VALIDAREA METODELOR UTILIZATE DE LABORATOARELE DE NCERCRI Validareareprezintconfirmarea prin examinare i furnizare de dovezi obiective c sunt ndeplinite anumite cerine specifice pentru o utilizare dat.Validarea metodei este procesul prin care laboratorul i stabilete caracteristicile de performan i limitele metodei i prin care identific factorii care influenteaza aceste caracteristici precum i gradul de influena al acestor factori i procesul prin care laboratorul verifica dac metod este adecvat scopului pentru care va fi utilizat.In functie de scopul validarii pot fi evaluai urmtorii parametri: Exactitatea grad de concordan ntre rezultatul unei msurri i o valoare adevrat a msurandului. Limit de detecielimita cea mai de jos a domeniului de aplicare practic a metodei (cea mai mic valoare, concentraie, cantitate, etc care poate fi detectat). Limita minim de cuantificare cea mai mic concentraie de analizat care poate fi determinat cu un nivel acceptabil al repetabilitii i acurateii Liniaritatea proprietate a metodelor de msurare ce caracterizeaz un domeniu de concentraie. Repetabilitatea fidelitatea n condiii de repetabilitate Reproductibilitatea fidelitatea n condiii de reproductibilitate Robusteea sensibilitate n raport cu variaia unuia sau mai multor parametri. Sensibilitate incrucisata-sensibilitate in raport cu inreferentele generate de alti analiti; Selectivitate gradul n care o metod rspunde ntr-un mod unic la un analit cerut.Criteriile calitative de acceptare a unei metode adecvatea scopului validrii sunt: Incertitudinea parametru asociat rezultatului unei msurri, care caracterizeaz imprastierea valorilor ce, n mod rezonabil , ar putea fi atribuite masurandului . Domeniu de lucru(a unei metode de analiz) interval stabilit experimental i verificat statistic prin etalonarea procedurii, situat ntre concentraia sau masa cea mai mic i concentraia sau masa cea mai mare. Deplasarea(unei metode analitice) diferena rezultatelor unei metode rezultate n raport cu un material de referinta. Deviatia standard de Repetabilitatea Deviatia standard de ReproductibilitateaValidarea metodelor se poate face integral sau partial. Medodele care se valideaza integral, privind acceptabilitatea tuturor parametrilor de performanta, sunt: metodele nestandardizate; Metodele dezvoltate in laborator;Medodele care se valideaza partial, adica se demonstreaza acceptabilitatea lor din punctul de vedere al adecvarii la scop, sunt: metodele cantitative, metodele noi, publicate in literatura de specialitate, recunoscute in comunitatea stiintifica de specialitate.Validarea metodelor de analiza este necesara:Laboratoarelor medicale, Laboratoarelor de incercari,Laboratoarelor de incercari/etalonareca dovada a bunei aplicari a metodelor de analiza in conditiile proprii de laborator.n cazul n care nu se valideaz metodele de analiza nu se poate avea controlasupra performantei laboratorului, nu exista posibilitateade a imbunatatii calitatea serviciilor prestate, nu exist doveziin cazul unor reclamatii, nu se obine/menineacreditatrea laboratorului, se pierdedin eficien prin costuri suplimentare (costurile noncalitii).n cele ce urmeaz voi prezenta o Instruciune de lucru pentru validarea metodelor utilizate n laboratoarele de incercari pentru analiza apa potabila, produse alimentare si furaje.INSTRUCTIUNEA PENTRU VALIDAREA METODELOR UTILIZATE N LABORATOARELE DE INCERCARI PENTRU ANALIZA APA POTABILA, PRODUSE ALIMENTARE SI FURAJE

1. SCOP

Prezentul document are rol de instruciune pentru validarea metodelor n laboratoarele de incercari, n vederea satisfacerii cerinei 5.4.5. Validarea metodelor din SR EN ISO/CEI 17025:2005. Aceasta instructiune stabileste directii minime cu privire la modul de validare si la parametrii de performanta care trebuie evaluati n vederea validrii medodelor. Un laborator poate s considere ca relevani pentru scopurile proprii si sa evalueze si alti parametri decat cei prezentati mai jos.

2. DOMENIU DE APLICARE

Acest document se aplica atat de catre laboratoarele de incercari apa potabila, produse alimentare si furaje.

3. DOCUMENTE DE REFERIN

SR EN ISO/CEI 17025:2005 - Criterii generale pentru competena laboratoarelor de ncercri si etalonare. Ghidul EURACHEM - The Fitness for Purpose of Analytical Methods. A Laboratory Guide to Method Validation and Related Topics CR-01-1 Cerinte suplimentare pentru acreditarea laboratoarelor de incercari calitatea apei CR-01-2 Cerinte suplimentare pentru acreditarea laboratoarelor de incercari produse alimentare si furaje EA 4-14 Selectia si utilizarea materialelor de referinta EA 4/16 Linii directoare privind estimarea incertitudinii in incercarea cantitativa EA03/04 Utilizarea incercarilor de competenta ca instrument pentru acreditare de incercari. Eurachem/Citac Guide GC 4 Quantifyng Uncertainty in Analitical Measurement ILAC G 9 Linii directoare privind selectia si utilizarea materialelor de referinta ILAC G 24 - Guidelines for the determination of calibration intervals of measuring instruments SR Ghid ISO/CEI 99 - Vocabular internaional de metrologie. Concepte fundamentale i generale i termeni asociai (VIM)

4. DEFINIII

- Validarea (SR EN ISO/CEI 17025:2005) - confirmarea prin examinare si furnizarea de dovezi obiective ca sunt indeplinite cerintele pentru utilizarea intentionala. - Validarea metodei (Ghidul EURACHEM - The Fitness for Purpose of Analytical Methods. A Laboratory Guide to Method Validation and Related Topics)- Procesul prin care laboratorul verifica daca metoda este adecvata scopului in care va fil utilizata - Procesul prin care laboratorul isi stabileste caracteristicile de perfomanta si limitele metodei si prin care identifica factorii care influenteaza aceste caracteristici precum si gradul de influenta al acestor factori - Validarea este o procedur care asigur c o metod de ncercare este ct se poate de ncredere. Acest proces de verificare a metodei const dintr-un program de validare a metodei care rspunde la ntrebarea: ct de precis este metoda n minile utilizatorului final?"- Validarea unei metode de analiz este, de fapt, o metodologie de confirmare sau de acreditare a validrii tiinifice a unei metode de analiz. Aceast metodologie are drept scop demonstrarea faptului c o metod sau un procedeu analitic corespunde utilizrii pentru care a fost prevzut i c performanele caracteristice metodei considerate, stabilite prin studii de laborator, satisfac cerinele pentru ca aceast metod s poat fi aplicat.- Din anumite puncte de vedere, validarea (i documentarea ei) poate fi privit ca o carte de vizit a laboratorului pentru c, dac nu inem seama de cerinele acreditrii, ea ilustreaz clar competena laboratorului.

5. DESCRIEREA ACTIVITII

5.1. Cnd se realizeaz validarea metodei

Nu exist reguli generale privitoare la scopul validrii sau frecvenei acesteia. Totui, este sigur faptul c o singur validare de baz nu poate garanta operaii fiabile pe termen lung. Laboratorul trebuie sa demonstreze adecvarea la scop pentru toate metodele folosite la analiza produselor alimentare inclusiv apei potabile, mineralelor si furajelor. Un laborator trebuie sa valideze o metoda de lucru atunci cand este necesar sa se stabilesca daca parametrii de performanta ai acesteia sunt adecvati pentru rezolvarea problemelor analitice urmarite, cum ar fi:- atunci cand laboratorul introduce in lucru o metoda noua sau pe care nu a mai utilizat-o in trecut - atunci cand s-a modificat personalul care aplica metoda - atunci cand trebuie implementate imbunatatiri ale metodei ca urmare a introducerii de imbunatatiri de catre producatorul reactivulului, a schimbarii echipamentului, reetalonarea echipamentului, a schimbarii producatorului reactivilor etc. - atunci cand metoda este extinsa pentru a fi utilizata si pentru un alt scop decat cel de pana in prezent (ex. extinderea utilizarii metodei pentru o alta matrice, un alt compus sau la modificarea domeniului de lucru ) sau cand laboratorul nu aplica tot standardul- atunci cand rezultatele controlului de calitate indica o modificare a performantelor metodei

5.2. Stabilirea gradului de extindere al validrii

Gradul de extindere al validarii trebuie sa tina cont de: - relevanta parametrilor evaluati pentru utilizarea intentionala (ex: pentru determinari de reziduuri poate fi relevanta determinarea limitelor de detective ale metodei sau selectivitatea) - relevanta parametrilor evaluati pentru a satisface cerintele clientului (ex: limita de detectie cu concentratia maxima admisibila)- natura modificarilor aduse atunci cand sunt implementate imbunatatiri ale metodei - natura diferentelor atunci cand se compara metode diferite, echipamente diferite etc.Chiar si atunci cand se introduc in lucru metode standardizate sau publicate in literatura de specialitate este necesara o validare pentru a stabili modul in care laboratorul reuseste sa obtina performanta indicata in referential (standard, literatura, specificatiile producatorului date in prospectul de lucru etc.)Validarea trebuie sa fie un echilibru intre costuri, riscuri si posibilitati tehnice.

5.3. Condiiile tehnice n care se realizeaz validarea metodei

Validarea metodei trebuie s se realizeze n urmtoarele condiii:- Responsabilul de validare trebuie sa fie o persoana competenta- Conditiile de mediu cerute de specificatiile metodei (ex. specificatiile date de producatorul echipamentului, reactivilor, literatura de specialitate) trebuie sa fie satisfacute - Echipamentul de msurare trebuie sa fie in buna stare de functionare, trebuie sa fie etalonat inainte de validare, intervalul dintre doua etalonari trebuie stabilit in conformitate cu cerintele ILAC G 24, dupa fiecare reetalonare laboratorul trebuie sa revalideze parametrii afectati (ex: incertitudinea de masurare) - Reactivii utilizati sunt adecvati lucrului cu echipamentul care urmeaza a fi utilizat si sunt in termen de valabilitate- Materialele de referinta utilizate in procesul de validare trebuie sa fie adecvate metodei care urmeaza a fi validate (ex: matricea si nivelul de concentratie) si trebuie sa fie in termen de valabilitate

5.4. Parametrii validrii Informatiile folosite pentru a valida metoda pot fi obtinute prin testari in laborator sau din alte surse (informatii date de producatorul reactivilor/echipamentului, literatura de specialitate, standarde de metode etc.)Pot fi evaluati, in functie de scopul validarii, urmtorii parametrii:- selectivitate/specificitate; - limit de detecie; - limit de cuantificare; - domeniu de lucru i liniaritate; - exactitate/fidelitate; - precizie (repetabilitate i reproductibilitate); - recuperare; - rezisten/robustee; - incertitudinea de masurare.

Pentru metodele microbiologice standardizate, laboratoarele de incercari trebuie sa dovedeasca adecvarea la scop conform cerintelor specifice din standardele de metoda.( a se vedea standardul SR EN ISO 7218:2009, capitol 14). Pentru metodele microbiologice alternative (nestandardizate), laboratoarele de incercari trebuie sa valideze metodele conform standardului SR EN ISO 16140:2005. ( a se vedea standardul SR EN ISO 7218:2009, capitol 14). Atat pentru metodele standardizate cat si pentru cele alternative, in validarea de metoda se va tine cont de categoriile de produse alimentare relevante pentru patogenii majori si microorganisme majore nepatogene, care apar in alimente. In cadrul experimentelor desfasurate in scop de validare se vor folosi probe contaminate artificial cu material de referinta certificat ( ce contine un nivel bine definit de compus tinta intr-o stare stabila ) sau material de referinta ( tulpina bacteriana ATCC). Se pot folosi probe contaminate natural, dar contaminarea trebuie sa fie confirmata inainte de studiu de validare iar pastrarea probelor contaminate natural trebuie sa se faca astfel incat sa se reduca la minim atat schimbarile microbiologice cat si stresul microbian.

Pentru metodele microbiologice , utilizate in analiza apei, se utilizeaza stadardul SR ENV ISO 13843:2002, care recomanda pentru metodele standardizate demonstrarea prin experiment ca o metoda stabilita functioneaza in conformitate cu specificatiile din standardul de metoda.

5.5. Raportul de validare

Raportul de validare trebuie sa contina urmatoarele:- prezentarea conditiilor in care a fost realizata validarea (metoda folosita, standardul aplicat, scurta descrie a metodei si principiul, data, responsabil, persoanele care participa si care executa diferite etape ale procedurii (filtrare, extractie, concentrare, purificare, derativizare ), competenta, echipamente certificat etalonare, reactivi, materiale de referinta/materialele de regerinta certificate utilizate (ruta de trasabilitate, loturi, termene de valabilitate), conditii de mediu, etc. - stabilirea parametrilor de performanta ce urmeaza a fi demonstrati in validare - stabilirea criteriilor de acceptabilitate pentru parametrii de performanta in conformitate cu legislatia aplicabila ex : apa potabila - Directiva 98/83/EC privind calitatea apei potabile transpusa prin legea 458/2002, Legea 311/2004 pentru modificarea si completarea Legii nr. 458/2002 privind calitatea apei potabile, OG publicata in Monitorul Oficial ao Romaniei, partea 1, Nr 69/26.01.2011 pentru modificarea si completarea legii nr. 458/2002 privind calitatea apei potabile reziduuri de pesticide - Method validation and quqlity control procedures for pesticide residues analysis in food and feed, document No. SANCO/10684/2009, supersedes document No. SANCO/3131/2007, implemented by 01/01/2010 apa minerala - Hotrre nr. 1020/2005, din 01/09/2005 pentru aprobarea Normelor tehnice de exploatare i comercializare a apelor minerale naturale Publicat in Monitorul Oficial, Partea I nr. 854 din 22/09/2005 reziduuri - REGULAMENTUL (CE) NR. 333/2007 AL COMISIEI din 28 martie 2007 de stabilire a metodelor de prelevare a probelor i de analiz pentru controlul oficial al nivelurilor de plumb, cadmiu, mercur, staniu anorganic, 3-MCPD i benzo(a)piren din produsele alimentare si COMMISSION REGULATION (EC) No 1881/2006 of 19 December 2006 setting maximum levels for certain contaminants in foodstuffs REGULAMENTUL (UE) NR. 574/2011 AL COMISIEI din 16 iunie 2011 de modificare a anexei I la Directiva 2002/32/CE a Parlamentului European i a Consiliului n ceea ce privete limitele maxime de nitrii, melamin, Ambrosia spp. i transferul de anumite coccidiostatice sau histomonostatice, precum i de consolidare a anexelor I i II- prezentarea rezultatelor obtinute in urma testelor efectuate de laborator ( date primare, cromatograme, spectre, rapoarte generate de echipament, volume, mase, temperatura, umiditate, presiune, )- prelucrarea rezultatelor - concluzii cu privire la satisfacerea fiecareia dintre cerinte - o declaratie de validitate a metodei Raportul de validare va face referire la documente si inregistrari relevante.

Bibliografie

SR EN ISO/CEI 17025:2005 - Criterii generale pentru competena laboratoarelor de ncercri si etalonare. CR-01-1 Cerinte suplimentare pentru acreditarea laboratoarelor de incercari calitatea apei CR-01-2 Cerinte suplimentare pentru acreditarea laboratoarelor de incercari produse alimentare si furaje EA 4/16 Linii directoare privind estimarea incertitudinii in incercarea cantitativa

Validarea metodelor de ncercare 8