OBIECTIVE

Dezvoltarea unei metode GC-FID de dozarea a acid valproic (VPA) și fenobarbitalului (PB) din plasma.Validarea metodei analitice de dozare a VPA și PB din plasma.Utilizarea metodei la monitorizarea nivelelor plasmatice de VPA și PB la pacienţi.

A fost dezvoltată si validata o metodă simplă GC-FID de monitorizare a a unor antiepileptice (AED) din plasma pacienţilor. Prepararea probelor fără derivatizare și utilizarea detecţiei FID asigură metodei un raport bun eficienţă/preţ și posibilitatea utilizarii în scopul cuantificării de rutină a VPA și PB.Concentratiile plasmatice determinate la pacienti au fost variate. Nu s-a constatat o legătură evidentă între administrarea de AED în mono-, sau politerapie și nivelele plasmatice ale acestora.

METODA GC-FID DE DOZARE SIMULTANĂ A ACIDULUI VALPROIC ŞI FENOBARBITALULUI DIN PLASMA PACIENŢILOR EPILEPTICI

Simona Codruţa Hegheş1, Maria Ilieş 1, Alina Uifălean 1, Emma Brustureanu 2, Corina Bocşan3, Anca Buzoianu3, Cristina Iuga1

1 Disciplina Analiza Medicamentului, Facultatea de Farmacie, Universitatea de Medicină și Farmacie “Iuliu Haţieganu”, Cluj Napoca , Romania2 Departamentul Neurologie I, Facultatea de Medicină, Universitatea de Medicină și Farmacie “Iuliu Haţieganu”, Cluj Napoca, Romania 3 Disciplina Farmacologie, Toxicologie şi Farmacologie clinică, Facultatea de Medicină, Universitatea de Medicină și Farmacie “Iuliu Haţieganu”, Cluj Napoca, Romania

În condiţiile cromatografice descrise anterior, valoarea timpilor de retenţie pentru substanţele analizate și pentru standardele interne au fost: pentru VPA tR=4,4, CPA tR=5,5, DEBA tR=9,5, respectiv PB tR=12,7. Timpul de analiză este scurt (15min) și nu au fost observate picuri interferente la timpii de retenţie ai analiţilor. Liniaritatea metodei s-a verificat pe domeniul de concentratii 5,12-333,76mg/L pentru VPA, respectiv 5,32-340,8mg/L pentru PB (nivelele terapeutice VPA: 50-100mg/L, PB: 15-40mg/L.). Curbele de calibrare au fost caracterizate prin urmatoarele ecuatii: y=0,40970945x+0,2652973 (R2=0,99994) pentru VPA, respectiv y=0,23476753x+0,01856655 (R2=0,99942) pentru PB. Evaluarea statistică a demonstrat o precizie bună a metodei (precizie intermediară, repetabilitate) cu coeficienţi de corelaţie cuprinși între 1,6%-8,0%, respectiv 6,8 %-9,3% pentru VPA și 2.0-8.5%, respectiv 6.7-15% pentru PB. Limita de cuantificare (LOQ) a fost 5,12mg/L pentru VPA și 5,32mg/L pentru PB. Au fost evaluati 120 de pacienti cu mono- (VPA/PB) sau pluriterapie (VPA+PB). 55,9% dintre concentraţiile plasmatice de VPA (118 pacienti) s-au incadrat în domeniul terapeutic, 33,6% au avut nivele mai mici, iar pentru 10.5% nivelele au fost mai mari. Concentratiile plasmatice de PB în cazul a 11 pacienti au fost mai mici decât concentratia minima terapeutică.

REZULTATE

CONCLUZII REFERINŢE

1. Eadie MJ. Therapeutic drug monitoring – antiepileptic drugs. Br J Clin Pharmacol. 2000; 52(S1): 11S–20S2. Volmut J, Matisová E, Pham Thi H. Simultaneous determination of 6 antiepileptic drugs by capillary gas chromatography. J. Chromatogr. 1990; 527(2):428-35.

MATERIAL ŞI METODE

Au fost utilizate standarde și reactivi de puritate analitică, de provenienţă Sigma Aldrich. Probele au fost preparate prin extracţie lichid-lichid. Precipitarea proteinelor s-a realizat cu cloroform/metanol (1:1), în care au fost adăugate soluţiile standardelor interne (acid caprilic (CPA) si acid dietilbarbituric (DEBA)). S-a prelevat stratul cloroformic, din care s-a injectat 1uL.Conditii cromatografice: Sistem cromatografic Agilent 6890N cu FID, coloană capilară HP-5 (30 m × 320 μm (i.d.) × 0.25 μm), temperatură injector 200oC, mod de injectare: split, gaz vector: N2, debit faza mobila: 2,6mL/min, temperatură detector 290oC. Separarea s-a realizat în gradient. Temperatura initiala a cuptorului a fost setata la 75oC fiind crescuta la 106oC cu o rata de 5oC/min si mentinuta timp de 1 minut. A fost apoi crescuta cu 20oC/min pana la 200oC, fiind urmata de o ultima rampa de 10oC/min pana la 230oC unde a fost mentinuta timp de 2 minute.