14 Nr. 99 � 13 - 26 ianuarie 2010

NUTRI{IE

Principiul acestei metode constã în ataºarea lasecvenþa-þintã a unei sonde de ADN monocatenar(de circa 40 kb), marcatã fluorescent, pe baza com-plementaritãþii, de o secvenþã-þintã a unui cromo-zom. Hibridizarea sondei cu ADN-ul celular este vi-zualizatã la microscopul cu fluorescenþã echipat cufiltre de excitaþie ºi emisie, ceea ce permite citireasemnalelor specifice zonei-þintã. Se numãrã ºi seanalizeazã semnalele prezente în o sutã de celule(de ex., trei semnale fluorescente specifice pentrucromozomul 21 indicã sindromul Down).

Tehnica FISH permite detectarea mozaicismelor,identificarea rearanjãrilor cromozomiale complexe.

Mai multe sindroame dismorfice (sindromulWilliams, Prader Willi, Angelman, Di George) pro-duse de microdeleþii sau microduplicaþii, suspectateclinic, imposibil de observat prin tehnicile citogene-tice convenþionale, pot fi evidenþiate prin FISH meta-fazic. Întrucât aceastã metodã presupune ca primãetapã de lucru obþinerea unor culturi celulare (limfo-cite din sânge periferic sau amniocite recoltate prinamniocentezã în sãptãmânile 15-17 de sarcinã), re-zultatul investigaþiei este obþinut în douã sãptãmâni.

FISH-ul interfazic permite punerea în evidenþã aanomaliilor numerice, detecþia sexului genetic într-un

timp scurt (48-72 h). Se realizeazã pe nuclei inter-fazici fãrã sã fie nevoie de efectuarea de culturicelulare. Se folosesc sonde de ADN corespunzã-

toare regiunilor centromerice ale cromozomilor18, X, Y (CEP18, CEPX, CEPY), respectiv sondelocus specifice pentru cromozomii 13 ºi 21(LSI13, LSI21). Metoda este mai puþin informativãîn cazul contaminãrii cu celule materne (compar-ativ cu alte tehnici).

Analiza FISH este o metodã specificã, perfor-mantã, dar laborioasã, care necesitã celuleintacte; nu se substituie celorlalte metode deanalizã cromozomialã ºi are indicaþii foarte pre-cise. FISH-ul interfazic este indicat a fi folosit catest de screening rapid atunci când existã semnede alertã ecograficã sau biochimicã (dublu test,triplu test), iar ulterior se recomandã o evaluarecitogeneticã completã.

Hibridizarea fluorescent/ in situ (FISH)

��Hibridizarea fluorescenta in situ(FISH) este o tehnic/ de citoge-

netic/ molecular/ utilizat/ \n scopulidentific/rii anomaliilor cromozomi-ale, numerice ]i structurale (care nupot fi detectate prin cariotipare).

FISH interfazic – prezenta a trei semnaleroºii indica trisomia 21 (Down)

FISH metafazic – Prader Willi del (15)(q11-q13)