OnSite ™ Test rapid Streptococ de grup A - caseta (tampon)

1

UTILIZAREA PRECONIZATA OnSite Strep A Rapid Test este un test imunologic de flux lateral pentru detectarea calitativa a Streptococcus pyogenes grup A (Strep A) din probe de exudat faringian. Acesta este destinat sa fie utilizat de catre profesionisti ca un test de screening si ofera un rezultat preliminar al testului pentru a ajuta la diagnosticarea infectiei cu Strep. A. Orice interpretare sau utilizare a rezultatului acestui test preliminar trebuie sa se bazeze, de asemenea, pe alte constatari clinice, precum si pe rationamentul profesional al cadrelor medicale. Se recomanda sa se ia in considerare metoda(metodele) de testare alternativa pentru a confirma rezultatul testului obtinut de acest dispozitiv. REZUMAT SI EXPLICAREA TESTULUI Streptococi sunt bacterii gram - pozitive, care pot fi clasificate serologic in grupuri Lancefield A, B, C, D, F si G 1 . Strep A este un streptococ β-hemolitic care se raspandeste prin contact direct cu mucusul din nas sau gat al unei persoane infectate2. Simptomele pot dura pana la 24 de ore si mai mult, includ febra, dureri in gat, umflarea ganglionilor limfatici de la nivelul gatului si pete albe sau galbene pe amigdale cu gat rosu aprins. In unele cazuri, poate aparea scarlatina, care poate fi periculoasa daca nu este tratata prompt. Cultura din gat este cea mai fiabila metoda de a detecta o infectie cu Streptococcus. Cu toate acestea, culturile necesita 24-48 de ore de incubare pentru a oferi un diagnostic fiabil. Prin urmare, s-au dezvoltat teste rapide imunocromatografice pentru detectarea directa a antigenului streptococului de grup A din exudate faringiene 3,4,5 . Testul rapid OnSite Strep A este un test imunologic de antigen , care ofera un rezultat de test instant in 5-10 minute cu personal calificat minimal, fara utilizarea de echipamente de laborator. PRINCIPIUL TESTULUI Testul rapid OnSite Strep A este un test imunologic cu flux lateral. Componenta cheie de testare consta din: 1) un tampon conjugat care contine anticorp anti-Strep A conjugat cu particule colorate(conjugati de anticorpi) si un anticorp de control conjugat cu particule colorate si 2) o membrana de nitroceluloza care contine o linie de testare (linia T) si o linie de control (linia C). Linia T este pre-acoperita cu anticorp Strep A, iar linia C este pre-acoperita cu o linie de anticorpi de control.

Antigenul Strep A este extras mai intai din specimenul tampon cu amestecul de reactiv de extractie. Esantionul extras se adauga in godeul probei. Esantionul extras migreaza prin actiunea capilara pe banda de testare. Antigenul Strep A, daca este prezent in proba extrasa, se leaga la conjugatele de anticorpi. Imunocomplexul este apoi capturat pe membrana prin anticorpul anti-Strep A pre-acoperit, formand o linie T de culoare burgunda, indicand un rezultat test Strep A pozitiv. Absenta liniei T sugereaza un rezultat negativ. Testul contine un control intern (linia C) care ar trebui sa prezinte o linie de culoare burgunda a imunocomplexului anticorpilor de control, indiferent de dezvoltarea oricarei culori pe linia T. In caz contrar, rezultatul testului este nevalid si specimenul trebuie retestat cu un alt dispozitiv. REACTIVII SI MATERIALELE OFERITE Pungi de plastic sigilate individual continand:

a. Un dispozitiv caseta b. Un desicant

Tuburi de extragere a probei Tampoane sterile, fiecare sigilat intr-o punga din hartie si plastic Reactivul de extractie A (REFSB-R0184A,10ml / flacon) Reactivul de extractie B (REFSB-R0184B,10ml / flacon) Control pozitiv Strep A (200 µL / flacon)

Control negativ Strep A (200 µL / flacon) Un prospect (instructiuni pentru utilizare) MATERIALE NECESARE, DAR NEFURNIZATE 1. Ceas sau cronometru AVERTISMENTE SI PRECAUTII Pentru diagnosticul in vitro Acest prospect trebuie citit complet inainte de efectuarea testului. Nerespectarea prospectului poate duce la rezultate inexacte ale testelor. Nu deschideti punga sigilata daca nu sunteti pregatit sa efectuati testul. Nu utilizati dispozitive sau componente expirate. Aduceti toti reactivii la temperatura camerei (15-30 °C)inainte de folosire. Nu utilizati componentele in orice alttip de kit de test ca inlocuitor pentru componente in acest kit. Purtati echipament de protectie si manusi de unica folosinta in timp ce manipulati reactivii kitului si probele clinice. Spalati-va bine mainile dupa efectuarea testului. Utilizatorii acestui test trebuie sa respecte Precautiile Universale CDC din SUA pentru prevenirea transmiterii infectiei HIV, HBV si a altor agenti patogeni din sange. Nu fumati, nu beti si nu mancati in zonele in care sunt manipulate specimenele sau reactivii din kit. Aruncati toate esantioanele si materialele folosite pentru a efectua testul ca fiind deseuri cu risc biologic. Manipulati controalele negative si pozitive in acelasi mod ca si probele. Rezultatul testului trebuie citit in 5-10 minute dupa adaugarea esantionului sau a controlului pe banda de testare. Orice rezultate interpretate in afara celor 5-10 minute trebuie considerate nevalabile si trebuie repetate. Nu efectuati testul intr-o camera cu debit puternic de aer, adica un ventilator electric sau aer conditionat puternic. PREGATIREA REACTIVILOR SI INSTRUCTIUNI DE DEPOZITARE Toti reactivii sunt gata pentru utilizare ca atare. Depozitati dispozitivele de testare nedeschise la 2-30 °C. Daca se pastreaza la 2-8 °C, asigurati-va ca dispozitivul de testare este adus la temperatura camerei inainte de a fi deschis. Dispozitivul de testare este stabil pana la data de expirare tiparita pe punga sigilata. Nu congelati setul si nu expuneti la temperaturi mai mari de 30 °C. RECOLTAREA SI MANIPULAREA PROBELOR Considerati orice materiale de origine umana ca fiind infectioase si manipulati-le conform procedurilor de siguranta. Colectarea specimenelor: Pentru a colecta un specimen de exudat faringian, deschideti un pachet cu un betisorsteril neutilizat. Scoateti betisorul steril si frecati suprafetele amigdalelor si faringele posterior. Transportul si depozitarea specimenelor: Testarea trebuie efectuata imediat dupa ce specimenele au fost colectate. Specimenele extrase din tampon pot fi pastrate la 2-8 °C timp de pana la o zi. Pentru depozitarea pe termen lung, specimenele trebuie pastrate congelate la -20 °C. PROCEDURA DE TESTARE Pasul 1 Aduceti esantionul si componentele de testare la temperatura camerei (15-30° C) daca sunt refrigerate sau congelate. Odata dezghetat, amestecati bine specimenul inainte de efectuarea testului. Pasul 2: Procesul de extractie a antigenului Strep A 2.1 Tinand reactivul de extractie A vertical, adaugati 4 picaturi (aproximativ 240 µL) in tubul de extragere a probei. Reactivul de reactie A este de culoare roz. 2.2 Adaugati 4 picaturi de reactiv de extractie B (aproximativ 200 µL) in acelasi tub. Reactivul de extractie B este incolor. 2.3 Omogenizati lovind usor partea inferioara a tubului. 2.4 Introduceti betisorul continand proba in solutia pentru tubul de extragere a probei. Rasuciti betisorul de cel putin 10 ori in timp ce apasati capul in partea inferioara si laterala a tubului.

ID proba Linie de

control

Linie

de test

Godeu

proba

OnSite ™ Test rapid Streptococ de grup A - caseta (tampon)

2

2.5 Lasati sa stea timp de 1-15 minute la temperatura camerei (15-30 °C), apoi apasati ferm betisorul pe tub pentru a elimina cat mai mult lichid posibil din betisor. Puneti capacul tubului de extractie, cu picurator Aruncati betisorul conform recomandarilor privind manipularea agentilor infectiosi. Pasul 3: Deschideti punga de la imbinare si scoateti dispozitivul. Plasati dispozitivul de testare pe o suprafata curata si neteda. Pasul 4: Asigurati-va ca etichetati dispozitivul cu ID-ul probei. Pasul 5: Tinand tubul de extractie vertical, adaugati 3 picaturi (150 µL) de solutie extrasa din tubul de extractie in centrul godeului de proba (godeu S), asigurandu-va ca nu exista bule de aer. Pasul 6: Setati cronometrul Pasul 7: Rezultatele pot fi citite la 5-10 minute. Rezultate pozitive pot fi vizibile in mai putin de 1minut. Rezultatele negative trebuie sa fie confirmate numai la sfarsitul a 10 minute. Orice rezultate interpretate in afara ferestrei de 5-10 minute trebuie considerate nevalabile si trebuie repetate. Aruncati dispozitivul utilizat dupa interpretarea rezultatului, respectand cerintele locale care reglementeaza eliminarea dispozitivului.

PROCEDURA DE CONTROL Pasul 1: Se adauga 4 picaturi de reactiv de extractie A si 4 picaturi de reactiv de extractie B intr-un tub de extractie. Pasul 2: Se amesteca lovind usor partea inferioara a tubului Pasul 3: Adaugati 1 picatura de control pozitiv sau control negativ in tub. Pasul 4: Continuati asa cum este descris din pasul 3 din sectiunea Procedura de testare de mai sus. Pasul 5: In cazul in care controalele nu dau rezultatele asteptate,

considerati testul nevalabil si repetati testul sau contactati distribuitorul. CONTROL DE CALITATE Control intern: Acest test contine o functie de control integrata, linia C. Linia C se dezvolta dupa adaugarea solutiei extrase. Daca linia C nu se dezvolta, examinati intreaga procedura si repetati testul cu un dispozitiv nou. Control extern: Bunele practici de laborator recomanda utilizarea unor controale externe pozitive si negative pentru a asigura performanta adecvata a testului, in special in urmatoarele situatii:

a. Un nou operator utilizeaza kitul inainte de a efectua testarea specimenelor. b. Un nou lot de kituri de testare este folosit. c. Un nou transport de kituri de testare este folosit. d. Temperatura in timpul depozitarii se incadreaza in afara intervalului 2-30 °C. e. Temperatura din zona de test se incadreaza in afara intervalului 15-30 °C. f. Pentru a verifica o frecventa mai mare decat cea asteptata a rezultatelor pozitive sau negative. g. Pentru a investiga cauza unor rezultate nevalabile repetate.

INTERPRETAREA REZULTATULUI TESTULUI REZULTATUL NEGATIV: Daca se dezvolta numai linia C, testul indica faptul ca in esantion nu este prezent niciun antigen Strep A detectabil. Rezultatul este negativ sau nereactiv.

REZULTAT POZITIV: Daca se dezvolta ambele linii C si T, testul indica prezenta antigenului Strep A detectabil in specimen. Rezultatul este pozitiv sau reactiv.

Specimenele cu rezultate pozitive sau reactive trebuie confirmate cu teste (metode) alternative si constatari clinice inainte de efectuarea unui diagnostic. INVALID: Daca nu este dezvoltata linia C, testul este nevalid, indiferent de evolutia culorii pe linia T asa cum este indicat mai jos. Repetati testul cu un dispozitiv nou.

CARACTERISTICI DE PERFORMANTA

Corelarea pe specimene clinice Un total de 525 de probe de la subiectii sensibili au fost testati prin testul rapid OnSite Strep A si prin metoda de cultura. Comparatia pentru toti subiectii este prezentata in urmatorul tabel: Test rapid OnSite Strep A

Metoda culturii Pozitiv Negativ Total Pozitiv 117 7 124 Negativ 11 390 401 Total 128 397 525 Sensibilitate relativa: 94,4%, Specificitate relativa: 97,3%, Acord general: 96,6% Reactivitatea incrucisata Organismele enumerate mai jos au fost testate pentru reactivitatea incrucisata cu OnSite Strep A Rapid Test la 1.0x10 7 organisme pe test. Nu s-a observat reactivitate incrucisatapentru organismele enumerate.

4 picaturi de Reactiv de extractie B

4 picaturi de Reactiv de extractie A

Loviti usor tubul pentru omogenizare

Rotiti de 10 ori

Apasati betisorul pentru a-l stoarce în timp ce il

scoateti

3 picaturi de solutie extrasa in godeul S

OnSite ™ Test rapid Streptococ de grup A - caseta (tampon)

3

Bordetella pertussis Branhamella catarrhalis Candida albicans Corynebacterium diphtheria Enterococcus faecalis Streptococ Grup B Streptococ Grup C Streptococ Grup F Streptococ Grup G Hemophilus influenza Klebsiella pneumoniae

Neisseria gonorrhea Neisseria meningitides Neisseria sicca Neisseria subflava Pseudomonas aeruginosa Serratia marcescens Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermis Streptococcus mutans Streptococcus pneumoniae Streptococcus sanguis

Substante interferente Nu a fost observata nicio interferenta in testul rapid OnSite Strep A cauzata de picaturi de tuse disponibile in comert, din siropuri de tuse, spray-uri de gat sau apa de gura. LIMITARILE TESTULUI

Procedura de testare si interpretarea sectiunii ‚Interpretarea rezultatului testului’ trebuie urmate indeaproape atunci cand se testeaza prezenta Strep A in probele de exudat de la subiecti individuali. Pentru o performanta optima a testelor, colectarea corecta si extragerea probelor sunt esentiale. Nerespectarea procedurii poate duce la rezultate inexacte.

Testul rapid OnSite Strep A este limitat la detectarea calitativa a streptococului de grup A (STREP A). Intensitatea liniei de testare nu are o corelatie liniara cu titrul bacterian din specimen. 1. Rezultatul testului negativ sau nereactiv nu exclude

posibilitatea expunerii sau infectiei cu Strep A. 2. Un rezultat negativ sau nereactiv poate apare daca titrul

bacterian din proba este sub nivelul detectabil prin analiza sau daca antigenul bacterian detectat nu este prezent in proba de exudat prelevat. Variatiile tulpinilor de Strep A pot duce, de asemenea, la antigene modificate care nu sunt recunoscute de anticorpii utilizati in test.

3. Infectia poate progresa rapid. Daca simptomul persista, in timp ce rezultatul testului Rapid OnSite Strep ramane negativ sau nereactiv, se recomanda testarea cu o metoda de testare alternativa.

4. Excesul de sange sau mucus pe tamponul betisorului poate interfera cu testul si poate duce la un rezultat fals pozitiv. Evitati atingerea limbii, obrajilor, dintilor si zonei de sangerare a gurii cu tamponul.

5. Rezultatele obtinute cu acest test ar trebui interpretate doar in corelatie cu alte proceduri de diagnosticare si constatari clinice.

REFERINTE 1 2 3 4 5 * 1. Lancefield, R. C. A serological differentiation of human and

other groups of beta-hemolytic streptococci. J. Exp. Med. 57:571-595 (1993).

2. Ruoff, K. L., et al, Streptococcus p. 283-296 in Manual of Clinical Microbiology, 7th ed. American Society for Microbiology, Washington DC.

3. Anhalt, J.P., et al, Comparison of three methods for detection of group A streptococci in throat swabs. J. Clin. Microbiol. 30:2135-2138 (1993).

4. Harbeck, R.J., et al, Novel rapid optical immunoassay technique for detection of group A streptococci frtom pharyngeal specimens: comparison with standard culture methods. J. Clin. Microbiol. 31: 839-844 (1993). 5. Yu, P.K., et al, Evaluation of TestPack Strep A for the detection

of group A streptococci in throat swabs. Mayo Clin. Proc. 63:33-36 (1988).

SIMBOLURI SI PRODUCATOR