7/24/2019 Analiza Aminelor Biogene Din Vinuri Prin Extractia Lichid-lichid Asistata de Desarare Si Cromatografie Lichida de Ina

1/5

Analiza aminelor biogene din vinuri prin extractia lichid-lichid asistata

de desarare si cromatografe lichida de inalta perormanta cu detectie

uorimetrica

Rezumat

Aminele biogene sunt compusi organici azotati cu masa moleculara mica care

sunt ormati sau metabolizati in celulele organismelor vii si pot fi gasite in mai

multe alimente, find produse in principal de decarboxilarea aminoacizilor. Cand

sunt ingerate in cantitati mari pot produce probleme de sanatate oamenilor. In

bauturile alcoolice, si in special in vinuri, ele sunt ormate in timpul procesului de

vinifcatie, ca rezultat al actiunii microorganismelor.

In aceasta lucrare este propusa o noua metoda pentru determinarea aminelor

biogene din vinuri, care include o abordare a prepararii probei bazata pe desarareasistata de extractia lichid-lichid, olosirea clorurii de dansil clorura

de dimetilamino-natil-sulonil! pentru derivatizarea si separarea cromatografca

prin cromatografa lichida de inalta perormanta cu detectie uorimetrica. "ectul

desararii este olosit pentru a promova separarea azelor dintre apa si un solvent

organic miscibil in apa, in timp ce se imbunatateste extractia speciilor organice sau

anorganice. #ai multi parametrii ai extractiei au ost optimizati, cum ar fi

concentratia clorurii de dansil, p$-ul si eectele cauzate de ordinea in care extractia

si derivatizarea au loc.

Rezultatele au aratat posibilitatea de a ace in acelasi timp extractia si

derivatizarea, acand prepararea probei mai usoara si mai rapida. #etodologia aost aplicata cu succes pentru determinarea aminelor biogene din % vinuri alb, rosu

si ros&!. Aceasta metoda are potentialul de a fi o buna alternativa a metodelor

existente, din moment ce este mai ietina, usoara si simplifca pasul de preparare al

probei.

'. Introducere

Aminele biogene sunt un grup oarte important de compusi organici care sunt

des intalniti intr-o larga varietate de mancaruri si bauturi cum ar fi branza, vinul,

berea, produsele din peste si carne. In general sunt ormati prin decarboxilarea

aminoacizilor sau aminarea si transaminarea aldehidelor si (etonelor. Aminelebiogene sunt impartite de obicei in ) grupuri, conorm structurii lor chimice*

- aliatice* metilamina, dimetilamina, etilamina, putresceina, cadaverina,

isopentilamina, spermidina+

- aromatice* tiramina, eniletilamina+

7/24/2019 Analiza Aminelor Biogene Din Vinuri Prin Extractia Lichid-lichid Asistata de Desarare Si Cromatografie Lichida de Ina

2/5

- heterociclice* histamina, triptamina.

Aminele biogene sunt buni indicatori ai calitatii mancarii asociati gradului de

degradare si ermentare din mancare. Acesi compusi pot fi benefci sau daunatori

sanatatii oamenilor, deoarece in concentratii mici ei pot fi usor tolerati de catre

corpul uman si chiar pot auta cateva unctii fziologice+ pe de alta parte, inconcentratii mari, ei pot produce tulburari neurologice, dureri de cap, hipo sau

hipertensiune, greata, palpitatii cardiace sau intoxicatie renala.

In vin, aminele biogene sunt ormate in timpul procesului de vinifcatie

datorita actiiunii a mai multor microorganisme in timpul ermentarii alcoolice si

malolactice. ermentatia malolactica , care este catalizata de bacteriile acidului

lactic, este considerat unul dintre cei mai importanti pasi din timpul vinifcatiei.

Aceasta producere este dependenta de prezenta bacteriilor, de disponibilitatea

precursorilor amino acizi, de durata azei initiale de ermentatie, de nivelul

dioxidului de sul, de p$ si de perioada de contact dintre must si coaa strugurelui.

in aceste motive, vinurile rosii au in general continut mai mare de amine biogenedecat vinurile albe. In cazul berii, ormarea si prezenta aminelor biogene este legata

de actiunea drodiei, bacteriile acidului lactic si calitatea precursorul materiei prime.

eterminarea simultana si rapida a aminelor biogene din vinuri necesita

metode ietine, sigure si simple. In lucrarile de reerinta am gasit cateva metode

olosite pentru determinarea aminelor biogene care sunt bazate pe electrooreza

capilara, pe cromatrografa de gaze si cea mai intalnita pe cromatografa lichida de

inalta perormanta, in combinatie cu cativa detectori.

In aceasta lucrare propunem o metoda simpla si rapida pentru determinarea

a / amine biogene gasite in vinuri, olosind o procedura directa de prepare a probei,bazata pe o desarare asistata de extractia lichid-lichid si derivatizarea cu clorura de

dansil pentru analiza cromatografei lichida de inalta perormanta cu detectie

uorimetrica. Aceasta metoda oloseste eectul desararii ca baza pentru extractia

omogena lichid-lichid, si in aara de sustinerea separarii azelor, aditia de sare

imbunatateste extractia de specii moleculare in aza organica. Aceasta metoda,

care dea s-a dovedit a ii oarte valoroasa pentru determinarea compusilor 0-

dicarbonilici, este simpla, rapida si sigura pentru determinarea aminelor biogene din

probe de vin.

1. #ateriale si metode

Produse chimice si probe

2oti reactivii olositi in aceasta lucrare, exceptand cazul cand se mentioneaza

altel, au ost de grad analitic si au ost olositi ara o purifcare ulterioara. Apa

ultrapura a ost olosita pentru toate analizele chimice si spalarea sticlariei. 2oti

eluentii cromatografci au ost fltrati prin fltru de nailon.

7/24/2019 Analiza Aminelor Biogene Din Vinuri Prin Extractia Lichid-lichid Asistata de Desarare Si Cromatografie Lichida de Ina

3/5

3olutiile stoc standard individuale ale fecarei amine biogene au ost

preparate diluand sau dizolvand cantitatea asemanatoare de reactiv comercial in

apa de mare puritate si stocate la 4 5C. 3olutiile de lucru au ost preparate zilnic

prin dilutia solutiilor stoc.

3olutia de clorura de dansil a ost preparata dizolvand 67 mg de reactiv in 1%ml de acetonitril+ a ost stocat la 4 5C pana la olosire.

8robele de vin olosite in aceasta lucrare au ost cumparate de la

supermar(et-uri locale.

Procedura de extractie adoptata

#etoda experimentala olosita s-a bazat pe o metoda descrisa de I.#.

9alente, cu modifcarile adecvate. 1 ml de proda de vin au ost amestecati cu ' ml

de acetonitril si ' ml de clorura de dansil obtinand un raport de '*' intre aza

apoasa si cea organica. 8entru a asigura un pas corect de derivatizare, probele de

vin au ost in prealabil cu tampon osat in raport de '*', pentru a mari p$-ulmediului. upa 1% minute de derivatizare, 7.') g de :aCl au ost cantarite si

adaugate in amestec+ tuburile au ost centriugate la ;777 rpm timp de 1 minute

pentru separarea azelor. aza superioara a ost colectata pentru analiza.

ig. 1 - 3chema procedurii experimentale pentru extractia aminelor biogene

Analiza HPLC-FLD (analiza cromatografca lichida de inalta perormanta cu

detectie uorimetrica!

3istemul $8 ata sot?are. 3epararea derivatilor clorurii de dansil a ost acuta

cu o coloana 8henomenex @emini. aza mobila a constat in tampon de acetonitril si

acetat. In primele 6 minute acetonitrilul a crescut liniar de la )% la ;%+ in

urmatoarele 'B minute acetonitrilul a crescut la 67 , iar in urmatoarele '7 minute

la '77+ de la )% la 47 minute compozitia azei mobile s-a intors la )% acetonitril+

7/24/2019 Analiza Aminelor Biogene Din Vinuri Prin Extractia Lichid-lichid Asistata de Desarare Si Cromatografie Lichida de Ina

4/5

un pas suplimentar de % minute a ost olosit pentru conditionare inainte de

urmatoarea inectie.

). Rezultate si discutii

Aminele biogene nu au proprietati cromoore, asa ca pentru o detectie

corespunzatoare trebuie eectuata o reactie de derivatizare. Clorura de dansil

reactioneaza cu aminele pentru a orma sulonamide stabile covalente legate, care

au proprietati uorescente.

ig. ' - Reprezentarea reactiei dintre aminele biogene si clorura de dansil

In aara de optimizarea conditiilor cromatografce, mai multi parametrii au

trebuit optimizati, cum ar fi inuenta timpului de extractie, inuenta p$-ului si

concentratia clorurii de dansil.

8asii de extractie si derivatizare sunt in general considerati independenti de

cand, in maoritatea cazurilor, extractia este eectuata prima, urmata de

derivatizare. e cand clorura de dansil a ost preparata in acetonitril, care este de

asemenea solventul organic olosit la extractie, a ost studiata integrarea reactivului

in procedura de extractie. 8e aceasta cale au ost testate ) proceduri dierite de

extractiederivatizare*

- A. derivatizare urmata de extractie+- D. derivatizare si extractie simultana+

- C. extractie urmata de derivatizare.

7/24/2019 Analiza Aminelor Biogene Din Vinuri Prin Extractia Lichid-lichid Asistata de Desarare Si Cromatografie Lichida de Ina

5/5

Analiza probelor de "in

#etoda propusa a ost aplicata pentru determinarea continutului de amine

biogene din % vinuri. 9inurile erau de origini si sortimente dierite* ) vinuri albe, '

vin rosu si ' vin ros&. "xtractia si derivatizarea s-au eectuat in conormitate cu

procedurile descrise anterior. 8robele de vin au ost diluate '*' cu tampon osat

pentru a controla p$-ul si a scadea continutul de etanol. 9inul rosu a avut cel mai

mare numar de amine biogene, cum era de asteptat tinand cond de procesul sau de

vinifcatie.

Cat despre stabilitatea aminelor derivate, dupa un interval de '1 ore, nu am

constatat o pierdere semnifcativa a intensitatii semnalului.

4. Concluzii

In aceasta lucrare am propus o metoda simpla si rapida de determinare a

aminelor biogene din vinuri. #etoda propusa oloseste un solvent organic mai putin

riscant pentru extractie acetonitril! si procedura de extractie este oarte directa.

Acesta este principalul avanta al metodei propuse din moment ce extractia poate f

realizata simultan cu derivatizarea. #ai multi parametrii ai extractiei au ost

optimizati, cum ar fi derivatizarea concentratiei reactivului, p$-ul si timpul

extractiei. A ost aratata inluenta p$-ului si importanta controlarii lui inainte de

extractie.

Aceasta metoda a ost aplicata cu succes analizei a / amine biogene

prezente in mancare si bautura. 3e prezinta ca find o metoda usoara, rapida si

ietina pentru analiza acestei clase de compusi si care poate fi usor implementata

in experimentele pentru controlul calitatii.