Investete n oameni ! Proiect cofinanat din Fondul Social European prin Programul Operaional Sectorial Dezvoltarea Resurselor Umane 2007 2013 Axa prioritar Educatia si formarea profesional n sprijinul cresterii economice si dezvoltrii societtii bazate pe cunoastere Domeniul major de intervenie 1.5 Programe doctorale si post-doctorale n sprijinul cercetrii

Titlul proiectului: Burse doctorale pentru cresterea competitivitatii in domeniul medical si farmaceutic Numrul de identificare al contractului: POSDRU/88/1.5/S/58965 Beneficiar : Universitatea de Mdicina si Farmacie Gr. T. Popa Iasi Partener : Universitatea de Medicina si Farmacie Iuliu Hatieganu Cluj Napoca

Universitatea de Medicin i Farmacie

Grigore T. Popa Iai Facultatea de Farmacie

ROLUL APORTULUI EXOGEN DE SELENIU N

EVOLUIA UNOR PARAMETRI BIOCHIMICI LA

ANIMALELE DE LABORATOR

REZUMAT

Coordonator tiinific:

Prof. Dr. Rodica Cuciureanu

Doctorand:

Bogdan Gabriel lencu

Componena comisiei de doctorat:

Preedinte:

Prof. Dr. Monica Hncianu

Universitatea de Medicin i Farmacie Grigore T. Popa Iai

Coordonator tiinific:

Prof. Dr. Rodica Cuciureanu

Universitatea de Medicin i Farmacie Grigore T. Popa Iai

Refereni oficiali:

Prof. Dr. Liliana Foia

Universitatea de Medicin i Farmacie Grigore T. Popa Iai

Conf. Dr. Ana Corina Ioni

Universitatea de Medicin i Farmacie Carol Davila Bucureti

Conf. Dr. Lorena Filip

Universitatea de Medicin i Farmacie Iuliu Haieganu Cluj-Napoca

1

CUPRINS

PARTEA GENERAL 5

CAPITOLUL I

INTRODUCERE 5

I.1. Motivaia cercetrii 6

I.2. Obiectivele generale 6

CAPITOLUL II

SELENIUL N ELEMENTELE DE MEDIU 7

II.1. Starea natural i proprietile fizico-chimice 7

II.2. Seleniul n sol, ap i aer 8

II.3. Seleniul n produsele alimentare 10

II.3.1. Nucile de Brazilia 13

II.3.2. Plantele acumulatoare de seleniu 13

II.3.2.1. Usturoiul 13

II.3.2.2. Ceapa 14

II.3.2.3. Plantele din genul Brassica 14

II.3.2.4 Astragalus bisulcatus 14

II.3.3. Ciupercile 15

II.3.4. Organismele marine 15

II.3.5. Drojdia de bere 15

CAPITOLUL III

METABOLISMUL SELENIULUI I SELENOPROTEINELOR 16

III.1. Absorbia seleniului 16

III.1.1. Absorbia gastrointestinal. Biodisponibilitatea 16

III.1.2 Absorbia prin inhalaie 17

III.1.3 Absorbia prin piele i mucoase 17

III.2 Transportul seleniului n organism 17

III.3 Distribuia i retenia seleniului n esuturi 18

III.3.1. Seleniul n sngele total 18

III.3.2. Seleniul n plasm i ser 18

III.3.3. Seleniul n alte componente ale sngelui 19

III.4. Biotransformarea compuilor cu seleniu n organism 19

III.5. Excreia seleniului 19

III.5.1 Excreia urinar 19

III.5.2. Excreia fecal 20

III.5.3. Excreia pulmonar 21

III.5.4. Acumularea de Se n fanere 21

III.5.5. Excreia seleniului n laptele matern 21

III.6. Selenoproteinele la mamifere 21

III.6.1. Glutation peroxidazele 22

III.6.1.1. Glutationperoxidaza 1 (GPx1 / cGPx cytosolic GPx) 22

2

III.6.1.2. Glutationperoxidaza 2 (GPx2 / GI-GPx gastrointestinal GPx) 22

III.6.1.3. Glutationperoxidaza 3 (GPx3),(pGPx) 22

III.6.1.4. Glutationperoxidaza 4 (GPx4 / PH-GPx) 23

III.6.1.5. Glutationperoxidaza 5 (GPx5) 23

III.6.1.6. Glutationperoxidaza 6 (GPx6) 23

III.6.1.7. Glutationperoxidaza 7 (GPx7) 23

III.6.1.8. Glutationperoxidaza 8 (GPx8) 23

III.6.2. Deiodurazele (deiodinazele) hormonilor tiroidieni 23

III.6.2.1. Deioduraza 1 (DI 1) 23

III.6.2.2. Deioduraza 2 (DI 2) 23

III.6.2.3. Deioduraza 3 (DI 3) 23

III.6.3. Tioredoxinreductazele 24

III.6.3.1. Tioredoxinreductaza 1 (TrxR1) 24

III.6.3.2. Tioredoxinreductaza 2 (TrxR2) 24

III.6.3.3. Tioredoxinreductaza 3 (TrxR3, Tioredoxin glutation reductaza) 24

III.6.4. Selenoproteina de 15 kD (Sep15) 25

III.6.5. Selenofosfat sintetaza 2 (SPS2) 25

III.6.6. Metionin-R-sulfoxid- reductaza 1 (MsrB1/Selenoproteina R/ Selenoproteina X) 25

III.6.7. Selenoproteina P (SelP) 25

III.6.8. Selenoproteina W (SelW) 26

III.6.9. Selenoproteina N (Sel N) 26

III.6.10. Selenoproteina S (SelS) 27

III.6.11. Alte selenoproteine 27

III.7. Reglarea biosintezei selenoproteinelor 28

CAPITOLUL IV

TOXICOLOGIA SELENIULUI 31

IV.1. Toxicodinamia compuilor seleniului 31

IV.2. Toxicitatea acut a seleniului 32

IV.3. Toxicitatea cronic a seleniului 34

IV.3.1. Intoxicaii de natur profesional i iatrogen 34

IV.3.2. Cariile dentare 35

IV.3.3. Scleroza lateral amiotrofic (B. Charcot) 35

IV.3.4. Seleniozele endemice 35

CAPITOLUL V

SELENIUL I PATOLOGIA UMAN 37

V.1. Implicaiile seleniului n carcinogenez 37

V.2. Implicaiile seleniului n diabetul zaharat 39

V.3. Efectul imunomodulator al seleniului 41

V.4. Seleniul element antitoxic i citoprotector 42

PARTEA PERSONAL 46

CAPITOLUL VI

EVALUAREA EXPERIMENTAL A TOXICITII SELENITULUI DE SODIU 46

3

VI.1. Introducere 46

VI.2. Materiale i metode 48

VI.3. Rezultate 51

VI.4. Discuii 63

VI.5. Concluzii 65

CAPITOLUL VII

EVALUAREA EFECTULUI PROTECTOR AL SELENIULUI N INTOXICAIA

SUBACUT CU PLUMB SAU CADMIU LA OBOLANI

VII.1. Introducere 67

VII.2. Materiale i metode 67

VII.3. Rezultate 70

VII.4. Discuii 93

VII.5. Concluzii 94

CAPITOLUL VIII

CORELAII NTRE CONINUTUL N SELENIU AL SOLULUI I

CONCENTRAIILE ACESTUIA N CEREALE (PORUMB)

95

VIII.1. Introducere 95

VIII.2. Materiale i metode 97

VIII.3. Rezultate 102

VIII.4. Discuii 110

VIII.5. Concluzii 112

CAPITOLUL IX

PRODUSELE ALIMENTARE DE ORIGINE VEGETAL - SURSE DE SELENIU

PENTRU ORGANISM

113

IX.1. Introducere 113

IX.2. Materiale i metode 114

IX.3. Rezultate 114

IX.4. Discuii 118

IX.5. Concluzii 119

CAPITOLUL X

CONCLUZII GENERALE. ELEMENTE DE ORIGINALITATE. PERSPECTIVE DE

CERCETARE

120

BIBLIOGRAFIE 121

ANEXE

Anexa 1. Lucrrile publicate n timpul studiilor de doctorat

4

Teza de doctorat conine un numr de 13 tabele i 119 figuri. Rezumatul

conine un numr limitat din totalul acestora, fiind meninut numerotarea din tez.

Rezultatele obinute n cadrul studiilor doctorale au putut fi obinute i

datorit statutului de bursier n cadrul proiectului de finanare Burse

doctorale pentru creterea competitivitii n domeniul medical i farmaceutic - POSDRU/88/1.5/S/58965, implementat n perioada 2010-

2013.

Sincere mulumiri i sentimente de recunotin pentru contribuia la formarea mea profesional:

D-nei Prof. Dr. Rodica Cuciureanu

Universitatea de Medicin i Farmacie Grigore T. Popa Iai

D-lui Prof. Dr. Michel Larroque Universit Montpellier 1, Frana

5

MOTIVAIA CERCETRII

Seleniul este un microelement esenial, importana sa fiziologic fiind dat, n primul rnd, de faptul c este cofactor pentru o serie de enzime.

Dei implicaiile sale n funcionarea organismului animal au fost intens studiate n ultimele cinci decenii, studiile fiind efectuate att pe diverse

specii de animale ct i pe om, exist o serie de controverse privind rolul,

ct i necesarul fiziologic de seleniu, date de faptul c rezultatele studiilor au fost n anumite cazuri contradictorii.

Rezultatele obinute n urma studiilor privind evaluarea influenei

aportului de seleniu asupra statusului acestuia n organism, evaluarea

corelaiei dintre aportul de seleniu i activitatea unor selenoenzime i evaluarea rolului detoxifiant al seleniului contribuie la elucidarea unor

aspecte referitoare la mecanismele biochimice n care intervine seleniul,

furniznd eventual, prin coroborare cu rezultatele altor studii, informaii utile pentru reevaluarea necesarului de seleniu pentru organismul animal i

modificarea conduitei terapeutice n cazul suplimentrii alimentaiei cu

seleniu.

OBIECTIVE GENERALE Realizarea tezei de doctorat i-a propus ca obiective:

Evaluarea toxicitii subacute a selenitului de sodiu la doze diferite, prin determinarea unor parametri biochimici, hematologici i prin

efectuarea de examene histopatologice;

Evaluarea efectului protector al seleniului n intoxicaia subacut cu plumb sau cadmiu la obolani, prin determinarea unor parametri

biochimici, hematologici i prin efectuarea de examene histopatologice;

Determinarea seleniului din probe de sol i de produse alimentare (porumb) n vederea stabilirii unor corelaii privind transferul din sol n

plantele de cultur;

Determinarea seleniului din probe de produse alimentare;

6

PARTEA PERSONAL

CAPITOLUL VI

EVALUAREA EXPERIMENTAL A TOXICITII SELENITULUI DE SODIU

Scopul acestui studiu a fost de a evalua i compara toxicitatea subacut a selenitului de sodiu administrat n dou doze diferite, prin gavaj, la

obolani.

Au fost folosii 15 obolani masculi rasa Wistar. Dup aclimatizare obolanii au fost cntrii (masa corporal iniial 325-450 g) i au fost

alocai aleatoriu n unul dintre cele 3 loturi (n=5):

- Control (ap purificat);

- Se1 (Se+4

- 1 mg/kg corp zilnic, n zilele 1-10);

- Se3 (Se+4

- 3 mg/kg corp zilnic, n zilele 1-10); Seleniul (Se+4) a fost administrat sub form de soluii, prin gavaj. Soluiile au fost preparate din selenit de sodiu (Sigma Aldrich, p.a.) i ap

purificat. obolanii din fiecare lot au fost cazai ntr-o cuc colectiv. Animalele au fost recntrite n ziua a 11-a pentru a evalua

creterea/scderea n greutate, apoi au fost sacrificate. Pentru anestezie a

fost utilizat ketamina. Sngele a fost recoltat n vacutainere pentru

biochimie i pentru hematologie prin puncie cardiac. De la fiecare animal a fost recoltat unul dintre rinichi si un fragment de ficat, organele fiind

fixate n formol tamponat. Seciunile obinute dup fixare i prelucrare la

parafin au fost colorate cu hematoxilin eozin, apoi au fost analizate cu un microscop Olympus CX41 (obiective 10X, 20X, 40X) i fotografiate.

Pentru determinarea parametrilor biochimici din serul obinut au fost

utilizate kit-uri specifice i un analizor automat de biochimie RX Imola (Randox Laboratories, UK). Urmtorii parametri au fost determinai din

ser: activitatea alanin-aminotransferazei (ALT), aspartat-aminotransferazei

(AST) i gamma-glutamil-transpeptidazei (GGT) i nivelurile fierului,

bilirubinei totale i directe, colesterolului total, HDL-colesterolului, LDL-colesterolului, ureei, creatininei i acidului uric.

Pentru determinarea hemoleucogramei a fost utilizat un analizor de

hematologie Sysmex XT 1800 (Sysmex Corporation, USA).

7

VI.3. Rezultate n Figura 6.1 sunt redate creterile/scderile relative ale masei corporale medii pentru obolanii din cele patru loturi, la sfritul perioadei

experimentale (nainte de sacrificare), n comparaie cu nceputul perioadei

experimentale.

Activitatea seric a transaminazelor este redat n fig. 6.2 i 6.3. Nivelurile serice ale bilirubinei totale i directe sunt redate n fig. 6.5 i

6.6. Activitatea seric a GGT este redat n fig. 6.7. Nivelul seric al

colesterolului total este redat n fig. 6.8. Numrul de eritrocite i concentraia hemoglobinei sunt redate n fig. 6.15, respectiv 6.16.

Figura 6.1. Evoluia masei corporale

Figura 6.2. Activitatea ALT. Barele de eroare reprezint eroarea standard a

mediei; * = diferit semnificativ comparativ cu lotul Control

8

Figura 6.3. Activitatea AST. Barele de eroare reprezint eroarea standard a

mediei; * = diferit semnificativ comparativ cu lotul Control

Figura 6.5. Nivelul seric al bilirubinei totale. Barele de eroare reprezint eroarea standard a mediei; * = diferit semnificativ comparativ cu lotul

Control

Figura 6.6. Nivelul seric al bilirubinei directe. Barele de eroare reprezint

eroarea standard a mediei; * = diferit semnificativ comparativ cu lotul

Control

9

Figura 6.7. Activitatea seric a GGT. Barele de eroare reprezint eroarea standard a mediei; * = diferit semnificativ comparativ cu lotul Control

Figura 6.8. Nivelul seric al colesterolului total. Barele de eroare reprezint

eroarea standard a mediei; * = diferit semnificativ comparativ cu lotul

Control

Figura 6.15. Numrul de eritrocite (RBC). Barele de eroare reprezint

eroarea standard a mediei; * = diferit semnificativ comparativ cu lotul

Control

10

Figura 6.16. Concentraia hemoglobinei (HGB). Barele de eroare reprezint

eroarea standard a mediei; * = diferit semnificativ comparativ cu lotul

Control

Tabelul 6.I. Leziunile hepatice observate n lotul Se1

n tabelul 6.I i 6.II este redat cuantificarea semicantitativ a tipurilor

de modificri i leziuni observate n cazul seciunilor hepatice din loturile Se1, respectiv Se3.

obolan

nr.

Celule

anucleatea

(nr./100

celule)

Celule

intens

acidofile

cu nuclei

picnoticia

(nr./100

celule)

Celule

prezentnd

corpi

apoptoticia

(nr.)

Edem

perivascular

Degenerare

hidropic

1 28,7 3 4 + +

2 27,6 13 4 + ++

3 31,3 9 1 + ++

4 29,5 6 3 + +

5 30,1 11 2 + ++

+ - intensitate sau/i inciden redus; ++ - intensitate sau/i inciden moderat;

+++ - intensitate sau/i inciden mare; ++++ - intensitate sau/i inciden foarte

mare; a un numr de 10 cmpuri microscopice au fost analizate, n care celulele cu

modificri/elementele de interes au fost numrate i raportate la numrul total de

celule observat;

11

n fig. 6.23 i 6.23 sunt redate seciuni hepatice colorate cu

hematoxilin-eozin din cadrul obolanilor din lotul Se1, respectiv Se3.

Tabelul 6.II. Leziunile hepatice observate n lotul Se3

obolan

nr.

Zone de

necroz

Celule

ovale n

spaiile

portaleb

(nr.)

Celule ovale

intralobulareb

(nr. de

grupuri)

Edem

perivascular

i ectazie

vascular

Degenerare

hidropic

1 + 80 6/8 +++ ++++

2 ++ 79 4/6 +++ ++++

3 ++ 89 3/5 ++++ ++++

4 + 87 6/9 +++ ++++

5 +++ 91 4/7 ++++ ++++

+ - intensitate sau/i inciden redus; ++ - intensitate sau/i inciden moderat;

+++ - intensitate sau/i inciden mare; ++++ - intensitate sau/i inciden foarte

mare; b - un numr de 10 cmpuri microscopic au fost analizate, n care celulele cu modificri/elementele de interes au fost numrate

Fig. 6.23. Seciuni hepatice din cadrul lotului Se1. A. Hepatocite cu

degenerare hidropic n stadii incipiente; aspect intracitoplasmatic granular;

o celul prezentnd corpi apoptotici; cellule intens acidofile. B. Degenerare hidropic intens; vacuole uor colorate ce nu afecteaz poziia nucleului

pot fi observate n citoplasm; venula din spaiul portal este ectaziat, cu

edem perivascular (coloraie HE; A x 400; B x 200)

12

n fig. 6.27 i 6.29 sunt redate seciuni de rinichi din cadrul loturilor

Se1, respective Se3.

Fig. 6.25. Seciuni hepatice din cadrul lotului Se3. Degenerare hidropic

intens; halou perinuclear; ectazia venulelor i edem perivascular (A, B).

Numr mare de celule ovale n spaiul portal (A) i n spaiul intralobular (B); (coloraie HE; A,B x 400)

Fig. 6.27. Seciuni de rinichi din lotul Se1. A. Tubi contori proximali cu

degenerare hidropic; lumen foarte ngust; tub contort distal cu epiteliu atrofiat; congestive uoar; corpuscul Malpighi modificat; B. Ectazia

tubilor colectori din zona medular; congestive (coloraie HE; A,B x 200)

13

Fig. 6.29. Seciuni de rinichi din lotul Se3. A. Ectazie vascular i

congestive n zona cortical; B. Degenerare hidropic intens i cilindri

hialini; C. Atrofia tubilor contori distali i a tubilor contori proximali, cu

degenerare hidropic intens; D. Celule implicate probabil n regenerarea

rinichiului (coloraie HE; A x 60; B x 400; C x 100; D x 400)

VI.4. Discuii

obolanii din lotul de control au avut o cretere net superioar, ns cu difrene semnificative ntre indivizii fcnd parte din acelai lot. n cazul

dozelor de 1 mg/kg corp timp de 10 zile creterea a fost mai puin

semnificativ. n cazul dozelor de 3 mg/kg corp timp de 10 zile s-a observat o scdere semnificativ a masei corporale, raportat la masa corporal

iniial i n comparaie cu lotul de control.

Unele organizaii i cercettori individuali consider c inhibarea

creterii este cel mai bun indicator pentru evaluarea efectelor toxice ale seleniului (Orskov et Flyvbjerg, 2000; Jia et al, 2005). La niveluri de 4 i 5

mg de seleniu ca selenit / kg de alimente, o scdere semnificativ a creterii

n greutate a fost observat la obolani, n timp ce la concentraii similare

14

de seleniu ca nano-Se scderea a fost aproape nesemnificativ (Jia et al,

2005). Selenitul a suprimat creterea la oarece, n cazul dozelor orale

zilnice de 2,4 i 6 mg seleniu / kg corp timp de 12 sau 15 zile n timp ce nano-Se se pare c nu a interferat cu rata de cretere normal, la aceleai

doze (Zhang et al, 2005 ). Interesant, chiar i la doze mai mari administrate

pentru o perioad mai lung de timp selenitul a produs numai ntrzierea creterii sau stagnarea (Zhang et al, 2005), n comparaie cu studiul de fa,

caz n care, la doze de 3 mg seleniu / kg corp timp de 10 zile a fost

observat chiar o pierdere n greutate, fa de greutatea corporal iniial.

Activitatea seric a transaminazelor a fost semnificativ crescut n cazul administrrii de seleniu, comparativ cu lotul de control. Proporionalitatea

activitii ALT ntre loturile de studiu a fost similar cu cea a AST.

Activitatea cea mai mare a transaminazelor a fost observat n lotul Se3. La doze de 1mg/kg corp timp de 10 zile (Se1) nu s-au observat creteri

semnificative ale concentraiei bilirubinei totale n comparaie cu lotul de

control, iar creterea concentraiei bilirubinei directe a fost minor.

O cretere semnificativ a concentraiilor bilirubinei totale i directe, n comparaie cu lotul de control s-a observat n cazul lotului Se3.

Activitatea seric a GGT a fost semnificativ crescut doar la doze de 3

mg/kg corp timp de 10 zile (Se3), diferenele dintre celelalte dou loturi nefiind semnificative.

Dup administrarea de seleniu s-au observat creteri ale nivelurilor

serice ale colesterolului total n cazul ambelor loturi. Administrarea de seleniu a dus la scderea numrului total de eritrocite,

scderea cea mai semnificativ observndu-se n cazul dozelor de 3 mg/kg

corp timp de 10 zile. Concentraia hemoglobinei a fost sczut n cazul

tuturor loturilor crora li s-a administrat seleniu, n comparaie cu lotul de control, diferena cea mai important obsevndu-se n cazul lotului Se3.

n cazul lotului Se1 au fost observate modificri histopatologice reversibile la nivel hepatic, caracteristice pentru intoxicaia acut i subacut, constnd n principal n degenerare vacuolar sau hidropic a

hepatocitelor. Hepatocitele i-au mrit volumul datorit acumulrii

intracitoplasmatice de ap i incapacitatea de a menine homeostazia hidric i ionic, avnd un aspect granular. Nucleii au fost dispui n mod

normal, situai n centrul celulelor; capilarele sinusoidale au fost

comprimate. O cuantificare aproximativ a modificrilor induse la nivel

hepatic a fost realizat prin numrarea celulelor anucleate, celulelor prezentnd corpi apoptotici i a celulelor intens acidofile cu nuclei picnotici

15

i raportarea la 100 de celule. Intensitatea degenerrii hidropice a fost de la

mic pn la moderat iar a edemului perivascular a fost sczut.

n cazul lotului Se3, leziunile hepatice au constat n principal n ectazia venulelor centrolobulare centrolobular i a venulelor din spaiul portal, cu

edem perivascular, perei arteriolari foarte subiri i un lumen larg.

Degenerarea hidropic a fost intens i a fost caracterizat de un halou perinuclear mare. Au fost observate mici zone de necroz. Severitatea

necrozei a fost evaluat de la redus la foarte mare. n comparaie cu lotul

Se1, o diferen este c celulele ovale au fost prezente n numr mare n

spaiul portal i au fost, de asemenea, distribuite intralobular, n grupuri de 3/5 i 6/8, fiecare constnd n 4/9 celule. Comparativ cu lotul Se1,

intensitatea degenerrii hidropice i a edemului perivascular a fost

considerabil mai mare. n rinichii obolanilor din lotul Se1 au fost observate celule intens

acidofile n majoritatea cazurilor, cu nuclei picnotici aranjai n grupuri de 5

pn la 9. Celulele acidofile au alternat cu degenerarea hidropic a tubilor

contori proximali i distali. n lumenul tubilor contori proximali au fost observai cilindri hialini n cazul a 3 animale. Corpusculii Malpighi au fost

modificai la nivel glomerular. Tubii uriniferi din medul au fost ectaziai;

congestia a fost observat att n cortex ct i n medul. n rinichii obolanilor din lotul Se3 venele erau ectaziate, cu edem

perivascular. Congestia a fost observat att n cortex, ct i n medul.

Grupuri de 18-40 celule intens acidofile au fost observate n cortex, n zona tubilor contori proximali. Leziunile au fost mai severe dect n cazul

lotului anterior, principala problem fiind degenerarea hidropic accentuat

a nefrocitelor din tubii contori proximali. Lumenul tubilor contori

proximali a fost foarte ngust. Cilindrii hialini au fost observi la 25-30 din 100 tubi contori proximali, n cazul a 4 animale. Atrofia a fost observat n

cazul unor tubi contori distali. Au fost observate celule similare cu celulele

ovale care sunt gsite n ficat n cazul unui obolan, probabil avnd un rol n procesul de regenerare a nefrocitelor.

16

CAPITOLUL VII

EVALUAREA EFECTULUI PROTECTOR AL SELENIULUI

N INTOXICAIA SUBACUT CU PLUMB SAU CADMIU

LA OBOLANI

Scopul acestui studiu a fost de a evalua potenialul protector al seleniului n intoxicaia cu plumb sau cadmiu la obolani, n cazul

expunerii subacute, elementele fiind administrate prin intermediul apei de

but.

n cadrul experimentului au fost folosii 36 de obolani masculi rasa Wistar cu masa corporal iniial cuprins ntre 250 i 400 g.

Dup aclimatizare obolanii au fost alocai aleatoriu n unul dintre cele 8

loturi (n=6), fiind transferai n cutile colective corespunznd fiecrui lot (cte o cuc colectiv pentru fiecare lot).

Elementele de interes - seleniul (Se+4

), plumbul (Pb+2

) i cadmiul (Cd+2

)

au fost administrate prin intermediul apei de but, sub form de selenit de sodiu (Sigma Aldrich, p.a.), acetat de plumb trihidrat (Chemical Company -

Romnia, p.a.), respectiv clorur de cadmiu hemipentahidrat (Chemical

Company - Romnia, p.a.). Srurile au fost dizolvate n ap distilat,

soluiile rezultate fiind introduse n dozatoarele de ap cu piston corespunznd fiecrei cuti. Apa de but din dozatoare a fost schimbat

zilnic. Volumul de ap rmas din ziua precedent a fost msurat cu un

cilindru gradat. Prin diferen i prin raportare la intervalul de timp dintre momentul msurrii din ziua precedent i momentul msurrii din ziua

curent a fost calculat volumul de ap consumat de obolanii corespunznd

fiecrui lot n decurs de 24 de ore.

Loturile de studiu i concentraiile elementelor de interes n apa de

but au fost:

- Control (ap distilat);

- Se (Se+4

- 0,2 mg/l);

- Cd (Cd+2

- 150 mg/l);

- Pb (Pb+2

- 300 mg/l);

- Cd+Se (Cd+2

- 150 mg/l + Se+4

- 0,2 mg/l);

- Pb+Se (Pb+2

- 300 mg/l + Se+4

- 0,2 mg/l); Experimentul s-a desfurat pe parcursul a 56 de zile, animalele fiind cntrite la intervale de 7 zile. Aportul zilnic aproximativ (raportat la kg

corp) pentru fiecare element (Se, Pb, Cd) a fost calculat pe baza volumului

17

de ap consumat n decurs de 24 de ore de fiecare lot de obolani, a masei

totale a obolanilor dintr-un lot i a concentraiilor elementelor de interes

din apa de but. Animalele au fost anesteziate cu ketamin i.p. i sacrificate dup 56 de

zile.Sngele a fost recoltat n vacutainere pentru biochimie i pentru

hematologie prin puncie cardiac. De la fiecare animal a fost recoltat unul dintre rinichi i un fragment de ficat; de la unele animale au fost recoltare i

fragmente de aort, unul dintre testicule sau cerebelul; organele au fost

fixate n formol tamponat. Dup fixare, piesele au fost prelucrate la

parafin iar seciunile obinute au fost colorate cu hematoxilin eozin, apoi au fost analizate cu un microscop Olympus CX41 (obiective 10X,

20X, 40X) i fotografiate.

Parametrii biochimici au fost determinai din serul obinut utiliznd analizoarele automate de biochimie RX Imola

(Randox Laboratories, UK)

i Accent 200 (Cormay, Polonia) i kit-uri specifice. Pentru determinarea

hemogramei a fost utilizat un analizor automat de hematologie.

Urmtorii parametri biochimici au fost determinai din ser: activitile enzimatice ale alanin-aminotransferazei (ALT), aspartat-aminotransferazei

(AST), lactat-dehidrogenazei (LDH), amilazei i fosfatazei alcaline (PA) i

nivelurile serice ale fierului, bilirubinei totale, bilirubinei directe, colesterolului total, trigliceridelor, proteinelor serice totale, albuminei,

ureei, creatininei, calciului seric total i magneziului.

VII.3. Rezultate n fig. 7.1 i fig. 7.2 este redat consumul de apa mediu al obolanilor,

raportat la masa corporal, respectiv pe un animal.

n Fig. 7.3 este redat evoluia masei corporale medii raportat la masa corporal iniial.

n tabelul 7.I este redat aportul mediu aproximativ de elemente, estimat

pe baza consumului de ap i a masei corporale.

18

Figura 7.1. Consumul de ap mediu timp de 24 de ore al obolanilor,

raportat la masa corporal

Figura 7.2. Consumul de ap mediu timp de 24 de ore al obolanilor,

raportat pentru un animal

19

Figura 7.3. Evoluia masei corporale medii a obolanilor, raportat la masa

corporal medie iniial

n fig. 7.54 este redat o seciune hepatic din lotul Pb, iar n fig. 7.69 o seciune hepatic din lotul Pb+Se.

20

Tabelul 7.I. Aportul mediu de elemente pe parcursul perioadei experimental

Lotul Cd (mg/kg crp) Pb (mg/kg crp) Se (g/kg crp)

Control - - -

Se - - 15,48 0,42

Cd 10,48 0,41 - -

Pb - 25,34 0,68 -

Cd+Se 7,36 0,23 - 9,81 0,30

Pb+Se - 23,84 0,64 15,90 0,43

Fig. 7.4. Activitatea ALT

Fig. 7.5. Activitatea AST

21

Fig. 7.54. Lotul Pb - ficat Fig. 7.69. Lotul Pb+Se - ficat

VII.4. Discuii Nu s-au observat diferene semnificative ntre consumul de ap

corespunzor loturilor de control, Se, Pb i Pb+Se, pentru un anumit moment. Consumul de ap a fost semnificativ redus n cazul lotului Cd,

comparativ cu celelalte loturi, la nceputul i la sfaritul perioadei

experimentale. Consumul de ap n cazul lotului Cd+Se a fost semnificativ sczut comparativ cu celelalte loturi pe tot parcursul perioadei

experimentale. Consumul de ap pentru lotul de control, Se, Pb i Pb+Se au

sczut treptat spre sfritul perioadei experimentale. Tendina evoluiei consumului de ap n cazul raportrii la fiecare

animal a fost aproximativ similar cu cea observat n cazul raportrii la

masa corporal.

S-a observat o reducere evident a ratei de cretere n cazul loturilor Cd i Cd+Se, n comparaie cu lotul de control. n cazul lotului Pb reducerea

ratei de cretere a fost mai puin semnificativ.

Aportul de Cd (lotul Cd) a determinat o cretere semnificativ a activitii transaminazelor serice, n comparaie cu lotul de control; n cazul

lotului Pb activitile transaminazelor au fost deasemenea semnificativ

crescute, ns creterea a fost mai mic dect n cazul cadmiului. n cazul

loturilor Pb+Se i Cd+Se activitile transaminazelor au fost mai reduse n comparaie cu loturile Cd, respectiv Pb.

22

CAPITOLUL VIII

CORELAII NTRE CONINUTUL N SELENIU AL

SOLULUI I CONCENTRAIILE ACESTUIA N CEREALE

(PORUMB)

Obiectivele acestui studiu au fost: determinarea coninutul total de

seleniu n solurile din zona Moldovei i n porumbul (boabe) cultivat pe aceste soluri, stabilirea intervalelor ntre care se situeaz valorile obinute i

evaluarea distribuiei statistice, caracterizarea solurilor prin prisma unor

parametri fizico-chimici generali, evaluarea dependenei dintre coninutul de seleniu total n sol i cel n boabele provenind de la plantele de porumb

aferente i evidenierea unor eventuale corelaii ntre parametrii fizico-

chimici ai solurilor i coninutul total de seleniu n sol i n porumb

(boabe). Prelevarea probelor de sol i de porumb a fost efectuat n ultima parte a

lunii august 2012. Probele de sol i de porumb au fost prelevate din 27 de

locaii situate n judeele Neam, Bacu, Suceava i Iai. Din fiecare locaie a fost prelevat cte o prob din 3 puncte de prelevare diferite (ntr-un

singur caz doar dou probe), punctele de prelevare situndu-se la distane

cuprinse ntre 50 i 1000 m unele de altele. Prelevarea s-a efectuat la distane de minimum 10 m de drumuri, de pe suprafeele cultivate cu

porumb, de la adncimi cuprinse ntre 0 i 20 cm (din Orizontul A). Din

fiecare punct s-a recoltat minimum 1 kg de sol. S-a recoltat minimum un

tiulete de porumb provenind de la planta ce cretea deasupra punctului de prelevare sau la 10-20 cm de acesta.

Solurile au fost uscate la temperatura camerei, ulterior fiind mrunite i

trecute prin sita de 2 mm. tiuleii de porumb au fost uscai la temperatura camerei apoi au fost separate mecanic boabele de porumb.

Au fost determinai unii parametri ficico-chimici ai solurilor, dup

metode standardizate (pH, potenialul redox - Eh i rH, conductivitatea

electric - CE, coninutul de materie organic). Coninutul total de sruri solubile (TSS) a fost calculat pe baza conductibilitii electrice.

Concentraia seleniului total n soluri a fost determinat printr-o metod

spectrofotometric cu 3,3-diaminobenzidin iar cea din boabele de porumb printr-o metod de spectrometrie de absorbie atomic.

23

VIII.3. Rezultate

Corelaia n ansamblu dintre concentraiile de seleniu total din sol

i concentraiile de seleniu total din probele de porumb (boabe) este

redat n fig. 8.2. A fost construit att o curb de regresie liniar

(trasat cu verde), ct i o curb de regresie neliniar (polinomial de

gradul 2, trasat cu rou). n fig. 8.2 sunt redate i ecuaiile

corespunztoare curbelor de regresie.

Fig. 8.4. Corelaia dintre concentraia seleniului total din sol i concentraia

seleniului total din boabele de porumb

TABELUL 8.IV. Corelaii ntre concentraia seleniului total din sol,

concentraia seleniului total din boabele de porumb i parametrii fizico-

chimici ai solului Conc.

Se total

n sol

Materie

organic

n sol

pH Eh rH CE TSS

Conc. Se total

n sol

r* - 0,0719 0,0445 -0,1392 -0,0178 0,0327 0,0327

** - 0,1034 0,2336 0,1458 0,2748 0,1913 0,1913

Conc. Se total

n porumb

r* 0,6902 0,0128 -0,1251 0,0950 -0,1300 0,0189 0,0189

** 0,6929 0,0532 0,2474 0,1410 0,2459 0,2402 0,2402

* - r = coeficient de corelaie (regresie liniar); ** - = raport de corelaie (regresie neliniar - polinom de gradul 2);

24

n tabelul 8.III sunt redate corelaiile dintre concentraia total de

seleniu din sol, concentraia total de seleniu din boabele de porumb i

ceilali parametri ai solului ce au fost determinai. Au fost calculai att coeficienii de corelaie (r) afereni regresiei de tip liniar ct i rapoartele de

corelaie () aferente modelului de regresie polinomial de gradul 2.

TABELUL 8.V. Parametrii statistici per ansamblu ai concentratiilor

seleniului total n sol, concentraiilor seleniului total n boabele de porumb

i coninutului de materie organic n sol Parametrul statistic Conc. Se total

n sol

(mg/kg)

Conc. Se total

n boabele de

porumb

(g/kg)

Materie

organic n

sol

(%)

n 80 80 80

x 0,27 45,38 5,06

0,14 23,77 1,14

CV (%) 50,75 52,37 22,56

xmin 0,07 9,21 2,62

xmax 0,68 106,62 7,79

Me 0,25 40,59 4,92

xg 0,24 39,41 4,93

Indice de aplatizare (Kurtosis) 0,42 0,61 -

Indice de asimetrie (Skewness) 0,87 1,00 -

TABELUL 8.VI. Parametrii statistici per ansamblu ai parametrilor fizico-

chimici ai solului Parametrul

statistic

pH Eh

(V)

rH CE

(S/cm)

TSS

(mg/kg)

n 80 80 80 80 80

x 6,34 0,296 22,913 185,1 118,7091

0,56 0,016 0,846 154,1 98,7721

CV (%) 8,78 5,33 3,69 83,21 83,21

xmin 5,09 0,253 20,364 43,8 28,0769

xmax 7,96 0,333 25,437 914,0 585,8974

Me 6,32 0,298 22,957 131,8 84,4551

xg 6,32 0,296 22,897 94,9 94,9667

25

Fig. 8.5. Histograma de frecven pentru concentraia seleniului total n sol

Fig. 8.6. Histograma de frecven pentru concentraia seleniului total n

boabele de porumb

26

Parametrii statistici de ansamblu referitori la concentraiile seleniului

total n probele de sol i n probele de boabe de porumb i la coninutul

aproximativ de materie organic al solurilor sunt redai n tabelul 8.V iar cei referitori la parametrii fizico-chimici ai solurilor sunt redai n tabelul

8.VI.

n fig. 8.5 i fig. 8.6 sunt redate histogramele de frecven pentru concentraia seleniului total n soluri, respectiv pentru concentraia

seleniului total n probele de boabe de porumb. Frecvena a fost calculat

pentru intervale de concentraie de 0,05 mg/kg n cazul fig. 8.5 i de 8

g/kg n cazul fig. 8.6.

VIII.4. Discuii Concentraiile seleniului total n probele de sol s-au situat ntre 0,07 mg/kg i 0,68 mg/kg. Concentraiile seleniului total n sol au avut o distribuie aproximativ

gaussian, deviat ns spre stnga. Cele mai frecvente concentraii au fost

cele cuprinse ntre 0,25 i 0,30 mg/kg. Concentraiile seleniului total n probele de boabe de porumb s-au situat

ntre 9,21 i 106,62 g/kg. Concentraia medie a seleniului total pentru ntregul set de probe analizate a fost de 0,27 0,14 mg/kg, fiind cu aproximativ o treime mai

mic dect concentraia medie a seleniului total n soluri calculat la nivel

global (aproximativ 0,38 0,25 mg/kg, dup Kabata-Pendias et Pendias, 2001).

Distribuia valorilor concentraiilor de seleniu total n boabele de

porumb a fost aproximativ de tip gaussian (fig. 8.6), observndu-se o

deviaie spre stnga, la fel ca n cazul distribuiei concentraiilor din sol. Frecvena cea mai mare au avut-o probele avnd concentraii cuprinse ntre

32 i 40 g/kg.

Concentraia medie obinut n cadrul acestui studiu n cazul solurilor din zona Moldovei este practic egal cu cea obinut n cazul solurilor din

zona Depresiunii Fgra (0,268 0,133 mg/kg, dup Lctuu et al,

2012b), dar mai mic dect cea calculat n cazul solurilor din Nord-Vestul Deltei Dunrii (0,648 0,239 mg/kg, dup Lctuu et al, 2012c) i de pe

vile rurilor Clmui i Buzu (0,766 0,225 mg/kg, dup Lctuu et al,

2012d). Totui concentraia medie calculat conform datelor din prezentul

studiu este mai mare dect cea calculat n cazul solurilor din Sud-Estul Cmpiei Romne (0,237 0,830 mg/kg, dup Lctuu et al, 2010) i din

27

centrul i Sudul Dobrogei (0,143 0,76 mg/kg, dup Lctuu et al, 2010).

Toate aceste comparaii se refer la concentraiile medii ale seleniului total

din orizontul A. Concentraia medie a seleniului total din zona Moldovei, Romnia este

comparabil cu cele estimate n solurile din Belgia (de la 0,25 la 0,46

mg/kg, n funcie de clasa de sol - dup De Temmerman et al, 2004) i cele din Iran (from 0,04 to 0,45 mg/kg, dup Nazemi et al, 2010) dar mai mic

dect cea din zona Murcia-Spania (0,37 0,16 mg/kg, dup Perez-Sirvent

et al, 2010) i majoritatea celor din nordul Indiei (ntre 0,207 i 0,545

mg/kg - dup Yadav et al, 2005). n ultimele decenii seleniul a fost introdus n compoziia unor

ngrminte chimice complexe, alturi de nutrieni de baz i de alte

microelemente. A fost evideniat faptul c aplicarea de seleniu sub form de ngrmnt duce la creterea concentraiei seleniului total n sol i n

plantele cultivate pe acesta (Mikkelsen et al, 1989). Este posibil ca n cazul

unora dintre probele de sol i porumb boabe din experimentul curent

coninutul total de de seleniu din sol i implicit din boabele de porumb s fi fost influenate de aplicarea anterioar a ngrmintelor coninnd seleniu.

Nu doar ngrmintele chimice pot crete coninutul de seleniu al solurilor

i plantelor de cultur, ci i fertilizatorii naturali, avnd un coninut ridicat de materie organic i de seleniu. S-a constatat c solurile prelevate din

zonele de cultur au un coninut total de seleniu mai mare dect cele

prelevate din zonele cu vegetaie slbatic (Perez-Sirvent et al, 2010), fapt ce ar putea fi explicat prin utilizarea de ngrminte cu seleniu.

Concentraia medie a seleniului total n probele de boabe de porumb

recoltate din zona Moldovei, Romnia a fost de 45,38 23,77 mg/kg.

Aceast concentraie medie este de aproximativ 10 - 80 de ori mai mic dect cele calculate n unele zone din China (Wang et al, 2012).

Corelaia dintre concentraiile de seleniu total n soluri i concentraiile

acestuia n boabele de porumb a fost relativ puternic, evideniindu-se dependena coninutului de seleniu n porumb de cel din sol.

Corelaiile dintre parametrii fizico-chimici ai solului i concentraiile

seleniului total n sol sau porumb boabe au fost n mare parte nesemnificative, sugernd faptul c aceti parametri nu influeneaz n mod

individual concentraia de seleniu din sol sau disponibilitatea sa pentru

plante. Valori ale r sau de 0,15-0,25 au fost obinute n cazul corelaiilor

dintre CE, pH i TSS i concentraiile de seleniu din sol sau porumb, dar totui semnificaia statistic este slab. Lctuu et al (2012c) au obinut o

28

corelaie invers ntre concentraia seleniului total n solurile din Delta

Dunrii i pH, n cazul unui model de regresie liniar, r fiind de -0,464866.

pH-ul solurilor analizate a variat ntre 5,09 i 7,96, media fiind de 6,34 0,56 (aciditate slab). Majoritatea solurilor au avut aciditate slab sau

au fost neutre. n alte zone din Romnia s-a constatat c, per ansamblu,

solurile au fost acide (n Depresiunea Fgra, dup Lctuu et al, 2012b) sau alcaline (n Delta Dunrii i vile rurilor Clmui i

Buzu - dup Lctuu et al, 2012c, respectiv Lctuu et al, 2012d).

Coninutul estimat de materie organic al solurilor analizate s-a situat n

limite medii, coninutul mediu pe zone situndu-se ntre 2,62 i 7,72 %. Exist puine studii publicate pn n prezent referitoare la coninutul de

seleniu n plantele de porumb cultivate n Romania i n cereale, n general.

n zona Copa Mic coninutul mediu de seleniu n boabele de porumb a fost de 114 g/kg iar n gru de 133 g/kg (Stanciu-Burileanu (Aldea) et al,

2010). n cadrul altui studiu a fost determinat coninutul de seleniu dintr-un

sortiment de gru, coninutul fiind mult mai mic, de 24,18 g/kg

(Mencinicopschi G et al, 2012). n cadrul altui studiu n cadrul cruia a fost determinat coninutul de seleniu din nutreuri combinate i din diverse

plante furajere provenind din exploataii agricole din Dobrogea s-a

constatat c aproximativ 93 % dintre produsele analizate au avut un coninut deficitar n seleniu (Serdaru et al, 2003).

29

CAPITOLUL IX

PRODUSELE ALIMENTARE DE ORIGINE VEGETAL -

SURSE DE SELENIU PENTRU ORGANISM

Scopul acestui studiu a fost de a determina coninutul n seleniu al unor produse alimentare de origine vegetal i de a compara valorile obinute cu

cele obinute n cadrul altor studii. Determinarea seleniului din produsele alimentare s-a efectuat printr-o

metod de spectrometrie de absorbie atomic.

IX.3. Rezultate Coninutul de seleniu n diferitele produse alimentare este redat n fig.

9.1 (9.IA i 9.IB).

IX.4. Discuii Pn n prezent exist foarte puine studii publicate referitoare la

coninutul de seleniu n produsele alimentare de pe piaa din Romnia. Nivelul mediu de seleniu din mere determinat (1,030,06 g/kg) este

aproximativ de acelai ordin de mrime cu cele gsite n Grecia i

Portugalia (1,40,2, respectiv 0,7 g/kg - dup Pappa et al, 2006; Ventura et al, 2009), dar mai mic dect cele din Australia i Croaia (4,5, respectiv

8,8 1,6 g/kg - dup Klapec et al, 2004; Pyrzynska et al, 2009).

Concentraia medie de seleniu determinat n cartofi (7,600,70 g/kg)

a fost mai mare dect cea din Arabia Saudit, Portugalia i Slovenia (1,00,3, 3,93,2, respectiv 1,50,3 - dup Al-Ahmary, 2009; Ventura et

al, 2009; Smrkolj et al, 2005).

Coninutul mediu n seleniu al ardeilor grai (0,570,05 g/kg) a fost mai mic dect cel determinat n Grecia (4,20,3 g/kg - Pappa et al, 2006).

Nivelul seleniului n varz (4,3 g/kg) a fost mai mic dect cele

determinate n Arabia Saudit, Croaia i Thailanda (Al-Ahmary, 2009;

Klapec et al, 2004; Sirichakwal PP et al, 2005). Concentraia medie a seleniului n morcovi (4,110,12) a fost mai mic

dect cea din Croaia i Thailanda (Al-Ahmary, 2009; Klapec et al, 2004) i

puin mai mare dect n Portugalia i Arabia Saudit (Ventura et al, 2009; Al-Ahmary, 2009).

Concentraia seleniului a fost mai mare n ceapa roie dect n ceapa

galben. Concentraiile seleniului n ceap au fost mai mari n Arabia

30

Saudit, Grecia, Coreea de Sud i Croaia, comparativ cu rezultatele

prezentului studiu (Al-Ahmary, 2009; Pappa et al, 2006; Choi et al, 2009;

Klapec et al, 2004). Nivelul de seleniu din usturoi a fost mai mare dect cel determinat n

produsele din Grecia i Coreea de Sud (Pappa et al, 2006; Choi et al, 2009).

Concentraia seleniului n roii a fost foarte mic, fiind aproximativ egal cu cea din Portugalia (Ventura et al, 2009), dar mai mic comparativ

cu cele determinate n Croaia i Grecia (Kapec et al, 2004; Pappa et al,

2006).

Concentraia seleniului n ptrunjel a fost de aproximativ 10 ori mai mic dect cea din Grecia i Arabia Saudit (Pappa et al, 2006; Al-Ahmary,

2009).

Concentraia seleniului n ciuperci a fost foarte mic n comparaie cu alte studii. Choi et al (2009) au gsit concentraii de aproximativ 20 de ori

mai mari n acceai specie de ciuperci, n Coreea de Sud.

Nivelurile seleniului n arahide au fost de aproximativ 10 ori mai mici

comparativ cu cele din Arabia Saudit i Coreea de Sud (Al-Ahmary, 2009; Choi et al, 2009).

Coninutul de seleniu n orez a fost mai mic dect n Arabia Saudit i

Thailanda (Al-Ahmary, 2009; Sirichakwal et al, 2005) i mai mare dect n Grecia (Pappa et al, 2006).

Coninutul n seleniu al fasolei boabe a fost aproximativ la fel cu cel din

Grecia (Pappa et al, 2006) i mai mic dect cel din Slovenia (Smrkolj et al, 2005).

Concentraia seleniului n mazrea verde (congelat) a fost foarte redus.

Concentraiile de seleniu n fina de gru i n produsele derivate

(spaghete, biscuii i pine) au fost neobinuit de mari. Concentraia de seleniu n fina de gru a fost mai mare dect cea din Coreea de Sud (Choy

et al, 2009). Concentraia n pine a fost mai mare dect n Grecia i Arabia

Saudit (Pappa et al, 2006; Al-Ahmary, 2009). n cadrul unui alt studiu concentraia seleniului ntr-un sortiment de pine alb din Romnia a fost

doar de 12 g/kg iar cea n fina alb de gru de 24 g/kg (Mencinicopshi

et al, 2012). Este posibil ca nivelurile ridicate de seleniu determinate n prezentul studiu s se datoreze aditivrii produselor cu premixuri coninnd

compui cu seleniu. n cazul pinii, pe lng posibila suplimentare cu

seleniu prin intermediul unor premixuri, este deasemenea posibil ca drojdia

utilizat n procesul tehnologic s aduc un aport suplimentar de seleniu n pine.

31

Fig. 9.1. Coninutul de seleniu n unele produse alimentare de origine

vegetal de pe piaa din Romnia; A - coninutul de seleniu n fructe, legume, leguminoase i alte categorii de alimente; B - coninutul de seleniu

n fina de gru i n produsele alimentare derivate

32

CAPITOLUL X

CONCLUZII GENERALE. ELEMENTE DE

ORIGINALITATE. PERSPECTIVE DE CERCETARE

Selenitul de sodiu a avut un efect proporional cu doza asupra

modificrilor patologice ale parametrilor biochimici i hematologici i

asupra structurilor histologice. Celulele ovale au fost prezente n mod semnificativ numai n ficatul obolanilor care au primit cea mai mare doza

de selenit (3 mg / kg corp), care n acest caz este o dovad a gradului

leziunilor hepatice, deoarece celulele ovale sunt activate numai n cazul leziunilor hepatice severe n anumite condiii, n scopul de a susine o

cretere compensatorie. La cea mai mic doz (1 mg/kg crp) este posibil ca

modificrile histopatologice induse la nivel hepatic sa fie reversibile.

Seleniul a manifestat aciune protectoare moderat fa de toxicitatea hepatic i renal a plumbului i cadmiului.

Concentraiile seleniului total n probele de sol analizate au variat ntre

0,07 i 0,68 mg/kg, cu o medie de 0,27 mg/kg. Aceast concentraie medie este cu aproximativ o treime mai mic dect concentraia medie a seleniului

total n soluri, la nivel mondial. Aceeai concentraie medie a mai fost

obinut anterior i n alt zon din Romnia (Depresiunea Fgra). n Romnia, n cazul zonelor cu soluri preponderent aluvionare, concentraiile

medii ale seleniului determinate anterior au fost mai mari dect cele

estimate n cadrul prezentului studiu. n cazul zonelor cu alte tipuri de

soluri concentraiile au fost uor mai mici. Concentraiile seleniului total n probele de porumb (boabe) au variat

ntre 9,21 i 106,62 g/kg, cu o medie de 45,38 g/kg.

Majoritatea solurilor au avut aciditate slab sau reacie neutr. Doar n cteva zone de prelevare solurile au fost moderat acide iar cele foarte acide

au fost prezente doar n aproximativ 3 puncte de prelevare.

Corelaia dintre concentraiile seleniului total n sol i concentraiile

seleniului total n boabele de porumb este bun, lund n considerare ansamblul de valori obinute. Corelaiile dintre parametrii fizico-chimici ai

solurilor i concentraiile seleniului total n sol i porumb sunt

nesemnificative n cazul anumitor zone corelaia este mai slab, fapt datorat probabil anumitor proprieti specifice ale solurilor respective i condiiilor

microclimatice din zona respectiv.

33

Concentraiile seleniului total n produsele alimentare analizate a variat

n limite largi. Concentraii mari de seleniu au fost obinute n cazul finii

de gru i a tuturor produselor derivate (pine alb, biscuii, spaghete). Legumele au avut un coninut redus de seleniu.

34

BIBLIOGRAFIE Al-Ahmary KM. Selenium content in selected foods from the Saudi Arabia

market and estimation of the daily intake. Arab J Chem 2009; 2:95-99.

Choi Y, Kim J, Lee HS, et al. Selenium content in representative Korean

foods. J Food Compos Anal 2009; 22:117-122. De Temmerman L, Waegeneers N, Thiry C, Du Laing G, Tack F, Ruttens

A. Selenium content of Belgian cultivated soils and its uptake by field

crops and vegetables. Article in press. Sci Total Environ 2014. Jia, X., N. Li and J. Chen. 2005. A subchronic toxicity study of elemental

Nano-Se in Sprague-Dawley rats. Life Sci. 76, 1989-2003.

Kabata Pendias A, Pendias H. Trace elements in soils and plants. 3rd ed. Boca Raton, Florida: CRC Press, 2001

Klapec T, Mandic ML, Grgic J, et al. Selenium in selected foods grown or

purchased in eastern Croatia. Food Chem 2004; 85:445-452.

Lctuu R, Aldea MM, Lctuu AR et al. Selenium in rock-soil-plant system in the South-Eastern part of Romania. Res J Agric Sci 2010;

42:199-204.

Lctuu R, Lungu M, Stanciu-Burileanu M et al. Selenium in the soil-plant system of the Fgra depression. Carpath J Earth Environ Sci

2012; 7:37-46.

Lctuu R, Stanciu-Burileanu MM, Rnoveanu I et al. Selenium in soils

of the Danube delta North-Western part. Present Environment and Sustainable Development 2012; 6:145-155.

Lctuu R, Stanciu-Burileanu MM, Rnoveanu I et al. Selenium in

salsodisols located in the Clmui and Buzu rivers valleys. Soil Forming Factors and Processes from the Temperate Zone 2012; 11:33-

42.

Mencinicopschi G, Balint R, Balint L, Atudosei N, Mencinicopschi C. Fortifierea cu seleniu a finii respectiv a pinii. Metode de determinare a

coninutului de seleniu. Industrie alimentar 2012; 4:197-212.

Mikkelsen RL, Page AL, Bingham FT. Factors affecting selenium

accumulation by agricultural crops. In: Jacobs LW, editor. Selenium in agriculture and the environment. Soil Science Society of America &

American Society of Agronomy, 1989.

Nazemi L, Nazmara S, Eshraghyan MR et al. Selenium concentration in soil of Iran. 19th World Congress of Soil Science, Soil Solutions for a

35

Changing World; Brisbane, Australia: 1-6 august 2010 - DVD;

http://www.iuss.org/19th%20WCSS/Symposium/pdf/0824.pdf.

rskov, H. and A. Flyvbjerg. 2000. Selenium and human health. The Lancet 356, 942-943.

Pappa EC, Pappas AC, Surai PF. Selenium content in selected foods from

the Greek market and estimation of the daily intake. Sci Total Environ 2006; 372:100-108.

Perez-Sirvent C, Martinez-Sanchez MJ, Garcia-Lorenzo ML et al.

Selenium content in solis from Murcia region (SE, Spain). J Geochem

Explor 2010; 107:100-109. Pyrzynska K. Selenium speciation in enriched vegetables. Food Chem

2009; 114: 1183-1191.

Serdaru M, Vldescu L, Avram N. Monitoring of feeds selenium status in a Southeast Region of Romania. J Agric Food Chem 2003; 51:4727-4731.

Sirichakwal PP, Puwastien P, Polngam J, Kongkachuichai R. Selenium

content of Thai foods. J Food Compos Anal 2005; 18:47-59.

Smrkolj P, Pograjc L, Hlastan-Ribic C, Stibilj V. Selenium content in selected Slovenian foodstuffs and estimated daily intakes of selenium.

Food Chem 2005; 90:691-697.

Stanciu-Burileanu (Aldea) MM, Stroe VM, Lctuu R, Luca C. Analysis of selenium content of crops plant from Copa Mic area. Analele

Universitii din Craiova, seria Agricultur - Montanologie - Cadastru

2010; 40:294-298. Ventura MG, Stibilj V, Freitas MC, Pacheco AMG. Determination of

ultratrace levels of selenium in fruit and vegetable samples grown and

consumed in Portugal. Food Chem 2009; 115:200-206.

Wang S, Liang D, Wang D, Wei W, Fu D, Lin Z. Selenium fractionation and speciation in agriculture soils and accumulation in corn (Zea mays

L.) under field conditions in Shaanxi Province, China. Sci Total Environ

2012; 427-428:159-164. Yadav SK, Singh I, Singh D, Han SD. Selenium status in soils of northern

districts of India. J Environ Manag 2005; 75:129-132.

Zhang, J., H. Wang, X. Yan and L. Zhang. 2005. Comparison of short-term toxicity between Nano-Se and selenite in mice. Life Sci. 76, 1099-1109.

http://www.iuss.org/19th%20WCSS/Symposium/pdf/0824.pdf

36

ANEXA 1 - Lucrrile publicate n timpul studiilor de doctorat

(din tema tezei de doctorat)

Articole publicate n reviste cotate ISI 1. lencu BG, Solcan C, Ciobanu C, Avasilci L, Cuciureanu R. Dose-

dependent subacute toxicity of sodium selenite in male Wistar rats. Jokull 2013; 63(7):57-69.

Articole publicate n reviste indexate BDI i clasificate B+ 1. Teodor V, Cuciureanu M, lencu BG, Zamoteanu N, Cuciureanu R. Potential protective role of selenium in acrylamide intoxication. A

biochemical study. Studia Universitatis "Vasile Goldis", Life Sciences

Series 2011; 21(2):263-268. 2. Avasilci L, lencu BG, Ciobanu C, Cuciureanu R. Effects of sodium

selenite administration during diethylnitrosamine intoxication in rats.

Studia Universitatis "Vasile Goldis", Life Sciences Series 2011; 21(2):275-

280. 3. lencu BG, Ciobanu C, Cuciureanu R. Selenium content in foodstuffs

and its nutritional requirement for humans. Clujul Medical 2012;

85(2):139-145. 4. lencu BG, Ciobanu C, Solcan C, Anton A, Ciobanu S, Solcan G,

Cuciureanu R. Effect of selenium supplementation on serum iron, calcium

and magnesium levels in rats exposed to cadmium or lead. Lucrri tiinifice - Seria Medicin Veterinar 2013; 56:200-206.

Comunicri poster la manifestri tiinifice internaionale

1. lencu BG, Cuciureanu R. Spectrophotometric determination of selenium in foodstuffs from the Romanian market using 2,4-

dinitrophenylhydrazine. 15th Panhellenic Pharmaceutical Congress; Atena,

Grecia, 13-15 Mai 2011 CD.

Comunicri poster la manifestri tiinifice naionale 1. lencu BG, Avasilci L, Ciobanu C, Cuciureanu R. Dose- and dosing regimen- dependent effect of sodium selenite administration on some

biochemical and haematological parameters in rats. Timmedica

International Congress and Exhibition 4th

edition; Timioara, Romnia,

16-18 iunie 2011 CD ISBN 978-606-8054-45-2.

37

2. lencu BG, Avasilci L. Cuciureanu R. Potenialul protector al

seleniului n intoxicaia cu dietilnitrozamin la obolani. n: Hncianu M,

editor. 50 de ani de nvmnt universitar farmaceutic la Iai; Iai, 6-8 octombrie 2011. Iai: Ed. Gr. T. Popa UMF Iai, 150-153 ISBN 978-

606-544-073-9.

3. lencu BG, Solcan C, Avasilci L, Ciobanu C, Cuciureanu R. Cercetri privind toxicitatea selenitului de sodium la obolani. Actualiti i

perspective n cercetarea farmaceutic; Craiova, 26-28 septembrie 2012.

Craiova: Sitech, 88-89

- ISBN 978-606-11-2833-4.

Comunicri orale la manifestri tiinifice naionale 1. Avasilci L, lencu BG, Morariu ID, Ciobanu C, Dranca E, Cuciureanu R. Effect of diethylnitrosamine and sodium selenite administration on some

biochemical and haematological parameters in rats. Timmedica

International Congress and Exhibition 4th edition; Timioara, 16-18 iunie

2011 CD ISBN 978-606-8054-45-2.

38