Disciplina: Citologie vegetalaLucrare practică nr. 1

I. METODE ŞI TEHNICI DE LUCRU UTILIZATE ÎN BIOLOGIA VEGETALĂ

I. 1. Microscopul fotonic binocular: alcătuire, mod de utilizare

Ce este microscopul fotonic?Microscopul fotonic este un instrument optic care, utilizând lumina, măreşte

obiectele sau structurile de dimensiuni mici, invizibile cu ochiul liber.Microscopul fotonic permite distingerea detaliilor dintr-un obiect aflat la o distanţă

de 0,2µm. Puterea de rezoluţie a microscopului exprimă cea mai mică distanţă la care două puncte ale obiectului pot fi văzute distinct.

Din ce este alcătuit microscopul fotonic?A. Partea mecanică:

1. Piciorul (talpa sau soclul) :i. forma: poligonală, triunghiulară sau de potcoavă;ii. rol: asigură stabilitatea microscopului;iii. prezintă: lampa, oglinda, orificiul de pătrundere a luminii,

butoane de reglare a luminii.2. Coloana :

i. rol: menţine diferite părţi ale microscopului, serveşte la deplasarea microscopului;

ii. prezintă: mâner, tubul port-oculare, revolverul port-obiective, mecanismul de mişcare pe verticală a părţii optice;

3. Platina (măsuţa):i. rol: menţine preparatul microscopic;ii. prezintă: un orificiu central, cleme, rigle şi mecanisme pentru mişcare în plan orizontal;

4. Mecanismul de punere la punct a imagini i cuprinde:i. şuruburi sau vize macrometrice;ii. şuruburi sau vize micrometrice.

B. Partea optică:1. Obiectivele :

iii. sunt sisteme de lentile într-o montură metalică;iv. au putere de mărire diferită: 6x, 10x, 20x, 40x, 90x.

2. Ocularele:v. sunt formate din 2 lentile aflate la extremităţile unei monturi

metalice;vi. lentila superioară – lentila oculară; lentila inferioară – lentila

colectoare.3. Sursa de lumină (lampa sau becul): este încorporată în picior.4. Oglinda 5. Condensatorul :

i. este un sistem de lentile;ii. proiectează în planul preparatului imaginea sursei luminoase;iii. sub acesta există o diafragmă - iris.

Puterea de mărire a microscopului = puterea de mărire a obiectivului x puterea de mărire a ocularului.ex: ocular 10x; obiectiv 20x puterea de mărire a microscopului = 200x

1

P

arte

a

mech

an

ică

Part

ea

op

tică

2

Microscop fotonic NOVEX (Holland)

Talpă

Mâner

Tub port-oculare

Revolverport-obiective

Platină

Şurubmacrometric

Şurubmicrometric

Oculare

Obiective

Sursă de lumină

Oglindă

Condensator

Şurub cu cremalieră

Cum procedăm pentru scoaterea preparatului de la microscop ?aduceţi în axul microscopului obiectivul 20, apoi 10; eliberam preparatul dintre clemele de fixare;reducem intensitatea luminii la nivelul becului;închidem alimentarea la sursa de curent.

Care sunt manevrele de lucru pe care le veţi efectua pentru vizualizarea unui preparat la microscopul fotonic?conectăm cablul la sursa de curent electric;declanşăm aprinderea sursei de lumină;mărim intensitatea luminii la nivelul sursei de lumină;fixăm preparatul pe platina microscopului;aducem în axul microscopului obiectivul care măreşte de 10 ori;ne asigurăm că secţiunea de observat este străbătută de fluxul de lumină; privim prin oculare (reglăm distanţa interoculară, dacă este nevoie);acţionăm şuruburile macrometrice până obţinem imagine în câmpul microscopic;aducem în ax obiectivul care măreşte de 20 de ori;privind prin oculare, mişcăm şuruburile micrometrice, până obţinem din nou imagine;în mod similar procedăm pentru obţinerea imaginii la obiectivul ce măreşte de 40 de ori.

I. 2. Tehnică de obţinere a preparatului microscopic în urma secţionării la microtomul de mână

Am aflat mai sus din ce este alcătuit un preparat microscopic însă, ne-a rămas să înţelegem cum anume putem obţine o secţiune, atât de subţire încât să poată fi străbătută de lumină (de ordinul µm) şi atât de dreaptă pe toată suprafaţa ei, ca să putem examina detalii şi să putem obţine desene de calitate.

Mai jos sunt enumerate etapele de lucru care se parcurg în mod curent în laboratorul nostru pentru obţinerea preparatelor microscopice:

1. Fixarea materialului de studiat:- fixarea = omorârea instantanee a celulelor şi ţesuturilor cu prezervarea

structurii lor;- soluţii fixatoare: alcool etilic 70%, aldehidă formică (7 – 20%), sau

amestec (FEA): formol/alcool etilic/acid acetic: 1/40/1.2. Secţionarea:

- folosind: microtomul de mână, măduva de soc, briciul botanic;- tipuri de secţiuni posibile: superficiale, transversale, longitudinal

radiare, longitudinal tangenţiale;3. Colorarea: de exemplu: cu verde–iod şi carmin alaunat;

- treceri succesive prin: hipoclorit (20 minute), apă acetică (spălare), verde-iod (1 minut), alcool etilic (spălare), carmin – alaunat (20 minute), apă (spălare).

4. Montarea: - pentru preparatele proaspete sau temporare în: apă ori amestec

apă/glicerină: 1/1;- pentru preparatele permanente sau definitive în: glicero - gelatină sau

balsam de Canada.5. Etichetarea: cu denumirea ştiinţifică a plantei, organul secţionat, tipul de

secţiune.

3

Reţineţi afinitatea coloranţilor pentru anumite componente celulare, în funcţie de compoziţia lor chimică (exemplu, carminul alaunat colorează în roz pereţii celulozici, iar verdele iod colorează în verde pereţii lignificaţi ai celulelor vegetale).