Proteine ADN-conjugati DOI: 10.1002/anie.200701942O metodă universală pentru Pregătirea Covalente proteine-ADN-uluiConjugați pentru utilizare în crearea de nanostructuri de proteine **Benjamin P. Duckworth, Yan Chen, James W. Wollack, Yuk Sham, Joachim Mueller D.,T. Andrew Taton, și Mark D. Distefano *ADN-ul are numeroase caracteristici atractive, ca o schela pentrunanostructura de asamblare. Sa rigiditate, structura previzibil, șide adunare prin hibridizarea ADN-ului permite complementarepentru a forma arhitecturi la scara nanometrica, cum ar fi cuburi, [1] tetraedre, [2]octoedre, [3, 4] și tablouri 2D. [5-8] Prin introducerea proteine înNanostructuri ADN, elementele de recunoaștere și funcționalitățicare sunt inerente în proteine pot fi organizate înmotive nanostructurate. ADN-proteine scaffolded ansamblurilorau fost folosite în metodele de detectare imuno-PCR (PCR =polymerase chain reaction) [9-11] pentru a aranja biocatalizatori într-oserie de reacții consecutive [12, 13] și să organizeze altenanomaterialelor [14]. Există în prezent mai multe metodologiifolosit pentru a lega proteine pentru a ADN-ului. Proteinele au fost asamblatepe schele ADN-ul, prin intermediul molecule adaptor intervenientecum ar fi Streptavidin [12,15-20] sau aptamers [21, 22] Alternativ.,conjugare directă covalentă poate fi realizat prin modificareade reziduuri cisteina sau lizină [23-26] sau modificarea intein. [11, 27, 28] Niemyer și co-lucrătorilor au angajat acesteproteine-ADN-ul pentru a forma conjugati fluorescență de rezonanțăde transfer de energie (FRET) sisteme pentru utilizarea în nanaobiotehnologie. [29, 30]Aici, vom demonstra o strategie de fuziune bazate peproteine regioselectively și covalent de etichete la extremitatea Ccu un singur-catenar ADN-ului. Aceste proteine-oligonucleotidhimere au fost apoi asamblate în mod spontan Nanoarhitecturileprin hibridizarea ADN-ului complementar.Strategia legarea covalentă descrise aici se obține unLegătura scurt si compact între proteine și ADN-ulmolecula care permite un control precis asupra distanța de proteineși orientare în nanostructura finală.Pentru a realiza etichetarea selectivă de proteine, vom folosi enzimaproteine farnesyltransferase (PFTase) pentru a eticheta un substratde proteine care conține o etichetă C-terminal cu o tetrapeptideazidă-a modificat difosfat isoprenoid (1, Schema 1). [31-34]Noi am demonstrat anterior că această reacție este prenylationfinalizeze în decurs de 1 oră și nu necesită proteine tinta sautransferază să fie prezentă în formele lor pure. [34] În urmaetichetarea enzimatic, proteine azidă-funcționalizată (2) poate fifi reacționat cu ADN-ul conține o alchine (3) privind încheierea acestuia 5 "de cătrefolosind CUI-catalizată [3 +2] cycloaddition Huisgen ("clic")reacție. Phosphoramidite alchine conținând care a fostfolosit pentru a sintetiza 3 a fost conceput cu un lant de carbon lung pentru aajutor în separarea 3 de la ADN-ului, care nu facconține fragmentul alchine, cu toate acestea, această caracteristică nu este

esențială.Pentru a ilustra puterea acestui etichetare chemoenzymaticmetoda, am ales consolidată verde fluorescent de proteine (GFP)ca o proteina model. GFP, și-a exprimat și purificat să conțină oC-terminal CVIA tag-ul, a fost incubate cu 1 și PFTase pentru3 h la 308c să cedeze azidă-funcționalizată GFP (2). Pentru a creaalchine-funcționalizată ADN-ului, un oligonucleotid, care a fost de 33baze în lungime a fost sintetizat prin utilizarea de iarnă în fază solidăSintezei ADN tehnici. Un phosphoramidite care conținlanțului de carbon hidrofobe și o fracțiune a fost alchinemanual cuplat la ADN-ul atașat la porilor controlatăSchema 1. PFTase-mediate de proteine țintă, etichetarea cu o azidămolecula, și reacția ulterioară cu alchine-modificat ADN-ului. TBTA =tris (benzyltriazolylmethyl) amină, TCEP = tris (2-săruri) fosfină.[*] BP Duckworth, JW Wollack, prof. TA Taton,Prof. M. D. DistefanoDepartamentul de Chimie, Universitatea din MinnesotaMinneapolis, MN 55455 (USA)Fax: (1) 612-626-7541E-mail: distefan@chem.umn.eduPagina de start: http://www.chem.umn.edu/groups/distafano/Dr. Y. Chen, Prof. J. D. MuellerDepartamentul de Fizica, Universitatea din MinnesotaMinneapolis, MN 55455 (USA)Dr. Y. ShamMinnesota Supercomputing Institutul, Universitatea din MinnesotaMinneapolis, MN 55455 (USA)[**] Această lucrare a fost sustinuta de subventii de la NIH (GM 008700 și GM58442). Ne mulțumim Prof. AndrewTurberfield pentru coordonateleADN-ul tetraedru.Informații justificative pentru acest articol este disponibil pe WWWsub http://www.angewandte.org sau de la autor.AngewandteChemieAngew. Chem. Int. Ed. 2007, 46, 8819 -8822? 2007 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co KGaA, Weinheim 8819

&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& Profitați de albastru de referință linkurile &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&

sticlă (CPG) rasina (a se vedea informațiile justificative). Deprotejarea,decolteu, și purificarea HPLC a cedat pur 3.Reacția clic a fost apoi utilizate pentru a selectiv Cuplu 3 la 2.GFP-ADN conjugat (4) a fost purificat de la care nu au intrat azidefunctionalizedGFP (2) și ADN-alchine (3) materialul defolosind filtrare cromatografie de gel (a se vedea SprijinireaInformații). Volumul eluare a produsului dorita fost ușor de determinat din cauza combinației de GFPfluorescență și absorbanța ADN-ului, precum și eficiențaconjugare a fost estimată la 72%.

Pentru a confirma conjugare succes și proprietăți de recunoașterea modificat un singur-catenar ADN-ului, un complementar33-mer ADN care conține un Texas Red fluorofor(TR-ADN) a fost amestecat cu conjugat GFP-ADN-ului (a se vedeainformații justificative). După cum poate fi văzut înSprijinirea Informații, atunci când nu-TR ADN-ul este prezent, numaiGFP fluorescenta se observă. Când unul echivalent de TR-ADN-ul se adaugă, de componente complementare ADN obligati,poziționarea fluorophore TR aproape de GFP, astfel încâtObserved.Atitration FRETis de TR-DNAwith GFP-DNAisse arată în informațiile justificative. Fluorescență deatât GFP și TR ajunge la valorile limită atunci când cele două suntprezente în concentrații aproape echivalente. Când TR-ADN-uluia fost adaugat in molecule GFP care nu sunt conjugate cuADN-ul, nu a fost observat FRET (datele nu sunt prezentate). AcesteaExperimentele demonstrează că ADN-ul care a fost covalentatașat la GFP prin utilizarea reacția clic se comportă caADN-ul convențional și pot hibridiza la complementare acestuiaStrand. Pentru a demonstra domeniul de aplicare al acestei metode, proteine-ADN-ul se conjugă cu CDC42 (o proteină naturală prenylated)și glutation S-transferaza au fost, de asemenea, pregătite (a se vedeainformații justificative).Chimia atașament descris aici poate fi, de asemenea,folosite pentru a construi noi proteine ADN-nanoassemblies.Ca schela ADN-ului pe care proteinele pot fi cu model,am ales DNAtetrahedron, care a fost recent descris deTurberfield și co-lucrătorilor [2, 35]. Tetraedru este format dinpatru oligonucleotide (6, 7, 8, și 9), care asamblează rapid auto-pentru a forma suprastructurii randament ridicat. Turberfield și colegiicapsulate cu succes o molecula de proteina în cadrultetraedru prin conjugarea una dintre cele patru oligonucleotidela o amină suprafata de citocromului C [36].Prin folosirea TurberfieldAs de asamblare ca model, am conceput untetraedru cu porecle de la patru din cele șase margini. Apoi,oligonucleotide componente 10a, 11, 12a, o și 13 o ausintetizate prin utilizarea de iarnă chimie de cuplare ADN-ului. Laa obține secvența 10a, trei baze de la un capăt 5 'al secvenței6 au fost transferate la capătul 3 '. Această schimbare nick plasează astfel încâtcă se termină oligonucleotidice ar proiecta dintetraedru. Secvențe 11 a, 12 a, și 13 au fost proiectate o înacelași mod de secvențe 7, 8, și 9, respectiv. Amodelul tetraedrului ADN-ul este indicat în partea stângăPanoul de Figura 1b (a se vedea, de asemenea, informațiile justificative).ADN-ului s-au convertit la alchine-funcționalizată ADN-uluide cuplare manuală a phosphoramidite alchine la5 'terminus ale toate cele patru direcții pentru a produce 10b, 11b, 12b, și13b (a se vedea informațiile justificative). În urma purificarede oligonucleotide alchinici, GFP? N3 a fost în mod individualreacționat cu fiecare fir de ADN cu ajutorul reacția clic pentru agenerează 10 C, 11 C, 12 C, și 13c. Cele patru GFP-ADN-ului

conjugați au fost apoi purificat prin filtrare utilizând cromatografie cu gel(A se vedea informațiile justificative); analizacromatograme indicat o eficienta de cuplare între ADN-ulși GFP? N3 de 70%, ceea ce este similar cu cel observat înpregătirea de 4. Pentru a forma un tetraedru GFP (figura 1b,dreapta panoului), cele pure GFP-ADN conjugati (10c, 11c,12C, și 13c) au fost combinate în așa fel încât concentrația finalăde fiecare conjugat a fost de 1,0 mm, în Tris-HClSoluție (Tris = tri (hidroximetil) aminometan) care conțin5.0 mm MgCl2 (TM soluție tampon). Ca un control, cele patruoligonucleotide care nu aveau atât phosphoramidite alchineși o moleculă GFP (6, 7, 8, și 9) au fost, de asemenea, combinate.Probele de (20 ml) au fost încălzite la 54 8C timp de 3 minute, urmatde răcire la 48c peste 2min. Probele au fost analizate de cătreelectroforeza în gel de agaroză la 48c. Gelul a fost sonda pentruatât fluorescență verde și ADN-ul (prin colorarea cubromură de etidiu, EtBr). Lane 1 (Figura 1c, dreaptapanou) prezinta o specie de ADN care conțin căror mobilitate estesimilar cu un marker 200-bp ADN-ului (banda M). Acest rezultat esteîn concordanță cu observațiile raportate de Turberfield și colegiipentru formarea inițială nonfunctionalizedADN-ul tetraedru. Lane 2 (F igure 1 C, dreapta panoului),care conține componente GFP-ADN modificate, arată oADN-ul conținut de specii a căror mobilitate este mai mică decât cea anemodificat tetraedru. Ca tetraedru GFP a fostconceput pentru a poziționa fracțiunilor de patru GFP în afaratetraedru, era de așteptat ca hidrodinamic razaar fi mai mare și, prin urmare, mobilitatea electroforetică arfi mai mic. În plus, speciile de mobilitate mai mică prezintăFigura 1. Formarea unei proteine-ADN-ul modificat tetraedru. a) Numerotaresistem de specii de ADN și ADN-GFP. b) modelarea molecularăa ADN-ului tetraedru (stânga) și GFP ADN-tetraedru (dreapta). ADN-ul estese arată în albastru și GFP este prezentată în alb. Modele au fost create șienergie redusă la minimum prin utilizarea Maestro (SchrBdinger). c) analiza Gel detetraedru ADN-ul (banda 1) și tetraedru GFP (banda 2).Lane M contine un marker de 200 bp ADN-ului.Comunicații8820 www.angewandte.org? 2007 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co KGaA, Weinheim Angew. Chem. Int. Ed. 2007, 46, 8819 -8822

&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& Profitați de albastru de referință linkurile &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&

fluorescență verde atunci când entuziasmat la 488 nm (figura 1c, stângăpanou, banda 2), indicând faptul că acesta conține atât GFP șiADN-ul. Astfel, speciile observate în 2is benzi conformitate custructura propusă tetraedrice.Pentru a valida de asemenea, că conjugații GFP-oligonucleotidiciauto-asambla în suprastructurii propus, tetraedrecu diferite numere de ADN-ului si ADN-ul GFP-

au fost asamblate și analizate prin electroforeză în gel de(Figura 2). În aceste experimente, conjugați au fost adăugate atât decă concentrația finală a fiecărei specii a fost de 100 nm în200 ml de soluție tampon de TM. Lane 1 conține 6 și 2 benziconține oligonucleotide 6, 7, 8, și 9 (cu nici un prezent GFP).Lane 3 conține o GFP-oligonucleotidului conjugat (10 c)și 7, 8, și 9. Benzi ulterioare conțin GFP-suplimentaroligonucleotide substituit pentru oligonucleotidului singur. Atendință clară poate fi văzută, în care un număr tot mai mare demolecule de proteine scade proporțional mobilitateacomplexă, care indică faptul că toate cele patru GFP-oligonucleotidesunt necesare pentru a forma suprastructurii.În cele din urmă, conținutul GFP a presupus GFP-ADNtetraedru a fost evaluată prin utilizarea de corespondență fluorescențăspectroscopie, o tehnica cu un singur molecula [37]. Prin măsurareafluctuațiile de intensitate fluorescenta de particule fluorescentetrece printr-un volum mic de observare doi fotoni laconcentrații scăzute, numărul de fluorophores pe ADN-uluitetraedru a fost cuantificat printr-o analiză de luminozitate. [38]Luminozitatea este o măsură a semnalului de fluorescență desingură moleculă [39] În consecință., în cazul în care o particulă conține douăMolecule GFP, luminozitatea complexului este de două ori cea aGFP singur [40] Măsurarea. Al luminozității ADN-uluitetraedru (a se vedea informațiile justificative), a arătat că savaloare crescută cu cantități egale ca număr de GFPcontainingcomponente a fost crescut de la o (complex de 10c, 7,8, și 9) la patru (complex de 10 C, 11c, 12 C, și 13c). Acesteaexperimentele furnizează dovezi convingătoare pentru prezențao singură entitate moleculare, cu fragmente GFP patru anexată laADN-ul tetraedru.În rezumat, am dezvoltat un roman chemoenzymaticmetoda de a lega covalent orice proteine de interes cu ADN-ulși-au demonstrat utilitatea prin pregătirea unui complexproteine-ADN tetraedru. Ca tetraedru este compusa patru direcții individuale de ADN cu secvențe unice, acestStructura conține patru poziții individual adresabile pentruproteine funcționalizare. Metoda de proteine-ADN-uluiconjugare a raportat necesită o etichetă de recunoaștere prezentate(CVIA), care este destul de mic în comparație cu biotină-avidin și alte proteine de fuziune-abordări. Acest lucru permitesecventa de proteine suplimentare necesare pentru etichetarea selectivă afie reduse la minimum și, prin urmare, permite mai multe proteine-compactspațierea și un control mai mare asupra integrării de proteineîn termen de constructii ADN. În cele din urmă, aceasta ar trebui să facilitezepregătirea unui număr mare de proteine roman-ADN-ului hibridstructuri cu caracteristici utile structurale și funcționale.Secțiunea experimentalGFP-CVIA a fost purificat enzimatic și etichetate cu 1 pentru a produceGFP? N3 astfel cum sunt descrise anterior [34]. Toți reactivii sinteză de ADN au fostachiziționate de la Glen Cercetării și allDNAstrands au fost sintetizate

prin utilizarea unui PerSeptive Biosystems Accelerarea Sintetizator de ADN-ului. ADN-ulmodificat cu Texas Red a fost achiziționat de la ADN-ul integratTechnologies, Inc După sintezei ADN-ului a fost complet, alchinephosphoramidite a fost cuplat la sfârșitul manual 5 'al ADN-ului, carea fost încă atașată la rasina CPG. ADN-ul a fost modificatdeprotected, separate de rășină, și purificat prin fază inversăHPLC.Pentru a sintetiza conjugații GFP-ADN, GFP N3 (20 mm)? Fostincubate cu alchine-modificat ADN-ului (22 mm), CuSO4 (1,0 mm),TCEP (1,0 mm) și TBTA ligandului (100 mm), într-un volum total de500 ml de NaH2PO4 50mm, pH-ul 7.3 Soluție tampon (fosfat tamponSoluția; PB). Reacția a fost menținută la temperatura camerei pentru1 h, după care a fost trecut printr-un PNA-5 coloane (Amersham)echilibrată în soluție tampon de PB pentru a elimina CuSO4, TCEP, șiTBTA. Conjugații GFP-ADN au fost purificate prin utilizarea unui Superdex-75 filtrare coloană de gel (Amersham) în soluție tampon PBcare conțin NaCl 1,0 m (fosfat-tampon salină; PBS).Pentru GFP-TR studii, 100 nm GFP-ADN-ului (în 500 ml de PBSSoluție tampon) a fost amestecat cu diferite echivalente de TR-ADN-ului.Spectrele de fluorescenta au fost dobândite prin utilizarea unui Eclipse VarianDetector de fluorescență, cu o lex 488 nm.Pentru experimente tetraedre se arată în figura 1, ADN-ului6, 7, 8, și 9 și GFP ADN-fire 10c, 11c, 12 C, 13 C și au fostpreparat cu 50 mm, Tris-HCl, pH 8,0 și 5,0 mm MgCl2 (TM tamponsoluție), astfel încât concentrația finală a fiecărei componente a fost1,0 mm. Cele 20 de reacții ml au fost încălzite la 548C timp de 3 minute, urmatde răcire la 48c peste aproximativ 2min. Probele au fostdiluat cu 5 F soluția de gel nativ de tampon de încărcare și separate prinfolosind un gel de agaroză 1,5%. Gelurile au fost supuse electroforezei înTris, acetat, etilendiaminotetraacetic tetraacetic de acid (TAE) Soluție tampon dela 100 mA pentru 40 min la 48c. Pentru probele prezentate în figura 2,conjugați s-au adăugat, astfel încât concentrația finală a fiecărei speciia fost de 100 nm, în 200 ml de soluție tampon de TM. După tetraedres-au format așa cum este descris mai sus, probele de 200 ml s-au concentratla aproximativ 30 ml la 48c. Aceste probe au fost diluatecu 5 F nativ de gel soluție tampon de încărcare și separate prin utilizarea unui1,5% gel de agaroză așa cum este descris mai sus. Pentru probele prezentate înFigura 1, gelul a fost prima fotografiat utilizând o dinamica molecularaDensitometru furtuna fluorescenței platformă și apoi înmuiate în EtBr(0,5 mgmL 1?) În apă timp de 30 min și sonda prin utilizarea unui Bio-RadMoleculară Imager FX phosphorimager. Pentru Figura 2, EtBr(0,5 mgmL 1?), A fost inclusă în gel de sine.Primite: 03 mai 2007Revizuit: 08 august 2007On-line Publicat în: 12 octombrie 2007Figura 2. Formarea de proteine ADN-tetraedre care contin diferiteNumerele de proteine ADN-componente. Lane M: 100-bp scara ADN-ului, 200 bpeste indicat de săgeată; banda 1: oligonucleotidului 6; banda 2: ADN-ultetraedru singur (6, 7, 8, și 9); Lane 3: 10 C, 7, 8, și 9; benzi 4-6:

creșterea numărului de GFP-ADN componente. Sarcinile banda suntschematic reprezentat pe partea dreaptă a figurii.AngewandteChemieAngew. Chem. Int. Ed. 2007, 46, 8819 -8822? 2007 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co KGaA, Weinheim www.angewandte.org 8821

&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& Profitați de albastru de referință linkurile &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&

Cuvinte cheie:. Reacțiile clic · enzime · · nanostructurietichetarea proteine · structuri proteice[1] JH Chen, NC Seeman, Natura 1991, 350, 631.[2] RP Goodman, IAT Schaap, CF Tardin, CM Erben, RMBerry, CF Schmidt, AJ Turberfield, știință 2005, 310, 1661.[3] Y. Zhang, N. C. Seeman, J. Am. Chem. Soc. 1994, 116, 1661.[4] WM Shih, JD Quispe, GF Joyce, Natura 2004, 427, 618.[5] E. Winfree, F. Liu, LA Wenzler, NC Seeman, Natura 1998,394, 539.[6] TH LaBean, H. Yan, J. Kopatsch, FR Liu, E. Winfree, JHReif, N. C. Seeman, J. Am. Chem. Soc. 2000, 122, 1848.[7] H. Yan, SH Park, G. Ginkelstein, JH Reif, TH LaBean,Stiinta 2003, 301, 1882.[8] Y. El, Y. Chen, HP Liu, AE Ribbe, CD-uri Mao, J. Am. Chem.Soc. 2005, 127, 12202.[9] ER Hendrickson, TMH Truby, RD Joerger, ER Majarian,R. C. Ebersole, Res acizilor nucleici. 1995, 23, 522.[10] T. Sano, CL Smith, CR Cantor, știință 1992, 258, 120.[11] I. Burbulis, K. Yamaguchi, A. Gordon, R. Carlson, R. Brent,Nat. Modalitati 2005, 2, 31.[12] SH Park, P. Yin, Y. Liu, JH Reif, TH LaBean, H. Yan, NanoLit. 2005, 5, 729.[13] CM Niemeyer, J. Koehler, C. Wuerdemann, ChemBioChem2002, 3, 242.[14] P. Hazarika, F. Kukolka, CM Niemeyer, Angew. Chem. 2006,118, 6981; Angew. Chem. Int. Ed. 2006, 45, 6827.[15] CM Niemeyer, T. Sano, CL Smith, CR Cantor, nucleicAcizi Res. 1994, 22, 5530.[16] CM Niemeyer, W. BNrger, J. Peplies, Angew. Chem. 1998, 110,2391; Angew. Chem. Int. Ed. 1998, 37, 2265.[17] CM Niemeyer, M. Adler, S. Gao, L. Chi, Bioconjugate Chem.2001, 12, 364.[18] CM Niemeyer, CA Mirkin, nanaobiotehnologie: Concepte,Metode și aplicații, Wiley-VCH, Weinheim, 2004.[19] Y. El, Y. Tian, A. E. Ribbe, C. Mao, J. Am. Chem. Soc. 2006, 128,12664.[20] JM Tomkins, BK Nabbs, K. Barnes, M. Legido, AJ Blacker,RA McKendry, C. Abell, ChemBioChem 2001, 2, 375.[21] H. Li, SH Park, JH Reif, TH LaBean, H. Yan, J. Am. Chem.Soc. 2004, 126, 418.

[22] Y. Liu, C. Lin, H. Li, H. Yan, Angew. Chem. 2005, 117, 4407;Angew. Chem. Int. Ed. 2005, 44, 4333.[23] S. S. Ghosh, P. M. Kao, A.W. McCue, H. L. Chappelle, BioconjugateChem. 1990, 1, 71.[24] DR Corey, PG Schultz, știință 1987, 238, 1401.[25] S. Howorka, S. Cheley, H. Bayley, Nat. Biotechnol. 2001, 19, 636.[26] F. Kukolka, C. M. Niemeyer, Org. Biomol. Chem. 2004, 2, 2203.[27] M. Lovrinovic, R. Seidel, R. Wacker, H. Schroeder, O. Seitz, M.Engelhard, R. S. Goody, C. M. Niemeyer, Chem. Electri. 2003,822.[28] M. Lovrinovic, CM Niemeyer, ChemBioChem 2007, 8, 61.[29] F. Kukolka, BM MNller, S. Paternoster, A. Arndt, CMNiemeyer, C. BrOuchle, DC Mielul, Mic 2006, 2, 1083.[30] F. Kukolka, O. Schoeps, U. Woggon, CM Niemeyer, BioconjugateChem. 2007, 18, 621.[31] Y. Kho, SC Kim, C. Jiang, D. Barma, SW Kwon, J. Cheng, J.Jaunbergs, C. Weinbaum, F. Tamanoi, J. Falk, Y. Zhao, Proc.Natl. Acad. Sci. SUA 2004, 101, 12479.[32] MW Rose, Rose ND, J. Boggs, S. Lenevich, J. Xu, G. Barany,M. D. Distefano, J. Pept. Res. 2005, 65, 529.[33] C. Gauchet, GR Labadie, CD-uri Poulter, J. Am. Chem. Soc.2006, 128, 9274.[34] BP Duckworth, J. Xu, TA Taton, A. Guo, MD Distefano,Bioconjugate Chem. 2006, 17, 967.[35] RP Goodman, Berry RM, AJ Turberfield, Chem. Electri.2004, 1372.[36] CM Erben, RP Goodman, AJ Turberfield, Angew. Chem.2006, 118, 7574; Angew. Chem. Int. Ed. 2006, 45, 7414.[37] E. L. Elson, J. Biomed. Optati. 2004, 9, 857.[38] Y. Chen, J. D. Mueller, Proc. Natl. Acad. Sci. Statele Unite ale Americii 2007, 104,3147.[39] Y. Chen, JD Mueller, PTC Deci, E. Gratton, Biophys. J. 1999,77, 553.[40] Y. Chen, L.-N. Wei, J. D. Mueller, Proc. Natl. Acad. Sci. Statele Unite ale Americii2003, 100, 15492.Comunicații8822 www.angewandte.org? 2007 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co KGaA, Weinheim Angew. Chem. Int. Ed. 2007, 46, 8819 -8822

&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& Profitați de albastru de referință linkurile &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&

Anulaţi modificărileNou! Faceţi clic pe cuvintele de mai sus pentru a edita şi pentru a afişa traduceri alternative. Renunţaţi

Google Traducere pentru companii:Unelte pentru traducere Instrumentul de traducere a site-urilor web Global Market Finder

Opreste traducere instant Despre Google Traducere Mobil Confidentialitate Ajutor Trimiteţi feedback