Download - LP 3
![Page 1: LP 3](https://reader030.vdocumente.com/reader030/viewer/2022032700/563db7bd550346aa9a8d7bce/html5/thumbnails/1.jpg)
LP 3. BIOCHIMIE LP 3. BIOCHIMIE CLINICĂCLINICĂ
EXPLORAREA EXPLORAREA METABOLISMULUI PROTEICMETABOLISMULUI PROTEIC
![Page 2: LP 3](https://reader030.vdocumente.com/reader030/viewer/2022032700/563db7bd550346aa9a8d7bce/html5/thumbnails/2.jpg)
Clase de proteine Clase de proteine plasmaticeplasmatice
Plasma = amestec coloidalPlasma = amestec coloidal Clase de proteine plasmaticeClase de proteine plasmatice
– AlbuminaAlbumina– GlobulineGlobuline
Index de disproteinemieIndex de disproteinemie– Raport de concentraţieRaport de concentraţie– A/G = 0,8 – 1,2A/G = 0,8 – 1,2
![Page 3: LP 3](https://reader030.vdocumente.com/reader030/viewer/2022032700/563db7bd550346aa9a8d7bce/html5/thumbnails/3.jpg)
Proteinemia Proteinemia concentraţia proteinelor totale din plasmă Metode:
– În ser sau plasmă: Metodă fotometrică: reacţia biuretului: în mediu
alcalin legăturile peptidice reacţionează cu ionii de Cu(II) cu formarea unui compus colorat violet, a cărei întensitatese determină la 546 nm;
– În urină sau LCR: Metoda Coomassie: utilizarea colorantului
Coomassie Brillant Blue(prag de detecţie: 1mg/L proteine)-macrometoda
pyrogallol red ( prag de detecţie: 20mgproteină/L)-micrometoda
Material biologic : ser, plasmă (heparinată), urină, LCR, lichide de puncţie –r.Rivalta (acid acetic glacial)
![Page 4: LP 3](https://reader030.vdocumente.com/reader030/viewer/2022032700/563db7bd550346aa9a8d7bce/html5/thumbnails/4.jpg)
Metoda biuretuluiMetoda biuretului
![Page 5: LP 3](https://reader030.vdocumente.com/reader030/viewer/2022032700/563db7bd550346aa9a8d7bce/html5/thumbnails/5.jpg)
Proteinemia
Valorinormale: – ser sau plasmă:
60 -80 g/l (adult) 45-75 g/l (nou-născuţi şi sugari)
– urină: < 150 mg/zi– LCR: 150 –450 mg/l
![Page 6: LP 3](https://reader030.vdocumente.com/reader030/viewer/2022032700/563db7bd550346aa9a8d7bce/html5/thumbnails/6.jpg)
Disproteinemia Modificarea calitativă/cantitativă a
conţinutului în proteine a plasmei; Valori scăzute (hipoproteinemie):
– insuficienţă hepatică, sindrom nefrotic, arsuri, enteropatii, malnutriţie / malabsorbţie, insuficienţă pancreatică;
– pseudohipoproteimemie: prin diluţie (recoltare de pe branulă)
Valori crescute (hiperproteinemie):– hiperproteinemii absolute:
hiperimunoglobulinemie:cronice, gamopatii monoclonale;
– hiperproteinemii relative: hemoconcentraţie, diabet insipid, diaree.
![Page 7: LP 3](https://reader030.vdocumente.com/reader030/viewer/2022032700/563db7bd550346aa9a8d7bce/html5/thumbnails/7.jpg)
Albumine Albumine forma globulară, dimensiune și greutate
moleculară mică (60000-69000Da) factori stabilizanți ai echilibrului coloidal al
plasmei –solubilitate bună Dozare ser:
– metode fotometrice (verde de bromcrezol) – procentaj relativ din proteinogramă sau cantitate
absolută calculată din valoarea proteinemiei – imunodifuziune radială– nefelometrie imună alte lichide biologice
decat serul– imunturbidimetrie
Dozare urină şi LCR: nefelometrie, turbidimetrie;
![Page 8: LP 3](https://reader030.vdocumente.com/reader030/viewer/2022032700/563db7bd550346aa9a8d7bce/html5/thumbnails/8.jpg)
Proteinuria Bence-Jones
lanţurile uşoare de tip sau kappa saulambda
apare în – plasmocitoame– macroglobulinemia Waldenström.
Metode de evidenţiere: – imunofixare (prag de sensibilitate: 20-30
mg/l) – electroforeza urinară (prag de
sensibilitate: aprox. 100 mg/l).
![Page 9: LP 3](https://reader030.vdocumente.com/reader030/viewer/2022032700/563db7bd550346aa9a8d7bce/html5/thumbnails/9.jpg)
AlbumineAlbumine
Valori normale: – ser: 55-65% din totalul proteinelor plasmatice;
34 -48 g/l.– Urină: sub 20 mg/l;– LCR: 110-350 mg/l; (in functie de locatie: cel
mai concentrat ventriculii cerebrali, lombar, toracic, cervical)
Valori scăzute: insuficienţă hepatică, sindrom nefrotic, arsuri, inflamaţii acute şi cronice, enteropatii, tumori maligne.
Probe biologice: ser, urină, LCR;
![Page 10: LP 3](https://reader030.vdocumente.com/reader030/viewer/2022032700/563db7bd550346aa9a8d7bce/html5/thumbnails/10.jpg)
Electroforeza proteinelor metodă analitică de separare a particulelor
sau ansamblurilor de particule încărcate electric, sub acţiunea unui câmp electric extern
o particulă încărcată electric se va deplasa cu o viteză constantă determinată de acţiunea următoarelor forţe:
forţa de atracţie electroforetică F1: F1= Q · E forţa de frecare Stokes F2: F2 = 6π ·η· r · v
![Page 11: LP 3](https://reader030.vdocumente.com/reader030/viewer/2022032700/563db7bd550346aa9a8d7bce/html5/thumbnails/11.jpg)
Electroforeza proteinelor
viteza electroforetică v: v = Q· E / 6 π· η· r
mobilitatea electroforetică μ: μ= v / E, μ = Q / 6π · η ·r particulele pentru care raportul Q/r
este identic vor avea mobilităţi electroforetice identice
![Page 12: LP 3](https://reader030.vdocumente.com/reader030/viewer/2022032700/563db7bd550346aa9a8d7bce/html5/thumbnails/12.jpg)
Electroforeza proteinelor
Mediu de migrare:agaroză, pH: 8.6 (tampon TRIS barbital), Colorant: amido black, red Ponceau
![Page 13: LP 3](https://reader030.vdocumente.com/reader030/viewer/2022032700/563db7bd550346aa9a8d7bce/html5/thumbnails/13.jpg)
Electroforeza proteinelor
Se aplică 5 μl de ser pe gelul de agaroză Se aşteaptă 10 min. (penetrarea serului în
gel) Se introduce gelul înaparatul de
electroforeză Se aplică tamponul TRIS barbital Se alege programul de migrare După migrare şi uscare se transferă gelul
în unitatea de colorare
![Page 14: LP 3](https://reader030.vdocumente.com/reader030/viewer/2022032700/563db7bd550346aa9a8d7bce/html5/thumbnails/14.jpg)
Electroforeza proteinelor
După colorare se interpretează– Inspecţie– Interpretare densitometrică
![Page 15: LP 3](https://reader030.vdocumente.com/reader030/viewer/2022032700/563db7bd550346aa9a8d7bce/html5/thumbnails/15.jpg)
Fracţiunile electroforetice Fracţiunile proteinelor serice:
– albumina – α1-globuline:
α1-lipoproteină (HDL), α1-glicoproteina acidă, α1-antitripsină, α 1-antichimotripsină,
– α2-globuline: haptoglobină, ceruloplasmină,, α2-macroglobulină,
– β1 şi β2 globuline: β-lipoproteine, hemopexina, factorul C3, transferina, PCR, fibrinogen.
– fracţiunea γ-globulinelor: - IgM, IgA şi IgG.
![Page 16: LP 3](https://reader030.vdocumente.com/reader030/viewer/2022032700/563db7bd550346aa9a8d7bce/html5/thumbnails/16.jpg)
Proteinograma
Valori normale(procentual calculate din densitograme):– albumină: 54,3-65,5%– α1-globuline: 1,2-3,3 %– α2-globuline: 8,3-15,0 %– β-globuline: 9,0-17.7 %– γ-globuline: 7,1-19,5%
![Page 17: LP 3](https://reader030.vdocumente.com/reader030/viewer/2022032700/563db7bd550346aa9a8d7bce/html5/thumbnails/17.jpg)
Interpretare
Ciroză hepatică – Ciroză hepatică cu ascită;– Proteine totale: 71 g/l– Albumină: 32 g/l– Hipoalbuminemie;– ↓α1, α2– ↑γ-globulinele– Fuziune beta-gamma;
![Page 18: LP 3](https://reader030.vdocumente.com/reader030/viewer/2022032700/563db7bd550346aa9a8d7bce/html5/thumbnails/18.jpg)
Interpretare
Sindrom nefroticProteinurie 9,5g/24 ore;Proteine totale: 35 g/l;Albumină: 18 g/l;↓ albumine;↓ Alfa1-globulinemie;↑ alfa2-globulinemie;↑ beta-globulinemie;↓ gama-globulinele
![Page 19: LP 3](https://reader030.vdocumente.com/reader030/viewer/2022032700/563db7bd550346aa9a8d7bce/html5/thumbnails/19.jpg)
Interpretare
Inflamaţie acută – Băiat de 2 ani;– Proteine totale: 57 g/l;– Albumină: 36 g/l;– ↓ albuminemie;– ↑alfa1-şi alfa2 globulinemie;– ↑ gammaglobulinemie
![Page 20: LP 3](https://reader030.vdocumente.com/reader030/viewer/2022032700/563db7bd550346aa9a8d7bce/html5/thumbnails/20.jpg)
Interpretare
Anemie feriprivă Proteine totale: 73 g/l; Albumină: 43 g/l; ↑ beta-globulinemie
– (transferina!);
![Page 21: LP 3](https://reader030.vdocumente.com/reader030/viewer/2022032700/563db7bd550346aa9a8d7bce/html5/thumbnails/21.jpg)
Interpretare
Hipogamaglobulinemie (leucemie mieloidă acută)Proteine totale: 61 g/l;Albumină: 44 g/l;↓ albuminemie;↑ alfa1-alfa2 globulinemie;↑ betaglobulinemie;↓gammaglobulinemie;
![Page 22: LP 3](https://reader030.vdocumente.com/reader030/viewer/2022032700/563db7bd550346aa9a8d7bce/html5/thumbnails/22.jpg)
Interpretare
Hipogamaglobulinemie (leucemie limfatică cronică) Proteine totale: 55 g/l;
Albumină: 49 g/l; ↓ albuminemie; ↓ gammaglobulinemie, domina
celulele maligne, care epuizeaza maduva, celulele sanatoase nu mai ofera titrul protector;
![Page 23: LP 3](https://reader030.vdocumente.com/reader030/viewer/2022032700/563db7bd550346aa9a8d7bce/html5/thumbnails/23.jpg)
Interpretare
Mielom multiplu – Proteine totale: 109 g/l;– Albumină: 36 g/l;– ↓ albuminemie;– Gradient M în gamma 1