Rezistenţa osmotică

Principiu:Rezistenţa osmotică este rezistenţa eritrocitelor

în soluţii hipotone.Aceasta se determină urmărind comportarea

eritrocitelor în soluţii de NaCl de diferite concentraţii hipotonice, indicănd concentraţiile unde începe hemoliza şi unde hemoliza este totală.

 Materiale necesare:

-clorură de sodiu soluţie;-apă distilată;-eprubete de hemoliză;-sânge integral imediat după recoltare sau sânge recoltat pe anticoagulant uscat.

Tehnica diluţiilor cu pipeta gradată:În 21 de eprubete se repartizează câte 1ml din diferite

concentraţii de NaCl, concentraţii care descresc de la 0,7 la 0,3%, pornind de la o soluţie de 1% NaCl(conform tabelului). Se aspiră de fiecare dată într-o pipetă gradată o cantitate de 1 ml din soluţia de 1% de NaCl şi se adaugă 0,7 ml în primul tub şi restul de 0,3 ml în al 21-lea tub. La a doua pipetare se adaugă 0,68 ml în al doilea tub şi restul de 0,32 ml în al 20-lea tub şi aşa mai departe. La pipetarea apei distilate se procedează invers.

Cu o pipetă Pasteur uscată se distribuie câte o picătură de sânge în fiecare eprubetă şi se agită uşor pentru a omogeniza sângele. Eprubetele se lasă la temperatura camerei 30 de minute după care se pot centrifuga şi se fac citirile sau se lasă să sedimenteze 3 ore. Citirea se poate face şi la 24 de ore dacă stativul este păstrat la +4C.

Tehnică

Hemoliza iniţială exprimă rezistenţa osmotică minimă şi este indicată de concentraţia primei eprubete care prezintă un supernatant hemolizat roz.

Hemoliza totală exprimă rezistenţa osmotică maximă şi este indicată de concentraţia primei eprubete care nu prezintă sediment de eritrocite, toate fiind hemolizate.

Valori normale:Rezistenţa osmotică minimă: 0,46-0,42 %Rezistenţa osmotică maximă 0,38-0,34 % 

Dacă hemoliza iniţială apare la concentraţii mai mari rezistenţa osmotică este scăzută cum se întâmplă în icter hemolitic congenital, intoxicaţii cu benzen, uneori în hepatita epidemică.

Dacă hemoliza iniţială apare la concentraţii mai mici, rezistenţa este crescută cum se întâmplă în talasemie, după hemoragii acute (hematiile tinere au rezistenţa osmotică crescută splenectomie, în anemii feriprive, în icterul mecanic, uneori în anemia Biermer.

Eprubeta nr. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

Soluţie NaCl (ml)

0,70

0,68

0,66

0,64

0,62

0,60

0,58

0,56

0,54

0,52

0,50

0,48

0,46

0,44

0,42

0,40

0,38

0,36

0,34

0,32

0,30

Apă distilată (ml)

0,30

0,32

0,34

0,36

0,38

0,40

0,42

0,44

0,46

0,48

0,50

0,52

0,54

0,56

0,58

0,60

0,62

0,64

0,66

0,68

0,70

Concentratia NaCI (%)

0,70

0,68

0,66

0,64

0,62

0,60

0,58

0,56

0,54

0,52

0,50

0,48

0,46

0,44

0,42

0,40

0,38

0,36

0,34

0,32

0,30