitro a ovocitelor. Se refer la ovocitele recoltate din foliculii secundari sau teriari. Dup aspirarea lichidului folicular i a ovocitelor, aceestea sunt plasate n mediul de cultur i incubate n atmosfer gazeificat la 38oC. Capacitarea spermatozoizilor. Se face in vitro, prin incubarea materialului seminal la 38oC, timp de 1-2 ore. Fecundarea in vitro. Reprezint culura timp de 24 de ore a unei suspensii de spermatozoizi capacitai mpreun cu ovocite mature n mediu cu 5% O2, 5% CO2, 90% N2, la 37oC. Cultura zigolor se face pn la stadiul de morul sau blastocist. Ovocitele sunt considerate fecundate dac se constat fie prezna spermatozoizilor n spaiul perivitelin sau n ovoplasm, fie decondensarea cromatinei, sau prezena pronuleilor cu apariia segmentaiei.Criteriile de selecie a receptoarelor au n vedere c femelele alese trebuie s aib vrsta cuprins ntre 18-20 de luni i o greutate optim de 360-450 kg. Tehnologia transferului de embbrioni la taurine

Alegerea vacilor donatoare se face n funcie de profilul metabolic al acestora, a modului de formare a corpilor galbeni, calitatea ovulelelor i a embrionilor rezultai. S-a demonstrat ca cel mai bun rspuns poliovulator se obine n urma tratamentului cu FSH.Selecia donatoarelor are n vedere urmtoarele: Intervalul dintre ftare i apariia primelor clduri s fie mai mic de 60 zile; Intervalul dintre ftare i prima mont fecund s nu depseasc 80 de zile; Numrul de doze (paiete) pe gestaie s fie mai mic de 1,5; Perioada optim pentru supraovulaie la vac este intervalul cuprins ntre a 60-a i a 80-a zi de la ftare; Este necesar ca femelele s se afle ntr-o stare foarte bun de ntreinere deoarece carenele alimentare reduc rspunsul ovarului la stimularea hormonal;Pentru realizarea fenomenului de supraovulare, femelei donatoare i se administreaz n zilele 16/17 a ciclului un tratament cu FSH. La apariia cldurilor se administreaz intravenos o doz de gonadotropin corionic pentu stimularea ovulaiei. Femela donatoare n clduri se nsmneaz artificial n ziua estrului, cu repetarea procesului de 2-3 ori pentru a asigura fecundarea tuturor ovocitelor.

Recoltare zigoilor se face nesngeros, cu catetere de tip Worrlein i Cassou, prin spalarea cornului uterin n zilele 6-8 de la mont, cu medii de cultur speciale (PBS modificat cu 2% ser fetal bovin i antibiotice), 300-400 ml pentru fiecare corn uterin.Practic, recoltarea se face prin introducerea intrauterin a unei canule de recoltare cu 3 ci distincte (una pentru insuflarea aerului, alta pentru instilarea mediului de splare a cavitii uterine i a treia pentru recoltarea lichidului introdus mpreun cu embrionii).Dupa recoltare mediul de recuperare se las 30 de minute pentru decantare, dup care se nltur supernatantul i se examineaz la lupa stereomicroscopic cca 80-100 ml de mediu din fiecare corn uterin. Embrionii recuperai din mediul de splare, sunt trecui n mediul de cultur pentru aprecierea lor cantitativ i din punct de vedere morfologic.Prin recoltarea nechirurgical a embrionilor, n urma procesului de inducere a poliovulaiei cu FSH i PMSG s-a obinut o medie de 9,5 embrioni / donatoare n cazul utilizrii FSH-ului i respectiv de 5,3 n cazul utilizrii PMSG-ului.Rata de recuperare a embrionilor depinde de tipul i gradul de uzur al cateterului utilizat i de experiena operatorului n prelevarea embrionar.Pentru conservarea embrionilor, utilizarea metodei de diluie n trepte (glicerol i sucroz), are o rat mai mare (66,6%) de embrioni transferabili (fr rupturi ale zonei pellucide i dezorganizri ale masei embrionare).Selecia embrionilor prin metode stereomicroscopice, constituie o etap foarte important n fluxul tehnologic al transferului de embrioni. Examenul se face la microscopul stereomicroscopic cu hot steril, climatizat. Dac lichidul de recuperare a embrionilor este uor sangvinolent datorit microleziunilor din timpul recoltrii, pot interveni fenomene de degenerare celular.Evaluarea embrionilor are ca scop estimarea vrstei i aprecierea normalitii morfologice i funcionale ale acestora. n ziua a 7-a dupa I.A. embrionii au form sferic i un diametru de 150-180 mm.

Masa embrionar este format din blastomere i este nconjurat de o membran glicoproteic cu aspect gelatinos, translucid, denumit zon pellucid cu grosime de 12-15 m. Culoarea embrinilor aflai n stadiul de morul i blastocist timpuriu const ntr-un aspect mai ntunecat al masei embrionare fa de detritusurile uterine. Blastocitii expandai au o zon pelucid mai redus (8-9 m) i un aspect mai palid.Pentru evaluarea normalitii morfologice a embrionilor n codul Zoo-Sanitar-Veterinar Internaional pentru embriotransfer, se prezint codificarea calitii acestora. Incidena formelor embrionare netransferabile este foarte mare (39%), fiind un argument n favoarea necesitii analizei embrionilor. O alt problem este reprezentat de embrionii retardai, deoarece aspectul morfologic al acestora este normal, dar rata succesului transpalntrii este inferioar chiar dac receptoarele se afl la intervalul corespunztor vrstei embrionului. Dup prelevarea si selectarea morfologic, embrionii sunt transferai n stare proaspt sau dup conservare, la femelele receptoare cu ciclul sincron cu al donatoarelor.Conservarea embrionilor pe termen lung se face prin 3 procedee de congelare, urmate de stocarea lor n azot lichid la -196o C. Cele 3 procedee constau n: Congelarea n trepte n medii cu concentraii crescnde de glicerol; Congelarea ntr-un singur pas n medii cu 10% glicerol; Congelarea pentru transfer direct n medii cu etilen glicol;n cazul congelrii n glicerin, nainte de nsamnare embrionii trebuie s fie splai i transferai ntr-o pipet de transplantare. Embrionii congelai n etilen glicol pot fi transplantai direct din pipeta n care au fost conservai.Transferul direct simplific operaia de transplantare a embrionilor pn la nivelul cerut de nsmnarea artificial cu material seminal congelat. Paieta cu embrionul se decongeleaz exact n aceleai condiii ca i paieta cu material seminal. Operaiunea de embriotranfer se face n ziua a 7 dupa estru, dup echiparea pistoletului Cassou, prin traversul cervixului nchis (ceea ce face ca operaiunea s fie puin mai dificil). Procentul de reuit a embriotransferului este de 41% n cazul folosirii embrionilor congelai i de 42,6% n cazul folosirii embrionilor proaspai.Alegerea receptoarelor se face lund n considerare: situaia epizootologica a cirezii; Starea general de sntate a aparatului genital al fiecrei femele n parte; Valoarea genetic a receptoarelor pentru a nu folosi plus variantele; n cazul utilizrii vielelor, acestea trebuie s aib o vrst minim de 16 luni si o greutate minim de 380 kg. n cazul utilizrii vacilor, acestea trebuie s aib mai putin de 7 ani, greutate corporal minim de 550kg, un interval minim 60 de zile de la ftare, s nu fi avut retenii placentare sau endometrite i ovare normal dezvoltate;Pentru sincronizarea estrului receptoarelor cu cel al donatoarelor este sufucient utilizarea prostaglandinelor, dou administrri la interval de 11 zile la viele sau 13 zile la vaci. Pregtirea receptoarelor se face n primul rnd prin furajare. Embriotransferul se face n ziua a 7 de la estru prim manopere similare I.A. Folosirea practic a transferului de embrioni este indicat pentru animalele cu mare valoare de ameliorare genetic sau care au un nalt potenial productiv. Cea mai mare utilitate a embriotransferului const n posibilitatea transferului unor populaii aflate la mare distant sau pentru nmulirea rapid a liniilor selecionate cu potenial zooproductiv mare.Proogresele fcute n ultimii 10 -12 ani n tehnologia embriotransferului au adus performanele metodei la nivelul celor din I.A. cu material seminal congelat i la simplificarea folosirii embrionilor congelai pentru transplantare.

Bibliografie

Constantin N., 2003. Tratat de medicin veterinar. Vol. III, Ed.tehnic, Bucureti. https://www.google.ro/search?q=embryo+transfer+cows http://www.thejudgingconnection.com/pdfs/Embryo_Transfer.pdf http://www.davis-rairdan.com/embryo-transfer.htm