Diagnostico de laboratorio de Brucelosis y Fiebre Tifoidea

Alberto Flrez Granda

Enfermedades Infecciosas y Tropicales

INTRODUCCIN

1. Trmino brucelosis : conjunto de enfermedades ocasionadas, tanto en el hombre como en animales (zoonosis) por microorganismos del gnero Brucella.

2. Incluye diferentes formas clnicas de infeccin humana as como los diversos cuadros que se presentan en el ganado, sobre todo en forma de abortos epizoticos.

3. La expresin "brucelosis humana", es ms correcta que las denominaciones "fiebre ondulante" o "fiebre de Malta", que hacen referencia a una de sus caractersticas clnicas o a una localizacin geogrfica.

ESPECIE HUESPED NATURAL ENFERMEDAD CLNICA

B. melitensis Pequeos rumiantes

(cabras-ovejas)

Grave aguda con

complicaciones comunes

B. abortus Bvidos Leve, complicaciones

supuradas raras

B. suis Cerdos - roedores Supurada destructiva con

manifestaciones crnicas

B. cannis Perros Leve, complicaciones

supuradas raras

Zoonosis

Gnero Brucella

Cocobacilos gramnegativos aerobios de

crecimiento intracelular facultativo

Se adquiere la infeccin Indirecta: ingesta de productos lcteos contaminados: leche,queso

Directa: contacto con animales enfermos (secreciones, inhalacin)

Estructura

Especies lisas

El lipopolisacrido se componede una parte lipdica (lpido A) yde una parte polisacrida.

Se puede distinguir un ncleo,unido a la parte lipdica, y unacadena O, expuesta al exterior.

Cadena O: es la parteinmunodominante y la queinterviene en las pruebasserolgicas clsicas.

Especies rugosas

Rugosas Naturales: B. ovis y B.canis.

Mutantes rugosas de las cepaslisas

Ambas NO reaccionan frente alos anticuerpos anticadena O.

Esquema simplificado de la membrana externa de

la pared celular de Brucella

Distribucin mundial 2010

Transmisin

1. Asociada al consumo de leche, queso fresco y otros derivados lcteos, fundamentalmente de origen caprino contaminados y no pasteurizados.

2. Contacto con productos, subproductos y desechos como tejidos o excreciones de animales enfermos y por inoculacin.

3. Inhalacin de polvo de corrales o mataderos.

4. Atender animales enfermos, manipular carne y vsceras de animales infectados y trabajar en laboratorios.

Puerta de entrada

Es inicialmente fagocitada

Por los leucocitos PMN y los monocitos

Si sobrepasa esta barrera

Alcanza la va linftica

Ganglios regionales correspondientes

Desde all puede invadir el torrente sanguneo

Donde es vehiculizada y fagocitada por los PMN

y macrfagos

CUADROS CLNICOS

Caracterizada por su extraordinario

polimorfismo clnico, curso ondulante y su

tendencia a presentar recadas y

evolucionar a la cronicidad, debido a la

capacidad de supervivencia intracelular

del microorganismo causal.

Periodo de incubacin:

>% casos:10 - 20 das

CUADROS CLNICOS

1. Brucelosis aguda.- Desde el inicio de la sintomatologa clnica hasta tres meses de evolucin.

2. Brucelosis subaguda.- Evolucin de 3 meses a 1 ao.

3. Brucelosis crnica.- Perodo de evolucin > 1 ao.

Diagnostico

Historia y Ex FsicoCurso de la enfermedad

Serologa cuantitativa

Hemocultivos

Clnica

1. Ocupacin

2. Queso

Fresco

3. Viajes

4. Signos y

sntomas

Directo

1. Cultivo.-1. Mtodo diagnstico definitivo.

2. Hemocultivo, AMO,LCR, articular, exudado purulento, etc.

3. El medio de Ruiz Castaeda (usa fase slida y otra lquida) ms apropiado para dx. (10% CO2)

1. > % procesos agudos: incubacin 2-4 das.

2. < % presenta crecimiento entre 5-15 das.

3. Excepcional 30-45 das.

2. Enfermedad aguda.- hemocultivos (+) 90-95%.

3. En fracaso teraputico o reinfeccin .- hemocultivo (+) 60%.

Directo

1. Se han evaluado tres sistemas: VITAL (bioMrieux),

BACTEC (Becton-Dickinson) y BACT/ALERT (Organon

Teknika). BACTEC ms eficaz.

2. Todos los aparatos estudiados presentan falsos (-),

entonces hacer subcultivos.

3. En casos de muestras contaminadas (abscesos, restos

placentarios, etc.) deben utilizarse medios selectivos:

medio modificado de Thayer-Martin.

Deteccin por PCR

til para identificar y la diferenciar diversas especies.

Gran sensibilidad yespecificidad: paraDx inicial como enrecadas.Resultado de la PCR Bruce-ladder: Cada especie presenta un perfil

caracterstico que permite su diferenciacin mediante una PCR convencional.

Directo: PCR

DIAGNOSTICO INDIRECTO

1. Serologa.- >% de pruebas serolgicas usadas

para el dx detectan Ac frente a la cadena O del

lipopolisacrido de la membrana externa.

2. Gran especificidad en demostrar estos Ac, pero

no permiten afirmar la actualidad de la

infeccin.

Pueden verse falsos (+) con otras infecciones: V. cholerae, Francisella

tularensis, Yersinia enterocolitica serotipo 9. Tienen determinantes antignicos

comunes en los azcares de la cadena O.

Dx Indirecto

1. Rosa de Bengala.

2. Seroaglutinacin.

3. Prueba de Coombs anti-Brucella.

4. Cuantificar las Ig anti-Brucella.1. Prueba de Aglutinacin en Tubo

2. Prueba del 2 Mercapto-etanol

1. Rosa de Bengala

1. Brucelas suspendidas en tampn lactato pH 3,6 y

teidas con rosa de bengala, lo que permite una mejor

visualizacin de la reaccin de aglutinacin y se

confronta con el suero problema sin diluir.

2. Es una prueba de aglutinacin rpida.

3. Muestra una buena correlacin con la seroaglutinacin.

1. Rosa de Bengala

4. Puede ser negativa, en raros casos, en pacientes con

una infeccin de muy pocos das de evolucin o de

curso muy prolongado.

5. Suele emplearse como prueba de deteccin.

6. Proporciona una aproximacin diagnstica en pocos

minutos con una sensibilidad (95-99%) y especificidad

(98%) altas.

7. Mide M e Ig G.

Rosa de Bengala

Reaccin de Huddleson o reaccin de aglutinacin

rpida en placa

1. Se enfrentan cantidades decrecientes del suero a

investigar con cantidades constantes de Ag y se

observa la presencia o no de aglutinacin.

2. Este Ag reacciona Ac de B. abortus, B. melitensis y B.

suis.

3. Ttulo 1/160 se considera en zona endmica el punto

de corte en el diagnstico de la enfermedad.

4. Se interpreta conociendo antecedentes del enfermo y

la clnica.

5. >% Ac IgM (

Prueba de Coombs anti-Brucella

1. Especialmente diagnstico de la brucelosis crnica.

2. Demuestra presencia de Ac aglutinantes y no aglutinantes, fundamentalmente IgG.

3. El suero de Coombs (Ig humana) se encarga de facilitar la aglutinacin de Ac no aglutinantes del suero problema, fijados a la suspensin antignica de B. abortus.

Prueba de Coombs anti-Brucella

4. El ttulo obtenido es mnimo el de la

aglutinacin y es mas a mayor tiempo de

evolucin de la enfermedad.

5. Puede persistir prolongadamente y con

titulacin elevada aun en pacientes con terapia

adecuada y buena evolucin clnica.

Seroaglutinacin con 2-mercaptoetanol

1. Modificacin de la seroaglutinacin: usa solucin salina al 0,85% + 0,1M de 2-ME. Este compuesto destruye las IgM sin interferir con las de IgG que son las que se cuantifican.

2. En general, la prctica de la seroaglutinacin y la prueba de Coombs conjuntamente, permiten el diagnstico de la mayora de los casos.(1/160)

3. La limitacin ms importante de las pruebas de aglutinacin es que no permiten conocer el estado de actividad de la brucelosis.

Aglutinacin lenta en tubo de Wright (SAT)

Detecta anticuerpos IgM e IgG2, mediante la

tcnica de aglutinaciones seriadas de suero en

tubos.

Ttulos sugerentes > 1/160

Otras Pruebas indirectas

1. Fijacin de complemento

2. Inmunofluorescencia

indirecta (IFI)

3. ELISA indirecto (ELISA-I)

4. ELISA competitivo

(ELISA-C)

5. Prueba de

inmunodifusin en agar

(IDAG)

6. Polarizacin de

fluorescencia (FPA)

Definiciones Operativas

Norma Tcnica para el Diagnstico y Tratamiento de la Brucelosis Humana

NT No. 002 -MINSA/DGSP-V.01 - MINSA/DGSP-V.01 R.M. 978 2003/MINSA

Fiebre Tifoidea

Generalidades

1. Enfermedad bacteriana sistmica producida por

Salmonella Typhi y Paratyphi .

2. Letalidad asociada a complicaciones

gastrointestinales: perforacin y hemorragias

intestinales (10%).

3. Su reservorio natural es el hombre.

Transmisin

Se propaga a travs de alimentos, agua o bebidas contaminadas.

Algunas personas pueden convertirse en portadores de Salmonella typhi y continuar expulsndola en sus heces por aos, diseminando la enfermedad.

Clnica: 4 fases

1. 1era semana: T sube lentamente con bradicardia relativa,malestar general, dolor de cabeza y tos.

2. 2da semana: Postracin. T 40 C. Hay bradicardia. Iniciancomplicaciones. Vsceromegalia.

3. 3era semana: Si no se trata, las complicaciones sonfrecuentes: Perforacin Intestinal, otros.

4. Finales de 3era semana/Principios de 4ta: La T corporal serestablece, astenia persiste.

incubacin 10 14 das

Salmonella: 3 tipos de Ag

1. Ag somtico (O)

2. Ag flagelar (H) o (d)

3. Ag capsular o de envoltura (Vi) o (K)

Laboratorio: reaccin de Widal

1. Indica presencia de Ac aglutinantes (aglutininas) contra los Ag H (flagelar) u O (somtico) de la S typhi.

2. Ac contra Ag O: 6 - 8 das iniciada la enfermedad y desaparecen 3 - 6 meses.

3. Ac contra el Ag H: 8 - 12 das. Ttulos > altos respecto a los anti-O. Persisten > 1 ao.

4. Ac contra el Ag Vi aparecen tardamente (3era semana), lo hacen en ttulos bajos 1:10-1:20.

Limitacin del Test de Widal

1. 50 y 33% de pacientes con FT no tratada

no tienen aumento de los ttulos Anti-O y

Anti-H negativo respectivamente.

2. Presencia de Anti-O y Anti-H en la

poblacin sana.

Limitacin del Test de Widal

1. Considerar falsos (-), entre sus causas

tenemos:

a) Antibitico terapia temprana, la cual, retrasa

la aparicin de anticuerpos.

b) Uso de esteroides.

c) Medicin temprana de Ac (1era sem.)

d) Inmunodeficiencias adquiridas y congnitas.

e) Portadores crnicos de Salmonella typhi.

f) Infeccin por otros Gram (-)

Interpretacin

1. Considerar diagnostico si ttulos iniciales se cuadruplican entre 1 - 4 semanas.

2. Sospecha de FT:

1. Anti-O 1:320

2. H 160 en zonas endmicas

3. Una reaccin negativa no excluye el dx de FT con cuadro clnico compatible.

Conclusin

1. La reaccin de Widal no es el estndar de oro para el diagnstico de FT.

2. Sobre diagnostica FT por sus numerosas reacciones cruzadas.

3. La prueba no tiene valor si no hay cuadro clnico compatible.

Cultivos

A. Hemocultivo.-

1. Examen > valor Dx.

2. 90% (+) 1era semana de enfermedad.

3. 50% 3era semana.

B. Mielocultivo.-

1. Igual valor que Hemo.

2. >90% (+) 1era 4ta sem.

C. Coprocultivo.-

C. Valor en presencia de un cuadro clnico

D. Puede ser positivo en portadores crnicos.

E. Realizar >1 por eliminacin continua o intermitente.

EVALUACIN DE LOS. PROCEDIMIENTOS DIAGNOSTICOS DE

FIEBRE TIFOIDEA. Eduardo Gotuzzo, Jorge Guerra, Emilie Crosby,

Miguel Mir Quezada y Carlos Carrillo

Revistas/acta medica/1978_N1-4/pdf/a04.pdf

EVALUACIN DE LOS. PROCEDIMIENTOS DIAGNOSTICOS

DE FIEBRE TIFOIDEA. Eduardo Gotuzzo, Jorge Guerra, Emilie

Crosby, Miguel Mir Quezada y Carlos Carrillo

Revistas/acta medica/1978_N1-4/pdf/a04.pdf

Conclusin

1. Cultivo de gran utilidad: Mielo > especifico.

2. Control de recadas hasta 30 das de terminar ATB.

3. La reaccin de Widal puede ser til pero con escasa sensibilidad y especificidad.

4. El hemograma es altamente sensible pero poco especifica.