lp citologie 4

CITOLOGIE Lucrarea prac)că 4 – Membrana celulară Exclusiv pentru uz didac2c

Exclusiv pentru uz didac2c

℗2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie și histologie, UMF „Carol Davila” București

Membrana celulară. Formaţiuni specializate de la nivelul membranei. Joncțiuni intercelulare.

MO: membrana celulară nu este vizibilă deoarece grosimea sa, de ordinul zecilor de nm, este sub limita de rezoluţie a acestuia. ME: la o mărire de ordinul 103, celula apare delimitată de o linie întunecată subţire, continuă.

Vizualizarea membranei celulare Exclusiv pentru uz didac2c


La măriri de peste 50.000x, membrana celulară se prezintă ca o structură trilaminară, fiind alcatuită din două benzi întunecate la exterior şi una mediană, mai clară – definind ceea ce numim PLASMALEMĂ - substratul molecular: bistratul lipidic şi proteinele asociate acestuia. Cele 2 benzi electronodense ale plasmalemei se evidenţiază datorită fixării cu tetroxid de Os și a contrastării cu citratul de Pb. - osmiul leagă capetele polare ale fosfolipidelor, lanțurile glucidice exterioare iar citratul de Pb se leagă de grupările fosfat.

Membrana celulară în MET Exclusiv pentru uz didac2c


Bloom and Fawcett, A Textbook of Histology, Chapman and Hall, N.Y., 12th edition, 1994, Figure 1-2


Plasmalemă

Glicocalix

Citoschelet asociat membranei

Ultrastructura membranei celulare Exclusiv pentru uz didac2c


Glicocalix

Pe faţa externă a plasmalemei există o reţea de structuri oligo/poli-zaharidice cu aspectul unor filamente fine, ramificate ce alcătuiesc GLICOCALIXUL sau GLICOLEMA - substrat molecular: lanţuri de oligo/poli-zaharide purtate de lipide sau proteine.



Jeff Morris. The Glycocalyx: A New Focus for Heart Health. e-Journal of Age Management Medicine, 2012(3)

Nathan Duthoit. The Cell Membrane, nfsdsystems.com, 2009(4)

Citoscheletul asociat membranei

- reţea alcatuită din proteine filamentare anastomozate între ele, formând ochiuri şi noduri - ancorat atât la plasmalemă (proteine transmembranare) cât şi la citoscheletul celular



MODALITĂŢI DE STUDIU AL MEMBRANELOR

1. STUDIUL ULTRASTRUCTURAL a. Microscopie electronică de transmisie (TEM)

i. Pe secţiuni ii. Pe preparate de îngheţare - fracturare

b. Microscopie electronică de scanning (SEM)

9 ℗2013 Disciplina de medicină celulară și moleculară -‐ medicina dezvoltării umane, UMF „Carol Davila” Bucureș)


TEHNICA DE ÎNGHEŢARE – FRACTURARE

•  Fracturare – la nivelul porţiunii hidrofobe a bistratului lipidic

•  Se pot studia feţele interne ale celor două straturi lipidice ale membranei: faţa externă E şi cea internă protoplasmatică P

•  Proteinele membranare sunt mai bogate pe faţa P, fiind ancorate de citoschelet.



STUDII SPECIFICE Citochimie ultrastructurală

– trasori electronodenşi cu i. Feritină ii. Peroxidază de hrean iii. Citocrom c (hempeptizi) iv. Aur coloidal



STUDIUL CITOCHIMIC AL LIPIDELOR

a. FILIPINA – pentru colesterol (agregate care dezorganizează membrana, vizibile la M.E.)

b. POLIMIXINA B – pentru fosfolipidele anionice - PS şi PI

•  se poate evidenţia distribuţia asimetrică a lipidelor



Din: Simionescu M, Gafencu A, Antohe F. Microsc Res Tech. 57, 269–288 (2002)

Complexe filipină-colesterol la infundibulele stomatale ale caveolelor (îngheţare-fracturare; evidenţiate pentru prima dată de Dr. Florea Lupu)

℗2013 Disciplina de medicină celulară și moleculară -‐ medicina dezvoltării umane, UMF „Carol Davila” Bucureș)


Formațiuni specializate la nivelul membranei

De pol apical: •  Cili - pentru a mișca particule •  Microvili •  Stereocili De pol laterobazal: •  Joncţiuni celulare •  Labirint bazal


- pentru a crește suprafața


-  structuri membranare de pol apical, organizate pe microtubuli

-  localizare: epiteliu respirator, trompă uterină

Cili Exclusiv pentru uz didac2c

–  un dublet central, înconjurat de o teacă centrală

–  9 dublete periferice conectate prin nexină

–  două braţe de dineină (fiecare dublet periferic), proteinele motor ce asigură mişcarea activă a cilului

–  corpul bazal, similar ca organizare centriolilor, cu rol în organizarea cilului

http://www.cytochemistry.net/cell-biology/cilia1.jpg


-  structuri membranare de pol apical, organizate pe filamente de actină -  localizare (aprox. 3000/celulă, cresc Sabsorbantă):

- enterocite („platou striat”) – microvili scurți (1 µm) - nefrocite („margine în perie”) – microvili mai lungi (2-6 µm), inegali

-  sunt imobili

Microvili Exclusiv pentru uz didac2c


h6p://www.cytochemistry.net/microanatomy/epithelia/membr23.jpg

http://course1.winona.edu/sberg/IMAGES/microvl1.gif

-  structuri membranare de pol apical, organizate pe filamente de actină -  mai lungi decât microvilii (5-7µm) -  localizare:

- urechea internă (rol în percepția senzorială), - epididim (rol în absorbție)

-  sunt imobili

Stereocili Exclusiv pentru uz didac2c


h6p://www.cytochemistry.net/microanatomy/epithelia/membr23.jpg

http://course1.winona.edu/sberg/IMAGES/microvl1.gif


Joncțiuni celulare

Joncțiuni speciale: •  strânse (ocluzive) •  de ataşare (aderente) •  de comunicare (comunicante,

„gap”)

•  structuri membranare de pol latero-bazal

•  rol în adezivitatea celulelor în cadrul unui ţesut

•  observabile doar la MET


http://www.biology.arizona.edu/cell_bio/problem_sets/membranes/junctions.html

Joncţiunea strânsă = zonula occludens ME: “închiderea“ spaţiului intercelular, prin apoziţia membranelor a două celule adiacente -  funcții:

- barieră (izolează conținutul lumenului față de spațiul intracelular, stabilește gradiente de concentrație)

- contribuie la menținerea polarității celulelor

Zonula occludens Exclusiv pentru uz didac2c

Fawcett DW, The Cell: An Atlas of Fine Structure, WB Saunders, Philadelphia, 1966, p. 367. ℗2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie și histologie, UMF „Carol Davila” București

2 tipuri: -  Desmozomi în bandă (zonula adherens) -  Desmozomi în spot (macula adherens) ME: condensare membranară care prezintă pe versantul citoplasmatic placa desmozomală Hemidesmozomi ME: componenta celulară are acelaşi aspect ca desmozomii, dar localizarea diferă – la polul bazal al celulei

Desmozomi Exclusiv pentru uz didac2c


http://www.histology.leeds.ac.uk/cell/assets/desmosome2.jpg



Fawcett DW, The Cell: An Atlas of Fine Structure, WB Saunders, Philadelphia, 1966, p. 371.

http://www.biology.arizona.edu/cell_bio/problem_sets/membranes/13t.html

Succesiunea de la polul apical spre cel bazal a următoarelor tipuri de joncţiuni: •  Zonula occludens •  Zonula adherens •  Macula adherens (desmozom în spot)

Complexul joncţional Exclusiv pentru uz didac2c


= joncţiuni gap 2 membrane alăturate străbatute de canale hidrofile = conexoni

Joncţiuni de comunicare Exclusiv pentru uz didac2c


http://www.biology.arizona.edu/cell_bio/problem_sets/membranes/13t.html

DA Goodenough and DL Paul. Gap Junctions. Cold Spring Harb Perspect Biol 2009;1:a002576

Falduri de membrană bazală, bogată în Na+-K+ ATPază, între care se găsesc numeroase mitocondrii - localizare: celule din ductele secretorii ale glandelor salivare, glandele sudoripare, nefron

Labirintul bazal Exclusiv pentru uz didac2c


http://www.lab.anhb.uwa.edu.au Duct striat, H&E http://ahmedkelhy75.arabblogs.com/melsowar/archive/2011/3/1324235.html

lp citologie 4

Documents