Curs de BiofizicMMeetode dtode de se studtudiuiun Bion Biofizicfizic3Prof. dr. Cipriana TEFNESCUef lucr. dr. Irena GRIEROSUClasificare:I. METODE GENERAEII. METODE !"ECI#ICEI. METODE GENERAE:A) Observaia tiinificB) Experimentul tiinific$tiin%a este o u& &icercetarea este c'eia acesteia. ( Anton "annNatura rspunde doar celui pregtit s o aud.O)ser*a%ia &tiin%ificCuvntla od!" #ndeo$e%i #n SU&. Ori'ineintere$ant!. Ilu$trea(! afira)ia lui Pasteur* +ansa, ntmplarea ajut numai spiritele pregtite,. Serendipitatea e$te un +hazard fericit,.!erendi+itate,i++ocrate: observaia tiinificHippocrate a fost fondatorul colii medicale Kos i numele lui este strns legat de prima perioad a medicinii tiinifice. Diagnosticul lui se bazeaz pe sistemul de raionament logic, pe observaie clinic atent, pe o abordare uman a pacientului, pe logic.,i++ocrate:Printele mediciniiurmntul lui Hippocrate!azele cercetrii tiinifice" observaia#ia medical $ #oaia de observatie, continu s fie cel mai important document al pacientului %primele observaii clinice $ Hippocrate&. 'ratamentul pe baze tiinifice.O)ser*a%ia &tiin%ific E-+eri.entul &tiin%ific intenional" scop metodic" metod organizat, cercetare sistematic valoare cognitiv depinde de calitile cercettorului fr intervenia cercettorului$ poate fi"(. direct %bazat pe percepia senzorial&). indirect %intermediat de un instrument $ stetoscopul& aceleai caracteristici, dar cu intervenia cercettorului poate fi"1. in vivo (pe modele animale)2. in vitro (pe celule, culturi de celule) nu poate fi aplicat pe om.-.e/p0rience e$t une o%$ervation provo1u0e dan$ le %ut de faire na#tre une id0e. Claude 2ernard II. Metodele specifice biofiziciiClasificare bazat pe 3 criterii:*. Principiul fizic+biofizic al metodei %prezentat e,tensiv&**. -n relaie cu modul de utilizare"metode de separaremetode analitice %de analiz&***. -n relaie cu comple,itatea biosistemului "atomi,molecule celuleesuturiorgane, sisteme fiziologice.De ce metode de separare pentru medic?Schema unei celule animale tipice, care arat componentele subcelulare. Organite: (1) nucleoli (2) nucleu (3) ribozom (4) vezicul () reticulul en!oplasmatic ("#) ($) aparatul %olgi (&) citoscheletul (') reticulum en!oplasmatic (() mitocon!rii ( 1)) vacuole (11) citoplasma (12) lizozom (13) centriol.*roteom + ansamblul !e proteine pro!use !e genom (apro,imativ $).))) !e proteine la om). -naliza unei anumite proteine !intr+un .esut comple, necesit separarea acesteia.!e+ararea(+urificarea +roteinelorScopStu!iul propriet.ilor unei proteine /eterminarea secventei !e aminoacizi/eterminarea structurii tri!imensionale /i0icultate1elulele con.in, !e obicei mai mult !e 1))) tipuri !i0erite !e proteine. 2iecare proteina areabun!en.a me!ie mai pu.in !e 1 3 1))) Solu.ie/i0eren.ele biochimice 4i ale propriet.ilor 0izico+chimice ale proteinelor:solubilitate, !imensiuni, punct izoelectric, hi!ro0obicitate, a0initate pentru anumi.i liganzi.I. Gru+ele +rinci+ale de .etode n ra+ort cu +rinci+iul fizic/)iofizic 1. Metode electrokinetice : lectroforeza !i immunoelectroforeza L.P.!2. Metode cromato"rafice: (adsorb#ie,parti#ie, sc$imb de ioni, afinitate)%. Centrifu"are !i ultracentrifu"are&. Metoda de liofilizareGru+ele +rinci+ale de .etode n ra+ort cu +rinci+iul fizic/)iofizicL.P.!'. Metode kinetice:(iscozimetrie)smometrieMsurarea tensiunii superficialeGru+ele +rinci+ale de .etode n ra+ort cu +rinci+iul fizic/)iofizicL.P.!L.P.!L.P.!*. Metode optice:#otocolorimetrie'urbidimetrieNefelometrie#luorimetriePolarimetrie.efractometrie#lam$fotometrieL.P.!L.P.!L.P.!Gru+ele +rinci+ale de .etode n ra+ort cu +rinci+iul fizic/)iofizic+. Metode electrice:,olaro"rafiep-.metrieConductometrie/. 0ifrac#ie cu raze 1L.P.!Gru+ele +rinci+ale de .etode n ra+ort cu +rinci+iul fizic/)iofizic2. Microscopia optic:Microscopul optic/icroscopul cu contrast de faz/icroscopul cu fluorescen0ltramicroscopul/icroscopul polarizant/icroscopul cu imersieL.P.!L.P.!L.P.!Gru+ele +rinci+ale de .etode n ra+ort cu +rinci+iul fizic/)iofizicL.P.!13. Microscopul electronic,microanaliza nuclear !i alte te$nici 4n rela#ie.Gru+ele +rinci+ale de .etode n ra+ort cu +rinci+iul fizic/)iofizic11. Metode de spectrometrie optic :spectrometrie ultraviolet$vizibil spectrometrie .aman1pectrometrie ./Nspectrometrie de mas1&. Metode radio.izotopice 1'. Metode pentru studiul semnalului bioelectric (metoda patc2$clamp $ canale ionice i l.p.&L.P.!L.P.!L.P.!Gru+ele +rinci+ale de .etode n ra+ort cu +rinci+iul fizic/)iofizic